钙依赖蛋白激酶

关键词： 窒息 心肌 新生儿 损害

钙依赖蛋白激酶（精选八篇）

钙依赖蛋白激酶 篇1

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年10月～2010年10月于本院妇产科转入儿科的窒息新生儿60例, 新生儿窒息标准根据Apgar评分, 出生后1分钟评价≤3分者为重度窒息, 4～7分者为轻度窒息[1], 其中轻度窒息41例, 男24例, 女17例;重度窒息19例, 男11例, 女8例。对照组为我院同期出生的健康足月新生儿30例, 其中男17例, 女13例。窒息组与对照组的胎龄、体重、性别均无统计学差异。

1.2 检测方法

所有新生儿均在出生后24h内经股静脉穿刺采血2ml置于无抗疑剂的试管中, 分离血清后4h内测定完毕, c TnI采用美国德普公司生产全自动电化学发光免疫分析仪测定, CK、CK-MB和Mb采用日本OLympus Au-2700全自动生化分析仪, 由检验操作人员严格按试剂操作说明书操作。CK的参考范围为25～200u/L, CK-MB的参考范围为0～24 u/L, c TnI参考范围为 (0～0.05ng/ml) , Mb的参考范围0～72 ng/ml。

1.3 统计学方法

测定结果以x±S表示, 采用t检验, P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组新生儿CK、CK-MB、c TnI和Mb检测结果见表

注:与对照组比较, *P<0.01, 与轻度窒息者比较, #P<0.01

3 讨论

新生儿窒息时, 由于缺氧和酸中毒会引起全身多脏器功能损伤, 尤以心脏受累最常见, 其发生率高达22.5%[2]。是新生儿窒息死亡的重要原因之一, 己越来越受到临床医生的重视。

CK在人体主要存在于骨骼肌中, 其次是心肌和脑组织中。CK有三种同工酶:CK-MM、CK-MB、CK-BB, 而心肌中CK-MB含量最多, 但CK-MB虽主要存于心肌中, 也存于骨骼肌中, 当骨骼肌受损时, 血CK-MB浓度即会升高, 所以其特异性会受到限制, 因此需要寻找一个敏感性及特异性较高的标志物来诊断心肌损伤。

心肌肌钙蛋白 (c Tn) 是近年来发展起来的一种敏感性、特异性好的反映心肌损伤的血清标志物。肌钙蛋白由肌钙蛋白C (c TnC) 、肌钙蛋白T (c TnT) 和肌钙蛋白 (c TnI) 3个亚基组成。c TnC在骨骼和心肌组织中的氨基酸序列完全相同, 不能作为心脏特异性标志物, 而c T-nT和c TnI具有心肌特异性, 在心肌细胞损伤时释放入血。当心肌的细胞膜完整时, c TnI不能透过细胞膜进入血循环, 故健康人外周血检测不到。在心肌细胞损伤早期, 游离于胞浆内的c TnI快速释出, 4～6h后升高, 18～24h达高峰, 持续3-7d。目前己有c TnI的胶体金层析法快速检测, 己大大缩短了检测时间, 为临床提供了更快捷的诊断。

肌红蛋白是存在于心肌和骨骼肌胞浆中的亚铁血红素蛋白, 肌红蛋白在心肌损伤后1～4h就可在血液中检测到, 6～7h达峰值, 是心肌损伤时血清中最早出现的生化标志物, 肌红蛋白无心肌特异性, 但其心肌和骨骼肌中含量丰富, 在心肌损伤时能迅速释放入血, 具有高度敏感性。

本组资料结果显示, 新生儿轻度窒息组患儿血中CK、CK-MB、c TnI、Mb浓度较健康对照组明显升高, 差异有统计学意义 (p<0.01) 。重度窒息组CK、CK-MB、c TnI和Mb浓度明显高于轻度窒息组和健康对照组, 与两个组比较差异有统计学意义 (p<0.01) 。由此可见新生儿窒息时血清CK、CK-MB、c TnI和Mb浓度明显增高, 并与窒息程度成正比, 与文献报道一致[3-4], 因此临床上在怀疑有新生儿窒息时, 可通过检测血清CK、CK-MB、c TnI和Mb的浓度来早期发现心肌损害及心肌损害的程度, 判断心脏功能, 并采取相应的措施改善心功能, 防止心力衰竭, 降低新生儿死亡率。

摘要：目的 探讨新生儿窒息后肌酸激酶 (CK) 、肌酸激酶同工酶 (CK-MB) 、肌钙蛋白I (cTnI) 和肌红蛋白在心肌损伤早期诊断的临床意义。方法 采用免疫化学发光法和酶动力学法来对60例窒息新生儿及30例健康足月新生儿进行CK、CK-MB、cTnI和Mb检测。结果 窒息新生儿组CK、CK-MB、cTnI和Mb值与健康新生儿组比较均显著升高 (P<0.01) , 且随窒息程度加重而升高。结论 窒息对新生儿心肌产生损伤, CK、CK-MB、cTnI和Mb能较好地反映心肌损害程度。

关键词：肌酸激酶,肌酸激酶同工酶,肌钙蛋白I,肌红蛋白,新生儿窒息

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇2

【关键词】慢性肾功能衰竭;肌钙蛋白I;心肌损伤

【中图分类号】R722.1【文献标识码】B【文章编号】1672-3015（2011）01-0022-03

The role of Serum cardiac troponin I, creatine kinase isoenzyme - Ⅱ assay in renal failure patients

Zhai Jinjun

【Abstract】Objective:To observe the chronic renal function decline in patients with scorpion cardiac troponin, creatine kinase isoenzyme-Ⅱ abnormal changes and analyze its relationship with prognosis. Methods:ACCESS2 Chemiluminescence detection in patients with chronic renal function decline scorpion cardiac troponin, creatine kinase isoenzyme-Ⅱ, color Doppler determination of left ventricular ejection fraction (EF), while patients with elevated cardiac troponin for APACHE Ⅱ score. Results:48 cases of cardiac troponin I in patients with elevated rate of 44.4%; APACHE Ⅱ score in patients with elevated cardiac troponin increased significantly; serum cardiac troponin I, creatine kinase isoenzyme-Ⅱ also elevated in patients a high incidence of heart failure. Conclusion:Chronic renal failure is more common in patients with myocardial injury and the part is sub-clinical damage, be treated with caution.

