异种移植

关键词： 真皮 异种 畸形 细胞

异种移植（精选三篇）

异种移植 篇1

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2009年1月-2013年3月因颈部、手部、足踝部烧伤入院的患者42例, 男26例, 女16例, 年龄18~49 (30.5±3.1岁) ;深Ⅱ度和Ⅲ度8%~27.5%。火焰烧伤20例, 22例热液烫伤。

1.2 材料

由江苏启东市东方医学研究所有限公司生产的异种脱细胞真皮基质敷料。

1.3 治疗方法

烧伤后1周内[3], 将深Ⅱ或Ⅲ度创面削痂至浅筋膜或深筋膜层, 去除坏死皮肤及失活的组织, 彻底止血, 用庆大霉素溶液 (0.5%) 湿敷10min, 取皮用辊轴取皮刀切取大张自体刃厚皮, 采用锋利小剪刀剪制成<1mm的微粒皮 (或皮浆) 备用, 应用涂抹法将微粒皮种植于创面上, 异种脱细胞真皮用无菌0.9%氯化钠溶液洗涤3次后, 覆盖于微粒皮上, 并缝合固定。然后予凡士林纱布、棉垫覆盖, 加压包扎, 石膏托外固定于功能位, 术后常规抗感染输液等治疗, 3~4d打开创面, 如有皮下的积血积液, 局部剪开引流, 然后继续加压包扎, 10d后再次换药, 创面予半暴露或暴露。康复期使用抗瘢痕药物, 植皮区外贴瘢痕贴, 戴弹力套, 并加强功能锻炼、支具矫形等手段。

2 结果

本组患者复合皮移植后, 异种脱细胞真皮、自体微粒皮和创面基底三者紧密结合, 全部成活, 无1例坏死, 异种脱细胞真皮无排异反应, 无水泡形成, 成活后的皮肤色泽接近正常, 外观平整, 光洁度好, 肢体外形、关节活动无运动障碍, 瘢痕轻, 质地柔软, 弹性好, 无明显收缩, 比较耐磨。出院后18~24个月的随访, 1~2月后移植皮肤开始出现明显的色素沉着, 并且慢慢加深, 术后3~6个月的时间, 就开始逐渐淡化沉积色素, 皮片的颜色逐渐变淡, 6个月~1年的皮肤颜色变淡显著;2年后仍有相对较轻的色素沉着。成活后的皮肤无明显瘙痒等不适, 质地比较柔软。并且本研究中的所有患者在烧伤休克期后立即行创面削痂、复合皮移植术, 无1例出现脓毒症、多器官衰竭等并发症。

3 讨论

对于深度烧伤创面, 残留的坏死组织对机体非常有害, 需要尽快清创, 并给予良好的覆盖。功能部位的严重烧伤, 创面愈合后瘢痕增生严重, 会影响其功能和外观, 对于治疗这种功能部位的深度烧伤创面, 应考虑康复后的功能和外观。传统对于这种深度烧伤切痂后的创面, 应用自体刃厚皮片移植覆盖其上, 由于缺乏真皮层, 皮肤弹性差, 导致后期瘢痕挛缩严重, 畸形率高, 严重影响了患者关节功能活动[4], 烧伤削痂后的本组患者应用异种脱细胞真皮与自体刃厚皮片的复合移植术, 都没有出现脓毒血症及其他脏器功能障碍。异种脱细胞真皮采用猪皮为原料, 经病毒灭活与脱细胞等工艺制备而成, 是猪真皮的细胞外基质, 为一种多孔性的三维网状结构;主要成分为胶原蛋白, 不会引起排斥反应和被吸收, 同时宿主新生的上皮细胞可以被诱导生长, 真皮层结构可以快速被重建, 主要原理是通过促进自体成纤维细胞和血管内皮细胞在真皮支架生长, 从而促进创面愈合[5]。目前缺乏同种异体皮肤的来源, 价格较昂贵, 而异种 (猪) 脱细胞真皮基质移植物有着广泛的皮肤来源, 低抗原性, 价格相对低廉, 并且与人体组织相容性好, 作为自体皮片的替代物, 能较好的与人体组织相容, 能持续较长的时间, 起到较好的保护的作用, 效果较好。

