氨基酸测定

关键词：消酒暴热小麦

氨基酸测定（精选十篇）

氨基酸测定篇1

1 材料、仪器与方法

1.1 实验材料

麦苗采自山东潍坊地区,将长至25 cm高的幼麦苗割下、洗净、烘干磨碎成粉备用(100目以上)。

1.2 仪器

氨基酸自动分析仪(日立L-8800型),电子天平(METTLER AE200),混合氨基酸标准溶液(购于日本日立公司),色氨酸标准(购于日本日立公司)。

1.3 实验方法

精确称取一定量的样品放入特制的玻璃水解管中,加入6 mol·L-1 HCl 8 mL,抽真空,待真空度达到要求后维持10 min,封口,110℃ 水解 22 h,冷却。用滤纸过滤,取滤液1 mL于10 mL烧杯中,60℃水浴,在真空干燥器中蒸干。将蒸干的样品,定量加入一定体积的0.02 mol·L-1 HCl,在空气中放置30 min,用日立L-8800型氨基酸自动分析仪测定其氨基酸含量。因色氨酸被盐酸水解所破坏,故采用5 mol·L-1的NaOH溶液水解,用日立L-8800型氨基酸自动分析仪测定其色氨酸含量。测定条件为:

离子交换柱: 柱长 4.6×60 mm; 树脂 2622#; 反应柱柱温 135℃;分离柱柱温 57℃

缓冲液: 流速 0.400 ml·min-1; 柱压 7.000~7.300Mpa;茚三酮: 流速 0.350 ml·min-1;柱压 0.700~0.800Mpa。

标准蛋白分析程序

水分测定:GB/T 5009.03-2003;蛋白质测定: GB/T 5009.05-2003。

1.4 营养价值评价方法

根据FAO/WHO 1973年建议的氨基酸模式(%,dry)[3]和全鸡蛋蛋白质的氨基酸模式(%,dry)[3],分别按以下公式计算氨基酸评分(AAS)(CS)[4]:

undefined;undefined

式中:aa为试验样品氨基酸质量分数(%),AA(FAO/WHO)为FAO/WHO评分标准模式中同种氨基酸质量分数(%),AA(Egg)为鸡蛋蛋白质中同种氨基酸质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 一般成分分析

经测定:麦苗中水分的质量分数为4.32%,蛋白质质量分数为25.16%。

2.2 氨基酸含量及营养评价

由图1表1可见,麦苗中富含有18种氨基酸。

*必需氨基酸;#药效氨基酸; (T)总氨基酸; (D) 药效氨基酸; (E)必需氨基酸;(N)非必需氨基酸

麦苗中氨基酸总量为20.73%,其中人体所必需的氨基酸总量为8.10%,药效氨基酸为13.99%,在我国饮食中作为主食的谷类作物的第一限制性氨基酸——赖氨酸(稻米中含量为0.29%)[5],在麦苗中的含量尤其丰富,可达到1.31%。必需氨基酸占总氨基酸的比值(EAA/TAA)为39%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值(EAA/NEAA)达到63%。根据FAO/WHO的理想模式[3],质量较好的蛋白质的EAA/TAA在40%左右,EAA/NEAA在60%以上。麦苗的氨基酸组成符合上述指标,是全营养食品。

从单一氨基酸组成上看,麦苗中必需氨基酸含量较高,均是AAS标准的1.30倍以上;除胱氨酸+蛋氨酸外均是CS标准的1.20倍左右(见表2)。

氨基酸具有重要的生理功能,除主要作为合成蛋白质的原料外,还可以转变成核苷酸、某些激素、神经递质等含氮物质。氨基酸含量要充足、种类要全面,才能满足机体生长发育和健康的需要。氨基酸缺乏时,人体正常的生长发育就会受到抑制或产生疾病。本文测得麦苗中氨基酸种类齐全,含量丰富, 比例平衡,不但必需氨基酸含量很高,而且还富含药效氨基酸,这与中药典籍《本草纲目》将麦苗列为补益药物相符,也与国内外临床上使用麦苗防治疾病有良效这一事实相吻合。

3 结论

麦苗中富含18种氨基酸,尤其是必需氨基酸占总氨基酸的比值为39%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值达到63%,符合FAO/WHO的理想模式,比例平衡,是一种全营养食品。麦苗中药效氨基酸为13.99%,这也与其具有抗肿瘤、增强毛细管作用及心脏功能、消炎和增强机体免疫等多种功能密不可分。随着人们对麦苗生物活性物质及其作用研究的不断重视和深入,麦苗将会成为药物、保健、饮食、美容等方面的重要资源之一。

参考文献

[1]李时珍.本草纲目[M].北京:人民卫生出版社谷部第二十二卷.1979:1455.

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[4]赵峰,宋超,施兆鸿,等.野生银鲳幼鱼主要营养成分的测定与评价[J].营养学报,2008,30(4):425.

氨基酸测定篇2

目的建立一种同时快速测定大鼠纹状体中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、牛磺酸(Tau)5种氨基酸类神经递质的.高效液相色谱法.方法采用Kromasil C18(4.6×250 mm,5 μm)为色谱柱,丹酰氯为柱前衍生试剂,以曲唑酮为内标,以0.1 mol/L醋酸钠缓冲液∶甲醇=58∶ 42、14 mmol/L庚烷磺酸钠为流动相等度洗脱.结果在1～200 mg/L范围内,各组分线性关系良好(r=0.999).各氨基酸的平均回收率为79.1%～92.9%.结论本方法简便、快速、准确, 可用于临床大样本测定和研究神经及精神疾病氨基酸类神经递质的改变.

作者：黄晓康学军肖静杨鹏李涛 HUANG Xiao KANG Xuejun XIAO Jing YANG Peng LI Tao 作者单位：黄晓,肖静,HUANG Xiao,XIAO Jing(东南大学公共卫生学院,江苏,南京,210009)

康学军,KANG Xuejun(东南大学学习科学研究中心,江苏,南京,210009)

杨鹏,李涛,YANG Peng,LI Tao(东南大学神经生物学研究所,江苏,南京,210009)

阿那日－8的氨基酸的成分测定篇3

【摘要】:本文分析鉴定了阿那日-8中氨基酸的成分,测出17种氨基酸,总含量为7.35mg/100mg,其中含量最高的为谷氨酸1.192mg/100mg,含量最低的为胱氨酸0.130mg/100mg,人体必需的氨基酸有8种,占氨基酸含量的36.34%｡

【关键词】:氨基酸;阿那日-8

【中图分类号】R284.1;R927【文献标识码】 B 【文章编号】1007-8517(2009)01-0025-02

Determination of the Contents of Amio Acids in Anari-8

LIMei1BUrie

AbstractIn this paper, the contents of free a mino acids in Anari-8, was analysed. The total content of the sixteen kinds of free amino acids 7.350mg/100mg. The content of GLU is the highest which was 1.192mg/100mg and CYS content was the lowest which only a mout 0.130mg/100mg. There were 8kinds of essential amino acids whose total content was 36.34% in Anari-8.

