动脉粥样硬化研究

动脉粥样硬化研究篇1

1 AS基因组学和蛋白组学研究

冠心病的家族聚集性已在大量流行病学和前瞻性队列研究中得到证实, 我们所熟知的年龄、高血压、血脂异常、吸烟及糖尿病等传统危险因素, 通过作用于个体的易感基因影响着AS的发生发展;早期人们主要通过传统的家系连锁分析和候选基因分析法, 发现了涉及脂质代谢、炎症免疫、内皮结构和功能、平滑肌增殖、氧化抗氧化等各种过程的基因与冠心病的发生和发展存在一定关联, 极大地深化了对AS的认识。人类基因组计划迅速展开, 尤其是高通量基因芯片和基因测序技术迅速发展, 使得心血管疾病的基因组学研究取得了重大进步, 全基因组关联研究 (whole-genome association studies, GWAS) 是目前寻找AS基因位点的最好方法, 成功发现了许多先前从未认识的冠心病等AS心血管病的致病或易感基因, 确定这些致病/易感基因将为疾病的分子分型、早期预警/分层及个体化干预策略制定提供基础。2007年以来, 国外先后有多个研究中心通过GWAS发现染色体9p21.3区域与冠心病或心肌梗死相关, 该区域包括两个细胞周期依赖的激酶抑制剂CDKN2A和CDKN2B, 编码多个与调控细胞周期、凋亡相关的蛋白, 参与AS的发生发展。其中rs1333049和rs10757274两个单核苷酸多态 (SNP) 相关性最高, 通过图谱发现二者具有非常强的连锁不平衡。2012年我国学者对1 515例冠心病患者和5 019例对照人群的基因组DNA进行GWAS分析, 随后在15 460例冠心病患者和11 472例对照人群中进行多阶段重复验证, 并在8.7万欧洲人群全基因组样本中交叉验证, 首次鉴定出2p24.1、4q32.1、6p21.32和12q21.33共4个染色体区域, 其遗传变异可显著影响冠心病、心肌梗死的发病风险。同时, 还证实了国外报道的6p24.1、6q23.2、9p21.3和12q24.13共4个区域与我国人群冠心病、心肌梗死发病风险相关。此外, 一些非编码区基因变异的功能位点也参与AS发生发展。一项研究通过全基因组扫描发现了与血液中胆固醇和三酰甘油水平有关的59个新位点, 其中一些不仅与血脂水平相关, 而且与冠心病危险相关, 拓展了传统的对血脂代谢机制的理解。对个体基因信息的了解, 必将推动药物基因组学的发展, 最终转化为临床实践中早期诊断、危险评估和个体化治疗的有力工具。然而, 我们必须认识到由于GWAS的高成本及假阳性率等缺陷, 虽然一期的GWAS能发现较多的SNP, 然而大多数SNP都无法通过二期、三期功能验证, 仅仅是一个遗传路标的发现, 具体的功能机制还需进一步研究确定。

蛋白质组学是功能基因组学重要组成部分, 通过比较差异化蛋白探讨AS疾病的发病机制是目前心血管领域的前沿和热点。有研究者利用2DE对颈动脉动脉粥样硬化斑块核心区和周围正常区组织进行蛋白质组学研究, 21种差异蛋白被鉴定出, 其中热休克蛋白 (HSP) -27是第一个在颈动脉斑块分泌研究中发现的具有潜在的AS生物标记物。Slevin等用512份抗体设置阵列探讨与稳定性斑块相比较不稳定性斑块蛋白水平的变化, 共有21种蛋白在稳定性斑块中高表达, 而肿瘤坏死因子 (TNF-α) 、缺氧诱导因子1α (HIF-1α) 、HSP-40、C反应蛋白 (CRP) 等在不稳定斑块中过表达。迄今, AS蛋白质组学研究的标本多为颈动脉或主动脉, 而冠状动脉因其取材的困难, 还没广泛用于蛋白质组学的研究。最近, Bagnato等利用shotgun蛋白质组学技术对冠状动脉粥样硬化斑块进行了研究, 通过对冠状动脉血管壁层的激光分离技术, 共鉴定出806种蛋白, 最终确认了4种在AS疾病进展中发挥作用的重要蛋白, 包括:转化生长因子-β (TGF-β) 、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 、血小板衍生因子 (PDGF-β) 和基质细胞源性因子-1α (SDF-1α) 。然而, 这些差异蛋白在AS发生发展中的作用 (伴随还是因果) 还需要进行更深入的探讨, 更为精细的组织分离和蛋白组学技术将为未来的研究提供更为广阔的空间。

2 AS的炎症免疫机制

炎症免疫反应在AS病理发生尤其是不稳定斑块进展中的作用是近年AS研究的主流方向。炎症免疫反应被认为是AS发病理论学说的汇聚点。尽管AS发生的原因可以是多方面的 (脂质代谢异常、血流动力学负荷、遗传和感染等) , 但所导致的是一条相似的发展途径, 即慢性炎症免疫病理过程。正常动脉内膜下散在分布着一些由免疫活性细胞 (主要是单核、巨噬细胞) 和树突状细胞构成的细胞群, 形成血管相关性淋巴样组织 (VALT) , VALT功能与黏膜相关性淋巴样组织类似, 主要是监测其所在微环境以发现潜在有害抗原, 这些抗原作用于VALT, 使之失衡, 最终激活T淋巴细胞, 引起一系列特异性细胞免疫和体液免疫反应。近年来多种AS相关抗原相继被人们所认识, 如热休克蛋白60、氧化型低密度脂蛋白 (ox-LDL) 、CRP、糖基化终末产物等可于斑块和循环中检测到;在AS病变各个阶段都能观察到T淋巴细胞和自然杀伤细胞 (NK) , 激活的淋巴细胞可通过细胞因子如TNF-α、干扰素 (IFN-γ) 进一步放大炎症反应, 并进一步激活巨噬细胞、血小板和平滑肌细胞, 从而导致炎性产物的暴增, 促进AS进展和斑块的破裂。其中有多种炎症免疫细胞、细胞因子共同参与、相互联系, 构成复杂的网络, 并导致AS斑块呈现稳定与不稳定交替出现的现象, 涉及多个与炎症细胞趋化、细胞增殖与凋亡、细胞外基质重塑、炎症因子释放相关的信号转导机制都是目前研究的热点;此外, T淋巴细胞的激活首先需要抗原的递呈, 目前的AS炎症免疫理论认为给T淋巴细胞呈递抗原的主要是巨噬细胞或B细胞, 而二者的抗原递呈功能相对较弱, 因此, 近年来体内功能最强大的专职抗原递呈和免疫调节细胞-树突状细胞在AS免疫发病中的作用受到了广泛关注, 而树突状细胞与调节性T淋巴细胞构成的负向及正向免疫调控网络研究、miRNA在其中的调控机制也是目前研究方向。

3 免疫治疗研究

AS的免疫炎症机制的进展直接促使了免疫治疗的快速发展, 也是目前非感染性疾病中疫苗研究和开发最为迅速的方向之一, 逐渐成为AS防治领域的新热点。已经证实的参与AS免疫应答的抗原主要包括两大类。 (1) 内源性的自身抗原:如ox-LDL、热休克蛋白、β2糖蛋白-I (β2GPI) 。 (2) 外源性的感染抗原:流感病毒、肺炎链球菌、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等。免疫细胞识别和吞噬AS的相关抗原, 激活固有免疫应答, 并诱导以T淋巴细胞活化为中心的适应性免疫应答, 从而启动AS的炎症免疫级联反应。目前的疫苗开发主要是针对以上抗原进行。低密度脂蛋白 (LDL) 相关的疫苗目前主要有丙二醛 (MDA) 修饰的ox-LDL疫苗、铜离子修饰的ox-LDL疫苗、MDA氧化修饰的载脂蛋白 (ApoB100) 疫苗及氧化磷脂疫苗, 这些疫苗目前在AS模型小鼠、新西兰白兔等动物模型中进行, 由于免疫途径、抗原滴度等不同从而对Th1体液免疫、特异性细胞免疫抑制程度也不同, 得到的结果存在差异。HSP既具有免疫原性又具有反应原性, 是参与AS发生发展的一种重要的自身抗原。有学者采用鼻饲或口服HSP65免疫高脂喂养LDL-/-小鼠, 发现小鼠主动脉根部的AS面积明显降低, 斑块局部巨噬细胞和T淋巴细胞含量明显降低, 脾细胞的增殖能力明显降低, 抗HSP-65抗体IgG2亚型明显下降, IFN-γ表达明显下降, 白细胞介素 (IL) -4、IL-10表达明显增加。也有学者采用口服HSP60免疫AS小鼠, 发现小鼠主动脉窦和颈动脉斑块面积明显降低, 可能与诱导小鼠Th1向Th2应答转化从而诱导免疫耐受有关。β2GPI是一种磷脂结合蛋白, 近期的研究显示β2GPI是参与AS的重要抗原之一。在人AS斑块中可以检测到β2GPI的高表达, 并且多与CD4+T淋巴细胞聚集, 在急性冠脉综合征患者血液中抗β2GPI抗体的浓度明显增加。有研究采用不同剂量口服β2GPI的方式免疫高脂喂养的LDLR-/-小鼠, β2GPI各剂量组小鼠主动脉窦斑块的面积明显降低, 淋巴结增殖指数明显降低, 淋巴细胞对β2GPI的免疫应答被明显抑制。

