小表达（精选十篇）
小表达 篇1
1 材料和方法
1.1 材料与试剂
目的组(CXCR4siRNA)及阴性对照组为非抑制性双链RNA(Non-silencing dsRNA)由上海吉凯基因化学技术有限公司合成,转染试剂DMRIE-C由Invitrogen公司提供,逆转录试剂盒购自Fermentas公司,PCR试剂盒购自上海生物工程公司,PCR引物由上海生物工程公司合成,Jurkat细胞购自中国典型培养物保藏中心。
1.2 CXCR4s i RNA的制备
根据si RNA的设计原则设计针对CXCR4siR-NAc DNA(序列编号:NM-003467)符合特征的靶序列,同时设计无关对照靶序列(GC含量与靶序列相同)。靶序列为GCAGTCCATGTCATCTACA.CX-CR4siRNA:Sense:5'-GCAGUCCAUGUCAUCUACAtt-3';Antisense:5'-UGUAGAUGACAUGGACUGCtt-3';Non-silencingdsRNA:Sense:5'-UUCUCCGAACGUG UCACGUtt-3';Antisense:5'-ACGUGACACGUUCG-GAGAAtt-3'。
在Genbank中行BLASTn证实CXCR4siRNA仅与CXCR4基因相应位点匹配。Non-silencing dsRNA与任何已知哺乳动物基因无匹配。
si RNA配制方法:在5.0 nmol的双链si RNA中加入250 uM的si RNA母液,母液于90℃保温2min,冷至室温后置于-20℃保藏备用。
1.3 细胞培养及转染
实验分为3组:空白对照组Control(不加入CX-CR4siRNA,Non-silencing dsRNA和DMRIE-C),阴性对照组Non-silencing dsRNA(加入Non-silencing dsRNA和DMRIE-C),目的组CXCR4siRNA(加入CXCR4siRNA和DMRIE-C)。细胞转染前1d,Jurkat细胞更换新鲜培养基。转染前将位于对数生长期的细胞分别计数,用无血清无抗生素的RP-MI-1640调整细胞浓度至3×107/m L备用。采用脂质体转染法,分别取CXCR4siRNA和Non-silencing dsRNA加入0.5 m L的无血清无抗生素的RP-MI-1640配成80 n M的溶液,于12μL DMRIE-C加入0.5 m L的无血清无抗生素的RPMI 1640混匀接种至6孔板中,室温孵育10～15 min。每孔加入含3×106细胞细胞备用液0.2 m L,混匀后移至5%二氧化碳、37℃孵箱内孵育4 h后更换15%FBS的生长培养基。分别加入PHA、PMA并使其终浓度为1μg/m L、50 ng/m L,孵育转染48 h后进一步检测。
1.4 RT-P CR检测CXCR4基因的表达
采用Triol法提取细胞总RNA,用紫外分光计检测其浓度和纯度,并经电泳初步证实。各取等量RNA,用AMV逆转录酶进行反转录。得到人类总c DNA,然后以之为模板进行聚合酶链反应(PCR)。CXCR4上游引物5'-CGGAATTCCAGCAGGTAGCA AAGTGACG-3',下游引物5'-GACGCCAACATA-GACCACCT-3'。同时以人GAPDH为内参照,上游引物5'-ACGGATTTGGTCGTATTGGG-3',下游引物5'-TGATTTTGGAGGGATCTCGC-3',产物长度分别为561 bp和231 bp。PCR扩增条件如下:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,60℃退火30 s,35个循环;72℃延伸10 min,反应完成后取5 ul PCR产物行琼脂糖电泳,采用图像扫描仪拍照并进行条带灰度分析,以CXCR4/GAPDH的比值代表其相对含量。
1.5 统计学方法
数据用均数±标准差(x±s)表示,并用SPSS13.0版软件包进行统计学处理,各组间的比较,分析用q检验和方差分析,以P<0.01为差异有统计学意义。
2 结果
在琼脂糖凝胶电泳图谱上,各组均可见清晰的扩增条带,其中CXCR4基因目的组条带较空白对照组和阴性对照组明显减弱。CXCR4/GAPDH条带光密度值分别为:空白对照组(0.683±0.024);阴性对照组(0.627±0.015);目的组(0.569±0.014)。两对照组间比较差异无统计学意义(P>0.01),目的组与两对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),说明CXCR4mRNA的表达明显受到抑制。从而证实CXCR4SiRNA能有效抑制Jurkat细胞CXCR4基因表达,见图1、2和附表。
注:覮与空白对照组及阴性对照组相比,P<0.01
3 讨论
RNA干扰(RNAi)技术是最近几年发展起来的一种简单有效的代替基因敲除的遗传工具[3,4,5]。由内源性或外源性双链RNA(double-standed RNA,dsRNA)介导的细胞内m RNA发生特异性降解,从而沉默靶基因的表达,属于转录后基因表达沉默机制(Post-transcriptinal gene expression silence,PTGS)。RNAi作为一种新的基因阻断技术,具有特异、有效的基因沉默效应,能够简单、高效阻抑特定基因表达,已广泛用于抗肿瘤的基因治疗。已有文献报道白血病细胞系Jurkat细胞株是一个较理想的RNAi实验细胞模型[6,7]。Jurkat细胞系淋巴系起源的白血病细胞株,运用RNAi技术可明显降低Jurkat细胞基质细胞衍生因子(stromal cell derived factor,SDF-1)表达,同时可减缓肿瘤细胞的增殖及促进凋亡[8]。CXCR4是SDF-1唯一配体,在Jurkat细胞呈高表达,但目前国内外尚未见RNAi对Jurkat细胞CXCR4表达的报道。
设计有效的双链小RNA片段是实现RNA干扰的关键,本实验中依据Nature Cell Biology 2003公布的设计双链RNA的原则[9],根据ELBASHIR[10]描述设计针对CXCR4cDNA符合特征的靶序列。首先在Genbank中获取CXCR4cDNA的全长序列,然后利用Ambion提供的在线工具搜索符合要求的靶序列,同时设计无关对照序列,Genbank中行严格的BLASTn比对,由公司化学合成si RNA。
本实验用针对CXCR4基因的si RNA转染人急性T细胞性白血病细胞系Jurkat细胞48 h后,用RT-PCR方法检测其CXCR4基因表达水平的变化,发现目的组能导致CXCR4基因表达水平的下调,阴性对照组则不导致CXCR4基因失活,这一结果验证了RNA干扰具有高度特异性,为下一步有关CXCR4的研究奠定一定的基础,提示Si RNA可能为人类ALL治疗提供一条新的途径。
参考文献
[1]MOHLE R,SCHITTENHELM M,FAILENSCHMID C,et al.Functional response of leukeamic blasts to stromal celldrrived factor1correlates with preferential expression of the chemokine receptor CXCR4in acute myelomonocytic and lymphoblastic leukaemia[J].Br J Haematol,2000,110(3):563572.
[2]ZENG DF,KONG PY,CHEN XH,et al.Expression of stromal cell derived factor1(SDF1)and its receptor CXCR4in hematologic malignancies[J].Journal of Experimental Hematology,2005,13(2):274277.
[3]BRUMMELKAMP TR,BERNARDS R,AGAMI R.A System for stable expression of short interfering RNAs in mammailian cells[J].Science,2002,296(5567):550553.
[4]SUI GH,SOOHOO C,SHI Y,et al.A DNA vectorbased RNAi techenology to suppress gene expression in mammailian cells[J].Proc Natl Acid Sci USA,2002,99(8):55155520.
[5]ZHOU RR,SHEN LF.A small interfering RNA targeting vascular endothelial growth factor inhibits CNE2Z nasopharyngeal cancer cell neovascularization in vitro[J].China Medical Engineering,2007,15(3):231234.Chinese
[6]CRNKOVICMERTENS I,HOPPESEYLER F,BUTZ K.Induction of apoptosis in tumor cells by SiRNAmediated silencing of the livin/MLIAP/KIAP gene[J].Oncogene,2003,22(51):83308336.
[7]ZHU Y,LIN H,MA Y,et al.Effect of MDM2gene on Tcell leukemia Jurkat cells under different stress states[J].Journal of Sun Yatsen University(Medical Sciences),2005,26(5):545548.
[8]YANG W,KONG P,CHANG C et al.Effects of RNA interference inhibiting SDF1expression in bone marrow stromal cells on the proliferation and apoptosis of cocultured Jurkat cells[J].Chinese Journal of Hematology,2006,26(7):421424.
[9]EDITORS OF NATURE CELL BIOLOGY.Whither RNAi[J].Nat Cell Biol,2003,5(6):489490.
表达自信的哲理小故事 篇2
有一位女歌手，第一次登台演出，内心十分紧张。想到自己马上就要上场，面对上千名观众，她的手心都在冒汗：“要是在舞台上一紧张，忘了歌词怎么办?”越想，她心跳得越快，甚至产生了打退堂鼓的念头。
就在这时，一位前辈笑着走过来，随手将一个纸卷塞到她的手里，轻声说道：“这里面写着你要唱的歌词，如果你在台上忘了词，就打开来看。”她握着 这张纸条，像握着一根救命的稻草，匆匆上了台。也许有那个纸卷握在手心，她的心里踏实了许多。她在台上发挥得相当好，完全没有失常。
她高兴地走下舞台，向那位前辈致谢。前辈却笑着说：“是你自己战胜了自己，找回了自信。其实，我给你的，是一张白纸，上面根本没有写什么歌词!”