Key Wordsamino acids ; Anari-8

蒙药方剂“阿那日-8”,性温,为肝寒赫依之主方｡方中以调胃火,消食化滞石榴为主;配以肉桂､白豆蔻､荜拨以增强胃火,祛巴达干赫依,为调肝､祛寒､助消化之良药｡具有除巴达干､赫依､助消化等功能｡主治肝衰淤滞,腹涨肠满,肠鸣,寒泻,肝脏寒症｡在中(蒙)药研究时,常需要知道该药物中某些有效成分的含量,以对这一药物做出评价｡中(蒙)药中含有多种化学成分,如生物碱､黄酮类､萜类､鞣质､氨基酸等等｡对生命活动发挥着举足轻重的作用｡随着科学技术的发展,人们对中(蒙)药有效成分的类型､生理作用等的认识必将不断加深,不断完善｡为了更好地综合开发利用“阿那日-8”资源及其药用价值,为“阿那日-8”的质量评价提供科学依据,笔者对“阿那日-8”中的氨基酸成分进行了分析和鉴定｡

1 材料与方法

1.1 实验材料蒙药“阿那日-8”方剂由内蒙古民族大学蒙医药学院自制和兴安盟蒙医医院制剂室提供,符合制剂标准｡

1.2 仪器及检测条件仪器: 日立835-50型氨基酸自动分析仪测定条件:分离柱:4mmID×150mm,离子交换树脂:2619#,除氨柱:4mmID×50mm,柱温:57℃,茚三酮流速:0.3ml/min,缓冲液(用柠檬酸､柠檬酸钠､氯化钠配成pH为:3.4的缓冲溶液)流速:0.225ml/min,蛋白质氨基酸标准品:3nml,波长:570nm,440nm｡72min程序上机定量分析｡

1.3 样品的制备标准称取样品粉末41.5mg,加入6M盐酸15ml,抽真空封口｡在±110℃条件下水解22~24小时｡过滤,定容50ml｡取1ml滤液在小于40℃条件下减压蒸干｡用0.02M盐酸定容1ml｡得待测液上机分析(仪器自动取50微升分析)｡

2 结论与讨论

2.1 测定结果取待测液上机测定,鉴定出17种氨基酸,其吸收图谱见图1｡8种人体必需氨基酸结果见表1｡2.2 经分析鉴定,“阿那日-8”中含有17种氨基酸｡其中谷氨酸､天门冬氨酸､精氨酸､亮氨酸､甘氨酸､脯氨酸､缬氨酸､丙氨酸含量较高,占氨基酸总量的68.52%｡可作为“阿那日-8”中全部氨基酸含量特性的代表｡正确地利用这些氨基酸成分及其特性,是充分发挥“阿那日-8”药用价值的重要因素之一｡

2.3 鉴定出的17种氨基酸中有8种人体必须氨基酸,其总量为2.671mg/100mg,占氨基酸总量的36.34%｡人体必需氨基酸中亮氨酸含量最高为0.602mg/100mg｡

2.4 氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一,是构建细胞､修复组织的基础材料｡已知二十个品种基本氨基酸,赖氨酸､酪氨酸､亮氨酸､异亮氨酸､缬氨酸､蛋氨酸､苏氨酸､苯丙氨酸8种氨基酸为人体必需氨基酸,需要由食物提供｡

氨基酸对人体健康具有供给机体营养,调节机体机能,有些氨基酸可以有效地调节人体内分泌系统的平衡,增强免疫能力,维护心血管功能,改善肝肾功能,减低放化疗损害,促进激素分泌,促进蛋白质合成之功能｡

氨基酸的平衡和适量的供应是人体健康的基本前提,任何一种氨基酸供应缺乏,都会影响免疫系统和其他正常功能的发挥,使人处于亚健康状态,变得比较容易遭受疾病的侵袭｡如:缬氨酸､亮氨酸与异亮氨酸均属支链氨基酸.晚期肝硬化病人因肝功能损害,易形成高胰岛素血症,致使血中支链氨基酸减少,故临床常用缬氨酸等支链氨基酸的注射液治疗肝功能衰竭等疾病｡

参考文献

[1]罗布桑.蒙药学[M].北京:民族出版社,1989:545

不同产地天麻氨基酸的含量测定篇4

关键词：天麻,氨基酸,含量测定

天麻为兰科植物天麻 (Gastrodia elata BI.) 的干燥块茎。主产于四川、云南、贵州等省, 东北及华北各地亦产, 立冬后至次年清明前采挖, 立即洗净, 除去粗皮, 蒸透, 敞开低温干燥[1]。天麻为我国名贵中药材, 应用于中医治疗疾病已有几千年历史。以干燥块茎入药, 其味甘性平, 归肝经。功效平肝、息风、止痉。用于头痛眩晕、肢体麻木、惊风癫痫抽搐、破伤风[1]等病症的治疗。现代药理研究[2]表明天麻对中枢神经系统、心血管系统疾病有药理活性, 还有耐缺氧、增强免疫力等作用, 对老年性痴呆也有一定的疗效。

氨基酸广泛用于食品、医药、饲料、化妆品、农业和聚合材料等领域, 高附加值氨基酸、非蛋白质氨基酸和氨基酸的衍生物需求很旺盛。药典中对天麻的氨基酸含量并无记载, 且天麻中氨基酸含量与药理方面的报道很少见。根据有关研究[3], 天麻中不仅含有丰富的蛋白质水解氨基酸, 还存在种类齐全的游离氨基酸。其中人体必需氨基酸含量很高, 对人体有很好的保健作用。

四川西南地区荥经县种植的天麻有“明麻”之盛名, 是公认的川产优质天麻之一。本研究以四川西南地区荥经县天麻作为主要研究对象, 再选取了产于川北地区剑阁县及云南小草坝的产品作为对照, 用氨基酸自动分析仪测定氨基酸的含量, 分析不同产地对天麻氨基酸含量的影响。

1 材料与方法

1.1 供试材料

2012年3~4月收集大小均匀一致, 无病害的各产地的新鲜天麻样品共7个, 编号为A~G。其中A~E均由四川荥经县高山农业有限公司天麻基地提供, 样品F采自四川剑阁县, 样品G由云南省小草坝天麻种植基地提供, 见表1。

1.2 主要试剂与仪器

盐酸溶液:6mol·L-1和0.02 mol·L-1 HCl均为分析纯;不同pH值和离子强度的洗脱用缓冲液和茚三酮溶液按仪器说明书配置;水为去离子水;氨基酸混合标准品购自Sigma公司。

