关键词： 球虫病
免疫保护性抗原（精选七篇）
免疫保护性抗原 篇1
1 重组抗原5401
重组抗原5401是最早报道的鸡球虫抗原表达产物, 5401抗原是E.tenella的一个31 ku的表面抗原片段, 经体外试验结果表明具有部分保护作用。5401基因是EtMIC4基因序列的一部分, 编码EtMIC4蛋白的C末端区域, 由于5401抗原富含脯胺酸残基序列和疏水序列, Danforth H D等[1]认为这可能与细胞壁的附着和锚定功能有关, 而且此抗原可能不止一个抗原表位, 其在大肠杆菌内以p-半乳糖苷酶融合蛋白的形式表达, 融合蛋白免疫3～4周龄的鸡后可激发鸡群的免疫应答, 对E.tenella经口感染雏鸡可产生明显的保护性, 肠道病变记分降低, 同时可使鸡只体重增加、饲料报酬提高和死亡率降低。
杜爱芳等[2]克隆了E.tenella ZJ株的5401基因, 基因全长为864 bp, 克隆出的5401基因可以用于将来重组疫苗的研究。王素华以柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因为外源目的基因, 在E.coli中得到高效表达, 分离纯化表达的5401融合蛋白, 进行免疫试验, 结果表明表达的蛋白具有较好的免疫保护效果, 对于进一步开发基因工程疫苗以预防鸡球虫病具有重要意义。
2 子孢子表面抗原
Wisher等鉴定了堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫子孢子的一组125I标记的表面抗原和35S-蛋氨酸标记和未标记的细胞浆和内膜成分, 发现32～45个主要抗原成分, 分子质量为9～33 ku, 其中大约15%的抗原有免疫原性。共19种抗原能与免疫血清发生沉淀反应。1987年, Jenkins M C用感染球虫的免疫血清鉴别出E.acervulina的子孢子的几个免疫显性表面抗原。1989年, Jenkins M C等从构建的子孢子cDNA文库中克隆到编码E.acervulina子孢子表面抗原片段5401分子质量为31 ku, 以β-半乳糖苷酶融合蛋白形式产生的重组蛋白质免疫3～4周雏鸡, 可激发免疫, 仅4周产生部分免疫保护。Brothers V M等[3]用两个中和性单抗Ptn7.24A4/4和Ptn.9.9D12鉴定了E.tenella子孢子抗原蛋白TA4分子质量为25 ku, 在虫体内分子质量为21～28 ku。研究结果表明, E.tenella cDNA文库构建中的JX3262 S07的一部分与单抗MCA12发生反应, 可诱发抗多种E.tenella感染的种间交叉免疫, 对E.tenella和E.acervulina产生不完全保护。
3 裂殖子表面抗原
1988年, Jenkins M C等从构建的裂殖子cDNA文库中克隆到编码E.acervulina裂殖子 (CMZ-8) 表面抗原基因, 并鉴定了45种主要E.acervulina抗原, 约15% 有免疫原性, 分子质量为20～250 ku, 绝大多数位于裂殖子表面。CMZ-8抗原在体外可显著诱发T淋巴细胞活性, 用CMZ-8蛋白和非肠道途径免疫鸡和经口免疫的可表现出高效价的抗体和T淋巴细胞反应。3-1E基因蛋白抗原是堆型艾美耳球虫 (Eimeria acervulina) 子孢子与裂殖子两个发育阶段均具有的保护性表面抗原, 可以诱导机体产生明显的保护性免疫力[4]。关于球虫发育的细胞内阶段, 免疫反应的靶位点可能在肠黏膜上皮细胞表面。Cerf-Berussom等研究表明, 肠黏膜上皮细胞可以充当一种T淋巴细胞提呈抗原的细胞成分。Wakelin等的研究发现, 上皮细胞-1a-球虫抗原复合体可能会成为免疫效应的靶子。
4 微线蛋白
微线是一种具有分泌功能的细胞器, 位于虫体的顶末端。在球虫入侵过程中, 微线能够分泌至少10种蛋白质参与球虫与肠道细胞的黏附作用及侵入过程。体外试验结果表明, 当子孢子被加入到MDBK细胞中后, 微线瞬时大量分泌蛋白, 用Western-blot可在细胞上清液中检测到这些蛋白。间接免疫荧光抗体试验结果表明, 在虫体侵入细胞之前和侵入过程中, 微线蛋白出现在虫体顶末端的区域, 随后被分泌到虫体与细胞的接触面之间, 在虫体进入宿主细胞之后, 这些蛋白就迅速消失[5]。