她展开手心里的纸卷，果然上面什么也没写。她感到惊讶，自己凭着握住一张白纸，竟顺利地度过了难关,获得了演出的成功。
“你握住的这张白纸，并不是一张白纸，而是你的自信啊!”前辈说。
歌手拜谢了前辈。在以后的人生路上，她就是凭着握住自信，战胜了一个又一个困难，取得了一次又一次成功。
【自信哲理故事感悟】如何才能获得自信?有时候你需要做的只是睁开眼睛。
自信哲理故事二：黑色的氢气球
一天，几个白人小孩正在公园里玩，一位卖氢气球的老人推着货车走进了公园，白人小孩一窝蜂地跑过去，每人买了一个，兴高采烈地追逐着放飞在天空中色彩艳丽的氢气球。
在公园的一个小角落里，站着一个黑人小孩，他羡慕地看着白人小孩在嬉戏。他不敢过去和他们一块玩耍，因为自卑。白人小孩的身影消失后，他才怯生生地走到老人的货车旁，用略带恳求的语气问道：“您可以卖一个气球给我吗?”老人用慈祥的目光打量了一下他，温和地说：“当然可以。你要一个什么颜色的?”小孩鼓起勇气说：“我要一个黑色的。”
脸上写满沧桑的老人惊诧地看了看小孩，随即给他一个黑色的氢气球。小孩开心地拿过气球，小手一松，黑气球在微风中冉冉升起，在蓝天白云的映衬下形成一道别样的风景。
老人一边眯着眼睛看着气球上升，一边用手轻轻地拍了拍小孩的后脑勺，说：“记住，气球能不能升起，不是因为它的颜色、形状，而是气球内充满了氢气。一个人的成败不是因为种族、出身，关键是你的心中有没有自信。”
【自信哲理故事感悟】最终决定人生成败的不是外在的因素，而是人的内心。也可以用来表现世间处处有温情，这种温情可以化为自信的动力。
自信哲理故事三：昂起头来真美
珍妮是个总爱低着头的小女孩，因为她一直觉得自己长得不够漂亮，很没自信。
有一天，她到饰物店去买了只绿色蝴蝶结，店主不断赞美她戴上蝴蝶结挺漂亮。珍妮虽不信，但是挺高兴，不由昂起了头。因为急于让大家看看自己的新形象，出门的时候与人撞了一下都没在意。
珍妮走进教室，迎面碰上了她的老师。“珍妮，你昂起头来真美!”老师爱抚地拍拍她的肩说。
语言表达小练习 篇3
字数、行数不作具体要求，但最好50字、8行以内，是否押韵自便，但必须语句通顺、读来上口，主题应积极健康或富有哲理。
回：看外表方方正正/察内里正正方方/与生俱来的品格/表里一个样
功：形体昭示得分明/欲想成“功”/“工”作起来/非得有后“劲”才行
答：______________________________________
2. 在所谓“六书”的造字法中，有“会意”一说。即通过对字形分析，就能了解该字的大概意思。其实，根据某种需要，有很多汉字都可以采用“特别析字”的方式进行别解趣释，联想、挖掘、赋予其临时的“特殊意义”，进而为我们言情述志服务。请参考下面趣解的“回”字语段，从提供汉字中任选一字（或另选别的字），写一段析字形、思道理的话。
汉字提供：淼、功、卡、尖、月、行、囝囡
所写语段不得少于50字，联想须自然、合理，有一定的思想意义。
回——随着年龄的不断增长，我越来越喜欢、欣赏——不，应该是钦佩“回”字的结构品质了。你看它的外表，方方正正、有棱有角；你看它的内里，有角有棱、正正方方。它从不以矫饰的虚假处世，而是唯以表里如一的襟怀示人。这种坦荡、磊落的精神实在令人称道。
答：______________________________________
参考答案
1. 此题既能考查对某些汉字的结构、意义的把握情况，又能训练从生活中灵活选材、说理述志的能力。做题时，应先从话题汉字的结构、意义入手，进行细致分析和大胆联想，或拆字或合字，或就形体特征推及其思想意义。基于要求写诗，所以虽不强求押韵，但语言必须简洁、凝练、流畅，富有意蕴。
歪：坦荡的胸襟/磊落的个性/从无曲意虚情/不正就是“不正”
尖：小字辈们/欲置身尖端/扬眉吐气/必须先获取/“大”的根基
囚：无论什么人/如果他胆敢吞噬/“国”中的财“宝”/那他就不会再享有/幸福、欢乐/自由、逍遥
卡：如果是/上/不能上/下/又不能下/那么/只能被“卡”
淼：一滴水珠/瞬间就会消亡/无数滴水珠/就是大海汪洋
忌：如果/心头仅仅能/存放上自“己”/那么/他的未来/只能是个患者而已
衷：所以能/远离“衰败”/杜绝“悲哀”/就因为/心中的那个“正直（丨）”/始终不改/而且永在
财：欲想自己成“才”/就不要迷恋/眼前的小利/必须把“贝”抛开
臭：就因为/“自”“大”一点/即使是一种气味/也令人讨厌
傀：从前瞧像“人”/从后看似“鬼”/原来/“傀儡”者就是这样/人不人鬼不鬼
情：把心总是摆在前面/似乎/这样才算真挚的情感/殊不知/“心”是变化了的/于是酿下了几多恩怨
众：上边的“人”/之所以/又高又大/全凭着/下边的多人/抬举着他
2. 此题考查想象、联想能力。做题时，应先从选为话题汉字的结构入手，看它是形声字还是会意字，然后分析它的结构与其所承载的意义有何关系，也可以通过拆字或合字，甚至添加某些必要的条件作必要的想象，从而依据形体特征，联想思想意义，做出关于社会人生的哲理表述。
淼——“淼”，就造字法而言，语文老师说是会意字。它以其形体特点和含义似乎告诉我们这样一个道理：一滴水珠，不论它如何晶莹清澈，在太阳强光的照耀之下，瞬息间就会消逝得无影无踪；而很多很多的水滴，却能够汇成烟波浩淼的汪洋大海。聚粒沙而为塔、集寸腋以成裘，无数个量的积累，就是质的飞跃；团结就是力量。
功——“功”，在物理学上是个名词，指力使物体沿着力的方向移动；在汉语语法里也是个名词，指成就和表现成效的事情。就造字法说，它是个形声字，但我觉得如果把它看作会意，倒更是充满情趣而且不乏哲理的启迪——你看，前边是“工”，后边是“力”，这意在告诉我们：要想成“功”，就必须“工”作、必须尽“力”，并且工作起来，还非得有后劲（力）不可。
卡——“路漫漫其修远兮，吾将上下而求索”。伟大爱国诗人屈原，以其正直、高洁的品格，为祖国的振兴、苍生的富庶而上下求索。他虽“愁苦终穷”却“不能变心从俗”，仍然“董道而不豫”。人生就应该如此：上，就应能上九天揽明月；下，就要能下五洋捉巨鳖。真正做到能“上”能“下”才行啊！否则，能“上”而不能“下”，或能“下”而不能“上”，不被“卡”在浑浑噩噩、庸俗无为的境地才怪呢！
尖——“尖”，是一个自相矛盾的身躯，自己敢和自己叫板的结合体。你看，“小”的高高在上，把“大”的实实在在地踩在脚底；那“大”的却匍匐称臣，心甘情愿地成为“小”的坐骑。说它矛盾，仔细想来也不矛盾，因为就是这样特殊的结构揭示了人世间的一个真谛：小字辈们要想置身“尖”端、出人头地，一定要有“大”的来做雄厚的根基。
月——在茫茫宇宙、漫漫的银河系里，月亮当是无数繁星中很小很小的一颗，然而，它认定了“日”，辉映着“日”，并跟定了“日”，终于与“日”结合为“明”。有人说：月亮自身不能发光，其明亮的光不过是反映“日”的，月亮是个偷光的贼。这话不假，月亮的确是靠借“光”而显示自己的。但是，我要说：在“善假于物”的生存竞争中，能够恰到好处地把别人的东西拿来，通过加工、改造化为具有自己特色的东西，不也是很了不起吗——何况月光已不再是“日”之光了？
行——在古汉语中，“彳”，专指左脚走路；“亍”，专指右脚走路。“彳亍”这两个字的意思就是指“且走且停，慢慢腾腾地走路”。人生有限，道路漫长，如此行进，何时才能到达理想的境地呢？于是，人们又造出个新字——把“彳”和“亍”结合起来为“行”。这后造的“行”字，恰好告诉我们这样一个道理：要想快步“行”走，要想早日登临那璀璨的人生巅峰，必须左右并重，哪条腿也忽视不得。
小表达 篇4
1 材料与方法
1.1 标本收集
收集2004年1月～2006年12月哈尔滨医科大学附属第三医院病理科存档的79例非小细胞肺癌(NSCLC)的手术组织标本。本研究79例患者中,男41例,女38例;年龄<40岁23例,≥40岁56例;鳞癌39例,腺癌40例;淋巴结受侵组46例,无淋巴结受侵组33例;(Ⅰ+Ⅱ)期28例,(Ⅲ+Ⅳ)期51例。所有患者术前均未接受放、化疗及靶向治疗。本研究得到哈尔滨医科大学附属第三医院伦理委员会批准。
1.2 主要试剂和实验方法
兔抗人AnnexinⅠ多克隆抗体和免疫组化检测试剂盒,分别购自美国Zymed实验室和北京中杉公司。采用免疫组织化学法将79例非小细胞肺癌标本均进行AnnexinⅠ(1∶150)免疫组织化学染色。染色方法严格按说明书进行。用磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)代替一抗作为阴性对照,AnnexinⅠ阳性切片作为阳性的对照。
1.3 结果判定
AnnexinⅠ的阳性染色均以肿瘤细胞膜出现棕黄色颗粒时为阳性表达,以染色强度和阳性的细胞数比例来评定阳性表达。结果判定在双盲方法下进行,每张切片在光镜下随机的被选取5个视野,每个视野计数瘤细胞100个,染色强度分为:无色(-)为0分,浅黄色(+)为1分,黄色或更深颜色(++)为2分。阳性细胞数分级:≤50%为0分,51～75%为1分,>75%为2分。上面两项得分乘积结果≥2分则为阳性病例。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理,计数资料采用χ2检验,生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
在79例非小细胞肺癌组织中,有40例为AnnexinⅠ高表达(50.6%),其中鳞癌为包膜表达,腺癌为包膜或胞浆均有表达,以包膜表达为主。见图2、3。非小细胞肺癌组织中AnnexinⅠ的表达情况与肺癌患者淋巴结受侵相关(P=0.022,P<0.05),而与患者的性别、年龄、病理类型及分期之间的关系不明显(P>0.05)。见表1。淋巴结受侵组的AnnexinⅠ的阳性表达组的平均疾病进展时间为5.1个月,AnnexinⅠ阴性表达组的平均疾病进展时间为6.3个月,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。其中47例病例可评价明确的疾病进展时间,在这些病例中,AnnexinⅠ的阳性表达患者与阴性表达患者的疾病进展时间的关系有统计学意义(P<0.05),提示AnnexinⅠ参与到肿瘤恶化的生物学进展中。
3 讨论
AnnexinⅠ属于钙离子的磷脂依赖蛋白超家族成员,基因定位于人类染色体9q11～9q12上,其长度至少有19 kbp,内含有13个外显子,分子量35～40 KD,每个外显子长度不等,从57～123 kb,被113 bp～55 kbp内含子隔断,此蛋白是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶的磷酸化的底物,在细胞的生长、分化、细胞内信号传导等方面有着重要的调节作用,可能与AnnexinⅠ所介导的多种生物学的特征有关[3,4]。有研究检测了AnnexinⅠ在胃癌原发灶和转移灶的表达,结果发现AnnexinⅠ在淋巴结转移灶中的表达高于原发灶,尤其在Ⅳ期淋巴结转移灶中的阳性表达高达48%,高达提示了AnnexinⅠ与肿瘤的远处转移相关[5]。有研究AnnexinⅠ在正常乳腺导管上皮不表达,在乳腺良性肿瘤中的表达率很低,而在各种组织学类型不同的乳腺癌中却表现出很高的表达率,同时在转移性乳腺癌病例中的表达率明显高于乳腺癌无转移的病例,表明AnnexinⅠ与乳腺癌的发生及转移有着密切的关系[6]。也有研究显示,在大肠癌转移组中AnnexinⅠ蛋白的表达较无转移组的高,表达有显著的差异,提示大肠癌的临床分期越高,则AnnexinⅠ的蛋白表达率越高,AnnexinⅠ的表达和大肠癌的转移呈正相关[7]。
雅思小作文所使用的词汇和表达 篇5
1、趋势类词汇