【Key words】Chronic renal failure; Troponin I; myocardial injury

心肌损伤标记物是临床诊断心肌梗死（ MI）的重要方法之一,尤其是心电图改变不明显或为无 Q 波的心肌梗死、 不稳定性心绞痛、 心力衰竭、 心肌炎或中毒性心肌损伤时,具有高度特异性和敏感性的心肌标记物的检测至为关键。但临床无心肌缺血证据的终末期肾病（ESRD）患者血清心脏型肌钙蛋白 I( cTn I)水平常常升高。目前对其确切机制及临床预后意义仍存较大争议 。本研究针对通过检测肌钙蛋白 I ( cTnI)、肌酸肌酶同工酶-Ⅱ`(CKMB-Ⅱ)心肌损伤血清标志物与心功能指标, 来探讨 ESRD患者合并其它疾病时临床预后与心肌损伤标记物的关联, 为有效预测和防治ESRD心肌损伤提供临床依据。

1资料与方法

1.1一般资料:所有ESRD患者均来自本院急诊抢救室的2007年7月至 2009年 7 月收治的急诊患者,共45 例,其中男性31例, 女性14例, 年龄29～66岁。排除同时合并急性左心衰、心肌梗死、不稳定性心绞痛、恶性心律失等严重心血管疾患者，剔除有胸痛并有下述条件之一者:动态心电图观察提示明显的 ST段抬高或压低>1 mv。 基础病 ：慢性肾小球肾炎 5例 糖尿病例 33,肾小动脉硬化 4例,多囊肾3例 。

1．2方法:所有患者入院后 48 h 内空腹取静脉血用ACCESS2化学发光法行 cTnI定量检测、肌酸磷酸激酶同工酶-Ⅱ (CKMB-Ⅱ) 定量检测, CKMB-Ⅱ> 4.0ng/ ng/ml 为增高,cTn I>0.04μng/ml 为增高，cTn I>0.5μng/ml 为心梗指标; 同时计算心肌肌钙蛋白升高患者的APACHEⅡ评分、床边心脏彩色多普勒测定左室射血分数(EF);记录临床表现。

1．3统计学处理:所有数据均用SPSS 10.0统计软件进行分析。用单因素方差分析比较两组 CK- MB、APACHEⅡ评分、EF。所有量资料以(x±s) 表示, 以P<0.05表示差异有著性,P<0.01为差异有非常显著性。

2cTn I水结果

2.1不同系统疾病患者cTn I检测及升高分布情况:45例患者中 cTn I升高20例(44.4%),其中10例(22.2%)达到诊断心梗指标。cTn I升高的前 3位疾病为肺炎(6例)、不全肠梗阻 (3例) 急性阑尾炎(2例)；cTn I均未见升高有电解质紊乱(10例)、药物中毒患者(4例)、上呼吸道感染(11例)。

2.2慢性肾功能衰竭组心肌肌钙蛋白升高患者APACHEⅡ 评分及cTn I水平,见表1。

表1APACHEⅡ 评分、cTnI值的比较

组别例数cTn IAPACHEⅡ评分0．5≥cTnI≥0.04组10例0．17±0.13*11．05±5.12*cTnI≥0.5组10例2．01±1.6224.51±6.23注:与cTnI≥0.5组比较*P<0.05

2.3cTnI≥0.5患者中观察中有症状（有不同程度的胸闷、呼吸急促或心绞痛症）与无症状患者入院时cTnI值、CK-MB值及左室射血分数 ( EF)测定,见表2。

表2CK 2MB、LDH1、APACHEⅡ 评分、EF值的比较

组别例数cTn IEFCK-MB无症状6例2．64±1.8754.50±11.72%4．25±2.14有症状4例3．57±0.6630.23±10.22%*16．28±5.62*注:与无症状组比较*P<0105

3讨论

在对终末期肾病患者的诊治过程中, 笔者注意到患者心肌损伤血清标志物有不同程度的升高, 特别是cTnI阳性情况时有发生达（44.4%)，尤其在感染较重的患者中易检测到，而且临床无症状及心电图变化。近年文献也提示在临床无急性冠状动脉综合征症状的ESRD者中,相当数量的患者血清心脏肌钙蛋白水平不同程度地升高,在0%～15%之间[1,2]说明终末期肾病患者有合并症时更易引起cTnI升高，也说明终末期肾病患者有合并症时更易损伤心肌，据统计,终末期肾病(ESRD)患者每年病死率高达 23%,其中近1/2死于心血管事件,多数学者认为,血清肌钙蛋白升高来源于心脏,是各种原因引起的心肌微损伤或微梗死导致心肌cTn I释放入血清的结果,是不良心血管事件及死亡危险的独立预测因素。最近完成的包括1951例ESRD患者的临床试验结果显示,血清肌钙蛋白升高,即使是轻度升高 ( 0.01～0.10•734 μg/L)也能预测亚临床心脏不良事件[3] 。

但也有研究不支持上述结论,或者认为是血清肌钙蛋白非特异性升高,或者认为是心外来源,不能预测临床结局。当肾功能受损时, cTnT片段积聚,导致血清 cTnT水平上升。肾移植后,血清 cTnT水平迅速下降支持这一观点[4] 。

笔者以 cTnI检测结果进行分组统计比较。提示cTnI升高患者的APACHEⅡ 评分高于cTnI正常的。APACHEⅡ 评分系统由于较客观全面, 具有高度灵敏性和阴性预测价值, 已成为国际上应用最为广泛的危重病预后评分系统。APACHEⅡ 评分能有效评估终末期肾病 患者的疾病进展程度和预后。说明根据cTnI水平可以预测患者的预后，有其临床意义。

cTnI达心梗指标是否一定影响心肌，笔者观察到当CKMB-Ⅱ与cTnI同时升高时患者出现心衰症状及检测到低的EF值， cTnI水平增加反映出左心室肥厚和/或心肌损伤[5]从本研究中提示cTnI升高不一定就影响心功能，结合CKMB-Ⅱ同时升高者说明心肌有严重损伤而造成心功能下降。这说明cTnI能较敏感反映心肌受损，但不能反映心肌坏死范围，且其持续时间长达10-14天左右，不能反映近日心肌状况。而CKMB-Ⅱ在心肌坏死4小时内升高，与坏死范围相关，且持续时间仅约3-4天。当二者均升高时提示一定有心肌坏死且范围较大。

正常成人的心肌只有一种 cTnI,而所有的动物实验和临床研究均表明无论在生长发育期、成熟期,还是在疾病状态,骨骼肌中均无cTnI 的表达和再表达在各种正常和病态的骨骼肌中均无 cTnI表达和再表达的证据[6]。通过本临床观察提示我们在终末期肾病患者中无论何种原因造成cTnI升高，均提示患者有潜在的心肌受损，而对于临床有意义的不仅是判断心肌损害是否存在，更应判断肌钙蛋白升高是否能反映出可逆或不可逆的心肌损伤,以及怎样区分可逆性心肌损害与坏死，指导医生合理安排患者的检查及治疗，避免医疗资源浪费及增加患者负担。

cTnI可以作为 ESRD 患者心肌损伤的重要标记物，更好的评价是将 ESRD 患者的临床症状、 心电图检查、 心肌标记物(首选 cTnI)的重复检测结果进行综合分析,以甄别患者血液中心肌标记物的变化是肾功能的影响抑或是出现了心肌损伤，怀死。

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇3

黄酮类化合物是一类植物中普遍存在的苯并色酮类衍生物,大量数据表明其在癌症的预防以及治疗中发挥重要作用[5]。Flavopiridol是一种可人工合成的黄酮,作为第一个进入临床试验的CDK抑制剂[6],研究发现它对多种肿瘤细胞系,如肺癌、乳腺癌等均具有抗肿瘤活性,而且可以抑制异种嫁接模型中肿瘤的生长[7]。本研究以Flavopiridol作为参照,设计合成了7个新的查尔酮类似物,对这些化合物进行了结构确证,并测定了他们对CDK1的抑制活性以及对HCT116的体外抗肿瘤活性。

1 材料与方法

1.1 仪器

RY-1熔点测定仪(温度计未校正),VERTEX 70 Brucker红外光谱仪,API 4000型质谱仪,Advance Brucker 400型核磁共振仪,所使用的溶剂为氘代试剂,以TMS为内标。

