黄芪甲苷

关键词：

黄芪甲苷（精选八篇）

黄芪甲苷篇1

1 仪器与试剂

Waters高效液相色谱仪:包括510型泵,991光电二极管阵列型检测器,U6K型进样器;NEC Power Mate型计算机,黄芪甲苷标准品购自辽宁省药品检验所。甲醇、正丁醇为分析纯,乙腈为色谱纯、水为去离子水。试验用黄芪采自沈阳医学院草药园。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水=1:2;流速为0.8 ml/min;检测波长为205nm;速度为0.4mm/min。

2.2 标准曲线制作

精密称取黄芪甲苷标准品2.128mg,加流动相定容至2ml,配制成1.064 mgml的标准品溶液,分别以10、20、30、40、50μl进样测定,以峰面积对进样量作线性回归,得回归方程为Y=-5.6×10-5+6.9365×10-4X (Y为峰面积,X为黄芪甲苷量),r=0.9994,黄芪甲苷标准品在10.64～53.20μg范围内与峰面积呈良好线性关系

2.3 提取方法的选择

用3种不同提取方法(索氏提取器提取1h;80℃温浸提取1h和超声波提取1h)提取样品,后2种提取方法测得黄氏甲苷含量略低,故选索氏提取器提取方法。

2.4 流动相的选择

实验试用多种溶剂系统,最后确定以乙腈一水=1:2为流动相,黄芪甲苷分离效果最好,保留时间也较适宜。色谱图见图2 (A、B)。

2.5 样品液制备

将二年生黄芪干燥根研成粉过40目筛,然后精密称取5.00g,放置索氏提取器中,用100ml 80%甲醇加热提取2h,提取液减压蒸去甲醇,用20ml正丁醇分别萃取3次,合并正丁醇萃取部分,减压蒸干,残渣用重蒸甲醇定容至2ml,用0.45μ微孔滤膜过滤,滤液用于HPLC分析,每次进样10μl。

2.6 加样回收率试验

称取二年生黄芪干燥根粉5.00g 5份,分别精密加入黄芪甲苷标准品2.00mg,按样品制备方法提取样品并进行定量分析,将测定结果扣除样品中黄芪甲苷含量,与加入标准品的比为加样回收率。结果为96.1%(n=5),RSD%=2.15(n=5)。

2.7 精密度试验

取同一样品液,重复进样5次,根据测得的样品中黄芪甲苷的浓度(μgml)计算其相对标准偏差为2.40%。又取同一样品5份,制备5份样品液,分别进样测出黄芪甲苷的浓度,计算其相对标准偏差为4.20%。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液,每隔2h进样1次,分别测定其色谱峰面积。RSD%=2.2(n=5),结果表明,色谱峰面积在8h内基本无变化,表明本实验条件下稳定性良好。

实验条件下稳定性良好。

2.9 二年生根及生药中黄芪甲苷的定量分析

依法测定一年黄芪根甲苷的含量,结果见表1。

3 讨论

黄芪甲苷是黄芪的主要有效成分之一,为定量分析黄芪中黄芪甲苷的含量,本实验建立了黄芪甲苷的RP-HPLC测定法,测得二年生黄芪根中黄芪甲苷的含量为1.28%(干重),与黄芪标准含量(1.50%)相差0.22%,本实验建立的RP-HPLC测定法加样回收率高,精密度试验相对标准偏差小,测试数据更可靠。

摘要：目的:建立一种准确、简便测定黄芪甲苷含量的分析方法。方法:色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-水=1:2;流速为0.8ml/min;检测波长为205nm;速度为0.4mm/min。灵敏度为0.1 AUFS,测定了黄芪甲苷的含量.平均回收率为96.1%,RSD为2.15%。结果:样品浓度在0.01～0.2mgml之间与峰面积成良好的线性关系。结论:本方法的重复性好、精密度高、稳定性强。

关键词：HPLC,2年生黄芪,黄芪甲苷

参考文献

[1]张宇,陈治松,王粟明.高效提取黄芪甲苷的工艺研究[J].黑龙江医药科学,2005;(5):34-35

[2]肖佳尚,朱涛.HPLC-ELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量[J].广东药学院学报,2007;(2):142-143

黄芪甲苷篇2

【摘要】目的：探讨采用高效液相色谱法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的价值。方法：根据高效液相色谱法，色谱柱（150 mm × 4.4mm，5μm）；流动相：乙腈-水（32∶[KG-*3/5]68）；流速1 ml/min；柱温：25℃。分别对黄芪与红芪中的黄芪甲苷进行含量测定。结果：在2.024～10.120μg范围内，黄芪甲苷的线性关系良好。结论：该方法具有准确、稳定、可重复的特点。黄芪中明显含有黄芪甲苷，而红芪中黄芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鉴别黄芪与红芪。

【关键词】黄芪；红芪；黄芪甲苷；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0024-02

黄芪是临床常用的补益药，其味甘，性温，具有利尿排毒、敛疮生肌、补气固表的功效。研究发现，黄芪所含的皂苷具有提高免疫的功能，而皂苷中的主要有效成分为黄芪甲苷，并具有降压、消炎镇痛的活性。红芪具有补气升阳、固表止汗、敛疮生肌的功效。与黄芪相比，红芪的抗菌、降压作用较强。研究采用效液相色谱法对黄芪与红芪中黄芪甲苷进行鉴别，进而为黄芪、红芪中药制剂的质量控制提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1260型高效液相色谱仪（蒸发光散射检测器，美国安捷伦科技有限公司）；ABS135-S型分析天平（美国梅特勒-托利多公司）。