上升动词类: increase, go up, rise up, grow up, jump up, surge, shoot up, keep an upward tendency
下降动词类: decrease, go down, decline, fall down, drop, sink, dip, keep a downward tendency
波动动词类: fluctuate
持平动词类: remain the same, stabilize, remain stable, remain constant
修饰动词的副词: slightly 轻微地, slowly 缓慢地, gradually 逐渐地, steadily 稳定地, rapidly 迅速地, moderately 温和地, 轻微地, significantly 明显地, sharply 明显地, dramatically急剧地, drastically 急剧地
上升名词类: increase, rise, growth, jump, surge
下降名词类: decrease, decline, fall, reduction, drop
波动名词类: fluctuation
修饰名词的形容词: slight, slow, gradual, steady, rapid, moderate, significant, sharp, dramatic, drastic
2、极值类词汇和表达
最高点: reach the peak/top/highest point
Increase to the peak/top/highest point(所有上升类的动词都可以替换掉increase)
最低点: reach the bottom/lowest point
drop to the bottom/lowest point(所有下降类的动词都可以替换掉drop)
占的最多: occupy/make up/take up/account for the largest proportion/number/percentage of „
占的最少: occupy/make up/take up/account for the smallest proportion/number/percentage of„
3、倍数的表达方式
Double 是两倍/大一倍
Increase/decrease three times 增长/减少了三倍
4、大约的表达方式
About/around + 数字
数字 + or so
Approximately + 数字
5、常用的小作文的趋势句式表达
句式一: 变化主体/图画中主体+趋势动词+副词+时间区间
Eg: The number of aged people over 65 increased significantly from 1940-2000.The number of aged people over 65 dropped slightly from 1960-1980.The number of aged people over 65 fluctuated between 1 million and 1.2 million from 1940-1950.The number of aged people over 65 remained stable from 1930-1940.句式二: There be + 形容词 + 表示趋势的名词 + in+ 变化的主体+ 时间区间
Eg: There was an significant increase in the number of aged people over 65 from 1940-2000.There was a slight decline in the number of aged people over 65 from 1960-1980.There was a fluctuation between 1 million and 1.2 million from 1940-1950.小作文模板 according to the chart``` 2 the date lead us to the conclusion that``` 3 the date show``` 4 the tree diagram reveals how``` 5 the figures show``` 6 this is a cure graph which describes the trend of``` 7 the pie graph depicts``` 8 the graph provides some interesting date regarding``` 9 the table shows the changes in the number of ``` over the period from ```to ``` 10 as is shown in the table ``` 11 from the table ,we can clearly see that ``` 12 this table shows the changing proportion of X and Y from ``` to ```` 13 the graph, presented in a pie chart, shows the general trend in``` 14 as can be seen from the grape ,the two curves show the flutuation of ``` 15 over the period from ```to ```the``` remained level.16 in the year between ```and ```.17 in the 3 years spanning from 2005 through 2008.18 the number of ``` remained steady from ```to ````.19 the number sharply went up to ``` 20 the percentage of ``` stayed the same between ``` and ``` 21 the percentage remained steady at``` 22 the percentage of ```is sightly large than that of.23 there is not a great deal of diffenreces between ```and ``` 24 the graphs show a three fold increase in the number of ``` 25 ```decreased year by year while ```increased steadily.26 there is an upward trend in the number of ``` 27 a considerable increase occurred from ```to ``` 28 from ```to ```the rate of decrease slow down.29 from this year on, there was a gradual decline reduction in the ```reaching a figure of.30 be similar to ```be the same as 31 there are a lot similarities between ```and ``` 32 the difference between X and Y lies in ```
流程图（process diagram）一般来说，每年只考两到三次，属于雅思小作文中的非主流题型。事实上，流程图和其他数据图最大的区别在于：流程图是纯文字的，以描述为主，属于说明文。相比之下，柱状图、饼状图、表格等数据图则需要对数据进行分析和比较。写好流程图，需要注意以下五个方面：
一、时态相对单一，主要用一般现在时。
二、经常使用被动语态，显得比较客观和正式。
三、找出流程图的始末点，并划分中间的步骤或阶段。
四、掌握表示“顺序”的连接词(Sequencing Words)，用来说明过程的各个步骤和先后顺序。
重点掌握以下几个词。例如，表示过程用“process” 或“procedure”，过程的各个阶段和步骤可以用“stage”或“step”来描述。在谈到第一个步骤时可以用连接词“At first”、“To begin with”、“In the first stage”等引出。在进入中间的步骤时可以用“Then”、“Next”、“After that”或“The second stage”等，最后一个步骤可以用“Finally”、“Lastly”或“The final stage”。当然，如果有一些平行的步骤也可以用“At the same time”、“Meanwhile”等来引出。
五、对于题目里出现的专业词汇或生词，不认识也没关系，只需照抄即可。
简单地说, 流程图的本质其实就是要求学生将图中出现的文字信息用连贯的语言串起来，不需要过多地发挥。
建议同学们考前可以多看几篇流程图作文的范文，例如剑6的Test3，以及写作机经里的流程图例子等等。只要熟悉流程图的特点和写作方法，真正做到有备而来，那么流程图作文对你来说将会是小菜一碟。
2010年雅思小作文流程图
流程图 基本要领关键就在于要把考官当做“盲人”来对待，而你的任务就是用语言文字把流程图的main features说明给他，使得他能通过文字在脑海里再现一个清晰的图形。而这就是流程图的解题要领精髓所在。如果能够全面的展示图中的每个要点（TA），又能使文章连贯流畅而有逻辑性（CC），并辅之以精确丰富的词汇与语法（LR, GRA）那么好的流程图就应运而生了。流程图 写作特点解析
流程图写作特点之一： 一般来说，介绍过程要使用一般现在时，而除了要通篇时态一致之外，还要注意主谓一致与单复数一致的问题。
流程图写作特点之二：定语从句与被动语态要在流程图中经常使用，定语从句的使用是为了将有关联的两个过程连接。而被动语态的使用是为了增强文章表述的客观性。
流程图写作特点之三：顺序词，雅思写作的得分要点，在流程图里尤为重要，既是流程（过程），就有顺序，要使过程清晰化，就要有顺序词。流程图写作特点之四：要适当地添加个别图中没有交代但能从图片中直接读出来的的一些内容，否则可能达不到字数要求。但是一定要把握尺度，千万不要加上自己的主观观点，否则会扣分
流程图写作特点之五：所有流程图都是示意图，这意味着在描述时，不要只拘泥于图形标示是什么，而要写出其代表的含义。流程图 写作常见问题
在流程图的写作当中，学生在遣词造句的时候会出现一些常见错误。有些是因为词汇和语法的功底不扎实，有些是因为没有遵循雅思写作的规则，下面的就是一些常见错误的例子和修改方法。
问题句：The charts show how chocolate is produced
错误分析：由于该题的题目是The illustrations above show how chocolate is produced… 而学生在写该句时只对题目里的句子做了微小的调整，有照抄原题的嫌疑，所以该开场句不但不计入有效字数，而且会失分。