目前, AS疫苗防治的有效性大多来自于动物实验的证据, 临床证据十分有限, 现有的证据还存在相互矛盾的结论, 未来对于AS疫苗防治的研究还有如下的问题需要解决: (1) 寻找最佳的AS抗原或抗原表位, 提供最成功和特异的保护作用; (2) 确定有效的生物学标志物, 评价疫苗防治成效; (3) 探讨疫苗发挥保护性免疫的机制, 能够从微观角度阐释其作用机制; (4) 疫苗的安全性、作用途径、应用时间、合理的剂量、合适的佐剂等均是需要解决的问题; (5) 未来的研究着眼点还应该适应临床的需要, 如何诱导斑块的消退、改变斑块组成或增加其稳定性是临床最需要解决的问题。

动脉粥样硬化研究篇2

同时白细胞(WBC)在血液当中的含量在动脉粥样硬化发生发展过程中发生显著的.变化[1]。我院为进一步了解与动脉粥样硬化发生的危险因素，205月～206月我院选取50例采用中药进行预防性治疗的颈动脉粥样硬化患者，同时选取50例采用西医治疗的颈动脉粥样硬化患者，回顾分析其临床资料，对比分析两组患者的颈动脉粥样硬化危险因素血清C-反应蛋白(CRP)、白细胞(WBC)含量、血脂及其空腹血糖。现报道如下。

1临床资料

1.1一般资料所有病例诊断标准均符合第四届全国脑血管病会议所制定的标准。中医治疗组男28例，女22例，年龄57～88岁，平均(62.8±6.9)岁。西医治疗组男26例，女24例，年龄55～87岁，平均(62.9±7.1)岁。均排除患有糖尿病及心脑血管疾病所引起的严重影响血液流病变指标等疾病。

1.2治疗方法

中医治疗组采用半夏白术天麻汤等中药进行治疗，而西医治疗组则采用西药阿托伐他汀进行治疗，治疗疗程均为24周。

1.3危险因素检测

CRP检测：患者入院次日早晨空腹抽取患者静脉血液3ml，离心分离血清，放置于-20℃冰箱保存待测。检测患者静脉血清中CRP含量，正常值<5mg/l。

WBC检测：患者入院次日早晨空腹抽取患者静脉血液4ml，并进行抗凝处理。抽血前禁止进食饮水。使用医院标准方法对患者的血液进行常规检查，正常人WBC范围为(4-10)×109/l[2]。

血脂及血糖检测：在患者入院治疗早晨进行空腹抽取静脉血液，检测患者的血脂及血糖代谢指标：总胆固醇(TC)、血清甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及空腹血糖。

1.4统计学分析处理

所有数据均采用SPSS13.0统计学软件进行分析处理，各计量资料采用x±s表示，组间比较采用t检验。计数资料采用x2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

中医组的CRP，WBC，血脂及血糖水平均低于西医治疗组，其中CRP，WBC水平比较尤其显著，两组患者之间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。具体见表1。对中医治疗组CRP，WBC，血脂及血糖水平指标进行单因素分析时，CRP和WBC分别与患者的TC、TG、LDL及空腹血糖指标成正相关(P<0.05)，而与HDL水平呈现负相关(P<0.05)。具体见表2。

3讨论

中医预防治疗颈动脉粥样硬化应从病情的具体状况考虑，全方位掌握其病理特点，给予辨证施治，从而发挥中医全面调节机体机能的优势，对病情进行多途径、多环节及多靶点的干预治疗。目前有文献报道，采用中医治疗颈动脉粥样硬化显示出较好的治疗效果。然而目前中医对治疗颈动脉粥样硬化的临床研究存在病例较少、缺乏随机对照及可重复性差等缺点[3-4]，所以对于中医治疗应进一步研究应根据循证医学和临床药理实验管理规范的要求，开展全方位的临床研究，证明中医对于防治颈动脉粥样硬化的治疗效果。

通过本组资料结果显示中医组的CRP，WBC，血脂及血糖水平均低于西医治疗组，其中CRP，WBC水平比较尤其显著，两组患者之间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对中医治疗组CRP，WBC，血脂及血糖水平指标进行单因素分析时，CRP和WBC分别与患者的TC、TG、LDL及空腹血糖指标成正相关(P<0.05)，而与HDL水平呈现负相关(P<0.05)。

显示出中医对于预防颈动脉粥样硬化危险因素具有很好的疗效，甚至优于西医治疗效果。

总而言之，采用中医预防性治疗患者颈动脉粥样硬化的发生以及体内血脂、血糖的异常代谢的临床效果良好，值得进一步进行临床研究。

参考文献：

运动与动脉粥样硬化关系研究现状篇3

【关键词】运动;动脉粥样硬化

TheResearchStatusquoof

theRelationshipbetweenSportsandAtherosclerosis

SONGGao-qingWUWei-dong

(CollegeofPhysicalEducation,ZhengzhouUniversity,ZhengzhouHenan,450044)

【Abstract】Thisthesis,byobservingtheeffectofsportsexerciseonbloodlipid,rheologicalpropertyofblood,inflammation,andoxidationresistancecapacity,explorestheroleofsportsactivitiesintheoccurrenceanddevelopingprocessofatherosclerosis.Researchshowsthatsportscanimprovebloodfatandbloodrheologicalpropertyandcanresistinflammationandimprovetheabilitytoresistoxidation.Sportsrankamongtheimportantmeansofpreventingatherosclerosis.

【Keywords】sports;atherosclerosis

一、心血管疾病的流行及危害

预防医学和临床医学研究证实,高脂饮食是许多疾病的独立致病因素或重要影响因素。高脂饮食可导致肥胖、糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、冠心病和脂肪肝等疾病。近十年来,我国人民的生活方式发生了巨大的变化〔1〕,生活中体力活动的成分减少、男性吸烟率上升、生活节奏加快、社会心理压力加重。这些变化使我国人民的疾病模式随之发生了改变,2005年国家统计局发布的统计信息表明,在造成死亡的病因中,癌症和心、脑血管疾病分列第1、2位。城市慢性病如动脉硬化、脑血管疾病、高血压以及肥胖病等的死亡率已达到疾病致死人数的70%,农村也接近40%〔2〕。值得关注的是,目前心、脑血管疾病的发病率仍在逐年递增,并呈向中青年转移之势。从我国心血管疾病危险因素的流行趋势分析,21世纪心、脑血管疾病的发病率还将大幅度上升,对我国人民的健康将造成极大威胁。因此,加强对心脑血管疾病发病机制及防治手段的研究刻不容缓。

二、动脉粥样硬化的发病机制

动脉粥样硬化是一种古老疾病,人们认识这种疾病并对其进行研究已有100余年历史,但由于其发病原因十分复杂,发生机制仍不十分清楚。一般认为,动脉粥样硬化的发生发展是多种遗传因素和环境因素相互作用的结果。大量流行病学资料显示,动脉粥样硬化发生的首要危险因子有高血脂、高血压、吸烟及糖尿病等,次要的危险因素有肥胖、缺乏运动、精神社会因素、内分泌和遗传等因素〔3〕。

长期以来,关于动脉粥样硬化的发病机理形成了多种学说,如脂质学说、炎症学说、损伤反应学说及氧化学说等,但仍没有完全阐明其发生机理,因而对AS的防治缺乏有效的措施。

三、动脉粥样硬化的治疗

目前动脉粥样硬化的治疗方法主要是控制饮食、适宜运动和药物治疗。控制饮食就是限制食物中胆固醇、饱和脂肪酸等的摄入,适当地增加碳水化合物的摄入,从而降低总热量,控制体重增长。

药物仍然是动脉粥样硬化治疗的主要手段。由于动脉粥样硬化是许多因素协同作用的结果,所以AS的药物治疗也应从多个因素着手〔4〕。第一,调节血脂的药物。血液中高甘油三酯(TG)、高胆固醇(TC)、高低密度脂蛋白(LDL)是患动脉粥样硬化的重要危险因素,因此通过药物降低其在血液中的含量,使动脉粥样硬化发病率下降,抑制其发展,甚至使其消退。第二,抗氧化剂的使用。抗氧化剂的使用是防治动脉粥样硬化的新途径。大量研究表明,使用维生素E、维生素C等抗氧化剂使机体的抗氧化能力增强,自由基清除加快,有利于阻止动脉粥样硬化的形成。除此以外,还有一些抗血栓药、保护内皮药也同样具有良好疗效。

除去控制饮食、药物治疗可以控制动脉粥样硬化的发生发展外,运动也具有控制动脉粥样硬化的重要作用。运动可以通过降低血脂,增强机体抗氧化能力等延缓动脉粥样硬化的发生发展。运动作为一种经济有效的防治动脉粥样硬化的手段,有着广阔的应用前景。

四、运动对动脉粥样硬化影响的研究

(一)运动对血脂的影响

目前,运动对动脉粥样硬化影响的研究报道多集中在血脂、载脂蛋白等方面。大多数研究认为有氧运动训练可以改善血脂异常,对动脉粥样硬化斑块的形成和发展有显著的预防和控制作用〔5,6〕。