1.2[JP+1]材料黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品鉴定所）；红芪（购自郑州药材市场）；黄芪（购自甘肃兰州药材市场）；高纯氮气（纯度为99.999%，济南尧天仪器有限公司）。甲醇、乙醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。[JP]

2方法

2.1色谱条件日本岛津C18色谱柱（150mm × 4.4mm，5μm）；流动相：乙腈-水（32∶68）；流速1ml/min；柱温：25℃。理论板数以黄芪甲苷峰计算不低于4000。见图1。

2.2供试品溶液的制备精密称取黄芪/红芪粉末4.0g，放入索氏提取器，加入甲醇40m1，冷浸后再加30 ml甲醇。然后80℃回流4个小时，过滤，浓缩干燥，提取物加l0 ml水轻微加热进行溶解。用水饱和正丁醇进行萃取，每次40 ml，共4次。合并正丁醇液并洗涤，洗涤用氨试液进行，每次用40 ml，共洗涤2次，弃去氨液。蒸干正丁醇液后在残渣中加入水5ml。使用50ml水洗脱后弃去水液，再用40%乙醇洗脱，乙醇用量为30m1，同样去除乙醇洗脱液。随后用70%乙醇80ml继续进行洗脱，收集洗脱液，蒸干，甲醇溶解后放进5ml量瓶轻摇至均匀。[JP]

2.3对照品溶液制备精密称取5.0mg对照品黄芪甲苷放入l0 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品溶液。

2.4标准曲线与线性关系精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20μl测定，以黄芪甲苷含量为横坐标，峰面积均值为纵坐，得回归方程：Y=1.294×10-6X+0.02812（R=0.9994）。表明黄芪甲苷在2.024～10.120μg范围内具有良好的线性关系。

2.5稳定性实验取黄芪甲苷对照品溶液，分别在0、 3 、6、12、18、24h测定其峰面积。结果该溶液在24h内基本稳定。

2.6精密度实验取黄芪甲苷对照品溶液20μl，平行5次进样。结果峰面积的相对标准偏差为1.02%（n=5），表明仪器的精密度较好。

2.7[JP+2]重复性实验称取黄芪药材5.0g，平行5份。按照“2.2”的方法进行操作，并测定峰面积。结果样品5次所得的黄芪甲苷含量一致，说明方法具有良好的重复性。

2.5回收率实验称取黄芪药材5.0g，平行5份，每份加入黄芪甲苷3.0mg，按照“2.2”的方法操作。平均回收率为98.2%，RSD=0.87%。说明样品的回收率较好。[JP]

2.6样品测定取黄芪、红芪中药饮品，按照“2.2”方法操作，按照“2.1”的条件测定黄芪甲苷的含量。结果：黄芪、黄芪中均含有黄芪甲苷，与黄芪相比，红芪中黄芪甲苷的含量微小。见图2、图3。

3讨论

黄芪是一种常用的补气药，含有皂苷类、黄酮类、多糖类、氨基酸类等多种化学成分。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分，具有抗氧化、降压、消肿止痛、提高免疫功效等活性，目前作为监控黄芪药材质量的指标之一。薄层扫描法、高效液相色谱法均为测定黄芪甲苷含量的常用方法，但薄层扫描法的操作不便，测定结果的偏差较大，且紫外线检测器的灵敏度较低，受杂质的干扰较大、信噪比较低，回收率不稳定。研究采用高效液相色谱法对黄芪与红芪中的黄芪甲苷成分进行了检测，该方法具有较高的灵敏度，简单而准确，无干扰，重复性较高，适用于黄芪甲苷的含量测定。此外，研究发现，黄芪、黄芪中均含有黄芪甲苷，但与黄芪相比，红芪中黄芪甲苷的含量微小，这一特点可作为区分红芪和黄芪饮品的判断指标。

参考文献

[1] 张恒，刘峰.高效液相色谱-蒸发光散射器法测定益气化瘀颗粒剂中黄芪甲苷的含量[C].∥中华中医药学会.中华中医药学会2013年药房管理分会学术年会论文汇编.中华中医药学会，2013：3.

[2] 刘和平，彭招华，张润容，等. 黄芪药材中黄芪甲苷UPLC-ELSD含量测定方法的优化[J]. 中国实验方剂学杂志，2015，21（5）：92-94.

[3] 李伟珍，林玉燕，李汉荣，等反相高效液相色谱法测定通窍鼻炎颗粒中欧前胡素和黄芪甲苷的含量[J]. 湖北中医药大学学报，2015（3）：51-53.

[4] 丁丽玉，王浣清，吴飞，等. 高效液相色谱法测定藿苏养胃口服液中黄芪甲苷的含量[J]. 现代生物医学进展，2015，15（27）：5216-5220.

[5] 杜天信，王秀真，杜志谦，等. 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定加味益气丸中黄芪甲苷的含量[J]. 中医学报，2013，28（3）：378-379.