修改方法：paraphrasing与细节添加扩展：The ten pictures demonstrates/ illustrates / exhibits / depicts / describes / gives information about the different stages of making liquid chocolate.问题句：cacao tree grow in South America, Africa and Indonesia
错误分析：（1）名词表种类时，前面的冠词不能省略，或使用其复数形式，所以应该是a /the cacao tree或cacao trees。（2）开头不能冲上来就直接介绍cacao tree，而是通过主题词chocolate引出，否则显得太唐突
修改后：Chocolate comes from the cacao tree, which is growing in parts of South America, Africa and Indonesia.问题句：The tree produces large red pods，and the pods contain white cocoa beans.错误分析：该句语法上虽然说的过去但是不符合英语表达习惯，当前后有重复的关联部分时，可使用定语从句，将有关联的两句话连接。同时，这样还可以增加句型复杂程度。
修改后：The tree produces large red pods which contain white cocoa beans.问题句： the pods are ripe, they are harvested, the beans are removed, they are fermented for several days in large wooden boxes.错误分析：此错误在中国学生中非常常见，由于汉语里的连词数量很少，而又不常用，所以中国学生通常没有使用连词的习惯，而英语则不同，其“形和”特点使得连词成为英语里最常用的词类之一，而且连词也是雅思写作的得分点之一（CC）.所以，应使用一些表示顺序的连接词。
修改后：when the pods are ripe,they are harvested, then the beans are removed and they are fermented for several days in large wooden boxes.利用写作框架观察阅读文章结构
1.主题性
阅读文章和雅思写作题目涵盖的范围比较广，具有极强的主题性，其重合话题有：环境、社会、教育三大方面。阅读文章的内容能帮助考生更好地理解题目的文化背景，积累观点素材，在备考过程中，考生可以将这两项结合起来。
剑四test 2的reading passage 1“Lost for Words”极好的回答了雅思一道较难的文化类考题：what are the reasons for the loss of many cultures and languages? How to solve this problem?”
许多学生因为缺少对这一背景的了解而无从下手，我们完全可以看看这篇阅读文章提供了哪些素材： “What makes a language endangered is not just the number of speakers, but how old they are.If it is spoken by children, it is relatively safe。” “„people reject the language of their parents„ It begins with a crisis of confidence, when a small community finds itself alongside a larger, wealthier society„” “Quite often, governments try to kill off a minority language by banning its use in public or discouraging its use in schools, all to promote national unity。” “„ They cannot refuse to speak English if most commercial activity is in English„”
这些都是十分准确而又全面的回答，说明了许多语言丧失的原因，甚至连语言丧失对于文化的连带影响也有所涉及：“Language is also intimately bound with culture, so it may be difficult to preserve one without the other。”
这篇文章在后文也对如何解决这一问题做出了回答：
“ „a growing interest in cultural identity may prevent the direst prediction from coming true„.’apprentice’ programs have provided life support t several indigenous languages。”
值得注意的是，这篇阅读文章的结构是遵循“背景—原因—解决方式”的架构来安排的，对于写作结构也有很好的架构作用。
2.流程图的描述
2010年雅思写作Task I图画题频现，许多学生不太熟悉流程图，对于如何描述其过程极为担心。其实分析发现，这样的句式在说明型的阅读文章中屡见不鲜，这类阅读文章常常涉及某个事物的发展过程或者制作方式，其遣词造句都是可以进行学习和利用。
剑五Test 2 Reading passage 1是一篇关于对现代塑料的说明文章，其中有一段就是对塑料制作过程的描述，很多句式都可以“拿来我用”。
首先是对这一流程的总体概括“The original patent outlined a three-stage process, in which phenol and formaldehyde were initially combined under vacuum inside a large egg-shaped kettle。” 我们可以根据这个句式来描写2009年9月一道关于玻璃瓶子回收过程的题目，如：
“A three-stage process is outlined, in which the used bottles are collected and re-produced in the plant.“
接着，制作过程中的细节按照先后顺序铺开，并结合被动语态与准确的动词选择：“The resin was allowed to cool in shallow trays until it hardened, and then broken up and ground into powder.Other substances were then introduced, including„..In the last stage, the heated Bakelite was poured into a hollow mould of the required shape „”，其中的”cool, break, grind, pour”等动词都是在工作流程中的高频词汇。“then, in the last stage”也可以作为极好的连接过渡词。
剑五Test 4 Reading passage 2关于强化玻璃的说明文中也有类似的描述句式：“„ used to make glass, and nickel can also be introduced by fragments of nickel alloys falling into the molten glass.As the glass is heated, these atoms react to form „”
其中的“be used to, introduce, melt, heat”也都可以用在描述中。
3.图表的描述
由于阅读文章中也不乏对于数据的说明，我们也很容易找到可以在雅思图表作文中使用的句式。
剑四 Test 2 Reading passage 2中的一段“According to„, 18% of patients„;12% suffer from„, which is only 1% more than those„..Those suffering from„ represents 7% of their patients, and candida sufferers represent an equal percentage.„ represent 6% and 5% respectively, and a further 4% see… “
这是一段很好的排序段范例，在描写数据的同时也比较了大小，句式变化多样，考生也不妨学习一下。
4.辩论文章观点的表述
尽管没有与雅思写作辩论文章完全对应的形式，阅读文章中也有很多可以效仿的观点表述句式，与学生动辄“some people think„”的单调表述相比，其表达生动多样。在此进行了一些总结：
如“„ reject this, pointing out that„ ”，“When it comes to„,„”，“„ believe the main reason for„ is„”，“there is a widespread belief that„”，“It was once assumed that„..However,„”，“There is an abundance of evidence to support the belief that„” , “the answer to„ depends on„”，等。
总之，作为较为正式的英文表达，雅思阅读是极好的写作模仿对象。考生可以从阅读文章里汲取许多好的句式，以克服在日常写作中“中式英语”的问题。
5.用词
小表达 篇6
【关键词】 Survivin mRNA；外周血；RT-PCR；非小细胞肺癌
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.053 文章编号：1004-7484（2013）-06-2913-01
肺癌目前是全世界发病率、死亡率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌占80-85%[1]，但目前缺乏特异且敏感的早期病变的诊断指标。外周血中肿瘤标志物的检测有助于发现常规方法不能发现的存活于血循环中的微小肿瘤细胞灶。本研究旨在通过RT-PCR方法检测NSCLC患者外周血中survivin mRNA的表达情况，探求NSCLC早期诊断、早期血道微转移检测的特异、敏感指标，为临床应用提供理论和实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验对象 选择2010年4月至2011年2月大连医科大学附属第一医院收治的相关患者。恶性肿瘤组55例：男性31例，女性24例，年龄30-77岁；其中腺癌40例，鳞癌14例，大细胞癌1例。所有病例均经病理检查证实。患者采血前均未行化疗或放疗。对照组包括肺部良性病变组30例：男性18例，女性12例，年龄23-74岁；其中肺炎19例，肺结核球4例，炎性假瘤7例。正常健康对照组30例：男性15例，女性15例，年龄21-69岁，均无心、肝、肺等器质性疾病史。