李则一等〔7〕的研究发现,载脂蛋白-E(ApoE)基因缺陷小鼠进行10周的游泳训练后,血清中TG和TC的水平显著降低,HDL的水平显著提高。运动组小鼠动脉粥样硬化斑块的面积显著低于安静组,血管内膜损伤和弹力纤维板断裂相对安静组小鼠较轻,提示有氧运动可有效延缓动脉粥样硬化斑块的发生发展,减小斑块的面积,减少斑块内成分。李则一等〔8〕的研究还发现,有氧运动可以通过影响高密度脂蛋白受体(SR-BI)基因的表达发挥抗动脉粥样硬化的作用。陈近利等人的实验同样发现〔9〕,10周的跑台运动显著降低了ApoE基因缺陷小鼠血浆中TG、TC、LDL的水平,使HDL水平提高,已形成的动脉粥样硬化斑块面积减小。该研究结果提示,对已经形成的斑块,适宜的运动可以延缓其发展。

大多数学者的研究认为,有氧运动可以显著降低血清TC、TG和LDL水平。然而,李晖等〔10〕的研究得到了相反结果,即经过12周的游泳训练小鼠血清TC、TG、LDL水平均显著升高,但运动组小鼠动脉粥样硬化斑块的面积显著减小。袁凌燕等人〔11〕的实验同样显示运动可使动脉粥样硬化斑块面积减小,抗氧化能力提高,但对血脂水平影响不显著。其原因可能是,运动时LPL的活性增加,VLDL分解成IDL加快,但由于实验动物为ApoE基因缺陷型,IDL不能经LDL受体直接分解代谢,引起IDL转变成LDL的增加。同时LPL对脂蛋白作用减弱,水解速率降低,血浆中TG清除不利,必然导致其升高。这些学者的研究结果提示,运动抗动脉粥样硬化的作用可能存在其他的途径。

(二)运动对炎症的影响

当前一致的研究观点认为,炎症、感染可促进动脉粥样硬化的发生与发展。随着研究不断深入,逐渐发现动脉粥样硬化的病理变化存在变质、渗出和增生等炎症的基本特征,从脂质条纹到不稳定斑块的生成、破裂和血栓形成,始终都有各种炎症细胞和大量炎症介质的参与。

超敏C反应蛋白(hs-CRP)作为一标志性的炎症因子可以受到有氧运动的影响,最近的一项研究结果显示,有氧运动可以使其水平显著降低,同时可以抑制动脉粥样硬化斑块的形成和发展,这提示有氧运动可以通过降低机体的炎症水平、改善炎症状态而发挥抗动脉粥样硬化的作用〔12〕。近期一学者的研究结果也显示,耐力训练减少了因急性运动诱导的白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达,并指出心血管疾病与机体长时间低水平的炎症有关〔13〕。这些研究结果提示,运动具有显著的抗炎症效果,并且运动引起的骨骼肌中炎症因子的改变可能会对全身系统的炎症状况产生影响。运动可以通过对抗炎症的途径达到抗动脉粥样硬化的效果。

(三)运动对血液流变性的影响

血液的流变性主要有全血粘度及血浆粘度,同时包括血细胞的聚集性、变形性和脆性。其中一个因素或几个因素的升高,都可以导致血液的高粘滞状态。其中红细胞的变形能力对组织吸氧起着重要的作用,只有红细胞的变形能力处于良好状态时,红细胞才能通过直径比较小的毛细血管,不至于形成栓塞,红细胞的运输氧气的功能才能充分地发挥出来。血液的流变性及其在各种生理和病理情况下的改变是心血管系统,特别是心脏动力功能和组织供氧的决定因素之一。肌体血液出现浓、黏、聚、凝的状态,可以诱发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等心脑血管疾病。

现有的研究表明〔14〕,运动锻炼可以改善血液的流变性。李可基等人报道称,冬泳和长跑锻炼等耐力训练能有效地降低红细胞聚集指数、使血沉下降,使全血高切黏度、血低切黏度和血浆黏度下降,大大改善血液的流变性。

(四)运动对肌体抗氧化能力的影响

随着动脉粥样硬化氧化学说的提出,众多研究学者阐明了有氧运动对肌体抗氧化能力的影响及其防治动脉粥样硬化的相关机理。长期的有氧运动能提高肌体抗氧化酶的活性,增强肌体内源性抗氧化防御系统的功能,使脂质过氧化反应减轻。

有氧运动可以通过增强肌体抗氧化酶活性,降低脂质过氧化物水平,抑制氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的形成,引起肌体抗氧化能力的提高,进而有助于防治动脉粥样硬化的发生〔15〕。另有研究证明,运动对小鼠的血脂水平无明显影响,但可使动脉粥样硬化斑块的面积减小,同时抗氧化能力提高,由此可认为运动抗氧化能力的提高可以独立于降血脂途径之外〔16〕。

五、小结

运动对动脉粥样硬化的防治作用毋庸置疑,且有氧运动是防治动脉粥样硬化的重要手段之一。但由于实验对象的不同、运动方案的差异造成了实验结果不尽一致,这无疑会影响人们对有氧运动防治动脉粥样硬化机制的认识。

参考文献

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动脉粥样硬化动物模型研究现状篇4

1高脂饮食造模

“脂质浸润学说”认为AS的发生与脂类代谢异常密切相关。家兔是高脂饮食造模常用的实验动物, 其优点是对高脂饮食特别敏感, 对外源性胆固醇的吸收率高, 有人对家兔予以高脂饮食 (1%胆固醇+0.05%胆酸钠+5%猪油) , 12周后发现模型组兔主动脉形成明显黄色斑块, 融合成片[1];但多数人认为, 其产生的损害与人类的AS病变差异较大。很多研究都报道, 由于鼠类本身具有抗AS特性, 单纯高脂饮食只能形成高脂血症, 不能形成AS病变。国内有人报道单纯用高脂饮食可导致大鼠主动脉壁明显增厚, 内皮向管腔突起, 中膜平滑肌增生和排列紊乱, 但目前多数AS模型, 是在高脂饮食基础上, 联合应用其他方法, 如钙超载[2]和内皮损伤等。

2钙超载造模

人们检测了AS形成过程中动脉壁内钙含量的变化, 健康冠状动脉壁钙含量处于低水平;而在脂质条纹期钙含量增加13倍;纤维斑块期钙含量较正常增加24倍;到晚期的复合斑块期钙含量达到健康冠状动脉的80倍, 认为细胞内外的钙超载是AS的重要因素之一。有报道表明, 大剂量的维生素D3可导致动物血钙升高, 诱发动脉壁钙化。因此, 有人考虑用维生素D3建立AS模型。国外很早就有人用维生素D3诱发了动脉壁的损伤和硬化, 但他们采用的方法是灌胃和食饵性诱发, 所需时间较长。国内学者改用一次性腹腔注射给药方法, 34d后发现实验组主动脉壁平滑肌细胞增生明显, 局部血管壁向管腔突出, 形成明显斑块, 提供了一种用维生素D3快捷诱导AS模型的方法。

3内膜损伤造模

在AS、高血压和经皮血管腔内血管成形术后再狭窄等血管疾病中, 内皮损伤和平滑肌增生迁移是两个关键步骤, 因此, 内皮损伤作为致病因素被普遍用于增殖性疾病的动物模型, 最多见的是直接机械损伤内膜, 有研究[3]利用血管空气干燥术建立模型, 先分离颈总动脉, 两端以动脉夹阻断血流, 用头皮针沿血管纵轴方向平行穿刺阻断血管的两端, 接上流量250ml/min的气流, 历时5min造成内膜干燥, 后恢复血流, 再高胆固醇喂食数周后, 可出现明显AS表现。李秋梅等[4]采用电刺激血栓形成仪刺激兔颈总动脉, 导致动脉内膜损伤或受刺激段血管内血栓形成, 高脂喂食3周后可见损伤侧平滑肌和基质增生明显, 外膜炎细胞浸润;6周后内膜明显增生, 内膜下脂质沉积, 中膜平滑肌增生, 电刺激局部形成明显狭窄。该模型避免了球囊导管术时必须动脉切开以及术后结扎切开的血管, 因此不影响动物正常的血流。

4免疫刺激造模

由于As的发病机制有免疫因素的存在, 有人从免疫学的角度来探讨As模型。Campbell[5]等采用载脂蛋白E-/- (载脂蛋白E基因敲除或缺失) 小鼠鼻内接种3×107单位肺炎衣原体, 数周后重复接种, 可产生As改变;Joseph[6]通过导管将 (1～6) ×106单位肺炎衣原体以4个大气压接种于腹主动脉管壁上, 正常饮食8周后可见As;临床上还有一些移植性血管增殖模型。国外的学者将大鼠降主动脉约1.5cm切下作为移植物, 移植到另一只大鼠的腹主动脉上, 一端接于肾主动脉上, 另一端接于肾主动脉分叉之下, 术后在不同时间段检查该动脉, 发现血管病变类似于人实质性器官移植后的AS改变。

5损伤神经造模

毁损弓状核能诱发AS, 是因为心血管中枢位于下丘脑, 其病变和失调可导致血管病变。为探讨神经因素对AS形成的影响, 吴开云等[7]通过毁损大鼠弓状核诱发了大鼠主动脉早期AS病变。国外动物实验中发现:电刺激动物下丘脑, 尽管实验动物的血压和血脂水平并未出现明显的改变, 但电镜下内皮细胞已出现十分明显的、类似于AS早期的病理变化, 甚至连续地电刺激还可引起平滑肌细胞的增殖和胶原成分的堆积, 这些证据表明血管中枢的病变与血管病变之间有密切关系。