EtMIC-1是最早报道的微线相关蛋白, 分子质量为10～110 ku, 是一种糖蛋白G相关蛋白, 在子孢子和裂殖子阶段均有表达, 从蛋白质结构分析, 微线蛋白与虫体宿主细胞膜的相互作用及侵入过程中有关。EtMIC-2是分子质量为50 ku的酸性蛋白, 位于子孢子和裂殖子的微线上。当虫体入侵宿主细胞时, 可瞬时诱导大量表达, 并集中于虫体与宿主细胞的接触处, 当虫体进入细胞后 (1 h) , 该蛋白很快消失, 在宿主细胞表面就检测不到该蛋白的存在[6]。EtMIC-3是分子质量为130 ku的蛋白, 体外试验结果表明对子孢子入侵培养细胞有抑制作用。EtMIC-4是分子质量为218 ku的微线蛋白, 其免疫原性尚待进一步研究。Brown P J等克隆了Et-MIC5的mRNA, 全长为3 334 bp, ORF大小为2 799 bp, 尚未见有免疫原性的报道。
5 折光体蛋白
球虫子孢子及第一代裂殖体阶段都含有折光体, 子孢子侵入宿主细胞后, 体内的前后两个折光体发生融合, 在球虫裂殖生殖阶段, 融合体又逐渐发生分裂, 但在第一代裂殖生殖之后逐渐消失。因此, 有人推测折光体内可能储存着子孢子通过肠道及细胞内发育前几小时所需要的营养物质, 这可能与虫体的入侵有关。第一个报道的折光体蛋白为GX3262 (亦称EtS07) , 可用多克隆的高免鸡血清在E. tenella的cDNA文库中鉴定出来, 用其表达的蛋白免疫鸡后, 可使盲肠球虫的病变值下降50% [7]。
烟酞胺核酸依赖转移氢化酶是分子质量为10 ku的E.acervulina折光体蛋白EaIA, 用其免疫鸡可降低球虫感染鸡的卵囊产量, 鸡的增重下降也得到改善。其氨基酸序列中有己糖转运蛋白序列, 说明折光体蛋白参与糖的转运, 与甘露糖醇及支链淀粉的转运有关, 甘露糖醇循环可为球虫的体外孢子化提供能量。在球虫孢子化初期 (0～12 h) , 支链淀粉经葡萄糖转化为甘露糖醇;在孢子化第二阶段 (12～48 h) , 甘露糖醇转化为葡萄糖而供能。Vermeulen A N等表达了另一种折光体抗原, 此抗原与α-吡啶核苷酸转氢酶有高度的同源性, 其作用可能与ATP的水解和呼吸有关。
由于艾美耳球虫的生活史复杂, 包括细胞内阶段、细胞外阶段、无性繁殖阶段和有性繁殖阶段, 故此虫体抗原也是比较复杂的, 保护性抗原可能是由各个阶段具有部分保护性的虫体抗原共同组成。随着细胞生物学、分子生物学等学科的发展, 对球虫的研究已经进入到了细胞和分子水平, 杂交瘤技术、分子克隆技术应用于球虫免疫原性的研究, 对抗原的种类、结构、免疫原性以及在诱导机体产生抗球虫保护性免疫的机制方面的深入了解可为建立全新的抗球虫方法奠定了基础。
摘要：鸡球虫病是严重危害养鸡业发展的重要疾病之一, 目前药物防治是控制球虫病的主要手段, 但药物防治存在耐药性及药物残留等严重问题, 因此鸡球虫病的免疫学防治成为研究领域中的热点, 新型疫苗的研制具有重要意义。文章对鸡球虫重组抗原5401、子孢子表面抗原、裂殖子表面抗原、微线蛋白、折光体蛋白等免疫保护性抗原的研究概况进行了综述, 以期为研究者提供参考。
关键词：鸡,球虫,免疫保护性抗原
参考文献
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免疫保护性抗原 篇2
乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递抗原的研究进展
乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物.近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展.乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的代表菌种,以其生长迅速、易于操作等优点成为表达外源抗原,作为黏膜免疫活载体疫苗的理想菌株.随着对乳酸乳球菌基因工程的.研究逐渐深入,已发展了一系列组成型和诱导型乳酸乳球菌表达系统以及蛋白定位系统.破伤风毒素片段C、布氏杆菌L7/L12蛋白等多种病原微生物抗原已成功在乳酸乳球菌中表达,并已证明部分重组乳酸乳球菌作为黏膜免疫疫苗可以同时刺激局部黏膜免疫应答和系统免疫应答.目前,如何使活载体乳酸乳球菌以最佳方式向黏膜免疫系统提呈抗原继而诱导有效免疫反应是该领域的研究热点,也是巨大挑战.实现外源抗原在乳酸乳球菌中的准确定位及与细胞因子的共表达是未来研究的重要方向之一.乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递外源抗原具有广阔的应用前景.