中药粉碎机, 购自上海淀永中药机械制造有限公司;烘箱, 购自上海精宏实验设备有限公司;日立L-8800氨基酸自动分析仪。

1.3 方法

1.3.1 样品前处理

采回的新鲜天麻作相同的处理:将新鲜天麻切薄片, 放入50℃烘箱, 烘干至恒重。将烘干的样品用中药粉碎机过80目筛, 备用。

1.3.2 氨基酸标准品测定

准确吸取混合氨基酸标准品溶液0.20mL于5mL容量瓶中, 用pH 2.2的缓冲溶液稀释后作为上机测定的标准品溶液[4]。氨基酸混合标准品包括天门冬氨酸 (Asp) 、苏氨酸 (Thr) 、丝氨酸 (Ser) 、谷氨酸 (Glu) 、甘氨酸 (Gly) 、丙氨酸 (Ala) 、胱氨酸 (Cys) 、缬氨酸 (Val) 、蛋氨酸 (Met) 、异亮氨酸 (Ile) 、亮氨酸 (Leu) 、酪氨酸 (Tyr) 、苯丙氨酸 (Phe) 、赖氨酸 (Lys) 、组氨酸 (His) 、精氨酸 (Arg) 、脯氨酸 (Pro) 和氨 (NH3) 。

1.3.3 样品测定

称取各样品粉末200mg, 置于水解管中, 加入10mL 6mol·L-1的盐酸, 放于110℃恒温箱中水解24h, 然后用蒸馏水定容到100mL。用水相滤头过滤约1.5mL至EP管, 取200μL至进样瓶, 50℃条件下烘干, 加1mL 0.02mol·L-1盐酸溶解后供上机测定。

调节仪器操作参数和洗脱用缓冲液的pH值, 进样20μL配制好的混合氨基酸标准品溶液, 使各氨基酸分辨率≥85%。然后自动进样处理好的样品溶液40μL, 用氨基酸自动分析仪分析测定[5~7]。

1.3.4 结果计算

2 结果

2.1 氨基酸标准品检测

由于脯氨酸与茚三酮反应呈黄色, 而与其余氨基酸反应呈蓝紫色, 二者在不同的波长处 (脯氨酸440nm, 其余氨基酸570nm) 有最大的吸收, 因而脯氨酸的色谱图与其他氨基酸有所不同。氨基酸标准品的色谱图见图1和图2。由图1可知, 16种氨基酸在35min内得到很好地分离;由图2可知, 脯氨酸在7.5min处也有明显地分离。

2.2 各产地天麻中氨基酸的测定结果

通过氨基酸自动分析仪测定的数据, 计算得各产地天麻中氨基酸的含量, 结果见表2。从表2可以看出, 不同产地的氨基酸含量是不同。其中以四川荥经县野生天麻样品 (B) 的含量最高, 四川荥经县引种云南小草坝天麻品种 (A) 的含量最低, 二者含量差异达到2倍以上。

由表2可知, 天麻中氨基酸的种类较丰富, 均含有15种相同的氨基酸。其中人体必需氨基酸有6种:赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸;非必需氨基酸9种:天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸和脯氨酸;其中四川荥经县野生与四川剑阁县样品中还含有酪氨酸。必需氨基酸中以赖氨酸、缬氨酸含量较高, 非必需氨基酸均以脯氨酸、甘氨酸含量较高。

注:A:四川荥经县引种云南小草坝天麻样品 (海拔1 220m) ;B:四川荥经县野生天麻样品;C:四川荥经县引种陕西天麻样品;D:四川荥经县野生天麻样品 (海拔1 242m) ;E:四川荥经县引种湖南天麻样品;F:四川剑阁县天麻样品;G:云南小草坝天麻样品

3 讨论与结论

不同产地中氨基酸含量不同, 其中四川荥经县野生样品 (B) 氨基酸含量最高, 为13.37%;其次为四川剑阁县样品, 为12.99%;再次为四川荥经县野生样品 (D) , 为11.37%;四川荥经县引种陕西与湖南的样品氨基酸含量差异不大, 分别为9.64%和9.18%;云南小草坝样品中氨基酸含量较低, 为7.26%;含量最低的为四川荥经县引种云南小草坝样品, 为6.09%。氨基酸含量最高与最低之间相差两倍多。

天麻中氨基酸含量比较高, 且所含的种类丰富。研究发现, 天冬氨酸 (Asp) 有解除氨中毒的作用, 可用于肝病的治疗[8];精氨酸 (Arg) 是人的半必需氨基酸, 但在创伤、手术、癌症、脓毒症等代谢应激时, 能促进创伤愈合, 是病理状态下的必需氨基酸[8];谷氨酸 (Glu) 在人体内形成谷氨酰胺, 可解除人体代谢中产生的游离氨, 参与肝脏、肌肉及大脑等组织中的解毒作用, 并参与脑组织代谢, 使脑机能活跃, 同时也是胰岛素的重要组成成分[8];脯氨酸 (Pro) 有抗高血压的作用, 可用于烫伤、营养不良、严重胃肠道疾患等病症的治疗及外科手术后的蛋白质补充[8]。天麻中所含的这些氨基酸是否具有此种药理作用或者有其他方面的药理效应均有待进一步研究证实。

不同产地天麻中氨基酸的含量有差异。氨基酸是重要的营养成分之一, 不同的含量及组成直接影响其营养价值和保健价值, 研究不同产地天麻中氨基酸的含量, 有利于进一步开发天麻中氨基酸的营养保健作用和药理作用。

参考文献

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[7]蒋滢.氨基酸的应用[M].北京:世界图书出版公司, 1996:1-163.

氨基酸测定篇5

黄瓜番茄中氨基甲酸酯类农药残留量的高效液相色谱测定

研究了采用高效液相色谱(配荧光检测器和柱后衍生系统)同时测定黄瓜、番茄中三羟基克百威、速灭威、残杀威、克百威、甲奈威、异丙威、抗蚜威、仲丁威等8种氨基甲酸酯类农药的多残留分析方法,对每种农药均做3种不同浓度0.05、0.1、0.5 mg・kg-1的添加回收率试验.结果表明,该方法对于8种农药的回收率为70%～105%,变异系数在10%之内,最小检出限为0.001 0～0.007 5 mg・kg-1.