1.2 目标化合物的合成

合成路线见图1。

R:分别为4-CH3;4-OCH3;4-Cl;4-Br;3-CH3; 3-OCH3;3-Cl七种取代基。1.2.1 化合物2、3的合成 方法与文献研究[8]相同。1.2.2 1-(2-羟基-4,6-二甲氧基苯基)-3-对甲基苯基-丙-2-烯-1-酮的合成(化合物4a) 氢氧化钾10.0 g溶于80 mL乙醇和20 mL水的混合液中,再投入4.0 g化合物3(0.02 mol)和对甲基苯甲醛3.6 mL(0.03 mol),于室温搅拌3 h后,用2 N盐酸溶液调 pH至8～9,析出大量固体,抽滤,固体用水洗至中性,干燥得黄色粉末5.5 g,回收率92 %。1.2.3 化合物4b-4g的合成 方法同化合物4a的合成。1.2.4 (E)-1-[2-羟基-4,6-二甲氧基苯基-3-(哌啶甲基)苯基]-3-(4-甲基苯基)-丙-2-烯-1酮的合成(化合物5a) 化合物4a 1.6 g(5.0 mmol)、多聚甲醛0.5 g(15.0 mmol)、哌啶1.0 mL(11 mmol)、甲醇20 mL投入反应瓶中,搅拌后加入盐酸数滴,回流2 h,冷却,减压回收溶剂,加水稀释,用5 %氢氧化钠溶液碱化,二氯甲烷40 mL,提取3次,饱和氯化钠溶液30 mL,洗涤3次,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压回收后,用无水乙醚浸泡,抽滤得黄色粉末1.2 g,硅胶柱层析,洗脱剂为石油醚 ∶乙酸乙酯 ∶三乙胺。1.2.5 化合物5b-5g的合成 方法同化合物5a的合成。1.3 目标化合物的结构确证 目标化合物结构分别用IR、1H-NMR、ESI-MS确证。1.4 目标化合物的活性测定1.4.1 目标化合物对CDK1抑制活性的测定 方法与文献研究[9]相同。1.4.2 目标化合物对HCT116的体外抑制作用 采用MTT法,由美国佐治亚州立大学化学系完成。

2 结果与讨论

本研究合成了7个化合物,经过IR、1H-NMR、ESI-MS证实,所合成的化合物与预期结构一致,详见表1(由于化合物5f所余量很少,所以没有做IR)。对合成的7个化合物进行活性测定的结果表明,化合物5b、5c和5d对CDK1的抑制活性高于对照Flavopiridol,所有化合物对HCT116的体外抑制活性都低于Flavopiridol,但IC50值也都在微摩尔数量级,其中5c、5d、5e、5f的IC50在2～3 μM,显示出较强的抑制活性,详见表2。上述结果表明Flavopiridol中的哌啶环被一个连有亚甲基的哌啶环代替后,有可能得到活性更好的类黄酮,这为我们今后寻找此类CDK抑制剂提供了参考。

摘要：目的:寻找活性更好的类黄酮CDK s抑制剂。方法:利用M ann ich反应制备7个查尔酮类类黄酮。结果:目标化合物的结构经过IR、1H-NMR、ESI-MS确证,并测定了化合物对CDK1的抑制活性以及对HCT116的体外抗肿瘤活性。结论:其中有3个化合物对CDK1的抑制活性高于对照F lavop iridol,所有化合物对HCT116显示较强的抑制活性。

关键词：查尔酮,CDK1抑制活性,体外抗肿瘤活性

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年1月-2011年12月在本院住院的AMI患者90例, 男70例, 女20例, 年龄30~75岁。对符合溶栓条件的32例患者行溶栓治疗[1,2]。其余患者因入院时间已超过发病6 h或有溶栓禁忌证而未行溶栓治疗。AMI患者入院后即刻抽血1次, 以后每4小时抽血1次至发病后24 h, 之后每日晨各抽血1次, 连续10 d。分离血清后立即测定c TnI浓度和CK-MB活力。

1.2 方法

cTnI测定采用免疫化学发光法, 仪器为美国康仁公司ACS;180SE全自动免疫化学发光分析仪, 试剂为配套试剂。CK-MB由日立737全自动生化分析仪进行测定, 试剂由澳斯帮生物工程有限公司提供。

1.3 统计学处理

采用PEMS 3.1对数据进行统计学处理, 计量资料以表示, 采用t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AMI血清cTnI与CK-MB变化比较, 见表1。 (1) cTnI上升时间在溶栓组与CK-MB平行, 在未溶栓组则迟于CK-MB出现 (P<0.01) ;溶栓再通组 (22例) 的cTnI与CK-MB达到峰值时间均早于溶栓未通组 (10例) 和未溶栓组 (58例) (P<0.01) , 而每组患者的cTnI和CK-MB的变化时间差异无统计学意义 (P>0.05) ;各组cTnI持续时间明显长于CK-MB (P<0.01) ; (2) 溶栓再通组的cTnI与CK-MB的峰值增高倍数明显高于溶栓未通和未溶栓组 (P<0.01) 。

*与对应的cTnI时间相比, <0.01;△与未溶栓, 溶栓未通相比, <0.01

2.2 在AMI发生12 h内cTnI的敏感性 (60.9%) 略低于CK-MB (75.6%) , 12~24h内cTnI的敏感性 (95.6%) 和CK-MB (93.3%) 相当, 24 h后cTnI的敏感性 (80.0%) 明显高于CK-MB (46.7%) 。

2.3 AMI患者均有cTnI和CK-MB的阳性改变, 诊断特异性分别为100%和94.1%。

3 讨论

肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成, 即肌钙蛋白T (TnT) 、肌钙蛋白J (Tnl) 和肌钙蛋白C (TnC) 。cTnI较早应用于临床, 对心肌损伤具有高度的敏感性和特异性, 但近来大量的研究表明, 在骨骼肌损伤、肾功能不全长期透析及某些肌病的患者, 其血清中c TnI可以升高[3,4,5], 而cTnI正常, 说明cTnI心肌特异性高于cTnI[6]。

cTnI以两种形式存在于心肌细胞中, 5%为可溶性, 激离于胞浆中, 95%为不可溶性, 结合在肌纤维上[7]。当心肌细胞因缺血缺氧发生坏死时, 游离于胞浆中的c TnI首先通过细胞膜释放人血, 继而结合型的cTnI在被激活的蛋白分解酶作用下持续而缓慢地进行释放, 由此导致cTnI与同时以游离形式存在于胞浆内的CK-MB在开始升高时间和达到峰值时间达到一致, 且持续时间明显延长, 这说明cTnl既适于AMI的早期诊断, 又适于亚急性心肌梗死的诊断。

本文观察发现, 未溶栓的AMI患者, 其cTnI升高时间晚于CK-MB, 且在12 h内敏感性低于CK-MB, 因而CK-MB的检测对早期诊断AMI有重要意义。cTnI释放与CK-MB一样受血管再通的影响, 在溶栓再通时, cTnI和CK-MB达到峰值时间明显早于未溶栓组和溶栓未通组, 说明cTnI和CK-MB一样可被用于监测再灌注疗法的效果, 为其提供实验室诊断依据。本文观察到的cTnI在血中升高时间、达到峰值时间与以往的报道基本一致。cTnI在血中恢复正常时间比CK-MB时明显延长, 在CK-MB恢复正常后, 仍可通过检测cTnI对AMI进行明确诊断。