1.2 方法
1.2.1 引物合成 在Gene Bank查找Survivin mRNA、β-actin mRN（内参）基因序列，引物由大连宝生物公司合成。
1.2.2 标本采集及Total RNA的提取 用枸橼酸钠抗凝经去酶处理的采血管，取患者晨空腹肘静脉血2.0ml。
淋巴细胞分层液分离核细胞，RNAiso Plus细胞裂解液裂解，氯仿，异丙醇进一步抽提总RNA。总RNA用紫外分光光度计定量，并行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，加入适量RNase-free灭菌水分装-80℃保存备用。
1.2.3 RT-PCR 逆转录反应条件42℃30min、95℃5min、5℃5min。在PCR反应仪中进行。反应产物-20℃保存备用。PCR扩增反应条件94℃5min，变性94℃30s，72℃延伸1min，共进行30个循环，最后72℃延伸5min.，Survivin mRNA复性62℃30s，β-actin mRNA56℃30s
1.3 统计学处理 应用SPSSV17.0统计软件包处理，用X2检验分析计数资料之间的比较，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 总RNA鉴定 实验中所抽提取的总RNA，其检测的OD260/OD280值为1.8-2.2之间。用1.0%琼脂糖凝胶电泳及EB染色分析可见28s、18s、5s三条带，表明完整性良好。
2.2 RT-PCR扩增图 用大连宝生物公司的DNA MarkerD（100bp-2000bp）作为相对分子量的质量标准，电泳结果可显示5条带（100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp）。指标Survivin mRNA的扩增产物为439bp；以β-actin mRNA268bp作为内参照，其在本实验所有标本中均稳定表达。阳性表达电泳图表现为439bp出现亮带。1%琼脂糖凝胶电泳，见图1。
2.3 3组外周血Survivin mRNA 的表达情况比较 在55例非小细胞肺癌组中Survivin mRNA表达率为61.82%；肺良性病变组表达率6.7%；健康对照组无阳性表达。非小细胞肺癌组较肺良性病变组及健康对照组差异有统计学意义（P=0.00）。Survivin mRNA在不同TNM分期、不同差异具有统计学意义（P=0.004）。不同病理类型组、不同年龄组、不同性别组的非小细胞肺癌患者，Survivin mRNA差异无统计学意义（P=0.446 、P=0.701和P=0.446），见表1。
3 讨 论
多数非小细胞肺癌患者在确诊时已有远处转移。早发现、早诊断、早治疗是提高非小细胞肺癌患者生存率和治愈率的关键。相对于传统方法，外周血肿瘤标志物检测是一个合理、安全、花费较小的选择。非小细胞肺癌患者血循环中微转移阳性的，生存期明显缩短，预后差[2]。因此选择适宜的方法，并在外周血中找到有助于非小细胞肺癌早发现、早诊断的肿瘤标志物具有重要的临床意义。RT-PCR是具有高度敏感性及异性的检测外周血肿瘤细胞的方法，目前得到了广泛应用，其检测的是基因在mRNA水平表达的情况，能在106-107个正常的细胞中检出1个肿瘤细胞，优于传统检测技术，適于用来检测外周血循环中存在的微量肿瘤细胞。Survivin是一种凋亡抑制蛋白，是目前发现的最具特异性的凋亡抑制因子之一。其特异性高表达于肿瘤组织，正常分化的组织则不表达。该特性决定了其可能为理想的肿瘤标记物，并成为肿瘤鉴别诊断以及判断预后等研究的新热点。Yie等研究发现，Survivin表达阳性者具有较高的复发率，生存期较短；通过多因素分析，Survivin是癌症复发的独立预测因子。Chen P的研究发现Survivin和临床分期是对无进展生存期和总生存期的独立预测因子。本实验发现外周血survivin mRNA的检测有助于早期血道微转移的发现，且随着TNM分期的增高，Survivin mRNA阳性表达率也显著增加，其在外周血中的表达可能是肺癌恶化发生复发转移所伴随的分子生物学变化，进一步提示其与患者预后息息相关。本研究认为采集外周血的方法，简便、安全易于临床应用。
参考文献
[1] Manegold C.Thatcher N.Survival improvement in thoracic cancerl progress from the last decade and beyond[J].Lung Cancer，2007，57 SuppI 2：S3-S5.
小表达 篇7
1 资料与方法
1.1 一般资料
方便选取该院收治的40例小细胞肺癌患者,其中男性34例,女性6例,年龄42~75岁,中位年龄59岁。
1.2 研究方法
40例小细胞肺癌标本均进行了Cg A、CD56、Syn免疫组化检测,染色结果判定为阳性或阴性。随访截止日期为2016年4月。
1.3 统计方法
数据分析采用SPSS 20.0统计学软件,分析Cg A、CD56、Syn的表达及NE表型与生存期的关系用百分率(%)表示,采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 小细胞肺癌中Cg A、CD56、Syn表达相关性分析
40例小细胞肺癌组织中,Cg A阳性表达12例,阳性率30.0%;CD56阳性表达35例,阳性率87.5%;Syn阳性表达25例,阳性率62.5%。Cg A、CD56、Syn间相互表达均不具有相关性,见表1。
2.2 Cg A、CD56、Syn的表达与SCLC临床病理参数的关系
SCLC组织中Cg A、CD56、Syn的表达与患者不同的临床参数之间,差异无统计学意义(P>0.05)。这些临床参数具体见表2。
2.3 小细胞肺癌无进展单因素生存相关分析
40例患者中位无进展生存期(PFS)平均8.6个月;3、12、6个月PFS分别是85%、62.5%、27.5%,PFS最长达到37.8个月。运用Log-rank检验行单因素生存分析,CD56与SCLC无进展生存相关(P<0.05)。Syn表达与SCLC无进展生存无关。Cg A、CD56、Syn相关3种NE表型之间PFS的差异具有统计学意义,中位无进展生存期最长的是三阳性组,为20.6个月;其次为双阳性组,8.0个月;单阳性组为7.3个月,见表3。
3 讨论
目前认为吸烟是小细胞肺癌的致癌因素。该数据也显示SCLC中吸烟的比例较高(62.5%)。吸烟引起[5]SCLC中抑癌基因P53突变,3p、17p染色体缺失,Rb基因缺失,E.cadherin表达下调,抗凋亡基因Bcl.2高表达。在免疫表型或超微结构上含有神经内分泌颗粒且神经内分泌标志物阳性,是肿瘤具有神经内分泌功能的典型表现。在各类神经肺内分泌肿瘤中均有不同程度的传统NE标记物表达(如Cg A、CD56、Syn等)[5]。国内一项对于62例SCLC的检测中[6],Cg A、CD56、Syn的表达率分别为9.7%,93.5%,87.1%。该组40例小细胞肺癌组织中,Cg A、CD56、Syn的表达率分别为30.0%,87.5%,62.5%。Stieber P等[7]综合分析了11个研究中BPNET肿瘤NE标记物的表达情况,发现分化较差的肺神经内分泌肿瘤类型中通常存在NE标记物的缺失。因此假设肺NET中神经内分泌分化的异质性可能在肿瘤侵袭过程及化疗敏感度等方面对肿瘤生物学行为有一定的影响,试图研究小细胞肺癌中神经内分泌(NE)表型的差异与预后和治疗的关系。研究发现,3种表型的小细胞肺癌的无进展生存期差异有统计学意义,与国内外文献结果相近。即双阳性组(1种神经内分泌标记物表达缺失)或单阳性组(2种神经内分泌标记物表达缺失)的SCLC其中位PFS(分别为7.3个月、8.0个月)远远低于三阳性组(20.3个月)。因此认为SCLC的无进展生存期与肿瘤神经内分泌分化的异质性有关,这种影响可能出现于病程的早期。虽然小细胞肺癌的神经内分泌特征较弱[8]。然而神经内分泌表型是小细胞肺癌预后影响因素之一,小细胞肺癌PFS较长的独立预后因素是Cg A、CD56、Syn的共同表达,在病程的早期影响肿瘤的进展,神经内分泌标记物的联合检测不仅能够用于SCLC的诊断,还可以为临床进行预后判断,可作为SCLC复发的预测因子及个体化治疗提供依据。其中可能存在的相互作用机制有待分子生物学研究进一步证实,此外因为该回顾性研究中样本量较少,存在一定的局限性,仅阐述一种可能存在的趋势。其结果有待于前瞻性大规模试验及免疫组化研究的进一步证实。
参考文献
[1]Osborne JK,Larsen JE,Shields MD,et al.Neuro DI regulates survival and migration of neuroendocrine lung carcinomas via signaling molecules Trk B and NCAM[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2013,110(16):6524-6529.
[2]Tanaka Y,Ogawa H,,Uchino K,et al.Immunohistochemical studies of pulmonary large cell neuroendocrine carcinoma:a possible association between staining patterns with neuroendocrine markers and tumor response to chemotherapy[J].Thorac Cardiovasc Surg,2013,145(3):839-846.
[3]张雯雯,孔庆暖,韩增磊,等.小细胞肺癌组织CD56、Cg A、Syn及TTF-1表达及联合诊断意义[J].齐鲁医学杂志,2013(2):109-111.
[4]Kalemkerian GP,Gadgeel SM.Modem staging of small cell lung cancer[J].J Natl Compr Canc Netw,2013,11(1):99-104.
[5]Montero-Hadjadje M,Vaingankar S,Elias S,et al.Chromogranins A and B and secretogranin II:evolutionary and functional aspects[J].Acta Physiol(Oxf),2012,192(2):309-324.
[6]Portela-Gomes GMl,Grimelius L,Stridsberg M,et al.Expression of amino acid sequences of the chromogranin A molecule and synaptic vesicle protein 2 in neuroendocrine tumors of the lung[J].Virchows Arch,2014,446(6):604-612.
[7]Stieber P.Pro-Gastrin-Releasing Peptide(Pro GRP)-A Diagnostic Biomarker for Small-Cell Lung Cancer[J].Zhongguo Fei Ai Za Zhi,2012,12(3):183-186.