黄芪甲苷篇3

1 紫外分光光度法

紫外分光光度法灵敏度高、操作简单、一般要求不高, 易于普及。利用黄芪皂苷和香草醛反应产物有紫外吸收的特点, 通过比色法可以测定黄芪皂苷的含量。陆一心[4]通过比较证明香草醛-冰醋酸比色法优于香草醛-硫酸比色法, 并确定实验条件为:新鲜配制的5%香草醛0.2m L, 高氯酸0.8m L, 于70℃水浴加热15min冷却后加冰醋酸5m L, 摇匀, 30min内在 (578±2) nm测定吸收度。潘飞等[5]采用日立U-2000型双光束分光光度计测定黄芪皂苷的含量。实验方法为在样品液0.5m L中加入无水乙醇至0.75m L, 再分别加入8%香草醛试剂0.75m L, 置于冰浴中加入72%硫酸7.5m L摇匀, 放入62℃水浴中恒温20min, 取出冷却.摇匀, 30min内在544nm波长处测定吸收度。

2 薄层扫描法

薄层扫描法亦称薄层光密度法, 是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析方法。应用薄层扫描仪或称薄层光密度计可同时对各种复杂的样品进行分离和测定, 简便快速、灵敏准确、专属性好。因此, 在医药学领域得到广泛应用, 尤其在药品检验工作中, 现已被国内外药典普遍采用[6]。靳浩等[7]利用薄层扫描法测定黄芪甲苷含量。吸附剂:薄层板 (厚0.5mm) , 展开剂:氯仿-甲醇-水 (65∶35∶10) 10℃以下取下层。展距7.5~8.5cm。显色剂:10%硫酸乙醇溶液。105℃烘10min。后盖以同样大小的玻璃板, 以透明胶带密封四周。单波长反射法锯齿扫描λ=544nm.狭缝lmm×1mm, 检测斑点峰面积。周嵩煜等[8]采用薄层色谱法对补血益气口服液中的黄芪、红参和制何首乌进行定性鉴别, 采用薄层扫描法测定该口服液中黄芪甲苷的含量。吸附剂为硅胶G-0.1%CMC-Na薄层板;展开剂:[正丁醇-醋酸乙酯-水 (4∶1∶5) 的上层溶液]-甲醇-正丁醇 (10∶1∶2) , 氨蒸气饱和;显色剂:10%硫酸乙醇溶液, 100℃烘至斑点清晰。取出, 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板, 周围用透明胶条封固。用日本岛津CS-930型双波长薄层扫描仪进行双波长反射法锯齿扫描, 测定波长:λs=530nm, 参比波长:λR=700nm, 线性化参数SX=3, 所采用的光束为0.4mm×0.4mm。梁溢等[9]用Merck公司生产的预制板 (10cm×10cm) , 展开剂:氯仿-甲醇-水 (13∶6∶2) 10℃以下放置过夜, 取下层液, 饱和15min展开。显色剂:1O%硫酸乙醇液, 105℃烘5min。扫描条件双波长反射法锯齿扫描λs=530nm, λR=700nm。在进行薄层层析时, 其温度不宜超过25℃, 否则样品中相近成分分离不好, 影响测定, 空气湿度也不宜过大。扫描时, 喷显色剂后105℃加热5min即可, 时间过长会使背景颜色变深, 背景干扰过大, 显色后应用大小相同的玻璃板盖上。周围有胶布密封在1.5h内测定完毕, 否则会影响测定结果[10]。

注:表1、2中[15-25]代表第15~25篇文献

3 高效液相色谱法

近年来, 随着高效液相色谱法的普及, 特别是配有蒸发光散射检测器的高效液相色谱法 (HPLC-ELSD) 越来越广泛地应用于质量控制中。高效液相色谱法具有高效、灵敏、快速等分析特点, 应用于各个科学领域[11]。张立为[12]以phenomenex ODS (4.6mm×150mm) 为色谱柱;乙腈一水 (32∶68) 为流动相;流速10m L min-1;柱温:室温;检测波长:203nm, 对8种不同产地的黄芪中黄芪甲苷进行含量测定。本法简便易行, 可较好的控制黄芪药材的质量。夏英等[13]采用高效液相色谱仪及蒸发光散射检浏器 (HPLC-ELSD) 对各种黄芪中的黄芪甲苷进行含量浏定。以Hypersil C18柱 (20mm×4.6mm, 5µm) 为色谱柱;以乙睛-水 (33∶67) 为流动相, 检测波长为203nm, 柱温25℃, 流速1.0m L/min, 蒸发光散射检测器 (ELSD) 参数:漂移管温度为10℃, 氮气流速为2.5m L/min。李欢欣等[14]采用反相高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。采用Kromasil C18 (250mm×4.6mm, 5µm) 色谱柱, 乙腈-水 (30∶70) 为流动相, 检测波长为203nm, 以卡马西平为内标。本法准确, 可靠, 适用于黄芪药材的质量控制。常用色谱条件见表1、2。

4 荧光法

荧光法根据黄芪甲苷与大茴香酸的反应产物具有荧光的特性, 刘养清等[26]建立了黄芪甲苷含量的荧光测定方法, 具有灵敏度高、选择性好、检测限低等优点。以2%大茴香酸-72%硫酸为荧光衍生化试剂, 于60℃水浴20min后迅速冷却, 用乙醇定容, 反应产物λex=320nm, λem=387nm, 检测限为0.02μg/m L, 线性范围是2.0~40.0μg/m L。