作者：赵辉闫实 ZHAO Hui YAN Shi 作者单位：农业部农业环境质量监督检验测试中心(沈阳),辽宁,沈阳,110034刊名：农业环境科学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF AGRO-ENVIRONMENT SCIENCE年，卷(期)：24(z1)分类号：X830.2关键词：高效液相色谱氨基甲酸酯黄瓜番茄残留量

氨基酸测定篇6

关键词：4-氨基安替比林法、挥发酚、常见问题、处理方法

一、前言

根据酚类能否与水蒸气一起蒸出，分为挥发酚和不挥发酚，挥发酚通常是指沸点在230℃以下的酚类，通常属一元酚。挥发酚的分析方法较多，而各国普遍采用的是4-氨基安替比林法，此方法分直接光度法和萃取光度法。当水样中挥发酚浓度低于0.5mg/L时采用萃取光度法，当水样中挥发酚浓度高于0.5mg/L时采用直接光度法。地表水环境质量监测中挥发酚含量较低，多数采用萃取光度法。现就用4-氨基安替比林法[2]测定挥发酚过程中的常见问题进行探讨。

二、采样和水样的保存

水样的采集必须有代表性，用玻璃仪器采集水样，水样采集后应及时检查有无氧化剂存在，可在每升水样中加入2克氢氧化钠，以保存水样中的酚不致分解，也可用磷酸酸化至PH值为4.0，加入过量的硫酸铜（1g/l）以抑制微生物对酚类的生物氧化作用，同时应冷藏（5℃～10℃）以抑制其降解和减缓氧化作用，并在24h内测定。

三、试剂的配制

1、实验用水

实验用水应为无酚水，无酚水一般用加碱蒸馏法。无酚水应贮于玻璃瓶中，取用时应避免与橡胶制品接触。实验证明，合格的无酚水会使实验空白值保持在低水平。

2、缓冲溶液（pH约为10±0.2）

缓冲溶液配制时，应避免缓冲液中氨的挥发所引起的pH值的改变，进而影响显色而干扰测定。注意在低温下保存和取用后立即加塞盖严，并根据使用情况适量配制，一般在两周内用完，否则吸光度会偏高。

3、4-氨基安替比林

4-氨基安替比林的纯度对空白试验的吸光度影响很大，同时会直接影响测定结果的精密度，必要时做提纯处理，将100ml配制好的4-氨基安替比林溶液置于干燥烧杯中，加入10g硅镁型吸附剂（弗罗里硅土，60目-100目，600℃烘制4h），用玻璃棒充分搅拌，静置片刻，将溶液在中速定量滤纸上过滤，收集滤液，置于棕色试剂瓶内，于4℃下保存。经过提纯处理的4-氨基安替比林溶液空白值一般都在0.050以下，用此溶液实验得出的标准曲线相关系数一般都>0.999，截距趋于零，完全符合技术标准，提高了分析质量。

四、水样的预蒸馏

1、水中挥发酚经过蒸馏后，可以消除颜色、浑浊度等干扰。但当水样中含氧化剂、油、硫化物时会影响测定结果，应在蒸馏前先做适当的预处理。

①水样中含氧化剂（如游离氯）可加入过量硫酸亚铁。

②水样中含少量硫化物时，用磷酸把水样的PH值调至4.0，加入适量硫酸铜，即可生成硫化铜而被除去；当含量较高时，则应用磷酸酸化的水样置于通风柜内进行搅拌曝气使其生成硫化逸出。

③水样中如含有油类，将水样移入分液漏斗中，静置分离出浮油后，先用固体氢氧化钠调节PH至12-12.5。用四氯化碳萃取（每升样品用40ml四氯化碳萃取两次），弃去四氯化碳层，将经萃取后的水样移入烧杯中，在通风柜中于水浴上加温以除去残留的四氯化碳，再用磷酸调节至PH约为4.0。当石油类浓度较高时，用正已烷处理较四氯化碳为佳。

同时用水做空白试验。

2、水样预蒸馏一般采用加入硫酸铜以甲基橙为指示剂加磷酸酸化后进行蒸馏以去除干扰、杂质的方法。在水样预蒸馏过程中应注意以下几点：

①蒸馏时水样中红色褪去，通常因为水样中含有氧化物质氧化分解了甲基橙指示剂而使红色褪去，为此在酸化时加指示剂应稍过量些，或在必要时加入几滴饱和亚硫酸钠溶液以还原水样中的氧化物质。

②蒸馏时水样由红色变为黄色，通常因为水样中的难溶性碱性盐类在加热后消耗了水样中的酸，而使水样中的甲基橙指示剂变黄，因此，为保证水样始终为酸性，使水样中的挥发酚能较完全地被蒸馏出来，酸化时所在磷酸应稍过量。

③在测定造纸印染、合成洗涤剂制革等行业的工业废水时，常因废水中富含表面活性剂，出现大量的泡沫而不能进行蒸馏，此时应加入适量的硬脂酸（十八碳烷酸），能有效地抑制蒸馏时泡沫的产生及水样的喷溅。

3、HJ503-2009方法规定要在加热蒸馏至馏出液约为225ml时放冷。再向蒸馏瓶中加入25ml水，继续蒸馏至馏出液为250ml为止。但在实际实验中，因为时间有限，等不及冷却时加入冷水蒸馏瓶很容易发生爆裂。尝试在蒸馏前就将25ml蒸馏水随水样一起加入蒸馏瓶中蒸馏，经多次实验两种方法比对结果无显著性差异。用这种方法既避免爆裂，保证安全，又防止挥发酚类物质部分逸出，确保所取水样中的挥发酚最大程度地随馏出液馏出，同时也节省了实验时间，监测结果的准确性也得到保证。

五、水样的测定

根据HJ503-2009，在挥发酚测定中多采用制作标准曲线测定挥发酚，但实际样品在蒸馏过程中有一定损失。通过多次实验比较，使用标准曲线计算测定结果偏低，所以应使用工作曲线，避免引入系统误差。

六、实验操作中常见问题的处理

1、当水样含挥发性酸时，可使馏出液pH降低，应先用氨水中和呈中性后再加缓冲溶液。

2、因为反应受pH值影响，应严格控制反应溶液的pH值，使其在PH为10±0.2范围内，所以加入的缓冲溶液量应准确。

3、在实际实验操作中，用4-氨基安替比林测挥发酚在常温下大约5分钟显色完全稳定，30分钟后逐渐褪色。因此加铁氰化钾放置10min后尽快用三氯甲烷萃取，时间过长着色由红变黄。如果是直接光度法则显色放置10min后立即测定。

4、加三氯甲烷后分两次剧烈振摇，每次2min，分液漏斗振摇每次力度要均匀以保证萃取充分，然后静置10min以提高三氯甲烷的萃取率。

5、萃取后，用干脱脂棉或滤纸筒拭干分液漏斗颈管内壁，比色时弃去最初滤出的数滴萃取液后，并用萃取液洗涤比色皿2～3次，以免发生交叉污染。

6、如被测水样中挥发酚浓度超过标准曲线范围时，可用萃取剂三氯甲烷对萃取液进行适当稀释后直接测定（同步稀释空白萃取液）避免重新取水样稀释后重蒸馏测定带来的麻烦。

七、精密度、准确度检验

应用上述经验及处理方法对含挥发酚为0.05mg/l、0.10 mg/l、0.20mg/l、0.40mg/l的标样和地表水进行测定，所得的标准偏差如下图所示：

结果表明，应用上述方法处理后检测结果低于HJ503-2009对精密度、准确度的要求，所以使用上述经验方法可使实验精密度、准确度得到提高。

参考文献：

[1].魏复盛主编，《水和废水监测分析方法》（第四版）中挥发酚的测定，中国环境科学出版社.北京，2002.10。

氨基酸测定篇7

1 材料

1.1 试验动物

试验用瑶山鸡蛋, 来自贵阳绿源禽业有限公司瑶山鸡保种场, 随机选择同一批次300日龄种鸡所产的种蛋60枚, 其中30枚用于测定蛋品质, 另外30枚用于氨基酸分析, 在产出后24 h内进行测定。

