信息素提取物

关键词：

信息素提取物（精选三篇）

信息素提取物 篇1

1 仪器与药品

1.1 实验仪器

电子分析天平 (北京赛多利斯) , Agilent1200高效液相色谱仪 (美国安捷伦) , C18色谱柱 (美国安捷伦) 。

1.2实验试剂与药品

葛根素对照品 (中检所研究院, 批号:110752-201313) , 葛根素提取物软胶囊 (荣成百合生物技术有限公司) , 甲醇 (色谱纯) , 其他试剂均为分析纯, 水为超纯水。

2 实验:葛根素软胶囊中葛根素的含量测定

2.1. 含量测定试验条件的选择

按文献[1]的试验方法进行操作, 在该试验条件下, 对照品和样品的峰形较差, 出现叉峰, 对照品理论塔板较低, 为不满意结果, 为找出更好的试验条件, 作者参照文献[2]的方法进行实验, 得到满意的结果。文献[1]的检测波长为247 nm, 流动相为甲醇-水-36%乙酸 (25:72:3) , 柱温25℃;柱子为安捷伦, 流速1.0 ml/min;文献[2]的检测波长为250 nm, 流动相为甲醇-水 (25:75) , 柱温30℃, 柱子C18柱, 流速1.0 ml/min。

2.2 对照品溶液的制备

取葛根素对照品0.0100 g, 分别加70%甲醇 (A法) 和30%乙醇 (B法) 溶解至10 ml容量瓶中, 超声萃取, 待溶解后用相应的溶解定容, 均制成每1毫升含葛根素0.1 mg的标准溶液。

2.3 供试液制备

取软胶囊10粒, 倾出内容物, 混匀。精密称取0.5 g, A法:加70%甲醇, 超声提取20 min后定容至10 ml;B法:精密加入30%乙醇50 ml, 称定重量, 回流30 min, 冷至室温, 再称定重量, 补足减失的重量, 摇匀, 再取2 ml, 加30%乙醇稀释至50 ml, 即得。

2.4 两种方法测定结果

A法:按文献[1]的色谱条件, 对对照品和样品进行试验, 结果对照品和供试品的峰形都较差。对照品理论塔板数较低, 方法不适用。B法:按文献[2]的色谱条件对对照品和样品进行试验, 结果, 该方法的出峰时间均在7 min左右, 葛根素能与其他成分很好地分开, 并且峰形较好, 故选择B方法为该保健品的检测方法。

2.5 标准曲线和线性范围

分别吸取对照品溶液, 用30%乙醇稀释并定容的浓度分别为4、10、20、30、40、50μg/ml的系列标准溶液。按上述色谱条件分别进样10μ, 以峰面积 (A) 为纵坐标 (Y) , 进样量 (μl) 为横坐标 (X) 绘制工作曲线, 得回归方程为Y=42.0138X+2.1010, r=0.9998, 线性范围为4~50μg/ml, 葛根素在此范围内与峰面积呈良好线性关系。见图1。

2.6 方法学考察

精密度试验:精密吸取葛根素对照品 (10μg/ml) 溶液在上述色谱条件下连续进样5次, 每次进样10μl, 结果葛根素色谱峰峰面积RSD为0.17% (n=5) , 表明:本实验精密度较好。稳定性试验:精密吸取葛根素对照品溶液, 于0、2、4、6、8、12 h进样, 进样量10μl, 考察葛根素色谱峰的相对保留时间及相对峰面积在12 h内的稳定性。结果葛根素色谱峰峰面积的RSD为1.42% (n=6) , 表明对照品溶液在12 h内基本稳定。加样回收率试验精密称取已知含量同批样品 (批号:20130526) 5份, 每份0.2000 g, 加30%乙醇溶液定量稀释成50 ml, 每份精密量取2 ml溶液和葛根素对照品溶液 (200μg) 2 ml, 置同一50 ml容量配制, 用30%乙醇稀释至刻度, 测定葛根素含量, 平均回收率为99.80%, RSD为1.0% (n=5) 。

2.7 供试品中葛根素含量测定

按上述色谱条件测定, 以标准曲线计算供试品中葛根素含量, 测定结果:含量为5.30% (g/100 g) , RSD为0.79%。

3 讨论

3.1 测定波长的选择

取葛根素对照品溶液, 按照紫外分光光度法 (《中国药典》2010年版 (一部) 附录Ⅴ) , 在200~300 nm范围内绘制紫外吸收光谱, 葛根素在250 nm处有最大吸收, 结合药典方法故选择250 nm为检测波长。