作 者：史达 宋岩 李一经 SHI Da SONG Yan LI Yi-jing 作者单位：东北农业大学动物医学学院,哈尔滨,150030 刊 名：微生物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 46(4) 分类号：Q93 关键词：乳酸乳球菌 外源蛋白 抗原 黏膜免疫 疫苗免疫保护性抗原 篇3
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2014年2~12月于我院进行急诊手术的孕妇100例, 随机分为观察组和对照组。观察组52例, 年龄23~36 (28.7±4.5) 岁。对照组48例, 年龄22~38 (29.8±6.7) 岁。入选标准: (1) 无输血史; (2) 无免疫相关性疾病; (3) 无恶性肿瘤、感染性疾病; (4) 输血前未服用相关药物。两组年龄、体重、孕程等基础资料比较无统计学差异 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2方法
两组孕妇术前均检测C抗原, 观察组输注与自身Rh C血型异型的血液;对照组输注与自身Rh C血型同型的血液。两组均输注与自身ABO及Rh D血型同型血液。全自动血型/配血分析仪由烟台奥斯邦生物工程有限公司提供, 规格型号为Microlab STARlet BG, Rh C抗原抗体 (Human, IgG) 由上海晶研实业科技有限公司提供, 微柱凝胶检测卡由长春博讯生物技术有限责任公司提供。
1.3 观察指标
检测并比较输血24h后两组血清中白细胞介素-2 (IL-2) 、白细胞介素-4 (IL-4) 及血液中CD3+、CD4+、CD8+细胞数量。用酶联免疫吸附法检测血清中IL-2、IL-4含量, 检测试剂盒由上海恒远生物科技有限公司提供。用流式细胞术分析血液中CD3+、CD4+、CD8+细胞数量, 流式细胞仪由美国科力瓦贸易有限公司提供。
1.4 统计学分析
采用SPSS 17.0软件进行数据统计, 计量资料比较采用t检验, P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组体液免疫情况比较
观察组输血后血清IL-2水平显著降低, IL-4明显升高, 与输血前比较差异有统计学意义 (P<0.05) ;对照组输血前后血清IL-2、IL-4水平比较则无明显变化 (P>0.05) 。见表1。
注:组内比较, *:P<0.05, #:P>0.05
2.2 两组细胞免疫情况比较
观察组输血后CD3+、CD4+、CD8+细胞数量明显降低, 与输血前比较差异有统计学意义 (P<0.05) 。对照组输血前后CD3+、CD4+、CD8+细胞数量比例均无明显变化 (P>0.05) 。见表2。
3 讨论
注:组内比较, *:P<0.05, #:P>0.05
目前, 被国际输血协会承认的血型系统包括ABO血型系统、Rh血型系统、MNS血型系统、P血型系统等30余种, 其中ABO、Rh血型系统临床意义最为重要[3]。据统计, 我国Rh C抗原阴性血型人数占我国总人口数的11.7%, 其比例远远高于Rh D阴性人数。并且随着需要反复输血患者的增多, 由于抗C抗原导致的输血反应也在临床上逐渐增多[4]。临床上已将Rh D抗原作为常规血型检测的项目之一, Rh C抗原与之相比虽免疫原性低于D抗原, 但Rh C型型血型人数明显多于Rh D型, 临床上常会见到因C抗原配型不和而发生输血反应或新生儿溶血。
在Rh抗体系统中, 抗E抗体和抗C抗体是机体天然存在的抗体, 其余Rh抗原如抗D抗体为外来红细胞经免疫反应所产生, 可由输血或妊娠导致。如果孕妇血浆或受血者血浆中存在相应的Rh抗体, 则输血时会导致严重的新生儿溶血或输血反应[5]。所以, Rh C抗原的检测在临床上日趋重要。大量研究表明, Rh C抗原配型不符会造成溶血输血反应及新生儿溶血病[6]。
本研究中, 观察组急诊手术中输注血液为与其Rh C抗原相异血液, 输血24后, 孕妇体内血清IL-2水平显著降低, IL-4 水平有所升高, CD3+、CD4+、CD8+细胞数量比例明显降低, 与输血前比较差异有统计学意义 (P<0.05) , 而对照组输注与其Rh C抗原相符血液临床指标变化不大 (P>0.05) 。IL-2由T淋巴细胞产生, 具有促进B细胞活化增殖的作用, 然而IL-2的降低说明T、B细胞功能会受到抑制从而降低孕妇的免疫功能;CD3+、CD4+、CD8+细胞数量比例明显降低说明Rh C异型抗原输注能抑制细胞免疫。综上所述, 输注同型Rh C抗原血液对减少输血后免疫反应的发生和预防新生儿溶血有重要意义, 临床上应该将Rh C抗原列入血型筛查范围。