综上所述, 血清cTnI和CK-MB的联合检测对诊断AMI、评价冠状动脉再灌注有重要意义, cTnI是一种优于CK-MB的辅助诊断AMI的特异性血清标志物。

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇5

关键词：高敏C反应蛋白,肌红蛋白,心肌梗死

急性心肌梗死(AMI)是急性冠脉综合症常见表现之一,由于冠状动脉血流动力学急剧改变造成病变血管短期内堵塞,其供血区内心肌缺血缺氧坏死造成一系列坏死病变发生。目前经皮冠状动脉成型术(PTCA)是冠脉再通的最好方法,能大大提高生存率和患者的生活质量,但该方法的最佳应用时机是在心肌损伤的早期即AMI发病6h内,能早期诊断对治疗具有积极作用。而在急性心肌梗死患者中,据美国疾病预防控制中心(CDC)和美国心脏病协会(AHA)公布:有33%患者症状不典型,心电图诊断的敏感性也只有50%,为此笔者探讨联合检测患者发病早期血清中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MB)和肌红蛋白(Myo)的含量,以及时确诊AMI而获得最佳治疗时间。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取并回顾性分析2011年1月至2012年10月来我院就诊并诊断为急性心肌梗死患者70例及同时期进行体检的健康人群70例。研究组为急性心死患者,发病均在6h内,其中男性57例,女性13例,年龄范围32-78岁,平均年龄(64.7±11.6)岁。发病时间为2-6h,平均病程(3.7±0.8)h,前壁梗死43例,下壁梗死21例,后壁梗死6例。对照组为同期体检健康人群,男性55例,女性15例,年龄范围28-75岁,平均年龄(63.2±8.2)岁。患者满足以下条件:(1)研究组患者诊断均符合中华医学会心血管学分会等2001年制定的标准[1],经临床心电图、冠状动脉造影、超声心电图等检查确诊;(2)对照组经临床心电图、冠状动脉造影、超声心电图等检查排除冠状动脉疾病;(3)排除局部外伤、肺或胸膜病变及严重肝肾功能不全、恶性肿瘤等干扰相应考察生化指标疾病患者;(4)所用研究对象均签署知情同意书。两组受检者性别构成比、年龄比较差异无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

体检者在空腹状态下抽取静脉血4ml,入院患者于发病后3h、6h、12h、24h取静脉血3ml,所用血液样本均置于干燥洁净真空试管中,经过37℃水浴30min后,分离血清,加盖分装后冻存于-20℃冰箱冰冻待测。使用Roche P800全自动生化分析仪检测高敏C反应蛋白(hs-CRP);使用Roche Cobase411全自动电化学发光分析仪检测心肌肌钙蛋白T(c Tn T)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MB)和肌红蛋白(Myo),试剂均为德国罗氏诊断有限公司生产。各项指标参考值如下:hs-CRP测定正常参考值为0-5mg/L;CK-MB参考值为男≤4.94ng/ml,女≤2.88ng/ml;c Tn T正常参考值<0.2ng/ml;Myo正常参考值<58ng/ml。将各项指标中大于参考值上限时定义为阳性。

1.3 统计学处理

应用SPSS17.0(产品与服务的统计学解决方案)软件来进行数据的统计及处理。以(x±s)来表示数据,以t检验应用于计量资料,以χ2检验应用于计数资料,采用q检验对两组数据进行比较,将P<0.05做为其差异标准。

2 结果

2.1 观察两组患者高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肌红蛋白(Myo)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)和肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)检测值及阳性率,研究组无论是检测值还是阳性率均明显高于对照组,差异存在统计学差异(P<0.05),详见表1-2。

2.2 观察两组患者发病后3h、6h、12h、24h时高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肌红蛋白(Myo)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)和肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)检测值,hsCRP最高峰出现在发病后12-24h之间,Mb最高峰出现在发病后6-12h内,c Tn T最高峰出现在发病后12-24h,CK-MB最高峰出现在发病后12-24h内。具体如表3。

2.3 综合分析入院时两组患者四项指标检测数值,将四项指标联合诊断,其中有不少于一项数值升高达到AMI诊断指标即为阳性,该联合指标敏感度为70/70(100%),分别高于单项检测hs-CRP阳性率(97.14%)、Myo阳性率(64.32%)、c Tn T阳性率(92.85%)、CK-MB阳性率(58.5%),联合诊断阳性率与Myo阳性率、c Tn T阳性率、CK-MB阳性率存在统计学差异(P<0.05)。

3 结论

当AMI发生时,病变冠状动脉几乎完全梗塞,缺乏代偿供血,心肌细胞因缺血缺氧发生损伤,细胞膜完整性及通透性改变,如果不能得到及时治疗,细胞发生不可逆性坏死和崩解,引起坏死心肌细胞释放某些特定化学物质入血,这类物质能够帮助临床医师诊断AMI[2]。

心肌损伤常用检测指标有Myo、c Tn T、CK-MB。Myo是广泛存在于心肌、横纹肌中的多肽链,也是亚铁血红蛋白,在心肌损伤和骨骼肌损伤或剧烈运动时升高。AMI发生时结合心电图变化,Myo具有高度敏感性,且其分子量较小可以很快从破损的细胞中释放入血液循环并能在早期升高[3],是AMI早期诊断的主要的指标。c Tn T存在于心肌和骨骼肌中,在AMI发生3h内即可增高[4,5],本文发现其高峰出现在发病12-24h内。即使在心肌微小损伤时,该值也能升高,具有较高的灵敏度,但持续时间长,不宜识别新AMI或是发生后期。CK-MB敏感度较差,AMI、心肌炎和肌损伤时也能升高。由于AMI多发生在存在冠脉粥样硬化的基础上,各种诱因导致斑块破裂、血栓形成、冠脉痉挛,呈序贯或同时发生,引起强烈炎症反应,同时后者可降低血栓稳定性,增加血块破裂和冠脉闭塞危险。hs-CRP是参与炎症反应的急性时相蛋白,在IL-6介导下,促进组织损伤,在AMI发生2-12h内即可明显升高且几乎与炎症和组织损伤程度成正比[3]。当心肌瘢痕修复完成时,hsCRP含量也随之下降,这与本文报道相符。本文研究组有近97%的患者均出现hs-CRP升高,且最高值明显,通过冠脉再通治疗后此值明显下降,并几天内维持一定水平。但是对于健康研究对象检测时,少部分患者也出现检测值升高,但升高程度有限,考虑可能和个体差异及自身体内轻度炎症有关。hs-CPR虽然不是针对心肌坏死的特异性指标,但其大幅度升高能够提示大范围组织坏死可能性,在结合临床症状和病史时具有较高敏感性[4]。同时有报道发现hs-CRP增高时患者的整体死亡率明显增高,故检测该指标并进行干预能够相对阻止AMI患者死亡率增加。

当AMI发生时,患者血清内Myo、hs-CRP、CK-MB和c Tn T值均有所升高,但由于受特异性和敏感度的影响,单相检测不能明确诊断或排除AMI,通过四项联合检测给临床医院能够提供更多患者信息,排除骨骼肌等损伤,对AMI诊疗及其他急性心肌损伤均有较大参考价值,可作为AMI发生早期、疗效、再发AMI的有效实验室指标。

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇6

1 资料与方法

1.1 资料

通过计算机检索《万方数据库》、《中国知网》、《重庆维普》、《pubmed》, 进行对所有纳入文献参考的参考文献的筛选, 收集公开发表的c Tn I和CK-MB对儿童VMC诊断价值的研究文献。中文检索词为病毒性心肌炎、心肌肌钙蛋白I、肌磷酸激酶MB。