1.2 主要仪器及设备

电子天平 (型号为AL204) 、蛋壳强度测定仪 (型号为EFR-01) 、蛋白品质测定仪 (型号为EMT-5200型) 、游标卡尺 (型号为8012) 、氨基酸自动分析仪 (型号为L-8800) , 由贵州省畜牧兽医研究所提供。

2 方法

2.1 测定内容与方法

主要测定瑶山鸡的蛋重、蛋比重、蛋形指数、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋壳重、蛋白高度、蛋白重、蛋黄重、蛋黄颜色及氨基酸的组成及含量。各项物理性状的测定参照参考文献[1]中的方法进行, 氨基酸组成及含量由贵州省畜产品理化检测分析实验室采用氨基酸分析仪测定。

2.2 数据的统计分析

采用Microsoft Excel软件对试验数据进行整理, 并用SPSS 18.0统计软件进行分析。

3 结果与分析

3.1 瑶山鸡蛋品质测定结果

随机选择30枚新鲜的瑶山鸡蛋, 在24 h内测定蛋品质, 结果见表1。

由表1可知:瑶山鸡的蛋形指数为1.31, 蛋重最大值为56.84 g, 最小值为42.97 g, 说明其蛋的均匀性较差;哈氏单位达84.62, 其蛋比重为1.08 g/cm3, 说明蛋比较新鲜;蛋壳厚度、蛋白比例、蛋黄比例、蛋壳比例分别为0.31 mm、56.53%、31.58%、10.31%;蛋黄色泽 (级) 为8.47, 说明其蛋黄色泽较深。

3.2 瑶山鸡蛋氨基酸成分分析 (结果见表2)

3.2.1 瑶山鸡肌肉氨基酸总量分析

由表2可知, 瑶山鸡蛋的氨基酸种类较多, 氨基酸总量为127.6 g/kg, 其中必需氨基酸总量为58.0 g/kg, 占氨基酸总量的45.45%, 非必需氨基酸总量为69.6 g/kg, 占氨基酸总量的54.54%, 必需氨基酸/非需氨基酸为83.33%。说明瑶山鸡蛋的氨基酸含量丰富, 营养价值高。

3.2.2 瑶山鸡蛋中鲜味氨基酸含量分析

由表2可知, 瑶山鸡蛋鲜味氨基酸总量 (谷氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸) 为37.2 g/kg, 占氨基酸总量的29.15%。其中谷氨酸含量最高为16.2 g/kg, 占鲜味氨基酸总量的43.55%。

3.3 瑶山鸡蛋中氨基酸相对含量分析

除色氨酸未测外, 所测瑶山鸡蛋富含人体所需的17种氨基酸, 其中以谷氨酸的含量最高 (16.20%) , 其次是赖氨酸 (14.0%) 、异亮氨酸 (13.3%) 、亮氨酸 (12.2%) 、精氨酸 (11.4%) ;含量较低的氨基酸依次是缬氨酸 (9.5%) 、丝氨酸 (9.3%) 、天门冬氨酸 (9.0%) 、丙氨酸 (8.4%) 、苏氨酸 (5.8%) 、组氨酸 (4.2%) 、脯氨酸 (4.1%) 、甘氨酸 (3.6%) 、酪氨酸 (3.1%) 和苯丙氨酸 (3.1%) ;含量很低的有半胱氨酸 (0.3%) 和蛋氨酸 (0.1%) 。

3.4 瑶山鸡蛋必需氨基酸含量分析

从必需氨基酸的含量来看, 除色氨酸未测定外, 瑶山鸡蛋富含人体所需的7种必需氨基酸, 必需氨基酸总量为58.0 g/kg, 占氨基酸总量的45.45%。必需氨基酸与非必需氨基酸的百分比为83.33%, 必需氨基酸含量较高。

4 讨论

鸡蛋品质直接影响鸡的品种选育甚至影响瑶山鸡产业的发展。瑶山鸡蛋的蛋形指数为1.31, 在正常范围 (1.31~1.39) 内。张慧君等[2]认为, 蛋形指数在1.30~1.35之间的种蛋孵化率最高, 达到94.5%。研究发现, 瑶山鸡蛋的哈氏单位达到84.62, 哈氏单位与蛋的新鲜程度、保存时间和气室变化有较大的关系, 说明本研究所用鸡蛋较为新鲜[3]。姚永胜等[4]研究表明, 蛋比重在1.08~1.10之间孵化效果最高, 但饲料中钙含量的不同, 则可能影响蛋的比重, 研究测得瑶山鸡的蛋比重为1.08, 说明瑶山鸡种蛋的孵化率较高。在集约化养殖中, 蛋壳强度对蛋的运输有非常大的影响, 试验测得瑶山鸡蛋的蛋壳强度为3.15 kg/cm2, 说明蛋壳质量较好, 在运输过程中不易破碎。

李蕴玉等[5]研究表明, 蛋重可以影响种蛋的孵化率, 而雏鸡初生重随蛋重的增加而显著增大, 呈较强的正相关。研究发现, 瑶山鸡蛋重存在明显的个体差异, 一般在47.89 g左右, 但其变异幅度较大, 最重为55 g, 最轻为35 g。由于瑶山鸡缺乏较系统的选育程序, 导致其蛋的均匀性较差, 因此在今后的生产中需要进一步加强选育, 选育中可根据蛋壳或瑶山鸡外貌特征的不同而选育不同的专门化品系。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位, 是生物体不可缺少的营养成分, 特别是必需氨基酸, 它们是人体不能合成的, 必需由食物供给的。瑶山鸡蛋富含人体所需的7种必需氨基酸, 必需氨基酸占氨基酸总量的45.45%, 必需氨基酸与非必需氨基酸的百分比为83.33%, 说明瑶山鸡蛋具有较高的营养价值。

氨基酸测定结果表明:除色氨酸未测定以外, 瑶山鸡蛋富含人体所需的17种氨基酸, 其中以谷氨酸的含量最高 (16.2%) , 其次是赖氨酸 (14.0%) 、异亮氨酸 (13.3%) 、亮氨酸 (12.2%) 、精氨酸 (11.4%) 。赖氨酸是人体第一必需氨基酸, 可以起到促进食欲、促进幼儿生长和发育的作用, 还能提高钙的吸收以及促进在机体内的积累, 加速骨骼生长, 它是合成大脑神经再生性细胞等重要蛋白质所需的必需氨基酸[6]。瑶山鸡蛋中的赖氨酸含量十分丰富, 具有较高的营养价值。谷氨酸是主要的鲜味氨基酸, 其含量的高低会直接影响肉质的鲜美程度。瑶山鸡蛋谷氨酸的含量占氨基酸总量的12.70%, 说明瑶山鸡蛋的鲜味较好。