参考文献
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免疫保护性抗原 篇4
由于口蹄疫的急性经过呈流行性传播,所以首先可根据临床症状做出初步的判断,再根据其病理变化进一步判断,但是确诊却需要经实验室诊断。
1 诊断
1.1 病原学诊断
口蹄疫的样本可以采集皮肤水泡(液)、食管和咽拭子(O/P)、血液、组织、器官、分泌物、排泄物,或产品,如肉类、奶制品和皮革制品。样品收集或收集后应注意的是采样周期和采样必须及时;采集标本要结合自己的检测的目标;样品应该是干净的,必须在无菌条件下操作,对所有的取样工具都进行彻底的消毒,采样点需要反复冲洗;取样量应充足和进行必要的备份;取样或送样注意安全;样品必须保持新鲜,在24 h内送到有资质的单位进行检测,检查在几小时或者暂时冷藏或冷冻;装样品的包装袋要严格密封、检验中注意做好相应的标记以便检验时方便分辨。
病毒分离鉴定是口蹄疫病的诊断的最可靠的证据。第一代牛甲状腺细胞对口蹄疫病毒最敏感,第一代牛,羊和猪的肾细胞也比较的敏感,猪肾细胞系IBRS-2,PK-15和仓鼠肾细胞株的BHK-21细胞系也可分离病毒。在2~7 d新生大鼠也同样可以用于口蹄疫病毒的分离,但灵敏度低。乳鼠接种口蹄疫病毒在24~72 h,典型的症状四肢麻痹,呼吸困难会出现。除此外,还可以将分离纯化的病毒进行荧光PCR检测。
1.2 血清学诊断检测
通过在动物体液中特异性抗体的检测,检测口蹄疫病毒抗体的方法包括补体结合试验(CFT),病毒中和试验(VNT),凝集试验,琼脂扩散,放射免疫法和ELISA法,最常用最有效的方法就是病毒中和试验和酶联免疫吸附法,当然这两种方法也是国际贸易所规定检测口蹄疫病毒抗体的方法。
1.3 自然感染和人工免疫的鉴别
目前,对自然感染和人工免疫识别,灭活苗的口蹄疫疫苗在临床中经常使用,疫苗的制作过程中,大多数的病毒非结构蛋白已被删除。用灭活苗免疫动物之后,口蹄疫病毒不能在动物的体内大量增殖,不会产生非结构的蛋白质,当然,要产生可以中和抗原的抗体并不容易。可以解决这一难题的检测方法已被国内专家学者们研究出来了,如NSP-3ABC-ELISA技术,研究表明,对于检测是否感染口蹄疫,通过检测抗非结构蛋白3AB和3ABC抗体是最可靠有效的指标。
2 动物体对口蹄疫病毒抗原的免疫反应
2.1 口蹄疫的体液免疫
动物接触(感染或免疫)口蹄疫病毒抗原之后,很快地就能诱导动物机体产生体液免疫,体液免疫反应介导的感染或接种疫苗诱导的T细胞参与,产生保护性中和抗体。中和抗体对于中和调节损伤口蹄疫、对动物的抗感染能力有非常重要的作用,当然与活性吞噬细胞等有不可忽视的关系。虽然口蹄疫的体液免疫被大家一致认为是主要的抗口蹄疫病毒,但还是有很多值得我们仔细去关注的现象,首先是动物毒性袭击试验后发现,在动物保护能力范围内的一些最低滴度抗体水平能够抵抗强毒的攻击;二是牛实际的保护力相关的抗体水平相对较高,不过在猪体内却很低;三是虽然合成肽疫苗,基因工程疫苗及分子疫苗免疫接种动物机体后产生的中和抗体水平非常高,但是对于动物机体却没有有效的保护力。这些目前无法解释的现象表明,影响口蹄疫免疫保护力的因素是多方面的,一定还有很多其他的重要机理还没有得到详细的解释。
2.2 口蹄疫的细胞免疫
在口蹄疫免疫保护中,虽然体液免疫起着重要的作用,但在抗病毒感染中的细胞免疫也有相应的作用。对保护作用的细胞免疫口蹄疫感染的动物一直有不同的看法,现在被广泛接受的是生产对T细胞依赖性抗体。研究人员使用感染或免疫牛和猪,观察特异性T细胞的抗病毒反应显示,细胞免疫对去除动物病毒持续感染有一定的作用。这些年,利用合成肽技术及T细胞亚群的聚类技术已在口蹄疫病毒免疫上有一些重要进展,发现在猪和牛口蹄疫病毒交叉反应性T细胞之间的不同,在蛋白VP1和VP3的T细胞表位;口蹄疫病毒感染的细胞,能阻断病毒的抗原呈递细胞表面的复杂函数的合成,在病毒感染的细胞,导致不能向T淋巴细胞表达和MH C1分子结合。根据Ar ant za S P报道,感染口蹄疫病毒细胞,表达3 h后表面MH C1分子被减少到70%,5 h后,MHC1分子减少到53%。这种机制可以帮助病毒逃避宿主的免疫反应的细胞毒性,提供持续的口蹄疫病毒感染的先决条件,也许是口蹄疫疫苗引起免疫耐受的因素。
3.3 口蹄疫的黏膜免疫
免疫保护性抗原 篇5
1 资料与方法
1.1 一般资料