在过去的几十年中, 以上动物模型为AS和血管增生性疾病的发病机制及防治研究提供了较好的研究对象, 但在研究中也发现现有的动物模型还不能满足当今研究的需要, 甚至已成为这一研究领域的瓶颈问题。改进模型建立较好的研究平台是这一领域研究的当务之急。

关键词：动脉粥样硬化,动物模型,研究

参考文献

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防动脉粥样硬化从儿童饮食抓起篇5

动脉粥样硬化是引发冠心病、高血压和脑血管病的一种血管病理改变，基本改变是脂质沉积在血管内膜形成斑块，斑块破裂导致血栓形成而致心、脑血管病发生与发展。另外，病理学研究表明，动脉粥样硬化的损害始于儿童期，甚至在婴儿期就已开始，并且导致动脉粥样硬化发展的行为危险因素，特别是不良饮食习惯大都是在儿童期就已形成，对日后的影响颇大。因此，防治动脉粥样硬化要从儿童期抓起，目前已经成为了人们的共识，而防治的重点就是从小养成良好生活方式和饮食习惯，控制体重和发现高脂血症。

儿童良好生活方式的养成，重点是合理饮食，运动锻炼和生活规律，以及保持良好精神状态，其中合理饮食至为关键。近年随着生活水平的提高，物质的丰富，加之独生子女群体中父母们的`娇生惯养，不少儿童的饮食结构偏于高热量、高脂肪，由此使得营养过剩与营养不均衡问题显得尤为突出，造成儿童期肥胖和血脂增高，必然使动脉粥样硬化问题加重，令人担忧。

医学专家告诫人们，预防儿童期动脉粥样硬化的发生发展。父母们应在儿童的日常膳食营养方面要多下一些功夫，一方面应帮助和指导儿童从小养成一日三餐定时定量的良好饮食习惯，做到品种多样，不挑食、不偏食、少吃零食，防止暴饮暴食。一旦从小形成了这样的好习惯，将对日后防范心血管疾病、消化道疾病和肥胖等大有益处。另一方面要重视儿童的膳食营养结构搭配：首先是热量要够，以粮谷为主，少吃高脂肪、高胆固醇的食物，其次是蛋白质适量，儿童正处于生长发育期，蛋白质是不可少的，要尽量为儿童选择含优质蛋白质多的食物如鱼、蛋、奶和瘦肉等。再次是鼓励儿童多喝汤，多吃菜，饭后再吃上1―2个水果，还要注意保证儿童机体的水分供应。

动脉粥样硬化研究篇6

【关键词】大动脉粥样硬化；脑梗塞；复发；丹参

1研究方法

1.1入选对象确诊缺血性脑血管病后依TOAST分型，大动脉粥样硬化型病人318人入组。

1.2入组后随机分为2组，其中实验组183人，年龄48.145±3.119岁，平均33-61岁，对照组135人，年龄47.124±1.168岁，平均40-61岁，组间患者病程，心率及血压水平，血脂，血糖值无明显差异，住院或专科门诊随访。均为我院2010年01-06月份的住院病人，全部病例均由1名主治医生和1名主任医师诊断符合1995年全国脑血管病学术会议关于脑血栓形成的诊断标准，排除肝功和肾功衰竭病人。

1.3治疗前测血，尿常规，肝肾功能，血尿酸，血脂，血糖，叶酸，同型半胱氨酸，电解质，心电图及眼底（离院后定期电话随访及家访）。

1.4对照组依中国脑血管病防治指南危险分层给予降压、抗血小板，他汀类调脂药物治疗。实验组在此基础上予中药丹参片2片，日三次口服，有不良反应者排除。

1.5治疗期间每3个月测血、尿常规，肝肾功能，血脂，血糖，叶酸，同型半胱氨酸，电解质，心电图及眼底一次。

1.6二年后分析脑血栓复发率、血液生化变化等。

以上患者均为65岁以下在辽宁省阜新地区生活至少30年以上的汉族人，两组间年龄和性别无显著差异。

2方法

统计方法spss13.0软件包t检验和χ2检验。

3结果

服药两年后采用spss13.0软件包，应用t检验和χ2检验统计脑血栓复发率，结果显示，实验组有12例复发，复发率为6.5%；无患者因药物副作用停药。对照组有27例复发，复发率为20%（P<0.01），有明显差异。

4讨论

MONICA调查资料显示，我国脑血栓的复发率为30%，为国际之首[1]。复发性脑血栓病人的预后比首次患病更差，病死率要高于首次发病，血栓复发是增加死亡率、再次住院、长期残疾、痴呆的主要原因。因此，脑血栓的二级预防已成为各国研究的热点和焦点。

目前缺血性脑血管病的2级预防主要是控制危险因素以及长期服用西药如降压药[2]，抗血小板聚集以及调制稳定斑块和抗氧化药物，而有着悠久历史的中药一直没有用武之地。现在已知动脉粥样硬化过程中脂质氧化以及炎症反应起着重要作用，而现有研究已经证明中药丹参具有抗氧化以及抗炎作用[3]，中医学认为丹参有养血活血的功效，素有一味丹参共同四物之美誉。因此我们实验用丹参口服预防大动脉粥样硬化型脑血栓复发，在我们的研究中确实明显减少了脑血栓的2年复发率，我们考虑除以上原因外，还可能与丹参的以下功能有关：①促进组织的修复与再生，局部淤血减轻、血液循环改善，愈合时间缩短。②抑制过度增生：对过度增生的纤维母细胞有抑制作用。③抗血栓形成：提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集（提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成）；改善血液流变学特性（血粘度降低、红细胞电泳时间缩短）。④改善微循环。⑤钙拮抗作用，由于血小板粘附、聚集、凝血及血栓形成时均需Ca2+参与，心肌收缩时更离不开Ca2+，因此丹参的抗血小板、抗凝血、抗血栓形成以及对血管的保护作用都可用钙拮抗来解释。正是由于丹参具有以上药理作用，因此能够预防大动脉粥样硬化型脑梗塞复发。当然本文所得结论具有一定局限性，这可能与病例的选择上的数量，年龄，性别，种族以及人群等有关，要应用于临床或是其他地区还需要进一步的研究和探讨。

参考文献

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动脉粥样硬化研究篇7

1 调节脂质代谢

血脂代谢紊乱与AS的发生密切相关。血浆中TC、TG浓度升高,特别是LDL-C、极低密度脂蛋白(VLDL)及载脂蛋白(apo B)浓度升高是AS的主要危险因素之一。HDL-C及载脂蛋白A(apo A)浓度降低亦是发生AS的危险因子。将血脂控制在合适的范围内是防治AS的有效途径。现已发现不少调脂中药及其有效成分作用确切,毒副反应较西药相对较少。左芳等[1]将80例AS患者随机双盲分成两组,对照组行常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加服通心络胶囊;发现通心络胶囊可显著降低血脂,改善软斑块组织构成,增加斑块密度,从而稳定斑块。杨飞等[2]研究发现通补兼施方脂清胶囊可显著降低AS家兔血清中TC、LDL-C以及肝脏中TC水平,显著抑制兔主动脉粥样斑块形成,升高一氧化氮(NO)、降低血栓素B2(TXB2)和内皮素-1(ET-1)水平。杨俊卿等[3]研究发现大鼠预防性给予不同剂量的姜黄醇提取物(主要为姜黄素)后,其血脂呈剂量依赖性下降,TC、LDL-C降低,HDL-C升高,LDL-C /HDL-C值明显降低。王亚红等[4]研究发现人参皂苷能抑制C57BL-ApoE基因敲除小鼠血清TC、LDL-C的上升,抑制AS斑块的形成。此外,具有调节血脂作用的中药还有:茵陈、何首乌、大黄、虎杖等,能抑制脂质吸收,促进脂质排泄;山楂、首乌、桑寄生、赤芍、丹参、薤白、葛根、决明子等,可促进脂质转运和消除。

2 保护血管内皮细胞及抗脂质过氧化

AS的发生与血管内皮细胞(VEC)之间关系密切,血管内皮细胞功能性损伤被认为是AS形成早期的始动环节,保护血管内皮功能是防治AS的手段之一。VEC受损可增加ET-1释放,减少NO释放。此外,自由基和脂质过氧化反应亦为VEC受损的主要危险因素,是AS发生的重要环节。许多中药通过抗脂质过氧化、保护血管内皮细胞从而防治AS形成。张琪[5]用血脉通颗粒(生首乌、淫羊藿、黄芪、泽泻、赤芍、葛根)治疗颈动脉粥样硬化77例,治疗组治疗后TG、丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平均显著性下降,超氧化物歧化酶(SOD)、HDL-C显著升高。且颈动脉内膜中层增厚未进一步发展,斑块有所消退。罗陆一等[6]用地黄引子(地黄、山茱萸、巴戟天、桂枝等)治疗颈动脉粥样硬化50例,发现地黄引子可显著升高NO及SOD,降低MDA及C反应蛋白(CRP),使颈动脉斑块体积缩小或消失。张红霞等[7]研究发现调肝导浊方(炙何首乌、柴胡、草决明、泽泻、蒲黄、姜黄、丹参等)连续给药12周,可明显降低AS家兔肝脏TC、TG、MDA含量,增强SOD活性。刘春玲等[8]研究发现养阴活血解毒方芦黄颗粒(黄精、首乌、姜黄、虎杖、漏芦、红花等)可显著升高AS家兔血清NO水平,降低ET-1水平。王强等[9]发现益气活血方通脉胶囊可降低血清MDA、ET-1水平,升高NO、SOD。Tang等[10]发现丹参酮ⅡA能显著改善大鼠AS钙超载模型的病理病变,其机制可能与其能增强动脉Cu/Zn SOD的活性并促进其蛋白质和mRNA表达、抑制ox-LDL的合成有关。王绿娅等[11]研究发现,余甘子可调节家兔脂质代谢,降低MDA含量,升高SOD活力,保护血管内皮功能。丹皮酚对高脂血症大鼠有升高血清NO、PGI和降低ET-1的作用,从而延缓AS进程。