3.2 提取方法的确定

分别采取A法和B法进行样品的提取, A法用超声方式提取, 含量低, 峰形差, 采用B法用回流方式, 所得效果为满意, 故选择回流提取为供试品制备的条件。葛根提取物软胶囊中葛根素的含量, 采用改变色谱条件后的HPLC进行测定, 方法学研究表明, 方法精密度、重现性好, 分离度符合规定, 方法稳定;同时经对样品检测数据的考察, 确定该含量测定方法具有可应用性, 能够更有效地控制改保健品的质量。

摘要：目的 保健品葛根素软胶囊产品的标准高效液相色谱法 (HPLC) 测葛根素时, 色谱图基线宽度大、对照品理论塔板数低, 峰形差, 欲对其色谱条件进行改进。方法 流动相改为:甲醇-水 (25:75) , 检测改为250 nm;流速、进样量不变。结果 色谱图基线宽度变小, 峰形好, 葛根素在450μg范围内与峰面积呈良好线性关系, r=0.9999;平均回收率为99.8%, RSD为1.0% (n=5) 。结论 流动相改变后的方法能更准确测定其含量。

关键词：高效液相色谱法,葛根素

参考文献

[1]刘泰然, 赵珊, 张楠, 等.反相液相色谱法测定保健食品中葛根素.中国卫生检验杂志, 2005 (2) :147-148.

信息素提取物 篇2

超声法提取朝天椒辣椒素工艺条件研究

采用超声法从辣椒中提取辣椒素,以辣椒素的`提取量为评价指标,利用正交实验确定乙醇在超声功率为120W时超声提取辣椒素的最佳条件为:液固比为5:1、超声时间为40 min.对比试验结果显示,超声提取比传统提取的提取率有明显提高.

作 者：孙雁霞 邬晓勇 王跃华 刘碧崇 苟小军 徐文俊 曹富强 SUN Yanxia WU Xiaoyong WANG Yuehua LIU Bichong GOU Xiaojun XU Wenjun CAO Fuqiang 作者单位：成都大学生物产业学院,四川,成都,610106刊 名：成都大学学报(自然科学版)英文刊名：JOURNAL OF CHENGDU UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)年，卷(期)：28(3)分类号：Q681关键词：辣椒素 超声提取 工艺设计

黑木耳凝集素的提取工艺 篇3

关键词：黑木耳；凝集素；提取工艺；凝集活性

中图分类号： S646.601；R284.2 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）03-0259-02

黑木耳（Auricularia auricula）营养丰富，是我国传统的食药兼用菌，含有多糖、凝集素、三萜类等药用成分，具有提高免疫功能、抗癌、降血脂等功效。随着双孢菇、灵芝、金针菇和口蘑等真菌凝集素及抗肿瘤效果的发现，真菌凝集素的作用被逐渐认识，它具有凝集细胞、活化淋巴细胞、免疫调节、抑制癌细胞、抑制植物病原真菌等作用[1-3]。我国是黑木耳的生产和消费大国，研究黑木耳中包括凝集素在内的多种活性成分的提取工艺，对黑木耳的开发和利用具有重要意义。本研究利用磷酸缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）浸提法，采用正交试验，优化提取工艺条件，以期为黑木耳凝集素在食品、医药、保健方面的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

黑木耳干品从市场购买，经粉碎、筛分、密封后存放于阴凉处备用。鸡血由武汉生物工程学院基础生物学实验室提供。试验所需试剂均为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 黑木耳凝集素的提取方法 取黑木耳干品粉末2.5 g，选取合适的提取试剂，以料液比1 g ∶20 mL在4 ℃条件浸提过夜。浸提液经过滤，4 000 r/min冷冻离心30 min。上清液加入固体硫酸铵至饱和度为50%，4 ℃盐析12 h。沉淀经冷冻离心、透析后，用PBS溶解，获得凝集素粗品。

1.2.2 凝集活性的测定 采用孙册等的方法[4]，检测凝集效价，即凝集素倍比稀释后，加入等量的2%鸡红细胞悬液，静置1 h观察结果。根据红细胞凝集分类标准，判定红细胞凝集效价[5]。参照赵则海等的方法[6]，对凝集效价定性数据赋值，取其加权平均数作为量化的凝集活性（agglutinating activity，Aa）。以凝集活性为指标，筛选提取的最佳工艺。

1.2.3 提取剂的选择 分别以PBS（0.05 mol/L，pH值7.2）、0.9%NaCl、蒸馏水作为提取剂，提取黑木耳凝集素，血凝法检测凝集效价和凝集活性，确定最佳提取试剂。