该院共接收30例经确诊为肾小球疾病的患者, 男性14例, 女性16例, 年龄在19~64周岁之间, 平均年龄为 (41.5±13.4) 周岁。其中有9例患者属于Ig A肾病, 8例患者属于局灶节段硬化性肾小球肾炎, 6例患者属于轻度系膜增生性肾小球肾炎, 4例患者属于膜性肾病, 3例患者属于系统性红斑狼疮。将每例患者的肾活检标本分别制成采用10%福尔马林固定的2μm厚石蜡切片, 和2μm厚的冰冻切片, 冰冻切片为对照组, 石蜡切片为研究组, 并将研究组的标本随机分为胰酶抗原修复组、无抗原修复组、高压加热抗原修复组, 分析和对比两组的免疫荧光染色结果, 两组患者的年龄、性别、病程、病史等一般资料, 数据差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂准备
仪器准备:1个湿盒、1个电高压消毒锅, 和3个过酸立式染缸。所有标本均采用型号为Nikon, 80i的荧光显微镜进行观察。试剂为:由丹麦DAKO公司生产的异硫氰荧光素标记的免抗人Ig A、Ig G、Ig M、C1g、C3、Fib, 和福州迈新生物技术公司生产的胰酶, 以及采用自配制的枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液, 3%过氧化氢溶液、PBS液。
1.2.2 修复方法
先将所有标本进行常规处理。将玻片进行特殊处理后浸泡在多聚赖氨酸中, 取出干燥备用。然后进行连续切片2μm, 裱于载玻片上, 将其置于60℃上进行烤片, 5 h后取脱蜡水对标本进行清洗, 采用PBS缓冲液反复清洗数次, 取3%过氧化氢溶液将标本的过氧化物酶进行去除, 处理时间一般为10 min。最后, 按照研究组的3种抗原修复方法分别进行免疫荧光染色。
(1) 无抗原修复组。标本进行常规处理后, 放置待用。
(2) 胰酶抗原修复组。将常规处理后的标本在37℃的恒温箱子里采用0.25%的胰酶进行孵育, 当15 min以后再用蒸馏水对标本进行反复冲洗两次, 将标本上的胰酶冲洗干净。
(3) 高压加热抗原修复组。将枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液倒入过酸立式染缸中, 再将立式染缸放进电高压消毒锅中, 盖上锅盖, 打开压力阀, 将过酸立式染缸中的枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液煮沸, 然后打开锅盖, 将常规处理好的标本放入枸橼酸-枸橼酸盐缓冲液中, 将电高压消毒锅进行密封, 并盖上锅盖和关紧压力阀, 再次进行加热, 直到电高压消毒锅开始喷气, 并喷气两分钟后, 将电高压消毒锅的电源关闭, 打开压力阀和锅盖, 然后将锅内的过酸立式染缸取出, 于常温下放置20 min, 冷却待用。
研究组所有标本均进行不同的修复方法处理后, 用蒸馏水反复冲洗两次, 再用PBS缓冲液清洗两次, 每次清洗时间为3 min, 清洗完成后将标本擦干, 与冰冻切片一起放入准备好的湿盒内, 取相应的抗体10μL分别滴入标本上, 在保持37℃的恒温下进行孵育, 1 h后, 再次取PBS对标本进行清洗2次, 最后取甘油进行封片处理。用荧光显微镜观察染色结果。
1.3 观察指标
观察和比较两组的有效肾小球数和荧光抗体Ig G、Ig A、Ig M、C1q、C3的沉积位置。根据荧光抗体的沉积位置和荧光强度进行评定标本的阳阴性, 阴性 (-) :采用低倍镜无法看见荧光, 采用高倍镜似可见荧光;弱阳性 (+) :采用低倍镜似可见荧光, 采用高倍镜可见荧光;阳性 (++) :采用低倍镜可以明显的看见荧光, 采用高倍镜荧光非常清晰;较强阳性 (+++) :在低倍镜下荧光非常清晰, 在高倍镜下荧光表现为耀眼;强阳性 (++++) :在低倍镜下荧光表现为耀眼, 在高倍镜下荧光表现为刺眼。
1.4 统计方法
所有数据均采用统计学软件SPSS17.0进行分析和处理, 计量资料采用t检验, 计数资料采用χ2检验。
2 结果
2.1 两组有效肾小球数比较
两组标本所观察到的有效肾小球数均≥3个, 两组数据差异无统计学意义 (P>0.05) , 见表1。
2.2 3种抗原修复法与对照组免疫荧光染色比较
研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同 (P<0.05) ;研究组中高压加热抗原修复组的假阴性明显高于对照组 (P<0.05) , 研究组中无抗原修复组的染色效果比对照组较差 (P<0.05) 。见表2。