3 抑制血管平滑肌增殖及调节增殖与凋亡之间的平衡

血管平滑肌细胞(VSMC)位于动脉血管中膜,血管壁受损是导致VSMC增殖的起始原因。血管壁受损、细胞浸润,继而释放多种生长因子(PDGF、TGF-β及FGF等)、血管活性物质(AngⅡ、ET-1)和细胞外基质(纤维蛋白),激活VSMC的相应受体,引起原癌基因(c-myc、c-fos等)表达,导致VSMC的过度增殖。研究表明,中药可通过减少血管活性物质合成并拮抗血管活性物质与其相应受体结合、抑制生长因子表达、抑制原癌基因激活和降解纤维蛋白等方面抑制VSMC的增殖。牛膝、丹参、瓜蒌等平肝益气、活血祛痰药均能降低高血压大鼠AngⅡ含量。李运伦[12]研究发现,钩藤碱和异钩藤碱对AngⅡ诱导VSMC增殖有明显的抑制效应,其机制与其下调AT1-R、NF-κB、Stat3、c-myc、c-fos蛋白的表达以及c-myc mRNA和c-fos mRNA转录有关。周永兰等[13]研究发现三七总皂苷对基础状态下及血小板源生长因子(PDGF)诱导的VSMC增殖均具有显著抑制作用,其机制可能与其下调原癌基因c-myc基因表达有关。当归、阿魏酸钠对高脂血清损伤人脐静脉内皮细胞(ECV304)高表达的b-FGF及低表达TGF-β1有逆转作用。三七提取液能降低冠心病患者纤维蛋白原含量,升高组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性并抑制纤溶酶原活化物抑制因子(PAI)的合成和释放。吴艳霞等[14]发现,镇肝息风汤(怀牛膝、玄参、天冬、川楝子、甘草等)的含药血清可抑制AngⅡ诱导的人脐动脉VSMC增殖,促使凋亡率升高。

4 抗炎症反应

CRP的基础水平与心脑血管疾病的发病率呈正相关,它反映了AS斑块形成的严重程度,是目前所发现的建立在病理基础上预测心脑血管疾病发作、复发和预后的敏感指标[15]。杨焕斌等[16]治疗颈动脉粥样硬化斑块50例,给予冠心Ⅱ号(仙茅、杜仲、淫羊藿、黄芪、田七、葛根),治疗后ET、MDA、CRP均明显降低,颈动脉斑块体积缩小或消失。田静文等[17]观察70例急性冠脉综合征患者给予血脂康短期治疗,发现血脂康可明显降低患者白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,对稳定冠脉斑块有利。燕芳芳等[18]发现益气活血通脉方芪参益气滴丸可使AS家兔的hs-CRP水平明显降低,同时斑块厚度减小,泡沫细胞减少,体积变小。芦黄颗粒(黄精、首乌、姜黄、虎杖、漏芦、红花等)可使AS模型兔的血清CRP和IL-6水平明显降低[19]。葛岚等[20]研究发现益气活血解毒汤(连翘、黄芩、牡丹皮、丹参、水蛭、人参等)可使AS家兔模型TG、TC、LDL-C、CRP、IL-6及TNF-α水平均明显下降,HDL-C则明显升高。周明学等[21]观察活血(三七总皂苷)、解毒(黄连提取物)、活血解毒中药有效部位(虎杖提取物、大黄醇提物)对ApoE基因敲除小鼠AS斑块炎症反应的影响,研究结果表明活血解毒中药有效部位可明显降低ApoE基因敲除小鼠血清炎症标志物hs-CRP及sCD40 L的水平,其效果优于单纯活血或解毒组。核因子-κB(NF-κB)在炎症反应的基因表达中也可能发挥着重要的作用,可影响AS斑块的稳定性;抑制NF-κB的活性有益于防治AS[22]。陶雪飞等[23]研究发现活血行气养心方开心胶囊(由越鞠丸、失笑散及生脉散加减而成)的药物血清可显著降低由气滞血瘀型大鼠高脂血清刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中NF-κB的活性。活血降糖胶囊(血竭、丹参、太子参等)可使2型糖尿病(T2DM)大鼠AS模型血管壁NF-κB表达水平明显下降,使大鼠主动脉内膜受损程度有所减轻[24]。

5 结语

AS是由多种因素共同作用导致的疾病,对这种疾病的治疗也应针对其病理发生的特点,以纠正其主要的病理改变为中心,从多靶点进行干预和治疗。而具有抗AS的中药复方及其有效成分各具不同的药效学特点,可针对AS的不同病理环节同时发挥作用。体现出了多靶点、多途径及整体调节的优势,具有较好的疗效和较高的应用前景。

目前的实验研究中还存在一些不足,主要表现在实验设计和实施有待完善。很多实验在分组和试验过程中很少采用随机对照双盲的方法,且样本量也普遍较少。此外在探讨某个中药防治AS的作用机制时,还需要从炎性因子、相关免疫指标及胰岛素抵抗的改善情况等多个方面来评价。

兔动脉粥样硬化发病机制的实验研究篇8

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物

健康雄性新西兰兔16只,3～4月龄,体重(1.5±0.5)kg,由河北医科大学实验动物中心提供(合格证号803036)。

1.1.2动物饲料

标准饲料由河北医科大学动物实验中心提供。高脂饲料配方:1%胆固醇;15%蛋黄粉;5%猪油;79%基础饲料;胆固醇、蛋黄粉购自北京鼎国生物技术有限责任公司。

1.1.3试剂

总胆固醇(TC)赋剂盒、甘油三脂(TG)试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒,均购自深圳迈瑞公司;NO检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;兔iNOS抗体,北京博奥森生物技术有限公司;兔PAI-1抗体,武汉博士德生物工程有限公司;兔SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒,北京中杉金桥生物技术有限公司;总RNA极速抽提试剂盒,上海飞捷生物技术有限公司;RT-PCR试剂盒,杭州博日生物科技公司;PAI-1及内参照β-actin引物和iNOS及内参β-actin引物均由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

1.1.4仪器

MINDRAY BS-220全自动生化分析仪(深圳迈瑞公司);YD-1508A冷冻切片机,浙江金华益迪医疗设备厂;LEICA DFC420型显微镜、LEICA DM 2000型显微成像系统,德国莱卡公司;Motic Med 6.0数码医学分析系统,麦克奥迪公司;UV-2100型紫外分光光度计,上海尤尼柯仪器公司;TC-xp-G基因扩增仪,杭州博日科技有限公司;Fine-do X3Tanon UVP凝胶成像系统,上海天能科技公司。

1.2方法

1.2.1分组与给药

家兔在实验室适应性饲养1周后,随机分为两组,每组8只,即:①正常对照组(N组)给予普通颗粒饲料喂养;②AS模型组(M组)给予高脂饲料喂养;两组家兔均分笼饲养,限食量,每兔每日100g,分两次喂养,自由饮水,连续喂养12周。

1.2.2标本采集

实验第12周末禁食12h,取各组兔静脉血2ml,分离血清,用于血脂检测。各组动物颈动脉放血致死,立即剖开胸腔、腹腔,游离主动脉全长,剥离外膜脂肪组织,生理盐水冲洗后纵行剖开,取靠近主动脉弓处的降主动脉约1cm,迅速液氮冷冻并置于-70℃冰箱保存用于RNA提取;另取一段近主动脉弓处及血管开口处动脉组织约lcm,用4%多聚甲醛溶液固定36h,常规酒精脱水,石蜡包埋、切片,分别作HE染色和免疫组织化学染色。

1.2.3指标检测

1.2.3.1血脂检测:

全自动生化分析仪测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。

1.2.3.2主动脉壁病理形态观察:

主动脉壁HE染色切片,40倍普通光镜下,每张切片随机选取5个视野,观察病理形态变化并显微摄像,利用医学图像分析系统分别测定其主动脉粥样斑块面积、主动脉内膜总面积以及内膜和中膜的厚度,每个标本取5个视野测量的平均值,并计算AS斑块面积/血管内膜面积和主动脉内膜/中膜厚度比值。

1.2.3.3血清NO含量检测:

实验12周末,禁食12h,经颈动脉穿刺取血3ml,待血液自凝后,3 000r·min-1离心15min,分离血清。取血清100μl,按NO检测试剂盒说明书,采用硝酸还原酶法测定血清的NO含量。

1.2.3.4免疫组化法检测主动脉组织iNOS和PAI-1蛋白表达:

采用免疫组织化学S-P法,DAB显色。光镜下观察主动脉组织iNOS和PAI-1蛋白的表达及定位,棕黄色颗粒为阳性表达。采用全自动显微照相系统分别拍摄各组图片,使用Motic Med6.0数码医学分析系统分析各组图片iNOS和PAI-1阳性细胞的平均光密度值。

1.2.3.5 RT-PCR方法检测主动脉组织iNOS mRNA和PAI-1mRNA表达:

取待检标本提取主动脉组织总RNA,严格按照试剂盒说明书操作。基因序列查自GenBank,应用专业引物软件Primer Premier5.0设计,由上海捷瑞生物工程有限公司合成。iNOS反应条件为:94℃预变性3min,然后94℃变性45s,50℃复性60s,72℃延伸60s,共循环29次;72℃延伸7min。各取iNOS和内参照β-actin的PCR产物10μl,经2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色、照相并经光密度仪扫描分析,以恒量表达的β-actin mRNA吸光度值为内参照进行标准校正,计算iNOS产物的相对量。计算公式:iNOS相对量=iNOS产物电泳条带吸光度/β-actin产物电泳条带吸光度。PAI-1的扩增条件:94℃预变性3min,然后94,℃,45s,54℃,45s,72℃,45s,共29个循环,结束前72℃,5min,4℃,5min。其余检测和计算方法同iNOS。

1.3统计学处理

应用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析(F检验),所有计量资料用()表示,组间比较采用SNK-q检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1血脂检测结果

与正常组相比模型组血清中TC、TG、LDL-C含量均明显升高(P<0.01),见表1。

注:与模型组比较,*P<0.05;**P<0.01(表2-4同)

2.2各组动物主动脉斑块面积/血管内膜面积和主动脉内膜/中膜厚度比较

与正常组相比模型组,主动脉斑块面积/血管内膜面积和主动脉内膜/中膜厚度及主动脉壁胆固醇含量都显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。见表2.

2.3各组家兔血清NO含量

第12周末各组兔血清NO检测结果:正常对照组为(53.88±8.82)μmol·L-1,AS模型组为(80.88±14.32)μmol·L-1,与正常对照组相比,模型组兔血清NO含量明显升高(P<0.01)。

2.4各组家兔主动脉组织iNOS蛋白表达的免疫组化分析及iNOS mRNA表达比较

iNOS的阳性染色主要位于中膜的平滑肌细胞胞浆内及内膜的巨噬细胞胞浆内,呈棕黄色颗粒。正常对照组兔主动脉内膜及中膜仅见散在微量棕黄色颗粒状阳性染色物质,模型组兔主动脉内膜及中膜均可见大量呈条状及点片状的阳性染色区。采用图像分析仪定量检测结果表明,模型组iNOS的表达明显高于对照组(P<0.01),有统计学意义。各组兔主动脉iNOS mRNA表达检测结果:β-actin电泳条带亮度无明显差异,正常对照组表达的iNOS极少,模型组iNOS产物电泳条带最强,产量最高,与正常组相比,模型组iNOS基因的表达明显增多(P<0.01)。见表3。

2.5各组家兔主动脉组织PAI-1蛋白表达的免疫组织化学分析及PAI-1 mRNA表达比较

正常组内膜和中膜仅见散在棕黄色颗粒状阳性染色物质;模型组增厚的动脉内膜及中膜内可见大量的棕黄色颗粒状阳性染色物质,部分融合成片,尤以内膜明显;采用图像分析仪定量检测结果表明,模型组单位面积动脉内膜及中膜PAI-1阳性染色标记物的平均光密度值明显高于正常组(P<0.01)。各组兔主动脉PAI-1 mRNA表达检测结果:β-actin电泳条带亮度无明显差异,正常对照组PAI-1表达得极少,模型组PAI-1产物电泳条带最强产量最高,与正常组相比,模型组PAI-1基因的表达明显增多(P<0.01)。见表4。

3讨论

NOS是NO合成的限速酶,检测此酶可间接地反映NO的水平,iNOS主要通过生成NO而发挥其生物学作用。在基础生理状态下,内皮释放的NO是体内主要的舒血管活性物质,它能平衡交感神经系统和肾素血管紧张素系统引起的血管张力改变,NO通过对鸟苷酸环磷酸酶中铁原子作用、激活鸟苷酸环磷酶,升高细胞内鸟苷酸环磷酶、具有维持血管张力、调节血压,抑制血管平滑肌细胞迁移、增生,抑制血小板聚集与白细胞对血管壁的黏附,调节影响心肌收缩与舒张功能的作用[4]。同时,还有抗血管壁细胞增殖的作用,因此在心血管系统的生理及病理过程中发挥重要作用[5]。作为决定NO生成的酶,一氧化氮合酶NOS在体内广泛分布,其中血管内皮细胞是最集中部位[6,7]。iNOS在正常生理情况下不表达,主要在巨噬细胞,中性粒细胞等被细胞因子激活后而产生,先表达iNOS的mRNA再生成iNOS从而诱导产生持续时间长而大量的NO。本实验研究表明,在动脉粥样硬化模型兔中iNOS基因的表达明显增多,引起NO的含量明显升高,促进动脉硬化的发生和发展。

内皮细胞损伤或功能紊乱可导致血液凝血-纤溶失衡,机体内纤溶系统的功能减低是导致血栓形成的重要原因之一[8]。当PAI-1过量时纤溶活性下降,引起纤维蛋白沉着甚至血栓形成,血浆脂蛋白渗入内膜,长期纤维蛋白的慢性沉积会导致血管的反复损伤,有利于斑块的生长,这可能是AS发展的一个重要原因[9]。Sobel等[10]报道,动脉粥样硬化斑块中PAI-1 mRNA表达增加,且PAI-1 mRNA水平与动脉粥样硬化程度呈正相关。本实验中,兔动脉粥样硬化模型中,PAI-1阳性染色标记物和PAI-1基因的表达明显增多。

本实验的研究结果表明,在动脉硬化发生发展中,iNOS和PAI-1的表达均明显升高。我们可以用药物干预iNOS和PAI-1的表达,从而达到抗动脉硬化的目的,为临床动脉粥样硬化的预防和治疗提供新的思路。

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动脉粥样硬化研究篇9

1 ISNA与晚期、极晚期支架内血栓

支架内血栓依据支架植入后发生的时间分为急性期 (0~24 h) 、亚急性期 (24 h~30 d) , 晚期 (30 d~1 年) 和极晚期 (>1 年) [1]。早期 (急性期与亚急性期) 支架血栓的2 年死亡率是20%, 晚期与极晚期支架血栓死亡率是10%[2]。

血管内成像促进了人们对支架内血栓形成潜在机制的认识。血管内超声 (inravascular ultrasound, IVUS) 研究显示, 早期支架血栓与支架膨胀不全和支架异位有关, 这可能解释不同支架类型早期血栓发生率相似[3], LST、VLST与支架异位和内皮延迟愈合有关, 而ISNA破裂是LST、VLST形成的重要的新的机制。ISNA是指支架附近新生内膜内有富脂质的泡沫细胞聚集伴或不伴坏死核形成[4]。ISNA的主要特点包括泡沫巨噬细胞、薄帽纤维粥样斑块 (thin cap fibroatheromas, TCFA) 、脂质浸润、斑块破裂。在稳定型心绞痛、ST段抬高性心肌梗死相关的VLST患者中, 应用光学相干断层成像技术 (Optical Coherence Tomography, OCT) 观察到ISNA破裂[5]。第一代和第二代DES植入后9 个月, 14.5% 支架出现了富脂质新生内膜, 3.9% 支架出现薄帽新生内膜, 支架植入后2 年, 富脂质新生内膜与薄帽新生内膜均增加, 分别为27.6% 和13.2%[6]。这些发现表明, 薄帽新生内膜破裂是VLST形成的重要机制。

2 ISNA与急性冠脉综合征

伴有新生动脉粥样硬化患者具有较高的急性冠脉综合征 (acute corenary syndrome, ACS) 发生率[7]。OCT研究显示, 裸金属支架 (baremetal stent, BMS) 植入平均6.5 年后, 33% 的支架出现薄纤维帽或富脂质的ISNA, 其中30% 出现支架内纤维帽破裂, 表现为不稳定型心绞痛[8]。Kang等[9]研究显示, 不稳定型心绞痛患者比稳定型心绞痛患者表现出纤维帽更薄, 内膜破裂、TCFA与管腔内血栓发生率更高。不稳定型心绞痛患者表现出更多的不稳定OCT结果, 包括TCFA、新生内膜破裂和血栓。因此, ISNA破裂与ACS密切相关。

3 ISNA与支架内再狭窄

既往研究显示, 再狭窄患者出现了ACS, 而病理学研究进一步阐明再狭窄病变与不稳定事件相关。无论是DES, 还是BMS, 当支架植入时间超过48 个月以后, 大多数再狭窄病变将进展为富脂质新生内膜, 且再狭窄患者比非再狭窄患者ISNA更常见[10]。Habara等[11]研究显示, 极晚期再狭窄病变常常可以在支架周围和新生内膜内观察到微血管形成。另有研究显示, 伴有微血管形成比不伴有微血管形成斑块破裂发生率更高以及纤维帽厚度更薄[12], 表明微血管在ISNA形成中起着重要的作用, 微血管是脂质斑块形成中为其输送红细胞和炎症细胞的重要通道, 与斑块的不稳定性、斑块内出血、斑块破裂密切相关。微血管在OCT图像上表现为无信号的管腔结构。Kang等[9]研究50 个DES再狭窄病变显示, 90% 新生内膜含有脂质积累, 10% 的新生内膜含有钙沉积, 此外, 26 个再狭窄病变 (52%) 有至少1 处TCFA和29 个再狭窄病变 (58%) 有至少1 处支架内新生内膜破裂。因此, 再狭窄病变晚期多有ISNA形成, 并且ISNA的组织成分与典型动脉粥样硬化斑块的组织成分一致[13]。