试验发现, 蛋氨酸含量极低, 仅为氨基酸总量的0.08%, 具体原因还需要进一步研究。

5 结论

瑶山鸡蛋比重为1.08, 说明瑶山鸡种蛋的孵化率较高, 瑶山鸡蛋的蛋壳强度为3.15 kg/cm2, 瑶山鸡蛋壳质量较好, 在运输过程中不易破碎。瑶山鸡蛋的均匀性较差, 还需要进行系统的选育, 提高种蛋的均匀度。

瑶山鸡蛋富含人体所需的17种氨基酸, 包含7种必需氨基酸, 必需氨基酸总量占氨基酸总量的45.45%, 必需氨基酸与非必需氨基酸的百分比达83.33%, 说明瑶山鸡蛋具有较高的营养价值。瑶山鸡蛋谷氨酸的含量最高, 占氨基酸总量的12.70%, 说明瑶山鸡蛋的鲜味较好。

参考文献

[1]陈伟生.畜禽地方品种资源调查手册[M].北京:中国农业出版社, 1999.

[2]张慧君, 李福林.蛋形指数对孵化效果的影响[J].内蒙古农业科技, 2008 (2) :65-66.

[3]侯卓成, 杨宁, 李俊英, 等.鸡蛋新鲜度随保存时间的变化规律[J].中国畜牧杂志, 2008, 44 (13) :42-45.

[4]姚永胜, 吴玉玲, 王秀芝.蛋比重对孵化率的影响[J].中国畜牧杂志, 1993, 29 (2) :48, 50.

[5]李蕴玉, 李佩国, 高山林, 等.蛋重对肉杂鸡种蛋孵化效果的影响[J].中国家禽, 2006, 28 (22) :20-22.

氨基酸测定篇8

1 材料与方法

1.1 材料

珠子参地上部分:2012年8月10日采自云南省丽江市玉龙县鲁甸乡珠子参种植基地。60℃烘干,磨碎成粉后过60目筛备用。

1.2 主要仪器与试剂

仪器:实验室用样品粉碎机,电子分析天平,恒温干燥箱,氨基酸自动分析仪L-8800。

试剂:氨基酸标准品,Sigma公司;柠檬酸钠、茚三酮,优级纯;无水乙醇、无水碳酸钠、氢氧化钠、氯化钠、冰乙酸、盐酸、柠檬酸等均为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 样品溶液测定

根据样品的蛋白质含量,称取试样约100~200 mg,样品处理参照杨芳等[3]的方法。用氨基酸自动分析仪测定氨基酸标准品(0.1 mmol·L-1),得到各氨基酸积分峰面积与浓度的标准工作曲线。测定珠子参样品,根据样品中氨基酸的峰面积计算各氨基酸含量。

1.3.2 测定条件

分离柱4.6 mm × 60.0 mm,柱温57.0℃,反应器温度136℃,泵1(洗脱溶液)流速0.40 mL·min-1,泵2(茚三酮溶液)流速0.35 mL·min-1,进样量20 μL。

1.4 营养评价

利用世界卫生组织/联合国粮农组织(WHO/FAO) 1973年修正的理想蛋白质人体必需氨基酸模式谱,计算样品中必需氨基酸(EAA)的氨基酸比值(RAA),氨基酸比值系数(RC)和比值系数分(SRC)[4]。

1.4.1 必需氨基酸的氨基酸比值RAA

RAA=(待评蛋白质EAA含量)/(WHO/FAO式中相应EAA含量);

此参数表明食物蛋白质中某种EAA含量是WHO/FAO模式谱中相应EAA倍数。

1.4.2 氨基酸比值系数RCRC=(RAA)/(RAA的平均值)

如果食物蛋白质中EAA组成比例与WHO/FAO模式谱一致,则各种EAA的RC=1; RC大于1表明该种EAA相对过剩;RC小于1表明该种EAA相对不足;RC最小者为第一限制性氨基酸。

1.4.3 比值系数分SRCSRC=100-CV*100

式中:CV为RC的变异系数;CV=标准差/均值。

如果食物蛋白质中EAA组成比例与WHO/FAO模式谱一致,则SRC=100;SRC越接近100,营养价值越高;SRC越小,营养价值越低。

2 结果与讨论

2.1 珠子参地上部分氨基酸分析结果

使用氨基酸自动分析仪对样品溶液进行测定,如图1所示,珠子参茎、叶和花中各氨基酸得到了较为明显的分离,分离效果良好。

珠子参茎、叶、花的氨基酸种类丰富,含有17种常见氨基酸,由表1可知,氨基酸总量分别为3.73%,14.80%,8.72%,叶片中氨基酸总量最高。茎、叶、花中药效氨基酸含量较高,分别为氨基酸总量的65.95%,65.27%,68.00%。茎、叶、花中含量排在前四位的氨基酸均为谷氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸,赖氨酸。珠子参茎E/T=0.39,E/N=0.64,叶E/T=0.41,E/N=0.71,花E/T=0.39,E/N=0.63,均较接近WHO/FAO提出的理想蛋白质E/T=0.40,E/N=0.60的要求,氨基酸配比较为合理。

注:*为必需氨基酸,#为药效氨基酸

2.2 珠子参地上部分氨基酸配比

本文采用氨基酸比值系数法对珠子参茎、叶、花中氨基酸进行营养评价。氨基酸比值系数法是基于氨基酸平衡理论设计的评价蛋白质营养价值的方法。如果蛋白质中必需氨基酸齐全,且比例越接近或符合WHO/FAO的氨基酸模式要求,则蛋白质的营养价值越高。将珠子参茎、叶、花中各种必需氨基酸与WHO/FAO推荐的氨基酸模式谱[5,6]进行比较,发现珠子参茎、叶、花中必需氨基酸含量相对较高,除蛋氨酸+胱氨酸外,其他几种必需氨基酸均高于WHO/FAO模式谱(表2)。根据表2进一步

注:1:570 nm波长处测得的氨基酸谱图;2:440 nm波长处测得的脯氨酸谱图

计算得出珠子参茎、叶、花蛋白质的RAA、RC、SRC值,结果见表3。由RC值可知,叶和花中苏氨酸和蛋氨酸+胱氨酸相对不足,其他几种必需氨基酸相对过剩;茎中的蛋氨酸+胱氨酸相对不足,其他几种必需氨基酸相对过剩。茎、叶、花中蛋氨酸+胱氨酸均为第一限制氨基酸。珠子参茎、叶、花的SRC值分别为63.86,67.78,69.30,说明珠子参花和叶中的蛋白相对茎来说有更高的营养价值,且花和叶中蛋白质含量较高,是优质的植物蛋白资源。