小表达 篇8
1 资料与方法
1.1 临床资料
收集2007年1月~2008年1月哈尔滨医科大学附属肿瘤医院手术切除并经病理确诊的45例NSCLC患者的石蜡标本。其中,男29例,女16例;年龄34~78岁,中位年龄为62岁,其中年龄≤60岁组18例,>60岁组27例;按1999年WHO的肺癌分类标准:鳞癌19例,腺癌26例;高中分化25例,低分化20例;按1997年国际抗癌联盟修订的TNM分期标准:Ⅰ+Ⅱ期28例,Ⅲ+Ⅳ期17例(其中Ⅰ期11例,Ⅱ期17例,Ⅲ期15例,Ⅳ期2例);无淋巴结转移组22例,有淋巴结转移组23例。所有病例术前均未经过放疗及化疗。另外同时收集15例癌旁肺组织作为对照组。
1.2 主要试剂
鼠抗人Skp2单克隆抗体(产品编号为ZM-0454)、小鼠抗人PTEN单克隆抗体(产品编号为ZM-0221)、鼠抗人p27单克隆抗体(产品编号为sc-1641)、PV-6001/6002免疫组织化学试剂盒和DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物工程公司。
1.3 实验方法
所有组织标本以4μm连续切片4张:其中1张行苏木素-伊红(HE)染色,用于观察细胞形态及细胞分化程度等病理特征,;另外3张行采用Power VisionTM二步法进行免疫组织化学染色,观察各个指标的表达情况。
1.3.1 实验过程
常规脱蜡和水化;3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性;抗原修复:PTEN和p27均采用枸橼酸盐缓冲液(0.01 mol/L,pH6.4)修复抗原,Skp2采用EDTA缓冲液(1 mmol/L,pH8.0)修复抗原,分别行高压修复2、3和2 min,冷却至室温;PBS液洗涤切片;一抗孵育切片:Skp2和p27的工作浓度均为1︰50,PTEN的工作浓度为1︰100,4℃冰箱过夜;PBS液洗涤切片;按照PV-6001/6002免疫组织化学试剂盒的说明,滴加山羊抗小鼠IgG抗体-HRP多聚体,室温孵育切片;PBS液洗涤切片;DAB显色;自来水终止显色;核复染;切片脱水,透明,树胶封片。用PBS液代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定标准
Skp2、PTEN和p27阳性表达的标准:均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。在病变处随机选取至少10个高倍镜视野(×400),镜下视野清晰,无出血坏死,每个视野计数100个细胞,共计数1 000个细胞核,阳性率为计数1 000个细胞中着色细胞的比例。根据相关的参考文献[3,4,5,6],规定Skp2阳性表达的标准为阳性率>15%,PTEN阳性表达的标准为阳性率>30%,p27阳性表达的标准为阳性率>25%。
1.5 统计学分析
所有数据采用SPSS 13.0软件包进行分析。Skp2表达与临床病理特征之间的关系以及与PTEN和p27表达的关系采用χ2检验和Fisher精确概率法,Skp2、PTEN和p27三者之间的相关性分析采用Pearson相关分析。检验水准为α=0.05。
2 结果
2.1 Skp2在癌旁组织和NSCLC中的表达
癌旁组织中无Skp2阳性表达(图1),NSCLC组织中在癌巢区出现Skp2阳性表达(图2和3),其阳性率为40.0%(18/45),两者差异有显著性(P<0.01,表1)。
2.2 NSCLC中Skp2蛋白的表达与临床病理特征的关系
Skp2表达与患者的年龄及性别无关(均P>0.05),但与患者是否吸烟、肺癌的组织学类型、分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移相关(表2)。NSCLC中吸烟患者Skp2的阳性表达率为57.1%(12/21),高于不吸烟者的25.0%(6/24),两者差异有显著性(P<0.05);在肺鳞癌中的阳性表达率57.9%(11/19),高于肺腺癌中的26.9%(7/26)(P<0.05);高中分化NSCLC组织中的阳性率较低20.0%(5/25),低分化NSCLC组织中的阳性率明显增加,为65.0%(13/20),两者比较差异有显著性(P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期的NSCLC组织中阳性率为64.7%(11/17),较Ⅰ+Ⅱ期者的25.0%(7/28)明显增加(P<0.01);在无淋巴结转移组中的Skp2阳性率为22.7%(5/22),而有淋巴结转移组中的阳性率则为56.5%(13/23),两者差异有显著性(P<0.05)。
2.3 PTEN和p27在癌旁组织和NSCLC中的表达
PTEN和p27均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性表达(图4~7),二者在NSCLC组织中的阳性表达较癌旁组织中表达减低(二者在NSCLC组织中的阴性表达见图8和9)。在癌旁组织中,PTEN蛋白的阳性表达率为100.0%(15/15),NSCLC中的阳性率为55.6%(25/45),两者差异有显著性(P<0.01)。p27蛋白在癌旁组织中的阳性表达率为80.0%(12/15),在NSCLC中的阳性表达率则为42.2%(19/45),两者差异有显著性(P<0.05)(表3)。
2.4 NSCLC中Skp2蛋白表达分别与PTEN和p27之间的关系
见表4,经Pearson相关性分析,Skp2与PTEN的表达呈显著负相关(r=-0.456,P<0.01),Skp2与p27的表达呈负相关(r=-0.331,P<0.05)。
2.5 NSCLC中PTEN与p27之间的关系
见表5,,经Pearson相关性分析,两者呈显著的正相关(r=0.493,P<0.01)。
3 讨论
肿瘤发生的共同特征是细胞周期的调控机制紊乱而导致细胞的失控性生长。泛素-蛋白酶体途径是调节细胞周期调节因子的一个主要途径[7]。Skp2是ZHANG等[8]在1995年发现并命名的细胞S期激酶相关蛋白,其参与了泛素-蛋白酶体途径。Skp2以细胞周期依赖的形式在G1晚期开始出现,在S/G2期高表达,然后其m RNA和蛋白的水平迅速下降。许多细胞周期调控因子都经由泛素依赖性蛋白水解途径所降解,其中包括p27、p57、C-myc、p130、cyclinE、cyclin D1、cyclinB和p21等。Skp2能够介导磷酸化p27的泛素化降解,是细胞从G1期进入S期的必需因子[9],与细胞周期的调控、细胞的增殖及凋亡密切相关。脾、扁桃体、胎盘和结肠黏膜等正常组织中Skp2呈阳性表达[10]。在对人类肿瘤的研究中发现,Skp2蛋白在多种肿瘤中呈高表达,如结肠直肠癌、宫颈癌、口腔鳞状细胞癌、胃癌和肺癌等[11,12]。Skp2表达的增加与上皮细胞癌变、肿瘤的恶性程度及预后差有关。
本实验发现,Skp2蛋白在肺癌癌旁组织中不表达,在NSCLC组织中的表达阳性率为40.0%,两者差异有显著性(P<0.01)。同时证明Skp2的表达与患者的年龄及性别无关(P>0.05),但与患者是否吸烟、肿瘤的组织学类型、分化程度、TNM分期及淋巴结转移相关。与YOKOI等[13]所证实的NSCLC中Skp2蛋白在肺鳞癌、分化差的肿瘤和有淋巴结转移的肿瘤中过表达等结论相符合。
p27蛋白是细胞周期的负向调控因子,细胞由静止状态进入增殖状态时需p27的降解。因此,p27功能的缺失会加速细胞周期的进程,预示细胞可能恶性转化。由Skp2介导的泛素-蛋白酶体途径是p27降解的重要途径[14,15]。本实验发现,p27蛋白在癌旁组织中的阳性表达率为80.0%,而NSCLC中的阳性率为42.2%,可见p27在NSCLC中的表达低于癌旁组织,二者差异有显著性(P<0.05)。而且本实验发现,Skp2与p27蛋白的表达呈负相关(r=-0.331,P<0.05),在其他癌如胃癌[10]和前列腺癌[16]等的研究中也得到了同样结果。Skp2在多种肿瘤组织中的表达不同程度的升高,具有癌基因的特征,过度表达的Skp2因加速了p27的降解使细胞更易由G1向S期转变,导致细胞周期的调控紊乱,从而促进了肿瘤的发生和发展,这可能是Skp2蛋白的过表达参与肺癌发生和发展的机制之一。
PTEN基因是迄今发现的第一个具有双特异性磷酸酯酶活性的肿瘤抑制基因。研究表明,PTEN蛋白是一个多功能的磷酸酶,它通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-激酶)通路诱导细胞凋亡和控制细胞周期G1/S的转换从而抑制细胞的生长,其中p27是关键下游靶[17]。已经证实,在多种人类的恶性肿瘤中,PTEN均有不同程度的变异失活。本实验发现,PTEN蛋白在NSCLC组织中的阳性率为55.6%,明显低于癌旁组织的100.0%,二者差异有显著性(P<0.01),说明在肺癌的癌变过程中PTEN基因的失活或缺失起到了重要的作用,与陈明等[18]的研究结果基本一致。