总之, 临床上对于治疗功能部位的烧伤, 应用异种脱细胞真皮与自体微粒皮的复合移植不仅能保证移植皮片的存活率, 保持良好的外观, 而且还减少瘢痕增生和功能障碍, 最大限度使患者康复, 减少住院时间, 治疗周期短, 值得推广。

摘要：目的 探讨异种脱细胞真皮复合自体皮治疗功能部位深度烧伤的应用及疗效。方法 42例深度烧伤患者采用切削痂术处理创面, 并进行消毒。覆盖自体微粒皮与大张异种脱细胞真皮, 最后用石膏托固定。结果 本组42例患者中全部植皮成功, 植皮成活率为100%, 随访18~24个月, 42例患者植皮修复术后外观和质地基本接近正常皮肤。瘢痕增生不明显, 关节活动无明显受限。结论 异种脱细胞真皮是深度烧伤创面良好修复材料, 较异体脱细胞真皮来源广, 成本低, 适合大范围临床推广。

关键词：大面积深度烧伤,复合皮移植,异种脱细胞真皮基质敷料

参考文献

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克隆猪——异种移植的［未来明星］ 篇2

克隆猪的首次培育成功使人类在异种器官移植研究方面前进了一大步。因为，一方面克隆猪要比克隆其他家畜如羊或牛困难得多，另一方面从解剖结构和生理功能来说，猪的器官与人体十分相似。但是由于人与猪之间存在巨大的种属差异，猪的器官或细胞移植到人体内不可避免地会被人体的免疫系统迅速摧毁，人与猪之间出现的这种排斥反应使得科学家以往进行的异种移植的尝试均告失败。

科学家经过研究已经发现，猪血管内皮细胞表面有一种物质叫α-半乳糖苷抗原，而人的血管内皮细胞表面没有这种物质，相反人体内存在一种与之针锋相对的抗体。人体血液一旦流入猪的器官，这种抗体就会与α-半乳糖苷抗原结合，并与其他因素一起攻击移植器官，往往在短短的几分钟或几小时之内，就可引起移植器官广泛水肿、出血、坏死，也就是发生了所谓超急性排斥反应。因此，要使移植器官长期存活，就必须克服这种超急性排斥反应。

现在，科学家希望通过生物工程技术能够培育出一种新品系——转基因猪，如能“剔除”或“关闭”猪身上这些不利于异种移植的某些基因，也就可以避免强烈的异种排斥反应。此外，人们还可通过转基因方法增加一些有利于克服人体免疫系统排斥反应的基因，它们可以担当起“缓和”两者矛盾的“和事佬”角色。但问题是使用基因工程技术逐个改造用于器官移植的猪，其效率很低，且往往因技术条件的差异很难获得大批稳定的“贡献器官”猪。

克隆猪的培育成功给人类带来了希望：通过基因工程方法培育出新品系的猪，能被人体接受，并可用作人体器官移植而不会出现排斥反应的，然后再利用克隆技术培育出一大批基因情况完全相同的克隆猪。这种“贡献器官”猪集各种适应性于一身，可以大量为人类提供人体“乐意接受”的器官。因此，如果能将转基因技术和克隆猪技术相结合，便有望为人类源源不断地提供大量替代移植用的器官或组织，最终解决人体移植器官的短缺问题，为成千上万等待器官移植的患者带来新生。

PPL公司的科研人员说，将经过基因工程方法改造的猪器官用于人体移植的研究，大约在4年后开始。他们除了进行转基因工程、克隆工程研究外，还准备在移植这种猪器官之前，事先给患者输入转基因猪的血细胞，使其在接受移植前，体内就产生对这种猪器官的免疫耐受能力，以减轻人体免疫系统对移植器官的排斥反应。同时，患者尚需服用一些预防排斥反应的免疫抑制剂。总之，希望通过上述综合措施，大幅度地提高异种器官移植的成功率。

但是，话还得说回来，即使克服了某些排斥反应，但要将猪器官移植到人体，还存有不少难关：克服了超急性排斥反应，又发生其他一些排斥反应该怎么办？猪心、猪肝毕竟不同于人心、人肝，其功能和结构的差别如何克服？克隆猪是否会给人类带来一些人畜共患的疾病？对猪来说，它们的转基因“克隆猪”能否代代健康繁殖？这一系列问题都是科学家所担心的，也是有待科学家今后研究的课题。