5 讨论

黄芪及其制剂中黄芪甲苷的含量测定早期使用较多的是薄层扫描法, 该法具有简便快速、灵敏准确、专属性好等优点, 但也存在重现性差等缺点。随着HPLC法的普遍使用, 特别是ELSD检测器的使用, 使其在测定黄芪甲苷上得以普及。

摘要：综述近年来黄芪及其制剂中黄芪甲苷定量分析方法研究状况, 主要方法有:紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法和荧光法, 为我们选择合适的方法提供依据。

黄芪甲苷篇4

1 高效液相色谱法 (HPLC法)

HPLC法因其分离度好、灵敏性高, 适用范围广等优点, 已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。

1.1 HPLC-uv法

黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷, 紫外末端吸收 (λmax200.8 nm) 。紫外检测灵敏度低, 干扰因素多, 目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。苏瑞强[1]等采用HPLC法测定黄芪甲苷的含量, 色谱柱为YWG-C18柱 (3.9mm x250 mm, 5μm) , 流动相为乙腈-水 (1:2.3) , 检测波长为203nm, 结果线性范围为0.86-5.27μg/m L, 加样回收率为97.52%, RSD为3.10%。

1.2 HPLC-示差折光检测法

由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收, 溶剂噪音对结果有较大的影响, 且其前处理繁杂。池玉梅等[2]应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量, 色谱柱为Hypersil ODS 2 (4.6mm X200mm, 5μm) , 流动相为甲醇-水 (67:33) , 结果黄芪甲苷线性范围是1-5μg/ml, 回收率为98.1%, RSD为2.02%。该法简单方便, 重现性好, 灵敏度高, 结果准确、可靠。

1.3 RP-HPLC法

路玫等[3]采用RP-HPLC法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量。色谱柱为Nova-Pak C18柱 (3.9mm x150mm, 4μm) , 流动相为乙腈-水-磷酸 (1:2:0.1) , 检测波长为203nm, 柱温为40℃。实验中将样品蒸干, 采用水饱和的正丁醇溶解, 用氨试液洗涤后蒸干, 残渣用甲醇溶解。结果加样回收率为94.7%, RSD为2.6%。该法简便、稳定性好、重现性好、灵敏度高, 且由于在流动相中加入磷酸, 可使基线平稳, 样品峰与其他峰达到基线分离。郑志仁等[4]将药材置索氏提取器提取1 h后采用RP-HPLC法测定提取液中黄芪甲苷的含量, 色谱柱为Nucleosil C 18柱, 流动相为乙腈-水 (1:2) , 检测波长为205nm。结果黄芪甲苷线性范围是1O.64~53.20μg/mL, 加样回收率为92.66%。

1.4 HPLC-ELSD法

蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化, 进入加热管后溶剂挥发;被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射, 散射光由光电倍增管收集得到响应, 光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小, 而不受流动相溶剂的干扰;不要求被检测组分有特定的化学结构。赵灵芝等[5]采用HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量, 以Blite-ODS柱为色谱柱, 乙腈-水 (36:64) 为流动相, 流速为0.8ml/min;ELSD参数中漂移管温度为1O0℃, N2流速为2.74m1/min。结果黄芪甲苷线性范围是2.016~12.096g, 加样回收率为97.43%, RSD为1.57%。该法灵敏度高, 分离度好, 干扰少, 前处理简便, 回收率高, 重现性好。周春玲等对甲醇-水 (40:60) 、四氢呋喃-水 (25:75) 及乙腈-水 (1:2) 等不同流动相进行了试验, 并考察了黄芪甲苷的分离情况及检测灵敏度, 同时通过观察峰面积、基线噪音和信噪比, 研究了漂移管温度和气体流速等ELSD参数条件。结果表明, 采用乙腈-水 (1:2) 为流动相时, 分离情况最好;最佳的测定参数是漂移管温度为105℃, 气体流速为2.96L/min;样品加样回收率为100.5%, RSD为3.23%。该法分离度好, 精密度和重现性俱佳, 回收率高。

1.5 HPLC-MS法

高效液相一质谱 (HPLC-MS) 联用仪是当前天然药物的成分、药理与临床研究中最重要的联用仪器, 能解决复杂成分样品的定性、定量问题。顾泳川等[6]建立HPLC-MS法测定大鼠尿中黄芪甲苷的含量, 并对其尿药动力学进行研究。采用Diamonsil TMC18柱为色谱柱;乙腈-水 (40:60) 为流动相;电喷雾离子化接口的四级质谱检测器, 内标为地高辛, 选择性离子检测 (SIM) 。实验中尿样加入地高辛混匀离心后, 上清液通过已活化的固相萃取小柱, 用3ml水淋洗, 残渣用2ml甲醇洗脱, N2吹干后用流动相溶解。该法专属性好, 方法灵敏度高, 最低检测限为10ng/ml, 杂质干扰小, 操作简便, 是检测体内黄芪甲苷的一种新型有效的分析方法。

2 薄层扫描法 (TLCS法)