1.2.4 单因素试验 以黑木耳凝集素的凝集活性为指标，以PBS为提取试剂进行单因素试验。料液比分别为 1 g ∶10 mL、1 g ∶15 mL、1 g ∶20 mL、1 g ∶25 mL、1 g ∶30 mL；提取温度分别为4、20、30、40 ℃；提取时间分别为6、12、18、24 h，确定各因素对试验的影响。

1.2.5 正交试验设计 选取料液比、提取温度、提取时间3个因素，以凝集活性为指标，进行L9（33）正交试验，试验设计见表1，对黑木耳凝集素的提取最佳工艺进行研究 [7-8]。

2.2 单因素试验

2.2.1 料液比对黑木耳凝集素凝集活性的影响 由图2可知，随着提取剂PBS用量的增大，提取的凝集素凝集活性也增大，料液比1 g ∶15 mL时，凝集活性基本达到最高；此后随着提取剂用量的增加，凝集素凝集活性有下降的趋势。提取剂用量少会导致提取率低和提取液黏稠，而用量过多会使提取液浓缩工作的负荷增加，因此确定最佳料液比为 1 g ∶15 mL。

2.2.2 提取温度对黑木耳凝集素凝集活性的影响 由图3可知，在4～30 ℃，黑木耳凝集素的凝集活性随温度升高而增加，30 ℃时达到最高；温度超过30 ℃时，凝集活性明显下降。结果表明黑木耳凝集素对溫度比较敏感，提取温度过高可能导致凝集素变性失活，凝集活性下降，因此提取温度应选择30 ℃。

2.2.3 提取时间对黑木耳凝集素凝集活性的影响 由图4可知，提取时间在12 h以内，黑木耳凝集素的凝集活性随着提取时间的延长而增加，12 h时达到峰值；此后，随着提取时间的延长，凝集素的凝集活性缓慢下降。综合考虑凝集素的提取率、凝集活性以及提取进度，确定提取时间为12 h。

2.3 正交试验

正交试验结果和极差分析见表2，方差分析结果见表3。影响黑木耳凝集素提取因素的主要顺序为：提取时间（C）>提取温度（B）>料液比（A）。由表3可知，因素C有显著差异，说明提取时间对凝集素凝集活性的影响最明显；因素A、B没有显著差异，对凝集素凝集活性没有显著性影响。结合极差和方差分析、单因素试验，确定黑木耳凝集素提取的最佳工艺参数是A1B2C3，即提取温度30 ℃、料液比1 g ∶15 mL，浸提时间16 h。此组合没有出现在正交表中，经过3次验证试验后，提取的凝集素的凝集活性平均为0.742，大于正交组合中的任一组合。

3 结论与讨论

本试验以单因素试验和正交试验相结合，对黑木耳凝集素提取工艺条件进行优化，得到最佳提取工艺为：以PBS为提取剂，料液比1 g ∶15 mL，提取温度30 ℃，提取时间为 16 h，经饱和度50%的硫酸铵盐析、透析后，获得的黑木耳凝集素的凝集活性达到0.742。

本试验以凝集素的凝集活性为指标，考察不同因素对提取的影响。在血凝法试验中，如何确定凝集素提取液的凝集效价比较困难。相比较其他方法，通过对凝集效价加权平均数获得量化的凝集活性，在凝集素提取及凝集活性研究中，可操作性更强。由于凝集素的本质是蛋白质或糖蛋白，蛋白质含量与凝集活性之间有相关性，因此在凝集素的提取过程中，可以参考蛋白质的提取和检测方法。

参考文献：

[1]李星云，黄 敏，宁安红，等. 抗肿瘤真菌蛋白的研究进展[J]. 国际肿瘤学杂志，2007，34（8）：576-579.

[2]孙正祥，王瑞霞. 食用菌中生物活性蛋白的研究进展[J]. 食用菌学报，2009，16（2）：85-90.

[3]吴丽萍，袁建赣，李 飞，等. 4种食用菌提取物对2种植物病原真菌的抑制作用[J]. 安徽农业科学，2009，37（8）：3587-3589.

[4]孙 册，朱 政，莫庆汉，等. 凝集素[M]. 北京：科学出版社，1986：20-21.

[5]孙 东，刘鹏举，郑晓翠，等. 桑叶凝集素的提取工艺优化研究[J]. 中国中药杂志，2008，33（21）：2564-2567.

[6]赵则海，肖小琼，邱卓荣，等. 四棱豆叶中凝集素的提取及其凝集活性研究[J]. 现代食品科技，2010，26（12）：1341-1344.

[7]权美平. 苦杏仁苷乙醇提取工艺参数优化[J]. 江苏农业科学，2013，41（5）：260-261.

[8]周 彬，杨文革，缪 建，等. 槲寄生凝集素粗品提取工艺研究[J]. 中成药，2007，29（5）：762-764.