异种移植 篇3

1 材料与方法

1.1 材料

h DAF基因重组质粒(以h DAFc DNA表示)由天津市泌尿外科研究所构建完成[6],抽提纯化后加入内切酶SacⅠ使其线性化,末端为黏性末端,工作液浓度为100mg/L;PAMAM-D(G5)由南开大学生物活性材料教育部重点实验室孔德领教授惠赠;SFM和SFM/BSA液的制备见参考文献[2](试剂均为Sigma公司产品);猪精液采自天津天泰公司猪场种猪,采精所用的公猪为1.0~1.5岁的长白杂交种,利用手握法采集含精子丰富的精液部分,距离实验时间不超过3 h,精液按照1︰10的比例稀释于37℃预热的SFM/BSA液中,保存于17℃;精子质量检测工作站为南京华贝电子医疗设备有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 PAMAM-D/DNA复合物的制备

100μL SFM液中分别加入线状h DAF c DNA 0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μg,每组c DNA再按照氮磷比10︰1、20︰1及40︰1分别加入相应剂量PAMAM-D,轻轻混合后室温下孵育30 min,形成的各组复合物以G5/h DAF表示。

1.2.2 猪精子细胞对外源性DNA的摄取

检测猪精液密度与活力后,室温下离心(3 500 r/min,10min,下同),弃上清。加入SFM/BSA液轻微振荡悬浮。重复洗涤精液1次后,再用SFM液洗涤1次,获得精子细胞,调整细胞浓度为107个/m L。取100μL精子细胞悬液置于离心管中,分别加入上述各组G5/h DAF,吹打混匀后,在17℃孵育2 h,对照组只加入相应剂量的h DAF c DNA。每管设3个重复。离心精子细胞,弃上清,沉淀用PBS清洗3次后,保留约100μL液体,吹打混匀。精子悬液中加入DNaseⅠ至终质量浓度100 mg/L,37℃下作用30 min。离心,弃上清,沉淀PBS重悬,洗涤3次。保留约100μL液体。

1.2.3 PAMAM-D对猪精子细胞活力和畸形率的影响

取少量新鲜猪精液,充分洗涤后,SFM液调整细胞浓度为107个/m L。分别吸取100μL精子细胞置于离心管中,每管中分别加入50、100、200及400μg PAMAM-D,吹打混匀后,17℃孵育2 h。每管设3个重复。各吸取50μL未处理前、充分洗涤后和与各组PAMAM-D共孵育的猪精子细胞悬液置于载玻片上,在精子质量检测工作站下分别检测精子活力和精子畸形率。其中,精子活力是指样本中直线向前运动精子的百分比,精子畸形率是指畸形精子在样本中的比率。检测时精子的局部温度保持在37℃左右。

1.2.4 PAMAM-D/DNA复合物对猪精子活力和精子畸形率的影响

取未处理的猪精子细胞、与G5/h DAF共孵育后的各组猪精子细胞悬液各50μL,置于载玻片上,在精子质量检测工作站下分别检测精子活力和精子畸形率。

1.3 统计学分析

各组数据均用均数±标准差表示,SPSS11.5先行方差齐性检验,再进行方差分析,P<0.05代表差异有显著性。

2 结果

2.1 PAMAM-D对猪精子细胞活力和畸形率的影响

未处理前和充分洗涤后的猪精子细胞活力分别为(83.9±1.1)%和(83.6±0.9)%,猪精子细胞畸形率分别为(10.9±0.9)%和(11.9±1.2)%。经2 h孵育后,各处理组中大部分猪精子细胞呈前向运动,形态正常。各处理组与未处理前比较,其精子活力和精子畸形率差异均无显著性,见表1。

2.2 PAMAM-D/DNA复合物对猪精子细胞活力和畸形率的影响

未处理前和充分洗涤后的猪精子细胞活力分别为(82.8±1.5)%和(82.6±1.4)%,猪精子细胞畸形率分别为(9.9±0.6)%和(10.3±1.0)%。经2h孵育后,各处理组中大部分猪精子细胞呈前向运动,形态正常。各处理组与未处理前比较,其精子活力和精子畸形率差异均无统计学意义,表2、3。