TLCS法多采用双波长扫描法, 能消除有机成分的干扰及操作误差, 使测定的灵敏度和准确度提高, 一般有内标法和外标法。

2.1 普通TLCS法

实验中样品用氢氧化钾液提取除去酸性成分, 以正丁醇萃取使背景干扰少, 用大孔树脂分离皂苷除去样品中糖类等水溶性杂质, 并在层析缸中放一小杯氨水, 使斑点分离明显;采用硅胶G板, 以氯仿-甲醇-水 (65:35:10为展开剂, 在氨饱和蒸气环境下展开, 喷以10%硫酸乙醇溶液后加热显色。加样回收率为97.39%, RSD为1.4%。将样品超声提取后, 在硅胶GF254板上以氯仿-醋酸乙酯-甲醇 (8:6:0.8) 展开, 254 BITI紫外光灯下定位, 双波长 (λs=228 nm, λR=370 nm) 反射式锯齿扫描测定, 平均加样回收率为99.5%, RSD为2.5%。该法能准确快速地测定提取液中的黄芪甲苷含量, 取样量少, 提取过程简单, 可不经显色直接扫描测定, 且方法重现性好, 操作简单易行。

2.2 高效TLCS法

普通TLCS法的稳定性、重现性相对较差, 灵敏度较低。将样品置索氏提取器中加甲醇回流提取, 乙醚脱脂, 无水正丁醇提取后蒸干, 残渣用甲醇溶解, 在高效硅胶G板上以三氯甲烷-甲醇-水 (65:35:10) 为展开剂展开, 硫酸乙醇显色定位。结果加样回收率为98.9%, RSD为2.00%。该法简便、可靠, 重现性和稳定性均较好, 且采用索氏提取分层明显, 薄层展开斑点清晰。

2.3 薄层光密度法

将样品用水饱和正丁醇萃取, 用1%氢氧化钠液洗涤后挥干, 残渣用甲醇溶解, 在硅胶G板上以三氯甲烷-甲醇-水 (7:3:9) 为展开剂展开, 反射法单波长 (525nm) 锯齿扫描, 狭缝1.2mmx1.2mm, 背景补偿, 线性校正CH=9, SX=3。结果黄芪甲苷线性范围为1.58~7.9μg, 加样回收率为97.28%, RSD为1.06%。该法重现性好, 斑点颜色在2h内稳定。

3 比色法

比色法利用了黄芪甲苷与显色剂发生显色反应生成有色物质, 使之能用可见分光光度法测定的原理, 常见显色剂有香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、香草醛-冰醋酸等。

3.1 采用香草醛-硫酸比色法测定黄芪甲苷的含量。该法利用在浓硫酸介质中, 黄芪甲苷的酚羟基与香草醛醛基进行羟醛缩合反应的原理, 将样品用乙醇溶解后, 加入香草醛液和硫酸液, 加热15min, 于578nm处测定吸收度, 操作简单, 反应灵敏度高, 重现性好, 且无使用仪器的限制。

3.2 采用香草醛-冰醋酸比色法对黄芪甲苷的含量进行了测定, 将样品用乙醇溶解后, 加入香草醛液和冰醋酸液, 加热15min, 于578nm处测定吸收度。该法具有试剂的空白吸收值较小、对分析样品干扰小等优点。

4 荧光法

4.1 茴香酸-硫酸体系荧光法

杜呜等[7]利用黄芪甲苷在浓硫酸介质中能与茴香酸反应, 其反应产物有强烈荧光的特点, 对血清中黄芪甲苷的含量进行测定。结果黄芪甲苷与茴香酸的反应产物的最大激发波长为Ex=320nm, 最大发射波长为Em=387nm, 线性范围为0.2~40.0mg/L, 最低检测限为0.02mg/L。该法具有灵敏度高、选择性好、检出限度低、线性范围宽、操作简便、无干扰等优点。游文玮等[8]采用荧光分光光度法, 针对大鼠血清中内源性杂质干扰严重的特点, 用固相萃取净化和富集血样, 再用化学衍生荧光分光光度法测定黄芪甲苷的含量。最大激发波长为Ex=310nm, 最大发射波长为Em=376nm, 平均回收率为97.1%, RSD为2.6%。该法采用固相萃取技术, 有效地富集和净化样品, 并利用了荧光光度法灵敏度高的优点。

4.2 香草醛-磷酸体系荧光法

杜鸣等[9]利用黄芪甲苷在磷酸条件下与香草醛反应的产物具有荧光的特性, 建立了香草醛-磷酸体系荧光分光光度法测定黄芪甲苷的含量。结果黄芪甲苷与香草醛的反应产物的最大激发波长为Ex=365nm, 最大发射波长为Em=430nm, 线性范围为0.20~20.0mg/L, 最低检测限为0.106mg/L。该法具有操作简便、专属性强、重现性好、空白值较低等优点, 且样品不必经过薄层分离即可直接测定。

综上所述, 对黄芪甲苷的分析方法很多, 但大多数制剂由于成分复杂, 干扰严重, HPLC法和TLCS法因操作简单、快速、灵敏度高、重现性好而优于其他方法。近年来, 随着新型检测器如ELSD等的不断出现, 使原本无紫外吸收的黄芪甲苷也得以很好的分离;而将色谱与质谱联用 (如HPLC-MS) , 化学衍生化与荧光相结合, 则各取所长, 能同时对成分复杂的样品进行定性定量分析, 尤其在药理、临床研究中是新型有效的方法。

参考文献

[1]苏瑞强, 俞仁昌, 辛建玲, 等.正交试验法优选黄芪甲甙的提取工艺的研究.中成药, 1998, 20 (I2) :40.