4 BMS、DES植入后ISNA的形成

BMS的应用已显著地降低了单纯球囊扩张时代的再狭窄率, 然而, 由于平滑肌细胞增值及细胞外基质产生, BMS的植入并不能消除裸金属支架下的新生内膜生长。一项长期随访研究揭示, BMS内新生内膜显示三期管腔反应, 6 个月内的早期狭窄阶段, 6 个月~3 年的中期狭窄减退阶段, 超过4 年的晚期管腔再狭窄阶段, 这些发现表明, 在晚期阶段, BMS内的新生内膜组织不仅易发生空间改变, 而且易发生性质上的改变, 特别是形成ISNA[14]。先前认为, BMS内新生内膜发生动脉粥样硬化改变是罕见的, 但血管内成像研究揭示, BMS植入5 年后新生动脉粥样硬化改变并不罕见[15]。

Nakazawa等[4]纳入299 例尸检病例 (197 个BMS和209 个DES) , 研究显示, 无论是BMS, 还是DES, 新生动脉粥样硬化均是不断进展的, 与BMS相比, DES的ISNA发生率更高, 且发生时间更早, DES相关的ISNA更具有不稳定性特征。值得注意的是, Otsuka等[16]研究发现, 即使第二代DES植入后也会形成ISNA, 且第二代与第一代DES的ISNA发生率没有差异, 大约为30%, 由此说明, 即使是第二代DES植入后, 也不能避免ISNA形成, 因此, 长期随访依然是必要的。

5 ISNA形成的病理学背景

最近研究显示, 在长期随访中发现DES伴随着延迟和渐进的新生内膜增殖, 被称为“晚期追赶”现象[4,17]。尽管DES内新生内膜持续生长, 最终导致主要不良心血管事件 (major adverse cardiovascular events, MACE) 的发生机制尚不清楚, 但在DES植入后的极晚期阶段, 细胞毒药物的影响及聚合物相关的慢性炎症使内皮细胞持续受损, 从而导致新生内膜组织的不稳定和增殖。此外, 不稳定和增殖的新生内膜可能构成动脉粥样硬化改变的病理学背景。已有研究表明, DES支架柱周围的慢性炎症直接损伤正常的血管愈合过程, 从而诱发支架内皮化不良, 炎症加速血管愈合过程的空间异质性, 进而与后续的新生内膜受损和过度生长相关。

最近使用人尸检样本的研究显示, BMS植入1 年后, 新生内膜组织主要由平滑肌细胞和胶原纤维组成, 然而, 与普通球囊成形术后的血管反应不同, BMS周围的血管组织显示以血细胞聚集为特征的长期慢性炎症, 由此说明, 即使在临床过程稳定的的患者中也会出现金属异物炎性反应, 尤其是在BMS植入超过4 年以后, 支架柱周围的慢性炎症、平滑肌细胞增值、泡沫状巨噬细胞浸润可能与动脉粥样硬化形成有关。因此, BMS支架柱表面覆盖的新生内膜易受特定血管反应的影响。此外, 全身动脉粥样硬化的刺激也会影响局部冠状动脉的新生内膜组织, 随后这种组织转变为具有不稳定特征的新生动脉粥样硬化病变, 不稳定特征包括斑块破裂、侵蚀和随后的血栓形成。

6 ISNA的OCT发现

ISNA形成的确切机制尚不清楚, 但OCT的应用为其提供了重要线索。Tian等[18]研究显示, ISNA常常发生于支架近端和远端部分, 较少发生于支架中间部分, ISNA的发生常常伴有新生内膜微血管形成, 邻近斑块脂质含量越高其ISNA发生率越高。Takano等[15]应用OCT研究发现随着支架植入时间的延长, 纤维性的新生内膜可能转变成富脂质的新生内膜;支架植入5 年后, 67% 的BMS内膜转变成富脂质的新生内膜;此外, 血管造影显示非再狭窄的BMS植入患者中观察到了新生动脉粥样硬化改变, 且纤维帽破裂和血栓形成与新生动脉粥样硬化改变有关。Vergallo等[19]研究显示, 支架植入后新生内膜增生程度与新生内膜脂质积累呈正相关, 支架内新生内膜越厚, 新生内膜脂质负荷越严重, DES的脂质积累多少与新生内膜增生程度呈正相关, 这种关联与支架类型及支架植入时间无关。新生内膜肥厚和ISNA可能有着类似的潜在机制, 涉及慢性炎症、内皮功能障碍及促炎细胞因子的参与, 而BMS内广泛的新生内膜肥厚, 可能放大支架内血流动力学紊乱, 主要表现为新生内膜进一步增生, 最终导致新生动脉粥样硬化改变。相比之下, 与BMS相比, DES植入后不完全和完全内皮化所诱导的炎症刺激新生内膜生长和脂质沉积于内皮下间隙, 导致早期的ISNA形成。

最近Tian等[18]报道了关于第二代DES植入后ISNA的发生率 (25.6%) , 该结果与第二代DES的病理学研究结果相似[16], 甚至说明, 第二代DES比BMS更早形成ISNA, 特别是在DES植入后的再狭窄病变。

7 ISNA形成的危险因素

ISNA形成的预测因素尚不清楚。Yonetsu等[10]研究了151 例患者179 个支架, 多变量分析显示, 支架年龄≥ 48 个月、各种亚型的DES支架、目前吸烟、慢性肾脏疾病、使用血管紧张素转换酶抑制剂 (ACE-Ⅰ) 或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 (ARB) 是ISNA形成的独立预测因子。而ACE-Ⅰ和ARB是ISNA形成的保护性因素。Lee等[7]校正心血管危险因素后, 慢性肾脏病、低密度胆固醇>90 mg/dl、支架年龄是ISNA形成的独立预测因子, 与DES的类型无关。

8 ISNA形成的临床意义

ISNA的发现打破了先前认为支架植入后的内膜增值是一种稳定状态的看法, 随着时间的推移, 增值的内膜会向新生动脉粥样硬化转化, 表明内膜增值也与VLST形成密切相关[9]。

在目前检测不稳定斑块的方法中, OCT因其分辨率高, 可以精确测量冠状动脉内、中、外膜、纤维帽厚度以及能对纤维帽中的巨噬细胞进行定量, 这种独特的能力使得OCT技术成为目前识别易损斑块的最佳影像学手段。Macneill等[20]通过OCT成像对罪犯病变与非罪犯病变中的巨噬细胞密度进行定量分析, 结果显示, 不稳定型心绞痛患者巨噬细胞密度明显增加, 罪犯病变部位的巨噬细胞密度显著大于非罪犯病变, 破裂部位显的巨噬细胞密度显著大于非破裂部位[ (6.95±1.60) %, (5.29±1.17) %;P=0.002], 罪犯病变表面的巨噬细胞浸润更能预测不稳定的临床情况。由此暗示, 通过OCT检测冠心病患者冠脉病变中的巨噬细胞密度有助于对患者预后进行预判并指导下一步治疗。

最近多中心临床研究显示, 二次MACE事件的发生几乎等同于ACS患者支架植入的罪犯病变或非罪犯病变, 3年内MACE事件发生率12.9%归因于先前罪犯病变的支架植入[21]。此外, 最近的一次大型队列研究表明, 在7年随访时间内, 第一代DES植入患者靶病变重建率和VLST发生率处于递增的趋势[17]。Amabile等[22]运用OCT识别VLST患者ISNA的存在, 10例具有明确的VLST患者的冠状动脉节段出现ISNA, 与非VLST患者相比, ISNA病变支架柱覆盖不良及新生内膜明显增厚。Ali等[23]研究表明新生动脉粥样硬化改变与DES围手术期心肌梗死增加有关。这些发现表明ISNA形成在支架植入晚期阶段触发支架相关的MACE事件发生的重要性。

综上所述, ISNA形成与晚期支架失败及晚期MACE事件发生密切相关。目前关于ISNA的发生机制尚不清楚且尚无有效的方法预防ISNA形成, 因此, 探索ISNA的发生机制、危险因素及防治措施有望成为预防晚期支架失败及晚期MACE事件发生的新选择。

摘要：冠状动脉支架内新生动脉粥样硬化斑块 (ISNA) 形成可能是导致晚期血管并发症如支架内再狭窄 (ISR) 及晚期支架内血栓 (LST) 形成的重要原因, 虽然支架内血栓发生率较低, 但一旦发生将带来严重后果, 具有很高的死亡率。ISNA形成不仅涉及第一代药物洗脱支架 (DES) , 而且第二代DES也不能完全幸免。迄今为止, 关于ISNA的发生机制仍不清楚, 且尚无有效的干预措施。