注:各组间比较,P>0.05

注:各组间比较,P>0.05

3 讨论

精子载体法制备转基因动物的关键步骤是精子细胞摄取外源基因,只有精子细胞高效稳定地摄取外源基因,才能通过受精过程使外源基因成为胚胎细胞染色体的组成部分,从而培育出转基因动物。成熟的动物精子在结构与功能上具有结合外源DNA并使其核内化的能力,但外源基因与精子的结合是随机的,稳定性差。为此,出现了多种试图促进外源DNA与精子结合的改进技术,包括电穿孔法、病毒介导和脂质体法等[7]。然而,这些改进方法因存在种种缺点如对精子产生毒害作用、受精率下降及应用的局限性等,使精子载体法存在的问题仍然难以得到根本改观。目前,纳米材料PAMAM-D在基因治疗方面的研究取得了较好的效果,但采用以PAMAM-D介导的精子载体法只见于培育鱼类转基因动物的研究[8]。笔者将之应用于哺乳动物的转基因操作上,是一种新的尝试。PAMAM-D是一种人工合成的新型纳米材料,具有成辐射状对称的刚性球体结构。与普通高分子聚合物不同,它具有低黏度、高溶解性、可混合性以及高反应性等特点。因此,PAMAM-D成为基因转移的一个新载体,较传统载体有明显优势。

PAMAM-D本身对精子细胞是否有毒性,是联合PAMAM-D的改良精子载体法建立转基因动物的关键问题之一。因此,监测应用PAMAM-D后精子的功能状态是非常必要的。在客观评价精子的功能状态时,评价指标[9]主要包括精子核状态、运动能力、形态特征、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、获能以及与卵子的结合能力等。评价方法主要是利用光学显微镜、荧光显微镜及流式细胞记数仪等仪器,应用常规染色或荧光染色技术以及精卵受精能力分析来检测精子的功能状态。不过除专门的检测机构外,这些检查手段很难广泛应用。因此,在实际评价精子质量时,精子活率和精子的外形是精子质量评定的主要方法,一般要求精子活率在70%以上,如果正常形态精子的百分数小于70%,应认为是劣质精液。本组采用精子质量检测工作站,可以迅速检测出精子活率和精子畸形率,减少了光镜下检测精子活率和形态的人为误差,从而准确评估精子的质量,增强了该法的实用性。

现有PAMAM-D对细胞毒性的研究表明,PA-MAM-D表现出浓度及大小依赖的毒性,其分子代数和浓度越高,细胞毒性越强[10]。此外,它的细胞毒性大小与作用细胞的种类有关[10]。目前,对于PA-MAM-D毒性机制主要有2种代表性的观点[11],其一认为纳米材料所带的正离子与细胞膜相互作用造成细胞产生损伤或引起细胞凝聚,另一种看法则认为,纳米材料进入细胞后激活细胞内信号转导系统导致细胞毒性。另外,PAMAM-D分子还可以诱发细胞凋亡[12]。不过,上述研究并未涉及精子细胞。本实验结果提示,PAMAM-D(G5)在能有效介导DNA转染的浓度水平时未显示出细胞毒性作用,即使笔者将其剂量增加到400μg,达到所需最大剂量的近15倍时,仍未发现其对猪精子细胞的质量有明显影响。此结果表明,在一定范围内PAMAM-D及其复合物对猪精子细胞没有明显毒性,应用PAMAM-D制备异种移植用转基因猪是一种安全的方法。

摘要：目的 研究应用PAMAM-D对异种移植用外源基因hDAF转染猪精子细胞的安全性。方法 制备PAMAM-D/hDAFcDNA复合物,将PAMAM-D及复合物与处理后猪精子细胞共孵育,经精子质量检测工作站检测孵育后的精子活力和精子畸形率。结果 经精子质量检测工作站检测,PAMAM-D和PAMAM-D/DNA复合物对猪精子细胞活力和精子细胞畸形率没有明显影响。结论 PAMAM-D及其复合物对猪精子细胞没有明显毒性,应用PAMAM-D制备异种移植用转基因动物是一种安全的方法。

关键词：精子载体,PAMAM-D,异种移植,安全性,人衰变加速因子基因

参考文献

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