2.3 珠子参地上部分γ-氨基丁酸含量

γ-氨基丁酸(GABA)是一种非蛋白质组成的天然氨基酸,在动物、植物和微生物中均有分布。GABA是哺乳动物中枢神经系统重要的抑制性神经递质,随着其生理功能研究的深入,已发展成为一种新型的功能性因子。研究表明,GABA具有降血压、调节激素分泌、治疗癫痫、增强免疫力、镇痛、抗焦虑和健脑等功效[7,8]。2009年卫生部第12号通告批准GABA为新资源食品,开发利用GABA成为当前食品及医药领域的研究热点之一[9]。本文分别测定了珠子参茎、叶、花中的GABA含量,并与文献报道的GABA含量

相对较高的几种植物进行比较,见表4。珠子参中GABA含量分布为叶>花>茎,叶片中GABA含量较高,其含量达0.26%,高于臭灵丹草[3]、南瓜叶[10]、南沙参[11]、龙眼[12]、发芽糙米[13]。

3 结论

珠子参茎、叶、花中含有17种常见氨基酸,种类齐全,含量丰富。茎、叶、花中的氨基酸总量分别为3.73%,14.80%,8.72%,其中药效氨基酸分别占氨基酸总量的65.95%,65.27%,68.00%;氨基酸组成合理均衡,其SRC值分别为63.86,67.78,69.30。相较于茎,珠子参叶和花中氨基酸总量较高,氨基酸配比更为合理,营养价值更高,是优质的植物蛋白资源。茎、叶、花中药效氨基酸含量较高,具有较高的保健价值。珠子参中还含有1种非蛋白氨基酸γ-氨基丁酸,其在珠子参茎、叶、花中的含量分别为0.12%,0.26%,0.16%;珠子参叶片中γ-氨基丁酸的含量高于臭灵丹草、南瓜叶、南沙参、龙眼、发芽糙米,可作为γ-氨基丁酸的主要原材料用于新资源食品的开发。

氨基酸测定篇9

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

日立835-50氨基酸自动分析仪;2619型阳离子交换树脂柱(2.6 mm×150 mm);脱氨柱(自制,填充树脂为日立2650,4 mm×50 mm);UV-7502PCS紫外可见分光光度计。

茚三酮、抗坏血酸、乙酸、乙酸钠、L-精氨酸、无水乙醇等均为分析纯;各氨基酸标准品均为分析纯(江南大学食品学院分析测试中心提供)。

百合样品购自甘肃兰州(无硫百合)、湖南邵阳(食用百合、药用百合),经常州药物研究所鉴定为百合科中Lilium brownii的干百合。百合样品经干燥粉碎,过40目筛,70～80℃烘干至恒重后备用。

1.2 分析条件[1]

氨基酸自动分析仪测试条件:流动相为柠檬酸钠缓冲溶液(pH=3.5);流量为0.225mL/min;茚三酮流速:0.13mL/min;柱温为53℃;进样量为50 μL;柱压P1为0.9～1.0 MPa,P2为0.98～1.4 MPa;氮气压力为0.03 MPa;检测波长为570 nm和440 nm。氨基酸标准品浓度:10～4 mol·L-1。

1.3 氨基酸的提取

百合中游离氨基酸采用水浸提法提取。准确称取湖南食用百合粉1.0000 g,对浸提温度、时间、料液比以及乙酸浓度进行了四因素三水平的正交优化试验,试验结果均以浸提液中总游离氨基酸含量高者为优化指标。总游离氨基酸含量采用茚三酮分光光度法测定[3],结果以L-精氨酸量表示。

1.4 氨基酸组成测定

游离氨基酸组成采用氨基酸自动分析仪测定,根据不同氨基酸的保留时间定性。取最佳提取条件下所得的提取液,经0.45 μm微孔滤膜过滤后,直接用氨基酸分析仪进行组分分析。

2 结果与分析

2.1 提取条件的选择

试验中以浸提温度(A)、浸提时间(B)、料液比(C)、乙酸浓度(D)为影响因素,作正交优化试验,试验安排如表1所示,以食用百合为例,试验结果见表2。

由正交分析结果可知,影响百合中氨基酸的提取因素中,以乙酸浓度的影响最大,其后依次是温度、料液比、时间。提取的最佳条件是A2B3C1D3,即以7.5%乙酸为提取液,料液比1∶35,70℃提取3 h。

2.2 三种百合中氨基酸组成分析

从表3可知,此次测定的3种百合中,均含有17种氨基酸,不同品种的百合氨基酸含量有较大差异,兰州无硫百合、湖南食用百合和湖南药用百合中总已知游离氨基酸的质量分数分别为13.95 mg·g-1、11.05 mg·g-1和9.24 mg·g-1,但其各种氨基酸含量分布类似,均以精氨酸(Arg)含量最高,在兰州无硫百合、湖南食用百合和湖南药用百合中分别占总游离氨基酸的55.6%、48.4%、63.3%。其次是谷氨酸(Glu)和脯氨酸(Pro),这两种氨基酸的质量分数比较接近,在兰州无硫百合、湖南食用百合和湖南药用百合中各有高低,但都在7.7～15%之间。再其次是天冬氨酸、苏氨酸、甘氨酸等等。

2.3 百合中必需氨基酸含量及营养价值

对于成人来说,必需的氨基酸有8种[4]。本研究中除色氨酸未测得外,其余7种氨基酸(即苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸)含量齐全,在兰州无硫百合、湖南食用百合和湖南药用百合中分别占总游离氨基酸的6.31%、9.14%、11.0%。对于婴儿来说,组氨酸和精氨酸也是必需氨基酸,百合中精氨酸是一种双基氨基酸,具有极其重要的生理功能。精氨酸能降低血氨,促进体中尿素生成,多吃精氨酸,可以增加肝脏中精氨酸酶的活性,有助于将血液中的氨转变为尿素而排泄出去,对高氨血症、肝脏机能障碍等疾病颇有效果。精氨酸的重要代谢功能是促进伤口的愈合作用,它可促进胶原组织的合成,能促进伤口周围的微循环而促使伤口早日痊愈。精氨酸也是精子蛋白的主要成分,有增进精子的质量,提高精子运动能量的作用,对治疗精子减少症有作用。

注:a为人体必需氨基酸;b为药效氨基酸;c为儿童必需氨基酸

2.4 百合中药效氨基酸含量及营养价值

除人体必需氨基酸外,百合中还富含多种药效氨基酸,其中含量最高的是精氨酸,其次是谷氨酸。谷氨酸是哺乳动物获得净氨基氮的主要氨基酸,能在人体内与血氨结合形成对机体无害的谷氨酰胺,解除组织代谢过程中产生的氨毒害作用,并参与脑组织代谢,使脑功能活跃,是影响生长发育的重要氨基酸。湖南药用百合中的天冬氨酸含量高于其他两种百合,达到8.37%,近年来天冬氨酸在临床上被广泛应用于治疗肝炎、肝硬化、肝昏迷。天冬氨酸与鸟氨酸生成的盐在体内尿素循环中起重要作用,可以延缓氨中毒,改善肝功能,其退黄、降酶作用较显著,能促进酒精代谢,减少酒精对肝脏的损伤。

研究结果表明百合中的氨基酸含量较高,种类齐全,富含必需氨基酸和药效氨基酸,集保健、营养、药用功能于一体,是一种对人体具有较高营养价值的天然绿色食品。

摘要：以3种不同的百合为原料,用水浸提法提取百合中游离氨基酸,对提取条件进行研究,通过正交试验确定最适宜提取条件(即:以7.5%乙酸为提取液,料液比1∶35,70℃提取3 h)。同时采用氨基酸分析仪测定3种百合的水提取液样品,共检出17种游离氨基酸(其中7种为必需氨基酸)。结果表明,百合中的游离氨基酸以精氨酸为主体,占总游离氨基酸含量的60%左右,说明百合中的氨基酸具有很高的营养和药用价值。

关键词：百合,氨基酸,提取,测定

参考文献

[1]刘刚,王辉,周本宏.云南产松口蘑17种氨基酸的含量测定及评价[J].中国医院药学杂志.2008,28(7):552～554.