1.2 文献纳入标准

(1) 独立对照研究; (2) VMC诊断明确; (3) 文献研究而结果以计量单位表示。文献排除标准:对每篇文章进行质量评价;剔除重复报告、质量差及无法利用的文献。

1.3 排除标准

(1) 存在研究设计缺陷, 质量差; (2) 数据不完整、结局效应不明确; (3) 统计方法错误且无法修正; (4) 无法提供或可供转化为OR (RR、率、HR) 及其95%可信区间; (5) 无对照的临床报告; (6) 没有发表、重复发表和正在发表的文章。

1.4 文献的质量评价

根据纳入标准, 采用Jadad评分量表进行评价, 最后筛选出质量较好的6篇[4,5,6,7,8,9]进入meta分析, 是由于他们在试验随即化的设计上更加合理, 数据更科学。

1.5 资料提取

阅读全文后进行资料提取, 内容包括心肌炎组和空白组c Tn I阳性例数、阴性例数及CK-MB阳性例数和阴性例数。将其转换为真阳性、假阳性、假阴性、假阳性。

1.6 资料分析

采用Rev Man 5.0软件对资料进行meta分析。首先通过χ2检验对同类研究间的异质性进行评价, 若P≥0.1, I2≤50%, 说明研究间存在异质性的可能性小;若P<0.1, I2>50%, 说明研究间具有异质性, 则对其异质性来源进行分析, 根据可能出现的异质性因素进行亚组分析 (如亚组只有1项研究, 仍采用与meta分析相同的统计量) , 必要时采用敏感性分析来分析检验结果的稳定性, 若异质性过大并不能判断其来源则放弃meta分析改为描述性分析。

2 结果

2.1 文献基本情况

共检索到39篇相关文献。根据文献的入选和排除标准, 经筛选有6篇文献纳入本meta分析, 见表1。

2.2 c Tn I诊断VMC的meta分析

通过6个研究文献结果经同质性检验, c Tn I组χ2=11.24, P<0.05, 说明各研究间不同质, 所以采用随机效应模型计算合并后的综合效应。效应合并值c Tn I组d=77.86, 其95%的可信区间为 (21.84~277.54) , 可以认为c Tn I诊断心肌炎有统计学意义, 即c Tn I可以诊断心肌炎。提取有效数据, 计算灵敏度、特异度等指标, 见表2, SROC曲线 (Sumnary ROC curve) 见图1。

2.3 CK-MB诊断VMC的meta分析

文献检索出的6篇文献, CK-MB组χ2=17.67, P<0.05说明各研究间不同质, 采取随机效应模型计算合并后的总和效应, 效应合并值CK-MB组d=15.64, 其95%的可信区间为 (4.77~51.22) , CK-MB诊断心肌炎具有统计学意义。提取有效数据, 计算灵敏度, 特异度指标, 见表2, SROC曲线见图2。

2.4 c Tn I和CK-MB诊断VMC的meta分析比较

通过meta分析, 对SROC线性回归模型进行参数求解, 得到各种参数总值, 见表3。c Tn I总敏感度=0.83, 可信区间为 (0.78;0.87) ;c Tn I特异度=0.91, 可信区间为 (0.87~0.94) ;曲线下面积 (简称AUC) =0.957 1, c Tn I Q=0.900 3。CK-MB敏感度=0.56, 可信区间为 (0.5~0.67) ;特异度=0.9, 可信区间为 (0.85~0.93) ;AUC=0.602 5, CK-MB Q=0.579 3。其中的灵敏度、特异度均较CK-MB高, c Tn I总优势比OR=77.86, 大于CK-MB=15.64。SROC曲线c Tn I较CK-MB拟合整体效果好。

注:a表示文献中未报告男女性的例数。

注:c Tn I—心肌肌钙蛋白I;CK-MB—肌磷酸激酶MB。

注:c Tn I—心肌肌钙蛋白, CK-MB—肌磷酸激酶MB。

3 讨论

cTnI和CK-MB在心肌受损时极易释放入血, 在骨骼肌中未发现, 因此, 血清中的浓度变化即可早期诊断心肌炎, 并具有很高的特异性。根据meta分析的结果, c Tn I敏感度=0.83, 特异度=0.91;CK-MB敏感度=0.56, 特异度=0.9;均可以灵敏地诊断心肌炎, 其中c Tn I诊断心肌炎敏感度更高。从拟合线SROC曲线来看, 散点在拟合曲线的两边分布, 两者整体拟合效果都较好。相比较, c Tn I SROC曲线灵敏度较靠近, 诊断心肌炎更灵敏。因此, 从多篇文献中得出的大量数据可见, c Tn I更能准确诊断出心肌炎。

目前国内各地报告的绝大多数VMC的病例实际上都缺乏病原学诊断依据的确诊指标, 只是具备1到2项参考指标。但是通过现有的医疗条件通过症状并结合影像和心电图观察心脏增大迹象, 并且R波为主的2或2个以上主要导联的ST-T改变持续4天以上伴动态变化, 在观察血液中的CK-MB与c Tn I的变化基本上可以诊断出VMC。将c Tn I和CK-MB联合检测, 更能准确筛查患者是否患有心肌炎。因此, 尽快制作出符合我国儿童特点, 灵敏度较高的肌钙蛋白试剂盒, 可早期诊断出儿童VMC。

SROC法是诊断试验综合评价的常用分析方法[10]。meta分析本身属于观察性研究, 它不但不能控制原文献中存在的偏倚, 如果资料处理不当还会引入新的偏倚。本文通过多种途径尽可能地全面收集有关国内的研究文献, 严格进行资料的取舍, 在一定程度上控制了检索偏倚。由于条件有限, 用于此次meta分析的资料仅为公开发表的文献, 无法获得更详细的信息, 因而对一些混杂因素的作用难以控制。但总的来说, 通过meta分析, 本文所得结论增强了该类研究结果的可靠性, 比单个研究结果可信。meta分析结果显示, CK-MB可以作为一种必要的辅助检查, 能进一步提供诊断依据。c Tn I较CK-MB特异性、灵敏度高, 而CK-MB的特异性、灵敏性则较差, 这是由于c Tn I是CK-MB浓度的13倍, 正常情况下c Tn I不会在血液循环中出现, 因此, 更适合用于小儿VMC的诊断[11]。c Tn I联合CK-MB检测在VMC的早期诊断中有重要意义[12]。

摘要：目的 探讨心肌肌钙蛋白I (cTnI) 与肌磷酸激酶MB (CK-MB) 对儿童病毒性心肌炎的诊断价值。方法 通过计算机检索和手工检索万方数据库及公开发表的cTnI与CK-MB对病毒性心肌炎诊断价值的研究文献, 严格按照纳入和排除标准, 对检索到的符合标准的6篇相关文献, 使用RevMan 5.0进行统计数据分析。结果 小儿病毒性心肌炎组与对照组cTnI、CK-MB阳性率比较。病毒性心肌炎组与对照组在诊断方面差异有统计学意义 (P<0.01) 。结论 儿童病毒新心肌炎 (VMC) 组的血清cTnI与CK-MB的阳性率均高于对照组, cTnI对小儿病毒性心肌炎的诊断优于CK-MB, CK-MB联合cTnI可使小儿病毒性心肌炎的诊断率进一步提高。