[2]池玉梅, 姜海英.HPLC示差折光检测测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量.中国药学杂志, 200l, 36 (1) :l14.

[3]路玫, 蒙大平.反相高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲苷含量.中国医院药学杂志, 200I, 2I (4) :212.

[4]郑志仁, 宋纯清, 刘涤, 等.用RP-HPLC法测定黄芪毛状根中黄芪甲苷的含量.中草药, 1999, 30 (2) :98.

[5]赵灵芝, 朱丹妮, 严永清.HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量.药物分析杂志, 1999, 19 (6) :403.

[6]顾泳川, 王广基.HPLC-MS法测定大鼠尿中黄芪甲甙的含量及其尿药动力学研究.中国药科大学学报, 2002, 33 (3) :222.

[7]杜鸣, 刘养清, 严志, 等.茴香酸荧光分析法测定血清中黄芪甲甙.北京大学学报 (医学版) , 200133 (3) :274.

[8]游文玮, 吴昭晖, 佟丽, 等.喂饲补阳还五汤大鼠血清中黄芪甲甙的固相萃取-化学衍生化-荧光分光光度法测定.第一军医大学学报, 2003, 23 (4) :335.

黄芪甲苷篇5

关键词：TRIZ,HPLC,黄芪甲苷,含量测定

黄芪桂枝五物汤喷干粉由黄芪、桂枝、芍药、生姜、大枣五味药组成。具有益气温经、和血通痹；调养荣卫，祛风散邪的功效，临床上可用于治疗肩周炎、末梢神经炎、坐骨神经痛、类风湿性关节炎、中风后遗症等疾患。喷干粉在生产中常做颗粒剂，片剂或胶囊剂的中间产品，生产中具有一定现实意义。本实验应用TRIZ理论对方中君药黄芪的主要有效成分黄芪甲苷的含量测定方法进行了摸索，以期为黄芪桂枝五物汤新剂型的改进提供一定的质量依据。

1 存在的问题（矛盾或冲突）

黄芪桂枝五物汤喷干粉中黄芪甲苷的含量需要测定，但资金少仪器、药物有限这是一种矛盾。如何解决是需要思考的问题。

TRIZ理论中的理想解IFR指出技术系统是沿着提高其理想度，向最理想系统的方向进化。理想度水平衡量公式为：I=ΣUF/ΣHF

式中：I-理想化水平（理想度）；ΣUF-有用功能之和；ΣHF-有害功能之和。

所以在测量黄芪甲苷的含量过程中我们应遵循利用的资源最少，成本低，效率高的思路。TRIZ理论提供了发现，解决问题的工具和技术，可以帮助科研人员避免解决问题过程中繁琐的试凑工作。TRIZ理论自始至终强调运用积极的思维客服惯性思维的束缚，TRIZ理论中克服思维惯性的方式有很多，如最终理想解，用非专业术语描述问题，STC算子，九屏法，小人法金鱼法，物-场分析法等，通常情况下，工程技术人员解决技术问题的步骤为：一是了解具体问题、分析问题；二是查找有关资料，了解所有已有方法并比较各种方法的优缺点；三是结合具体问题的种种限制条件，设计出技术方案。TRIZ理论中常用的科学效应大约有100多个，作者在分析了该技术问题是测量问题后，直接查找TRIZ的科学效应库，从科学效应的功能代码表中查找到代码F22（检查物体容量的状态和特性）。F22中推荐的科学效应和现象有E1(X射线）、E6（标记物）、E43（放射现象）、E45（感光材料）、E50（光谱）、E3（巴克豪森效应）、E60（热磁效应）等。经综合分析上述几个方法，光谱是可以采纳的方案[1]，所以我们选择了液相色谱检测法。

2 仪器与试药

仪器：Agilent Technologies 1200Series型高效液相色谱仪；Agilent数据处理系统（美国产）；SEDEX-85蒸发光散射检测器；色谱柱：Thermo Electron corporation;Hypersil ODS(C18),(4.6mm×250mm,5um），填充为十八烷基硅烷键合硅胶。流动相：乙腈-水（32:68）；流速：1ml/min；柱温：30℃；黄芪甲苷对照品：中国药品生物检定所，批号：110781-200613。

样品来源：实验室自制。

3 溶液制备

3.1 对照品溶液的制备

按含量测定项下方法制备对照品溶液，精密称定黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每lml含黄芪甲苷0.53mg的对照品溶液。

3.2 供试品溶液的制备

取本品适量，加去离子水15ml搅拌溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次（25ml、25ml、20ml、20ml），合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次（20ml、20ml），弃去氨试液，加正丁醇饱和的水振摇提取2次（20ml、20ml），弃去水层，正丁醇液水浴蒸干，甲醇溶解定容至5ml，为供试品溶液。

4 方法学考察

4.1 线形范围及标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液适量，分别稀释成0.106、0.212、0.318、0.424、0.53mg/ml溶液，分别精密吸取10μl按上述条件进行测定，可得到相关数据。