3 讨论
在肾疾病的诊断过程中, 肾活检组织免疫的检查起到诊断标志性的作用, 在肾活检组织免疫的检查中, 主要分为冰冻切片免疫荧光染色检查和石蜡切片免疫荧光染色检查。但是在传统的验证中, 由于福尔马林固定会使标本的蛋白质产生交联的现象, 抗原决定簇被封闭, 因此, 传统认为福尔马林固定的石蜡切片并不适合进行肾活检标本的免疫荧光染色。经文献[2]发现, 事实上抗原先将标本进行抗原修复后, 再对标本进行石蜡切片的免疫荧光染色处理, 可以达到临床诊断的效果。
该研究通过分析了不同抗原修复方法对肾活检标本的免疫荧光染色结果, 以及比较了无抗原修复组、高压加热抗原修复组、胰酶抗原修复组, 分别与对照组冰冻切片的免疫荧光染色结果, 结果显示:研究组中无抗原修复组的染色效果比对照组较差 (P<0.05) , 研究结果与传统观点相同, 研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同;研究组中高压加热抗原修复组的假阴性明显高于对照组 (P<0.05) , 研究结果与文献[6]基本相同。该研究分析, 由于冰冻切片组在试剂盒的使用过程中会出现未发生或例数较少发生无肾小球的情况, 从而要对冰冻切片组进行补救, 在补救的时间过长, 操作步骤较复杂, 因此冰冻切片组的检出的假阴性较低。
综上所述, 胰酶抗原修复组的免疫荧光染色结果最好, 与冰冻切片的结果基本相符, 因此, 冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候, 可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。
摘要：目的 探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。方法 选取该院30例肾活检标本作为研究对象, 随机分成对照组与研究组, 对照组采用冰冻切片方法, 研究组采用石蜡切片方法, 其中分成应用无抗原修复组、胰酶抗原修复组、高压加热抗原修复组, 均进行免疫荧光染色。分析和对比研究组与对照组标本的免疫荧光染色结果。结果 研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同 (P<0.05) ;研究组中高压加热抗原修复组的假阴性明显高于对照组 (P<0.05) , 研究组中无抗原修复组的染色效果比对照组较差 (P<0.05) ;两组所观察的有效肾小球数均≥3个, 两组数据差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候, 可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。
关键词：抗原修复方法,肾活检,石蜡切片,免疫荧光染色
参考文献
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免疫保护性抗原 篇6
1 材料与方法
1.1 对象
选取江西省内6台检测系统, 各检测系统的校准品、试剂均为原装配套, 6台检测系统分别为Maglumi3、Maglumi2、Maglumi1、Roche3、Roche2、Roche1。
1.2 方法
1.2.1 室内质控
6所实验室均在开机后就立即检测质控品, 在对质控结果未失控进行确认后就开始检测标本, 使用双水平进行质控分析。
1.2.2 新鲜血清样本
将低、中、高3个水平的患者标本直接从临床上进行搜集, PSA浓度分布:标本浓度在16 ng/ml以上7份, 标本浓度在5~15ng/ml 15份, 标本浓度在0~4 ng/ml 18份。将40份标本在6个月内分5次完成检测[3]。
1.3 统计学分析
本次实验所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行分析, 计数资料以百分率表示, 组间比较采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 指标情况
由表1可以看出, 18~49岁、50~69岁、70岁以上3个年龄段健康人群的P97.5、P95、P50等指标都会随着年龄逐步增长而升高, 70岁以上年龄段的P97.5、P95、P50最高。
2.2 室内质控情况
由表2可以看出, 6个检测系统的稳定性较好, 最高值未超过6.76%, 室内质控CV均值在5%以内。
2.3 室间质评中检测系统组内变异系数 (CV组内)