关键词：肌钙蛋白Ⅰ,肌酸激酶同工酶,病毒性心肌炎,Meta分析

参考文献

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钙依赖蛋白激酶 篇7

1 材料和方法

1.1 动物分组及主要试剂

选用健康4 月龄Wistar大鼠80 只, 雌雄各半, 体质量250~350 g。选择好的动物用随机数字表进行分组, 对照组、假手术组、模型组和TSG组各20 只。

Aβ1-42 购于美国Santa Cruz公司;Fluo-3/AM购自美国Sigma公司。引物自行设计, 由上海华大基因有限公司合成;Trizol、Taq酶、反转录酶购自立陶宛MBI公司。TSG为从何首乌中提取分离的干粉, 含量为68% (湖南中医药研究所提供) , 实验时用水溶解为100 mg/kg的浓缩液。MRC-1024 型激光共聚焦显微镜系美国BIO-RAD公司产品。

1.2 模型建立和干预

大鼠用水合氯醛按2.5 m L/kg进行腹腔麻醉, 立体定向仪下固定头部, 切开皮肤, 找到前囟位置, 参考大鼠图谱, 确定前囟后3.0 mm, 中线旁2.5 mm为海马CA1 区所在部位体表投影位置, 钻破颅骨, 微量注射器进针约2.9 mm, 左右两侧各缓慢均匀注入Aβ1-42 5μg, 10 min内注射完毕, 留针5 min后退出, 术后缝合皮肤。假手术组:参考模型制备, 脑内注射液为等量生理盐水, 灌胃液为生理盐水;模型组:脑内注射液为Aβ1-42, 灌胃液为生理盐水;二苯乙烯苷 (TSG) 组:参考模型制备, 脑内注射液为Aβ1-42, 灌胃液为二苯乙烯苷悬液。每天灌胃1次, 连续21 d, 动物灌胃量按5 m L/kg计算。

1.3 海马神经元的分离及Fluo-3/AM负载

将动物处死后, 迅速取出脑组织, 在低温修块台上分离出双侧海马, 切成薄片, 然后将这些脑组织移至4 m L含0.25%胰蛋白酶并通有95%氧气和5%二氧化碳的混合气体的无钙人工脑脊液中, 在32℃水浴中消化30 min。然后用含钙的人工脑脊液置换无钙人工脑脊液2~3 次使胰蛋白酶灭活。将经过消化的脑组织用玻璃吸管轻轻吹打至呈黏稠状。在室温下静置10 min, 用移液管取75μL悬浮液滴于涂有明胶的盖玻片上, 再静置10~15 min使细胞贴壁。

向贴壁于盖玻片上的海马神经细胞悬浮液中滴加荧光探针Fluo-3 (浓度为1 000μmol/L) 1μL和25% Pluronic F-127 1μL, 于37℃恒温培养箱中孵育45~60 min, 然后, 用人工脑脊液轻轻冲洗2、3 次后, 再加入1 滴人工脑脊液封片观察。在激光共聚焦显微镜下观察和记录。 图象分析软件系美国BIO-RAD公司产品。由于Fluo-3 结合钙离子后其荧光强度与钙离子浓度成正比。因此, 取每个细胞荧光强度测定值平均数表示该细胞内钙浓度, 每份标本沿齿状线选取8 个端点位置的细胞进行扫描记录, 取均值。

1.4 PKA活性和表达测定

1.4.1磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKA活性

反应总体积250μL反应底物为10 g/L鱼精蛋白加60μL样品;9.25×105 Bq[γ32P]ATP和0.5mol/L, pH 7.5 Tris-HCl反应液, 30℃温育后, 取反应液25μL点于Whatman P81强阳离子交换滤纸上 (约1 cm×2 cm) , 浸入75 mmol/L磷酸中终止反应, 以同样的磷酸重复冲洗后烘干, 放入10 mL蒸馏水的液闪瓶中, 用Beckman液闪仪测定PKA活性。实验重复3次。

1.4.2 Western blot测定PKA表达

密度梯度离心法提取内质网蛋白, 将海马组织转移到匀浆器中, 加裂解液匀浆, 离心 (2 400 r/min, 10 min) , 取上清, 继续离心 (12 000 r/min, 15 min) , 取上清, 再离心 (15 000 r/min, 30 min) , 加入裂解液和蛋白酶抑制剂, 用BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白质浓度;样品与等体积的上样缓冲液混匀, 煮沸变性, 用10%SDS-PAGE分离, 转移蛋白至硝酸纤维素膜, 5%脱脂奶粉封闭, 与一抗孵育, 加入辣根过氧化物酶标记二抗孵育, ECL试剂盒进行化学发光检测, JS-300凝胶图像仪扫描分析处理。

1.5 统计学方法

数据用SPSS 12.0 软件处理。计量资料用于均数±标准差 (±s) 表示, 两组间比较用t检验, 多组独立样本比较用方差分析。

2 结果

2.1 各组大鼠海马细胞内钙离子浓度变化

对各组大鼠海马细胞内钙离子浓度 ([Ca2+]i) 检测, 在Fluo-3/AM染色之后用激光扫描共聚焦显微镜系统进行观察, 并对各组大鼠海马细胞内的荧光像素进行了比较。见图1~3。模型组大鼠海马细胞内钙离子浓度的平均荧光像素强度明显高于TSG组和对照组, 差异有显著性 (P <0.05) ;TSG组与对照组相比, 荧光像素强度较强, 差异有显著性 (P<0.05) , 见表1。

(±s)

注:1) 与对照组相比较, P<0.05;2) 与模型组比较, P<0.05。

2.2 大鼠脑组织海马神经元细胞膜和胞浆PKA活性变化

从表2 可见, 手术组海马神经元细胞膜和细胞浆的PKA活性增高, 与空白对照比较, 差异无显著性;模型组海马神经元细胞膜和胞浆的PKA活性显著升高, 以细胞膜的PKA活性升高更明显, 经TSG干预后, 细胞膜和胞浆的PKA活性降低, 与模型组比较, 差异有显著性 (P <0.05) 。如图4 所示, 模型组的PKA蛋白的表达增加, TSG组PKA表达强度明显较弱, 与模型组比较差异有显著性 (P <0.05) 。假手术组与对照组比较差异无显著性, 排除手术因素干扰。

(±s)

注:1) 与对照组相比较, P<0.05;2) 与对照组相比较, P>0.05。

1:对照组;2:手术组;3:模型组;4:TSG组

3 讨论

细胞内钙浓度的动态变化对维持神经系统功能具有重要作用。细胞受刺激后, 通过细胞信号转导通路引起细胞内钙池钙释放和细胞外钙内流, 二者都引起胞浆钙升高, 其中细胞外钙内流是引起钙持续升高的关键因素, 主要由细胞膜上两种性质不同的钙通道介导:电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道, 也是胞外刺激引起细胞增殖、分化、分泌和凋亡等调节的主要因素[6]。

细胞内持续的钙超载造成神经元损伤已被确认, 钙超载可能促使AD及其他类型痴呆症的神经细胞死亡。研究表明, AD发病中存在着钙稳态的失衡, 主要由Aβ 的神经毒性引起氧化应激致细胞膜损害, 胞内游离钙离子浓度持续升高, 致使神经细胞能量代谢障碍, 质膜离子泵失效, 最终影响海马神经元兴奋性[7,8]。