将含量及峰面积取自然对数，进行线形回归，以峰面积自然对数值为纵坐标，以进样量（黄芪甲苷含量）自然对数值为横坐标，仅得回归方程为：Y=5.8352+1.4938X线性关系（r=0.9994），表明相关性显著，具有良好的线性关系。结果表明，黄芪甲苷在1.06μg～5.3μg之间有良好的线性关系。

4.2 阴性对照试验

取阴性样品7g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液，精密进样20μl.结果表明，黄芪桂枝五物汤固体汤剂中其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰。供试品溶液、对照品溶液、阴性溶液的色谱图见图1。

4.3 精密度试验

分别精密量取同一批黄芪甲苷对照品溶液10μl(0.53mg/ml），重复进样5次，按含量测定项下色谱条件测定峰面积，结果黄芪甲苷RSD=0.86%(n=5），表明进样精密度良好。

4.4 稳定性试验

精密称取供试品（批号：20090705)7.0217g，按含量测定项下制备供试品溶液。精密进样20μl，按设定时间连续进样5次，结果黄芪甲苷RSD=1.81%，表明样品溶液在12h内稳定性良好。

4.5 重复性试验

称取同一批号（批号：20090705）供试品5份，每份约7g，精密称定重量，按含量测定项下制备供试品溶液和测定，结果黄芪甲苷RSD=1.91%，表明方法重复性好。

4.6 加样回收率试验

取本品（批号：20090705），称取5份，每份约3.5g，精密称定，分别加入浓度为0.23mg/ml的黄芪甲苷对照品1ml，分别按含量测定项下制备供试品溶液方法制备并测定，结果见表1。

黄芪甲苷平均回收率为98.24%,RSD为1.05%；表明回收率较高，方法可靠。

5 样品测定

按上述方法测定3批样品中黄芪甲苷含量的平均值为0.0551mg/g，考虑到药材来源、以及制剂生产，贮存等因素，按降幅20%计为本品含量限定值，则其含量应不低于0.044mg/g。

6 结束语

通过以上方法学的验证，结果表明，用蒸发光散射检测器高效液相色谱法测定黄芪桂枝五物汤喷干粉中黄芪甲苷的含量，该方法操作简便、准确、重现性好，适用于该剂型的质量控制。

参考文献

[1]朱险峰,沙洪,谢小波,等.TRIZ在生物医学工程中的实证分析[J].天津大学学报(社会科学版),2010,12(9):433-437.

黄芪甲苷篇6

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪 (美国Agilent公司) ;奥泰2000ES蒸发光散射检测器 (美国) , AG245电子分析天平 (瑞士) , KQ-250B型超声清洗机 (昆山市超声仪器有限公司) 等。

1.2 试剂

乙腈 (色谱纯) ;甲醇 (分析纯) ;正丁醇 (分析纯) ;医用酒精;水为蒸馏水;黄芪甲苷 (含量测定用, 中国药品生物制品检定所, 批号120457-201331) ;排石汤 (规格:10 g/袋) 。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为C18色谱柱5μm (4.60×250 mm) ;

乙腈-水 (32∶68) 为流动相;流速:1.0 ml/min;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度100℃, 载气流速2.8 L/min;柱温:36℃;理论塔板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于4000[1]。

2.2对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品10.0 mg于50 ml容量瓶中, 加色谱甲醇超声提取黄芪甲苷冷却后加入色谱甲醇稀释定容至刻度, 制成黄芪甲苷的对照品溶液 (每1 ml含0.2 mg) 。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取排石汤颗粒10 g, 研磨均匀后置于100 ml量瓶中, 加分析甲醇200 ml溶解, 放置于超声清洗机中超声溶解40 min, 冷却后加分析甲醇定容至刻度, 混合均匀, 滤膜过滤, 所得续滤液即为排石汤颗粒供试品溶液。

2.4 含量测定方法

精密吸取黄芪甲苷对照品与排石汤颗粒样品溶液20μl, 注入高效液相色谱仪中, 记录对照品于供试品的峰面积, 通过峰面积的外标法计算排石汤颗粒中黄芪甲苷的准确含量。

3 方法学考察

3.1 标准曲线的绘制[2]精密量取黄芪甲苷对照品溶液 (0.2mg/ml) 1, 2, 3, 4, 5 ml, 置于10 ml容量瓶中, 加入色谱甲醇溶解, 同时用色谱甲醇稀释并定容至刻度, 混合均匀, 吸取上述稀释后的黄芪甲苷溶液各20μl, 同样方法注入高效液相色谱仪中, 测定对照品黄芪甲苷的峰面积。峰面积测定3次, 取平均值, 平均值测定后, 以黄芪甲苷进样量为横坐标 (X) , 黄芪甲苷平均值峰面积值为纵坐标 (Y) , 绘制线性标准曲线, 计算得到回归方程为:Y=19476.14X+76.345 (r=0.9999) , 从测定结构可以看出, 黄芪甲苷其含量在0.44~1.1μg间, 其进样量 (X) 与峰面积 (Y) 呈现良好的线性关系, 可以用峰面积来测定黄芪甲苷的含量。