[2]李华龙,黄哲苏,李海生.松树花粉提取物中17种氨基酸的测定[J].现代仪器.20006,:29～30

[3]范婉萍,吴捷.用分光光度法测定含氨基酸类制品中的氨基酸含量[J].中国测试技术.2007,33(3):117～

[4]B.A.鲍曼等.现代营养学.[M]北京:化学工业出版社2,004

[5]吴家红,靳凤云,龙开杰,陈华国.分光光度法测定板蓝根中总氨基酸[J].微量元素与健康研究.2006,21(5):45～46

山东栽培瓜蒌氨基酸的含量测定篇10

1 材料与方法

1.1 材料

样品材料经鉴定,均为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥果实。产地等见表1。

1.2 仪器及试剂

日立835-50氨基酸自动分析仪(日本),ZK-82A型真空干燥器(上海试验仪器厂),732型强酸型阳离子交换树脂(江苏淮海精细化工厂)。所用试剂均为分析纯。

1.3 样品处理

将样品粉碎,过10目筛,于60℃干燥至恒重,备用。

1.4 游离氨基酸的测定

精密称取药粉20 g,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至约10 mL,加2倍量乙醇沉淀,过滤,取上清液,回收乙醇,水浴浓缩至5～7 mL,将浓缩液全部通过强酸型阳离子交换树脂柱,静置0.5 h。用蒸馏水洗脱至无色(pH=7),再用新配制的2 mol·L-1 的氨水洗脱,收集洗脱液至茚三酮反应呈阴性。经氨基酸自动分析仪在下述条件下测定各样品中的游离氨基酸的含量:柱温53℃,缓冲泵压力100 kg/cm2,茚三酮流量1.8 ml/min,色谱柱2.6 mm×150 mm,分析时间72 min,样品进样量50 mL,标准品进样量5 mL。

1.5 水解氨基酸的测定

按照1.4项下操作,将20 g 精密称量的瓜蒌样品粉末,经水煎、醇沉、过滤、浓缩后的水溶液用 6 mol·L-1 盐酸溶解定容至 10 mL,置水解管中,在充氮状态下封口,140℃水解1 h,冷却,取 1 mL 溶液抽真空,70℃ 干燥,用0.002 mol·L-1的盐酸 6 mL 溶解。经氨基酸自动分析仪在与1.4项相同条件下测定样品中水解氨基酸的含量。

2 结果与分析

2.1 游离氨基酸

山东栽培瓜蒌中游离氨基酸的种类较为丰富,含有19种氨基酸,其中人体必需氨基酸7种:苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸;非必需氨基酸12种:丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、组氨酸、精氨酸、门冬氨酸、羟脯氨酸、鸟氨酸。必需氨基酸中以缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸含量较高;非必需氨基酸中以谷氨酸、丙氨酸、精氨酸、鸟氨酸含量较高。结果见表2。

游离氨基酸中必需氨基酸含量为561.8～2007.5 mg·kg-1,后者是前者的3.6倍;非必需氨基酸为1182.2～12985.5 mg·kg-1,后者是前者的11倍;总氨基酸为1744.0～14993.0 mg·kg-1,后者是前者的8.6倍。游离氨基酸以1026-3号最低而008和002两个样品含量最高,尤其是必需氨基酸的含量,008高达2007.5 mg·kg-1,几乎是1026-3的4倍;总氨基酸的含量是1026-3的8.5倍。

1113和1025-2均为仁瓜蒌,总游离氨基酸含量平均为4751.5 mg·kg-1,在10个样品中位于中上游;1106-3和1106-4为糖瓜蒌,总游离氨基酸含量为4956.9 mg·kg-1,略高于仁瓜蒌;1106-1为地瓜蒌,总游离氨基酸含量较低,为3262.5 mg·kg-1;1106-2为小光蛋,总游离氨基酸含量为3019.1 mg·kg-1,低于地瓜蒌。

2.2 水解氨基酸

山东栽培瓜蒌中含有19种水解氨基酸,与游离氨基酸种类相同。必需氨基酸中以缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、胱氨酸含量较高;非必需氨基酸中以谷氨酸、丙氨酸、精氨酸、门冬氨酸含量较高。结果见表3。

水解氨基酸中必需氨基酸含量为28527.2～52703.4 mg·kg-1,后者是前者的1.8倍;非必需氨基酸为56693.2～119734.8 mg·kg-1,后者是前者的2.1倍;总氨基酸为85220～172430 mg·kg-1,后者是前者的2倍。1026-3号的水解氨基酸含量最低。

3 讨论与结论

3.1 山东产瓜蒌中氨基酸种类

山东栽培瓜蒌中氨基酸的种类较为丰富,均含有19种相同的游离氨基酸和水解氨基酸,其中人体必需氨基酸7种:苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸;非必需氨基酸12种:丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、组氨酸、精氨酸、门冬氨酸、羟脯氨酸、鸟氨酸。

必需氨基酸中游离和水解氨基酸均以缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸含量较高。非必需氨基酸中两种氨基酸均以谷氨酸、丙氨酸、精氨酸含量较高。

3.2 山东产瓜蒌中氨基酸的含量

山东产瓜蒌氨基酸含量在各个样品之间差异显著。游离总氨基酸含量为1744.0～14993.0 mg·kg-1,后者是前者的8.6倍。水解总氨基酸含量为85220～172430 mg·kg-1,后者是前者的2倍。

1026-3号为2000年采于泰安药材技校的“短脖一号”,其游离氨基酸和水解氨基酸含量在10个样品中最低。游离氨基酸以008和002两个样品含量最高,二者均为瓜蒌试验基地种子繁育当年的果实,尤其是必需氨基酸的含量,008几乎是1026-3的4倍;总氨基酸的含量是1026-3的8.5倍。

3.3 不同农家品种氨基酸含量比较

从游离总氨基酸的含量考虑,糖瓜蒌略优于仁瓜蒌,仁瓜蒌优于地瓜蒌,又优于小光蛋。