本研究利用激光共聚焦显微镜激发钙离子荧光结果表明, 本研究结果表明, 模型组大鼠海马内钙的平均荧光像素强度明显高于TSG组和对照组。说明Aβ 1-42 可能通过细胞内钙超载导致内质网和线粒体结构的损伤, 结果导致注射Aβ1-42 的AD模型大鼠出现了明显的记忆能力下降。这些结果进一步支持了对钙平衡的破坏可能是Aβ 发挥神经毒性的主要机制之一的观点。与对照组相比, 模型组及TSG组钙离子浓度均升高, 与模型组相比, TSG组的细胞内的钙离子浓度较低。说明二苯乙烯苷可以抑制海马区细胞内游离钙离子浓度的升高, 减轻钙超载引起的的神经元损伤和死亡, 通过较大幅度纠正细胞内钙超载的作用机制来减轻Aβ1-42 的毒性作用所致模型大鼠的形态学结构改变和学习记忆的损伤, 使AD大鼠的学习记忆障碍得到改善。

蛋白激酶A (protein kinase A, PKA) 又称依赖于c AMP的蛋白激酶A (cyclic-AMP dependent protein kinase A) , 是一种丝/ 苏氨酸蛋白激酶, 信号通路的重要分子之一[9]。活化的PKA可作用于各种多种与糖脂代谢相关的酶类, 一些离子通道和某些转录因子, 使它们发生磷酸化并改变其状态, PKA的活化可以进一步激活MAPK (JNK, ERK, p38) 信号通路, 调控细胞凋亡或分化, 其同工酶的大多数类型存在于脑组织中, 与神经元的生长、记忆力和凋亡的关系密切[10,11]。

钙超载可以激活PKA, 而PKA活化又可以激活N型和L型钙通道, 促进钙内流, 加重钙超载, 形成恶性循环, 诱导细胞进一步损伤和凋亡。

在本实验条件下, 模型组海马细胞内PKA活化增高, PKA表达上调, TSG组PKA活化程度及表达较模型组减少, 表明Aβ1-42 诱导的神经细胞损伤机制涉及PKA的活化, 并且以细胞膜相PKA活化更明显。另一方面, PKA蛋白表达上调, 通过信号传导, 引起细胞生长、凋亡的调控转化。但不可否认的是细胞内钙离子的明显变化导致细胞内的钙紊乱, PKA的激活进一步可能使内质网、线粒体等亚细胞器功能受到了严重的影响。PKA活性上调的原因可能主要与以下因素有关:1Aβ 直接作用于c PKA亚类的调节和催化亚基, 与钙结合位点结合引起PKA产生变构效应而激活;2Aβ 作为细胞外刺激物激活了AMP环化酶, c AMP与蛋白激酶A (PKA) 的调节亚基结合, 激活PKA;3Aβ 可使神经细胞内钙浓度升高, 激活PKA。本研究结果提示:Aβ 可能通过影响PKA活性介导其神经毒性作用。

总之, 脑海马区是学习记忆功能重要的脑区, 与长时程增强 (LTP) 密切相关。海马细胞内钙超载造成的PKA信号通路活化, 神经细胞损伤和功能紊乱, 是导致人和动物学习记忆功能障碍中起重要作用。实验也表明何首乌提取物TSG具有一定的钙通道拮抗剂的作用, 对抑制细胞膜和胞浆的PKA活化状态起重要作用, 临床应用可能有助于对AD患者的脑功能损害进行防护。

摘要：目的 探讨β-淀粉样肽 (Aβ) 诱发的细胞内钙失衡机制中蛋白激酶A (PKA) 的作用及二苯乙烯苷的干预效果。方法 在立体定向仪下大鼠海马部位注射Aβ1-42造AD模型, 大鼠随机分为对照组、手术组、模型组、二苯乙烯苷 (TSG) 组;免疫荧光法检测的胞内钙离子, 在激光扫描共聚焦显微镜观察;磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKA活性, 免疫印迹法检测PKA蛋白表达。结果 与对照组比较, 模型大鼠细胞内钙离子浓度增高;PKA活性及表达均明显增高, 差异有显著性;与模型组相比, 二苯乙烯苷干预后, 细胞内钙离子降低, PKA活性及表达均下降, 差异有显著性。结论 Aβ神经毒性作用引起的细胞内钙失衡机制涉及PKA活化后促进钙内流, 并以细胞膜相活化更明显;二苯乙烯苷通过抑制PKA活化及表达, 以纠正细胞内的钙超载。

关键词：β淀粉样蛋白,钙失衡,蛋白激酶A,二苯乙烯苷

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钙依赖蛋白激酶 篇8

1 资料与方法

1.1 研究对象及分组

收集我院2008年1月~2009年5月胸痛发作3 h以内的急诊患者126例,且均经冠状动脉造影确诊,分为急性心肌梗死组(AMI组)和非急性心肌梗死组。诊断标准按照国际心脏病学会和协会及WHO临床命名标准化联合专题组制定的标准[2];排除标准:风湿性心脏瓣膜病,左室射血分数<30%,各种急性、慢性感染,严重肝、肾功能不全,恶性肿瘤,自身免疫性疾病,脑血管疾病,外周血管疾病,原发性醛固酮增多症等。AMI组62例。男36例,女26例;年龄32~71岁,平均60.7岁。首次采血时间为胸痛发作3 h内(包括3 h),平均2.4 h。梗死部位为前壁(包括前间壁)16例、前壁+高侧壁21例、下壁8例、下壁+正后壁13例、下壁+后壁+右室4例。非急性心肌梗死组64例,其中男34例,女30例;年龄39~74岁,平均65.6岁。发病3 h内采血1次(包括3 h),平均2.6 h。以后每隔2 h采静脉血1次,确诊后每隔4 h采静脉血1次(8 m L/次),分离血清,于2 h内进行c Tn I、CK-MB及BNP的测定。

1.2 方法

1.2.1 冠状动脉造影

经右股动脉途径采用Judkins法,以6 F冠状动脉造影导管进行冠状动脉造影。依据国际心脏病学会和协会及WHO临床命名标准化联合专题组制定的标准诊断急性心肌梗死,对确诊AMI的患者行急诊冠状动脉介入治疗(PCI)。

1.2.2 cTnI和BNP测定

采用微粒子酶免疫分析(MEIA)法测定c Tn I和BNP,使用美国雅培公司提供的全自动免疫分析仪(AXSYM型)、试剂盒和质控试剂。其他耗材包括MUP、Matrix cell液、4号液、探针清洗液、管道消毒液等均为雅培公司提供。严格按照试剂盒说明操作。正常参考值:c Tn I 0.0~0.4ng/mL;BNP 82~258 pg/mL。

1.2.3 CK-MB测定

采用全自动生化分析仪(日立7600型),试剂盒购自上海申能试剂公司。严格按照试剂盒说明操作。CK-MB大于24 u/L具有诊断意义。

1.3 统计学处理

所有数据采用SPSS 11.0统计软件进行统计学分析,实验结果以均数±标准差表示,两组间的比较采用独立样本的t检验和χ2检验。P>0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 两组患者的基本临床资料比较