由表3可以看出, Maglumi与Roche两种检测系统在6次室间质评活动中组内变异系数CV组内均在5.09%~9.27%。
3讨论
通过调查可看出, 6所检测系统的稳定性较好, 最高值未超过6.76%, 室内质控CV均值在5%以内。充分说明Maglumi与Roche两款免疫化学发光检测系统有较低的室间差异和较好的室内稳定性[4,5]。Maglumi与Roche两种检测系统在6次室间质评活动中组内变异系数CV组内都在5.09%~9.27%, 说明两款检测系统在室间质评能力和稳定性和验证中具有较好的表现。
摘要：目的 探讨总前列腺特异性抗原在化学发光免疫检测系统间的可比性研究。方法 6所实验室均在开机后就立即检测质控品, 在对质控结果未失控进行确认后就开始检测标本, 使用双水平进行质控分析。结果 6台检测系统的稳定性较好, 最高值未超过6.8%, 室内质控CV均值在5%以内。Maglumi与Roche两种检测系统在6次室间质评活动中组内变异系数CV组内都在5.09%9.27%。结论 两款检测系统在室间质评能力和稳定性和验证中具有较好的表现。
关键词：化学发光免疫分析,检测系统,前列腺特异性抗原
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免疫保护性抗原 篇7
1 标本来源与检验方法
1.1 一般资料
全部病例均为2007年12月至2010年5月在诸城市中医院门诊及住院疑似自身免疫性疾病的患者,共2876例,其中男798例,年龄9~85岁,平均43.4岁。女2078例,年龄9~89岁,平均44.1岁。
检验试剂由欧蒙(德国)医学实验诊断有限公司提供,其生产的ANA谱试剂可检测血清中或血浆中的ANA,ENA,ds DNA。ENA检测n RNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、Jo-1等6种不同抗原的Ig G类抗体。
检验样本全部病例取清晨空腹静脉血3 m l,离心分离血清(3000r/min,10min),如果不能及时检测,将血清置-20℃冰柜保存待检。
1.2 检验方法
抗核抗体检测采用间接免疫荧光法,受检血清1∶100、1∶320和1∶1000稀释后分别与固定在载片上的细胞和组织基质进行反应,血清中ANA可与基质片中抗原结合形成抗原-抗体复合物,此时加入FITC标记的抗人Ig G后,形成标记抗体-抗原-抗体复合物,在荧光显微镜下可观察到ANA着染荧光及其免疫荧光核型。
可提取的核抗原检测采用斑点法,标本用缓冲液1∶101倍稀释,在第一次温育时,已稀释的患者样本与膜条上的抗原反应。如果样本阳性,特异性的Ig G抗体(也包括Ig A和Ig M)将与相应抗原结合。为检测已结合的抗体,加入酶标抗人Ig G(酶结合物)进行第二次温育,然后加入原底物液以产生颜色反应。
抗双链DNA抗体检测采用间接免疫荧光法,待检血清样本用PBS吐温缓冲液1∶10稀释,包被有绿蝇短膜虫的生物薄片和稀释的血清样本温育。如果样本是阳性,特异性Ig G、Ig A和Ig M抗体与鞭毛抗原结合。在第二次温育时,荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应,形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。
1.3 统计学分析
全部数据采用SPSS11.0进行统计分析,P<0.05为差异具有统计学意义。
2 检验结果分析
在对2876例自身免疫性疾病患者进行ANA检测中,抗核抗体(ANA)阳性943例,阳性率32.78%,其中男性ANA阳性145例,阳性率为18.91%(176/765);女性ANA阳性798例,阳性率为37.81%(946/2111),两组差异有统计学意义(P<0.01)。
自身免疫性疾病患者不同年龄组ANA阳性率分析:在943例ANA阳性患者中18~50岁组的阳性率最高36.7%(632/1821),与≤17岁组28.3%(73/258)和≥51岁组29.86%(238/797)比较,阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。
在2876例自身免疫性患者检验标本中抗核抗体(ANA)滴度≥1∶100,≥1∶320,≥1∶1000三个水平。≥1∶100占36.9%(348/943),≥1∶320占28%(264/943),≥1∶1000占35.1%(331/943)。≥1∶100男性占19.8%(69/348),女性占%80.2(279/348);≥1∶320男性占13.64%(36/264),女性占86.36%(228/264);≥1∶1000男性占9.67%(32/331),女性占90.33%(299/331);男女患病率有显著性差异(P<0.01)。