最近,MAMILLAPALLI等[19]的研究发现,在鼠胚胎干细胞中,PTEN的缺失引起p27蛋白的水平下调,伴随Skp2蛋白表达的增加;相反,在人类胶质母细胞瘤中,PTEN蛋白的过表达导致p27聚集,伴随Skp2表达的减少;单纯Skp2的过表达可逆转PTEN诱导的p27的聚集,恢复cyclin/cdk2激酶的活性,克服PTEN诱导的G1期细胞周期阻滞。他们认为,Skp2可能是PTEN/PI3-激酶通路调节p27蛋白表达的一个重要成份。MA等[20]发现,在胃癌组织中Skp2的表达与p27及PTEN的表达分别呈负相关,p27及PTEN二者之间则为正相关。在本实验中可以看到Skp2与PTEN的表达呈显著负相关(r=-0.456,P<0.01),Skp2与p27的表达呈负相关(r=-0.331,P<0.05),PTEN与p27的表达呈显著正相关(r=0.493,P<0.01)。这些研究结果表明,肿瘤抑制蛋白PTEN的低表达或缺失,可能导致NSCLC中Skp2的表达升高,进一步促进p27的泛素化降解,使p27的表达降低,失去对细胞周期的调控,促进肿瘤的发生及恶性增殖。提示Skp2蛋白的过表达可能是肺癌发生和发展的一个重要原因,Skp2可能是PTEN/PI3-激酶通路调节p27蛋白表达的一个重要成份。
总之,在肺癌的恶性进程中,泛素-蛋白酶体通路控制的蛋白水平改变可能发挥了重要的作用。联合检测相关的3种重要蛋白,可以更好地评价NSCLC的恶性程度。Skp2在NSCLC中被诱导,为治疗肺癌提供了一个可选择的新靶点,可以开发以此分子为靶点的药物。
摘要：目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达意义及其与张力蛋白同源的10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)与p27之间的关系。方法 利用免疫组织化学方法检测45例NSCLC组织和15例癌旁组织中Skp2、PTEN和p27蛋白的表达情况。结果 Skp2蛋白在NSCLC中表达的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.01);Skp2的表达与是否吸烟、肺癌的组织学类型、分化程度、TNM分期和是否淋巴结转移相关(均P<0.05),但与患者的年龄和性别无关(P>0.05);PTEN和p27在NSCLC中的表达较癌旁组织降低(均P<0.05);在NSCLC中,Skp2与PTEN的表达呈显著负相关(r=-0.456,P<0.01);Skp2与p27的表达呈负相关(r=-0.331,P<0.05);PTEN与p27的表达呈显著正相关(r=0.493,P<0.01)。结论 Skp2在NSCLC中表达的升高,与NSCLC的发生、侵袭和转移有关,而PTEN和p27在NSCLC中表达的降低,提示PTEN的缺失可能导致Skp2的表达升高,促进p27的泛素化降解,使p27的表达降低,失去对细胞周期的调控,从而促进NSCLC的发生及恶性增殖。
小表达 篇9
1 资料与方法
1.1 一般资料
取2012-02~2013-06期间佳木斯大学附属第一医院收住的非小细胞肺癌手术患者术后组织标本和血清标本各42例为实验组,20例癌旁组织(距癌肿超过5cm以上的正常肺组织)及20例健康体检者血清为对照组。非小细胞肺癌患者男24例,女18例;年龄36~87岁,平均(63±11)岁;腺癌22例,鳞癌20例;TNM分期:I、II期26例,III期16例;组织病理类型:高、中分化19例,低分化23例。入选标准:所选患者均为首次手术且达到完全性切除并经病理学确诊,术前均未接受放化疗,1个月内未接受全身或局部激素治疗,未应用过抗肿瘤药物,排除合并有哮喘、肺囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病及不动纤毛综合征等其他肺部疾病的患者。均经患者家属知情同意。
1.2 主要试剂
兔抗人AQP3多克隆一抗,免疫组化染色试剂盒,人水通道蛋白-3 ELISA试剂盒,所需试剂均购自天津索罗门生物技术有限公司。
1.3 实验方法
(1)将待测标本统一切成4μm厚石蜡切片,其中每份标本备2张切片行常规HE染色及免疫组织化学染色。(2)NSCLC患者在手术治疗前抽空腹静脉自凝血2m L室温静置1h,离心(5000r/min),分离血清,冷冻保存,集中用ELISA法测血清中AQP3的浓度。各步骤严格按照检测试剂盒说明进行。
1.4 结果判定
(1)免疫组化SP法:由两位有经验的病理科医师对染色结果进行评判。以细胞膜或(和)细胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色。参照Ozdemir等的评分标准,按染色强度和染色细胞百分数进行评分,其中染色强度评分标准:浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分;染色细胞百分数评分标准:染色细胞<1/3为1分、1/3~2/3为2分、>2/3为3分。每张切片染色程度与染色细胞数得分相乘为其最后得分,得分<1为阴性,1~3为弱阳性(+),4~6为中阳性(++),7~9为强阳性(+++);表达程度的划分界限:(-)及(+)为阴性表达,(++)及(+++)为阳性表达。(2)免疫吸附实验:根据AQP3的标准品浓度及其对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线,再根据样品的OD值计算出相应的的样品浓度。
1.5 统计学处理
采用SPSS17.0统计软件。计数资料两组间比较采用χ2检验,计量资料采用两样本t检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 AQP3在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达
实验组患者的肿瘤组织标本阳性表达30/42例,阳性率为71.43%,对照组阳性表达6/20例,阳性率为30%,两者之间的差异具有显著统计学意义(P<0.05)。
2.2 AQP3在非小细胞肺癌患者血清中的表达
血清AQP3的表达在实验组患者组为(3.53±1.39)ng/L,而对照组为(2.80±1.07)ng/L,实验组表达量明显高于对照组,两组间差异具有显著统计学意义(P<0.05)。
2.3 AQP3在不同病理因素非小细胞肺癌患者的癌组织内和血清中的表达
AQP3在非小细胞肺癌组织中的表达水平与肺癌患者的性别、年龄、吸烟情况及TNM分期均无明显相关性(P>0.05),而AQP3在腺癌中的表达阳性率明显高于鳞癌(P<0.05),中、高分化组的表达阳性率明显低于低分化组(P<0.05),有淋巴结转移组的表达阳性率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),见表1。
AQP3在非小细胞肺癌患者血清中的表达水平与患者的性别、年龄、吸烟情况无相关性(P>0.05),而在腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05),在低分化组中表达高于中、高分化组(P<0.05),临床分期为III期组的表达高于I、II期(P<0.05),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05),见表2。
3 讨论
水通道蛋白是一组能介导水的快速跨膜转运的膜通道蛋白,分子量约30k Da,属于固有蛋白家族。该蛋白能增加细胞膜的通透性,参与水的分泌、吸收以及细胞内外平衡的调节。首次被人类认识的水通道蛋白是AQP1,是由Argre等鉴定人类Rh血型抗原时于红细胞膜上偶然发现的。随着研究的不断进展,目前已发现的该家族成员已有13个,即AQP0~12,称为水通道蛋白家族[1,2]。现对于呼吸道中AQPs的分布研究较明确的有AQP1、3、4、5四种,其中AQP3主要分布在气管和支气管的假复层上皮细胞基底膜以及部分肺泡Ⅱ型上皮细胞[3]。
恶性肿瘤细胞的快速生长、侵袭和转移除了需要蛋白质、脂类等营养物质外,还需要大量快速跨膜转运的水,近年来研究发现,AQP在肿瘤细胞的生长、血管生成、侵袭和转移中起重要作用[4]。研究表明,水通道蛋白可能参与肿瘤细胞的发生、转移过程[5]。有研究证实,AQP3在肿瘤细胞及肿瘤新生血管内皮细胞中均表达,提示AQP3参与肿瘤的血管生成[6]。推测AQP3表达的改变可能既影响了水分子的运输,又影响了细胞的生命活动。本实验通过两种方法检测了AQP3在肺癌中的表达情况,肺癌患者的癌组织和血清中AQP3的表达水平均显著高于正常对照组,其中,腺癌患者、低分化患者及有淋巴结转移患者肺癌组织中AQP3的表达水平分别高于鳞癌患者、中(高)分化患者及无淋巴结转移患者。这表明在肺癌发生过程中,随着恶性肿瘤细胞的增加,对水分子快速跨膜转运的需求增多,进而AQP3的表达也随之增加,由AQP3形成的水通道可能改变了癌变组织中细胞内的渗透压,转运了大量的小分子物质,加快了肿瘤细胞的快速增殖并向周围基质浸润,提示AQP3在肺癌发生、发展过程中可能起重要作用。另外,血清中AQP3水平上调是肿瘤发生过程的重要事件,也提示血清AQP3可作为肺癌诊断的辅助手段。在肺癌患者中,血清AQP3水平与TNM分期显著相关,而在肺癌组织中AQP3表达水平与TNM分期的相关性无显著的统计学意义,这种差异提示可能血液中AQP3的变化较组织中的变化更为敏感,也可因试验方法不同所致,有待进一步研究证实,研究样本量较少也可能造成这种差异。
综上所述,AQP3可能与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关,肺组织中及血清中AQP3表达水平的检测可能作为NSCLC的辅助诊断指标,尤其是血清中AQP3水平的检测具有相对无创、标本易得、可动态观察等优点,值得进一步推广。另外,本实验还提示AQP3抑制剂有待开发。