AMI组与非AMI组患者之间基本临床资料差异无显著性(P>0.05),见表1。

注:覮与非AMI组比较,P>0.05

2.2 两组患者不同时间c Tn I、CK-MB和BNP水平比较

AMI与非AMI患者不同时间CK-MB、c Tn I和BNP含量检测结果显示,AMI患者于胸疼≤3、3~6、6~12、12~24和24~48 h时,c Tn I、CK-MB和BNP含量均明显高于非AMI组患者(P<0.05),见表2、3、4。CK-MB水平在患病3~6 h升高,6~12 h达高峰,峰值可达(130.26±32.78)u/L,24~48 h后降至正常;AMI患者c Tn I水平在患病2 h开始升高,12~24 h可达高峰,峰值可达(9.35±2.38)ng/m L,持续24 h以上;BNP水平在患病3 h内开始升高,12~24 h持续升高,24~48 h达高峰,其峰值可达(1 000.65±165.48)pg/m L。

2.3 c Tn I、CK-MB和BNP联合检测诊断AMI的敏感度和特异性

注:覮与非AMI组比较,P<0.05

注:覮与非AMI组比较,P<0.05

注:覮与非AMI组比较,P<0.05

cTnI、CK-MB和BNP联合检测对AMI诊断的敏感度为98.3%,特异性为89.0%,比c Tn I、CK-MB和BNP单独检测的敏感度和特异性(分别为87.0%、82.2%、85.5%;79.6%、75.0%和73.4%)明显增高(P<0.05),见表5。

3 讨论

AMI是临床上常见的危重疾病,早期、快速、准确的诊断对制定有效的治疗方案和挽救患者的生命至关重要。该病虽然通过典型的临床症状和体征诊断并不困难,但部分AMI患者无明显临床症状和体征,需要借助各种心肌损伤标志物的检测来诊断,特别是早期诊断,是保证心肌再灌注治疗,尤其是溶栓治疗和急诊PCI治疗的重要指征,为降低死亡率、改善预后提供重要的前提条件。

c Tn I是心肌特有的调节蛋白,是临床用于诊断早期心肌损伤及AMI的理想生化指标[3],当心肌细胞因缺血缺氧而发生变性坏死时,c Tn I、c Tn T由于分子量较小,可持续从细胞逸出,并随之进入血液循环。心肌损伤后c Tn I、c Tn T 2~6 h开始升高,24 h达高峰,血中可持续5~7 d,故c Tn I、c Tn T作为心肌损害的指标有较高的诊断价值,而且c Tn I的特异性不受骨骼肌损伤、剧烈运动和肾脏疾病的影响[4],c Tn I在心肌损伤时出现时间早,持续时间长,诊断心肌梗死的特异性高。本研究结果表明,c Tn I在AMI早期即有明显的升高,而且诊断窗口时间长,能反应存在小范围的心肌梗死,是早期诊断和判断病情转归的理想指标。近年来,国内外对心肌损伤标志物的应用提出了指南,一致认为c Tn I是心肌损伤的确诊标志物。本文结果显示,AMI患者于胸疼≤3、3~6、6~12、12~24和24~48 h时,血清c Tn I含量明显高于非A-MI组患者,在患病3 h内可见升高,12~24 h达高峰,峰值可达(9.35±2.38)ng/m L,持续24 h以上。

心肌酶谱是用于诊断AMI的最早标志物,但由于酶学缺乏特异性,敏感性不高,且需动态观察,所以,很难对AMI做到尽早诊断,但连续的酶学检查可方便了解梗死面积的大小及溶栓的治疗效果。CK-MB在诊断AMI时有两种局限:(1)并非心脏特异的,骨骼肌中也含有此酶;(2)CK-MB升高快,清除快,用于诊断再梗死有明显的缺陷[5]。相关文献报道,CK-MB在未行PCI治疗时峰值出现在12~24 h,而本研究中CK-MB峰值由12~24 h提前到6~12 h,比未行PCI治疗的患者提前。

BNP是一激素家族,其作用是调节血压,维持水和电解质平衡,是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RASS)的唯一天然拮抗剂,主要是由心室的心肌细胞分泌[6]。许多观察资料都支持缺血是BNP释放的重要刺激因素这一理论[7]。正常人血液循环中存在少量的BNP,其半衰期约为20 min,几乎没有生理性波动且保持基本稳定。本文结果显示,AMI患者于胸疼≤3、3~6、6~12、12~24和24~48 h时,血清BNP含量均明显高于非AMI组患者。BNP水平在患病3 h内开始升高,12~24 h持续升高,24~48 h达高峰,其峰值可达(1 000.65±165.48)pg/m L。提示在AMI患者中,即使心功能正常,也可出现BNP水平增高[8,9]。本研究中仅检测了患者发病48 h内的BNP水平,故反映的是BNP升高的第1个高峰。结合以往的研究报道[10],可得出这样的结论:早期进行BNP水平的检测,有助于判断患者的心肌缺血和坏死程度;BNP水平越高,提示心肌缺血、坏死范围越广,需早期积极干预治疗。

联合检测c Tn I、CK-MB和BNP对AMI的早期诊断起到相互补充的作用。在无确切证据,如心电图改变或血清酶学指标的升高,临床症状又高度怀疑为AMI时,BNP的升高就可引导临床及时用药和合理处置;配合CK、CK-MB的密切监测,一旦c Tn I升高即可确诊AMI,尽早治疗,特别在3 h之内,对降低致残率和死亡率非常必要。c Tn I、CK-MB和BNP三者相互补充,可将AMI诊断与治疗提前到3h以内,并能作为预后监测及疗效观察的指标,具有很好的应用价值。

综上所述,BNP可以作为AMI的一个早期指标。BNP升高的时间早于CK-MB和c Tn I,对于早期(胸痛发作3 h内)筛查急性心肌梗死患者有帮助,即对于ST段不抬高、尚不在心肌坏死指标CK-MB和c Tn I诊断窗口的胸痛患者,如BNP显著升高,则提示有心肌梗死发生的可能,需要对其进行更严密的监测,继续观察c Tn I、CK-MB的改变。

c Tn I、CK-MB和BNP三项联合检验与冠状动脉造影的吻合程度较高,3 h内灵敏度达到98.3%,特异性达到89.0%,能为AMI的早期诊断提供简便、快捷、准确的检测方法,为早期溶栓、急诊PCI等有效心肌再灌注治疗,改善冠状动脉供血,提高患者生活质量,降低死亡率,改善预后提供重要的前提条件。

摘要：目的 探讨肌钙蛋白(IcTnI)、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)和钠尿肽(BNP)联合检测在急性心肌梗死(AMI)早期诊断中的应用。方法 收集胸痛发作3h以内的急诊患者126例,按AMI诊断标准分为急性心肌梗死组(AMI组)和非急性心肌梗死组。采用Judkins法,以6F冠状动脉造影导管经右股动脉途径进行冠状动脉造影,并对确诊患者进行冠状动脉介入治疗(PCI)。对126例患者定时采集静脉血,定量检测cTnI、CK-MB、BNP的浓度。对结果进行统计学分析。结果 AMI组与非AMI组患者之间基本临床资料差异无统计学意义。患病各时间段检测结果显示,AMI组患者血清cTnI、CK-MB和BNP含量均明显高于非AMI组(P<0.05)。联合检测cTnI、CK-MB和BNP对AMI诊断的敏感度为98.3%,特异性为89.0%,与分别单独检测cTnI、CK-MB和BNP的敏感度和特异性(分别为87.0%、82.2%、85.5%;79.6%、75.0%、73.4%)比较明显增高(P<0.05)。结论 联合检测cTnI、CK-MB和BNP,可明显提高AMI早期诊断的敏感度和特异性,与冠状动脉造影结果高度一致。

关键词：急性心肌梗死,肌钙蛋白I,肌酸激酶同工酶,钠尿肽

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