对2876例患者进行抗ENA抗体的检测,阳性标本数为356例,阳性率为12.38%(356/2876),只有2例阳性出现在ANA阴性的标本中。在943例ANA阳性的标本中,抗ENA抗体的阳性率为35.1%(331/943)。在356例抗ENA抗体阳性患者中,抗n RNP/Sm阳性68例,抗-Sm阳性16例,抗SS-A阳性136例,抗SS-B阳性41例,抗Scl-70阳性13例,抗Jo-1阳性4例,抗ds-DNA阳性78例。
3 检验结果讨论
间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)具有操作简单、敏感度高、特异性好,且结果易于判断等优点,能适合临床实验室常规抗核抗体(ANA)的检测,更好的诊断自身免疫性疾病患者。更重要的是HEp-2细胞包含大约100~150种自身抗原,适合初筛方法,美国风湿学会(ACR)已在2009年的立场声明中建议将间接免疫荧光法仍然作为抗核抗体(ANA)检测的金标准。
在2876例自身免疫性疾病患者中ANA阳性率为32.78%,其中男性与女性的阳性率比例为1∶2(18.91%/37.81%)。ANA阳性率低于文献报道,这可能与被检测人群有关,患者来自门诊和住院的多个科室,病种多样。滴度和阳性的判断存在主观因素,对于阳性结果的荧光滴度界限,目前仍存在较大的分歧,国内缺乏统一的滴度稀释系统和标准化报告程序。从年龄统计看,ANA阳性率各年龄组间存在差异,且在18~50岁组阳性率最高。ANA阳性中的荧光模式分布广泛,在单一荧光模式中,以核颗粒型、核均质型和胞质颗粒型为常见。在混合荧光模式中以核颗粒/核均质型为主。核型分析对于相关疾病检测具有提示意义。样本中滴度统计并未呈现阳性率随滴度增高而依次降低的趋势,可能选择患者为疑似自身免疫系统疾病有关。
抗ENA抗体的阳性率为12.38%,并且有2例患者ENA抗体阳性,而ANA阴性。ANA阳性的标本中,抗ENA抗体阳性率为35.1%。在抗ENA抗体阳性中,出现较多的有抗SSA阳性38.2%、抗ds-DNA阳性21.9%和抗n RNP/Sm阳性19.1%。在ANA阳性标本中有64.9%的抗ENA抗体为阴性,说明抗ENA抗体的阳性率低,检测项目还有待于进一步扩展。
在对自身免疫性疾病患者ANA和ENA谱联合检测中的阳性率,均高于单个自身抗体检测的阳性率,通过检验结果分析可知,对自身免疫性疾病患者的联合检测,具有检验结果互相弥补,提高患者检出率的优点。同时,根据ANA的不同核型和ENA的不同谱型,更加有利于的自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断,提高了自身免疫性疾病诊断率和诊断准确率。在进行自身免疫性疾病的临床诊断时,临床医师应当考虑进行多项指标联合检测,防止对患者漏诊和误诊的发生。
摘要：进行抗核抗体(ANA)和ENA谱两项临床指标的检查,对自身免疫性疾病患者的诊断,具有重要的临床诊断意义。抗核抗体(ANA)检测采用间接免疫荧光法,可提取的核抗原(ENA)谱检测采用斑点法,采用SPSS11.0进行试验结果统计并进行数据分析。2876例患者的ANA阳性率为31.65%,其中男性为19.74%,女性为36.67%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。不同年龄组间ANA阳性患者的阳性率也有差异(≤0岁组26.0%、21～49岁组34.2%、≥50岁组27.4%,P<0.01)。ANA阳性患者的荧光模式分析,以核颗粒型26.6%、核均质型18.1%、胞质颗粒型11%和核均质/核颗粒型10.6%居多。ANA滴度≥1∶100男性占22.69%,女性占77.31%;≥1∶320男性占13.57%,女性占86.43%;≥1∶1000男性占11.49%,女性占88.51%;男女有显著性差异(P<0.01)。在2876例患者中,有397例ENA谱阳性,抗nRNP/Sm阳性91例,抗Sm阳性17例,抗SS-A阳性198例,抗SS-B阳性57例,抗Scl-70阳性18例,抗Jo-1阳性5例,抗ds-DNA阳性87例。经过临床就诊患者中ANA阳性率在不同性别、年龄组间存在差异,ANA阳性荧光模型呈现多样化;与ENA谱联合检测有助于自身免疫性疾病的诊断。