动脉粥样硬化研究篇10

1 对细胞凋亡信号传导通路的影响

细胞凋亡的信号转导机制十分复杂, 目前认为至少有三条通路参与, 即线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路。

1.1 线粒体通路

又称内源性凋亡途径, 线粒体通路可由多种因素诱发, 如细胞脱离了原来的生长环境、失去了赖以生存的生长因子、DNA损伤等[2]。在生理情况下, 线粒体通透性转变孔 (MPTP) 周期性开放, 防止膜间隙正离子的过度蓄积。在各种促细胞凋亡信号作用下, MPTP不可逆过度开放, 线粒体跨膜电位崩解, 细胞色素c (Cytc) 等促凋亡活性蛋白释放至胞浆内, Cytc与凋亡蛋白酶活化因子-1 (Apaf-1) 形成多聚复合体, 活化Caspase-9前体, 导致下游效应者Caspase-3活化, 切割底物使细胞凋亡[3]。这一途径中, 活性Caspase-3是级联反应中关键蛋白酶[4], Bcl-2家族是线粒体凋亡途径的主要调控者, 他们通过激活一系列下游基因发挥调节凋亡作用。红花黄色素B[5]、茶多酚[6]、麝香酮[7]均能有效抑制细胞线粒体膜电位损伤后细胞内钙超载, 维护线粒体功能, 提高线粒体膜电位 (MMP) , 抑制刺激对细胞线粒体的损伤作用导致的细胞凋亡。高培国等[8]研究发现, 氧化应激可诱导细胞凋亡, 葛根素可通过拮抗过氧化氢对线粒体膜的脂质过氧化反应, 保持线粒体膜的完整性, 维持线粒体膜电位, 减少线粒体损伤率, 降低Caspase-3阳性表达率, 阻断细胞凋亡的信号传导通路, 达到保护细胞的目的。李响等[9]研究表明, 注射用血栓通可以防止线粒体损伤, 提高Bcl-2表达水平, 减少Cytc的释放, 减低Caspase-3活性来拮抗血管内皮细胞凋亡。蒙果等[10]研究发现金钠多中所含银杏黄酮可以阻止MMP的下降和保持膜的完整性, 从而抑制线粒体Cytc释放和细胞凋亡发生。

1.2 死亡受体通路

该途径也称外源性凋亡途径, 死亡受体中最典型的是Fas和TNFRs。 (1) Fas/FasL死亡通路:FasL可与Fas结合, 募集FADD (Fas相关死亡结构域蛋白) 后形成了死亡诱导信号复合物 (DISC) , 激活Procaspase-8, 进一步自我激活启动下游的Caspase相关蛋白酶级联反应, 最终导致细胞凋亡。该通路中, DISC的形成是级联反应的关键步骤[11]。 (2) TNFR死亡通路:TNFRs当与TNF结合后, TNFR-I三聚体化, 然后募集一个衔接蛋白TRADD (TNFR-associated death domain) 。TRADD可以引起两条信号转导通路的激活, (1) 通过招募FADD诱导细胞凋亡; (2) 通过肿瘤坏死因子受体相关蛋白2 (TRAF-2) 和诱导转录因子 (RIP) 活化。TRAF-2和RIP活化NF-κB诱导激酶 (NIK) , NIK使IκB发生磷酸化, 并促进NF-κB的降解和释放, 后者转位至核, 激活一系列基因表达[12], 导致细胞凋亡发生。甄艳军等[13]实验显示, 木贼提取物能致血管平滑肌 (SMC) 膜表面Fas大量表达, 增加死亡受体与配体结合的细胞毒作用介导SMC的凋亡, 而且凋亡率与Fas、FasL表达量成正相关, 两者结合触发的凋亡效应可清除增生的SMC, 减轻内膜增生, 使AS早期SMC增殖与凋亡趋于平衡, 减轻AS早期病变。尚秀玲[14]予白藜芦醇干预动脉粥样硬化家兔, 结果显示白藜芦醇能明显降低家兔主动脉FasmRNA、FasLmRNA、Caspase-3mRNA表达, 且Caspase-3mRNA表达与FasmRNA表达水平呈显著正相关, 通过抑制Fas/FasL途径来抗AS斑块内细胞凋亡。林蓉等[15]研究槲皮素对TNF-α损伤的内皮细胞发现, TNF-α使ECV核内NF-κB表达增加, 而槲皮素能降低内皮细胞NF-κB的表达, 抑制其活化, 减少其降解和释放。

1.3 内质网通路

内质网应激 (ERS) 是指很多病理生理刺激, 如氧化应激、缺血缺氧、钙稳态紊乱及病毒感染等, 能够引起内质网腔内未折叠与错误折叠蛋白蓄积以及Ca2+平衡紊乱。适度的ERS可通过促进内质网处理未折叠及错误折叠蛋白等降低损伤;而持久或严重的ERS则可引起细胞凋亡[16]。目前, 已知内质网应激诱导细胞凋亡的途径有3条: (1) CHOP/GADD153基因的激活转录; (2) JNK的激活通路; (3) 内质网特有的半胱氨酸蛋白酶Caspase-12的激活通路[17]。其中, CHOP通路是调节内质网应激诱导凋亡的主要通路。葡萄糖调节蛋白 (GRP78) 作为一种分子伴侣在蛋白质的折叠和转运过程中发挥重要作用, 通过“异常折叠蛋白质反应”途径激活ERS[18], 魏晏等[19]研究发现, 经淫羊霍苷 (ICA) 预处理的同型半胱氨酸 (HCY) 诱导的内皮细胞内GRP78mRNA表达明显减少, 且未见明显凋亡形态学改变, 考虑减缓血管内皮细胞内质网应激可能是ICA抗细胞凋亡作用的机制之一。高雪等[20]以体外培养HUVECs, 通过Ang-Ⅱ诱导细胞凋亡的发生, 观察盐酸川芎嗪 (TMP·HCl) 对凋亡细胞的作用, 发现Ang-Ⅱ诱导细胞很快激活细胞内ERK1/2、JNK, 引起细胞损伤。予盐酸川芎嗪预保护的细胞ERK和JNK磷酸化程度随药物浓度增高而降低, 其激活程度与TMP·HCl浓度成反比。表明TMP·HCl能抑制ERK、JNK的信号通路来保护内皮细胞。

2 对细胞凋亡调控蛋白的作用

Caspase家族和Bcl-2家族在凋亡的发生发展过程中起着举足轻重的作用。Caspases家族是凋亡活化因子, 是引起细胞凋亡的关键酶, 是凋亡通路的核心执行者。Bcl-2家族蛋白是调节细胞凋亡的关键元件, 分为3类:促凋亡蛋白, 如Bak和Bax;抗凋亡蛋白, 如Bcl-2和Bcl-xL以及Bim、Bid等BH3-only蛋白, BH3-only是一类促凋亡蛋白, 通过抑制Bcl-2抗凋亡成员的活性或激活Bax/Bak样促凋亡成员的活性来调节细胞凋亡。王燕[21]研究发现, 用含硒29.403 mg/kg的富硒大蒜油能够降低Bax和Caspase-3蛋白表达量, 使Bcl-2蛋白表达量显著升高, 通过作用于基因转录水平逆转Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达, 从而抑制内皮细胞凋亡。郭峰等[22]实验发现迷迭香酸预处理可以增加凋亡细胞中Bcl-2蛋白的表达, 减少Bax蛋白的表达, 升高Bcl-2/Bax的蛋白比值, 降低Fas、FasL的蛋白表达。潘露茜等[23]实验发现, 软脉煎可以从蛋白水平调节血管平滑肌细胞凋亡, 软脉煎干预后细胞Caspase-8蛋白表达显著降低, 提示软脉煎能通过干预细胞凋亡信号途径中的多信号途径介质Caspase-8来抑制凋亡。严玉平等[24]应用乌鸡白凤丸治疗动脉粥样硬化大鼠研究发现, Caspase-3蛋白表达下调, 血管内皮细胞凋亡率降低, 增殖指数增加。何煜舟[25]体外实验发现, 木犀草素抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡途径涉及Caspase-3通路。该药可显著抑制Caspase-3阳性表达, 减少内皮细胞凋亡数量。

3 结语

从细胞凋亡角度探讨中药干预心血管疾病的发生、发展机制是目前研究的热点, 无论是对凋亡的诱发因素, 还是信号传导通路及调控蛋白的研究都取得一定的成就, 涉及的药物包括中药提取出的单体、有效成分以及单味药和复方制剂。但是中药抗细胞凋亡的分子学机制十分复杂, 其药理学基础涉及多个环节, 因而目前仍存在着不足。 (1) 细胞凋亡系统本身分子机制未能阐明的十分透彻, 因而中药对各凋亡传导通路作用的研究大多只停留在表面, 更深层次的研究很少。 (2) 中药本身成分的复杂, 使得其作用多靶点、多层次, 大部分研究只显示中药对细胞凋亡的有效性, 而有效成分及凋亡作用机制有待进一步研究。 (3) 目前大部分实验研究为单因素诱导的细胞凋亡体外实验, 且处于初步试验阶段, 不能真正地模拟相应体内病变及中药干预的全面情况, 人体是一个复杂的系统, 因而在体内多因素参与下中药对细胞凋亡的网络式调控机制是需要研究和完善的重点。 (4) 从目前对凋亡研究的中药来看, 以活血药物居多, 呈现了药物研究的局限性。