摘要：目的:检测水通道蛋白-3(AQP3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和血清中的表达,旨在研究其与非小细胞肺癌发生、发展的关系。方法:采用免疫组化法(SP)及酶联免疫法(Elisa)检测42例非小细胞肺癌患者组织和血清中AQP3水平。结果:(1)AQP3在非小细胞肺癌组织中阳性表达率(71.43%)显著高于对照组(30%)(P<0.05),AQP3的高表达与病理类型、分化程度、有无淋巴结转移有关,而与性别、年龄、是否吸烟、TNM分期无关。(2)非小细胞肺癌组血清AQP3浓度(3.53±1.39)ng/L,明显高于健康人组(2.80±1.07)ng/L(P<0.05),其高表达与病理类型、分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移有关,与性别、年龄、是否吸烟无关。结论:AQP3在非小细胞肺癌组织及血清中的表达异常增高,提示AQP3在非小细胞肺癌发生、发展中发挥作用,血清中AQP3表达水平的检测具有相对无创、标本易得、可动态观察等优点,可作为肺癌的一种检测指标。
关键词：水通道蛋白-3,非小细胞肺癌,免疫组化,ELISA
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小表达 篇10
RECK是1998年日本学者Takahashi[2]等发现的一种新的肿瘤抑制基因, RECK因子具有独特的抑制基质金属蛋白酶表达及活性的作用。研究表明, 许多恶性肿瘤如甲状腺癌、胰腺癌、子宫癌等患者RECK基因的表达水平与肿瘤的侵袭力呈负相关[3], 且RECK基因高表达的患者预后往往好于低表达的患者, 故认为RECK基因有可能是抑制肿瘤发生, 发展与转移的关键基因[3]。
1 材料来源与方法
1.1 标本来源
收集2010—09～2012—12佳木斯大学附属第一医院胸外科手术切除NSCLC组织标本45例, 其中鳞癌17例, 腺癌28例;高分化25例, 中、低分化20例;按UICC2002肺癌分期标准分期, Ⅰ、Ⅱ期29例, Ⅲ期16例;男25例, 女20例;有淋巴结转移的30例, 无淋巴结转移的15例;均为原发性肺癌, 且术前未接受放化疗, 取30例癌旁正常肺组织作为对照。
1.2 应用试剂
金属蛋白酶抑制因子RECK鼠抗人多克隆抗体 (bs-2901R) 购于北京博奥森生物技术有限公司、即用型基质金属蛋白酶-9鼠抗人单克隆抗体 (MAB-0245) , SP免疫组织化试剂盒 (KIT-9710) 、DAB显色试剂盒 (DAB-0031) 均购于福州迈新生物技术开发公司。
1.3 实验方法及步骤
肺癌组织标本经福尔马林液固定后常规石蜡包埋。将每例组织连续切片3张, 切片厚度为4μm, 进行常规HE染色和RECK、MMP-9免疫组织化学染色。将RECK抗体浓度稀释倍数为1∶100。实验步骤参照检测试剂盒说明进行。
1.4 结果判断标准
RECK和MMP-9两种蛋白染色阳性者为棕黄色颗粒样物质, 定位于细胞浆。通常在10×40高倍镜视野下, 随机选取10个视野, 计数肿瘤细胞中阳性比例计算百分率, 当阳性细胞<10%记为 (-) ;阳性细胞数在10%～25%记为 (+) ;阳性细胞数在25%～50%记为 (++) ;阳性细胞数>50%记为 (+++) 。
1.5 统计学处理
选用SPSS17.0统计分析软件。采用χ2检验及Spearman等级相关分析方法, P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 NSCLC组织中RECK、MMP-9的表达
在45例NSCLC组织中, 24例肺癌组织RECK呈阳性表达, 阳性率为53.3%;30例癌旁正常肺组织23例RECK为阳性[ (+) - (+++) ]表达, 表达率为76.7% 。MMP-9在36例肺癌组织呈阳性[ (+) - (+++) ]表达, 阳性率为80%;30例癌旁正常肺组织中MMP-9阳性率为56.7%。RECK和MMP-9阳性表达位于肿瘤细胞的胞浆中, 显色为棕黄色, 偶见间质和血管表达 (见图1～4) 。
2.2 肺癌组织中RECK、MMP-9的表达与临床病理因素的关系
RECK在非小细胞肺癌中的表达水平与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤直径、病理类型均无明显相关性 (P>0.05) , 而与肺癌的临床分期Ⅰ+Ⅱ期RECK的阳性表达率明显高于Ⅲ+Ⅳ期 (P<0.05) , 有淋巴转移组的RECK阳性率明显低于无淋巴转移组 (P<0.05) , 肿瘤高分化组的RECK阳性率显著高于中低分化组 (P<0.05) 。
MMP-9在非小细胞肺癌的表达水平与肺癌患者的性别、年龄、肿瘤直径及病理类型无相关性 (P>0.05) , 而MMP-9在非小细胞肺癌临床分期为Ⅰ+Ⅱ期组的阳性表达率明显低于Ⅲ+Ⅳ期组 (P<0.05) , 而有淋巴转移组的阳性率也与明显高于无淋巴转移组 (P<0.05) , 肿瘤高分化组的MMP-9阳性表达率明显低于中低分化组 (P<0.05) , 见表1。
3 讨论
非小细胞肺癌作为呼吸系统中最常见的恶性肿瘤之一, 对其中方方面面的研究已经做了大量的工作。研究表明, 肺癌的发生、发展、转移是一个涉及多阶段与多因素的复杂过程。本实验应用免疫组化技术对非小细胞肺癌组织与正常肺组织在抑制剂RECK蛋白及MMP-9中变化规律的研究, 同时了解两者在非小细胞肺癌中的临床生物学行为关系。
RECK是由ν-Ki-ras基因转染到小鼠的纤维原细胞 (NIH3T3) 而克隆到的cDNA表达中分离得到的一种新基因[4]。该基因定位于人染色体9p12-p13, 长度大约87kb, 共包含21个外显子, 20个内含子, 已发现13个单核昔酸多态性 (single nucleotide polymorphism, SNP) , 其中4个位于编码区域 (外显子1, 9, 13, 15) , 而其余9个位于内含子区域, 其转录产物为4.6kb, 编码一个相对分子质量为110000的膜锚合葡萄糖蛋白[5]。经研究观察发现RECK可以抑制基质金属蛋白酶 (MMPs) , 从而抑制肿瘤的侵袭和转移, 其主要在转录后水平抑制至少三种MMPs, 其中MMP-9是肿瘤侵袭转移过程中的主要酶是蛋白水解酶。RECK基因通常在正常组织中呈现为高表达, 但在存有各种肿瘤来源的细胞体系中或者转染了ras等癌基因的细胞中不表达或者表达的不明显, 许多癌基因如ras、fos、myc 等均可促使RECK基因的表达下调[6]。这表明RECK基因有可能成为癌基因共同作用的一个负调节靶位点。
本实验研究发现, RECK在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率 (53.3%) 明显低于在正常肺组织中的阳性表达 (76.7%) , 并随着肺癌病理分化程度的降低、淋巴转移的发生以及临床分期的升高而阳性率降低 (P<0.05) 。故表明RECK基因表达的高低与非小细胞肺癌发展的程度有着密切的相关性, 预示着RECK基因有望作为判断肺癌恶性程度及判断预后的依据。
MMP-9是MMPs家族的重要成员之一, 是由Sopata和Dancewicz在1974年从中性粒细胞提纯获取的。MMP-9是在1989年正式命名, 该基因定位于染色体20q12-ql3, 它能够降解、破坏细胞外基质中最主要的组成成分W、V型胶原和明胶, 从而进一步破坏基底膜的完整性[7]。而基底膜和细胞外基质 (extracellulla matrix, ECM) 是阻止肿瘤侵袭和转移的主要屏障, 在肿瘤侵袭和转移的过程中具有能够降解细胞外基质和基底膜的能力是其首要条件, 该过程涉及了大量的蛋白酶和抑制剂[8]。其中MMP-9具有能够降解ECM中所有成分和基底膜的胶原的功能, 能够促使肿瘤细胞向周边结缔组织生长进入脉管系统, 最后到达继发组织器官并开始扩展性生长[9]。此外, MMP-9通过对细胞外基质的反复降解, 促使新生淋巴管的生成, 使肿瘤沿淋巴管道道转移。通过淋巴道发生转移的肿瘤细胞又可以不断释放出IV型胶原酶, 从而进一步加速淋巴管的产生[10]。
本实验结果显示, MMP-9在肺癌组织中的过度表达与肿瘤的恶性程度、淋巴转移及临床分期相关 (P<0.05) , 与患者年龄、性别、肿瘤大小及肺癌病理类型无明显相关性 (P>0.05) 。MMP-9在正常肺组织中表达较低, 而在肺癌组织中表达较高, 其随着肿瘤分化程度的降低、临床分期的提高而阳性率升高。故MMP-9的表达水平的高低与肺癌发展的程度有关, 而且有可能作为判断肺癌临床分期的重要依据之一。
本试验通过对非小细胞肺癌组织中RECK与MMP-9的表达进行联合检测分析, RECK和MMP-9表达呈负相关 (r=-0.356, P<0.05) 。当肺癌组织中MMP-9的表达随着RECK表达的降低而升高, 提示在肺癌组织中RECK的表达受到抑制, 导致了对MMP-9抑制作用的降低, 从而出现MMP-9的高表达, 进而促进了肿瘤细胞的侵袭、生长和转移[11]。综上所述, 本研究提示RECK蛋白有可能通过抑制MMP-9表达来发挥抑制肺癌的发生和侵袭的作用, 同时本实验结果提示联合两者检测有可能成为判断肺癌临床分期及预测预后情况的重要指标, 及应用RECK基因生物学技术治疗肺癌, 但具体途径和方法目前尚不十分明确, 有待我们进行更进一步的研究。
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