3.2 精密度试验考虑到实验的精确性, 精密度试验采用注入黄芪甲苷对照品的方式来检验精密度, 对照品比供试品溶液的黄芪甲苷峰面积更不容易被其他杂志性成分所干扰, 故精密吸取黄芪甲苷对照品溶液20μl, 注入高效液相色谱仪中, 连续进样6次, 记录其峰面积, 通过峰面积值计算RSD值。最终测得峰面积的RSD=0.157%, RSD结果显示此法测定黄芪甲苷含量精密度良好。

3.3 稳定性试验取同一批次的排石汤颗粒, 按照2.3项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液, 并在于配制供试品溶液后的0、2、4、8、12、16 h按含量测定方法测定黄芪甲苷峰面积, 通过峰面积的变化来校正高效液相色谱法的丁黄芪甲苷含量的稳定性, 最终测得峰面积结果显示排石汤颗粒中黄芪甲苷含量在16 h内稳定性良好。

3.4 重复性试验取同一批次的排石汤颗粒, 精密称取6份, 参照供试品溶液制备方法制备待检样品, 吸取上述配制好的排石汤颗粒供试品溶液各20μl, 依次注入高效液相色谱仪中, 测定每份样品中黄芪甲苷的峰面积值, 通过峰面积值计算其RSD, 最终测定RSD为0.518%, 这一测定结果显示高效液相色谱法测定排石汤颗粒中黄芪甲苷含量重复性良好。

3.5回收率试验精密称取同一批号的排石汤颗粒6份, 每份10 g, 同时加入黄芪甲苷对照品10.00 mg, 混合均匀后将混合物置于100 ml容量瓶中, 加日分析甲醇80 ml, 超声提取30 min, 超声提取后将提取液置于室温冷却, 放到室温后, 加甲醇稀释并定容至刻度100 ml, 摇匀, 微孔滤膜过滤, 得到过滤后的续滤液, 续滤液即为供试品溶液, 精密吸取所得供试品续滤液20μl, 依次注入高效液相色谱仪中, 测定黄芪甲苷峰面积, 期间应注入黄芪甲苷对照品溶液校正高效液相色谱仪的基线。最终测得排石汤颗粒中黄芪甲苷峰面积。通过峰面积计算黄芪甲苷平均回收率为100.100%, 相对标准偏差RSD=1.32% (n=6) 。结果见表1。

3.6 样品测定取加排石汤颗粒3批, 按供试品溶液的制备方法制备3份供试品溶液, 每份供试品溶液测定3次平行试验, 测定含量, 结果见表2。

4 讨论

黄芪是排石汤颗粒中的主要成分, 而其特有成分黄芪甲苷在控制排石汤颗粒质量中占有重要地位, 可以简便快捷的检测排石汤颗粒的质量情况。本实验在考察黄芪甲苷测定条件时, 在参照药典对流动相的规定后甲醇-水 (40∶60) , 四氢呋喃-水 (25∶75) 及乙腈-水 (1∶2) 等不同流动相, 结果显示乙腈-水 (32∶68) 为流动相实验结果最为理想, 每次测定结果重现性良好。

排石汤颗粒的质量标准中没有对其所含药材黄芪的质量控制, 而作为排石汤颗粒的重要组成部分, 黄芪的质量情况至关重要, 同时黄芪甲苷作为黄芪的标志性成分, 其含量测定在对于排石汤颗粒的质量控制中就起着极其重要的作用, 因此为了更准确控制该品种药物的质量。选择用蒸发光检测的方法来测定黄芪甲苷的含量, 经多次测定, 排石汤颗粒中黄芪甲苷的含量限度为不低于11 mg/10 g。且通过上述方法学考察, 本实验建立了排石汤颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法, 使其质量标准更趋严谨科学完整, 并且该方法简便快捷, 结果准确, 重现性、回收率好, 能有效控制排石汤颗粒的质量。

摘要：目的建立排石汤中黄芪甲苷的含量测定方法 , 为排石汤质量标准研究奠定物质基础。方法 HPLC法测定黄芪甲苷含量, 使用C18色谱柱5μm (4.60×250 mm) ;乙腈-水 (32∶68) 为流动相;蒸发光散射检测器;流速为1.0 ml/min。结果黄芪甲苷在0.422.1μg与峰面积呈良好的线性关系 (r=0.9999, n=5) , 平均回收率为98.92% (RSD为1.56%, n=6) 。结论该法简便、快速、稳定、可靠, 可用于测定排石汤中黄芪甲苷的含量。

关键词：排石汤,黄芪甲苷,HPLC法

参考文献

[1]余灏, 杨胜华.黄芪皂苷分析方法研究近况.华西药学杂志, 1993, 8 (3) :163-166.

黄芪甲苷篇7

1 仪器与试药

日本岛津公司LC-10AT VP高效液相色谱仪,TL9000色谱数据工作站(北京泰立化电子技术有限公司),超声波清洗器;梅特勒-托利多AG135型电子天平；正丁醇、乙醇、三氯甲烷、以上均为分析纯,对照品：黄芪甲苷(批号110781)(中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙腈为色谱纯,男科清热胶囊(泰安市中医医院)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相：乙腈-水(35:65)；柱温：35℃；进样量：10μl；检测波长：205 nm。理论塔板数按黄芪甲苷计算3200。

2.2 溶液制备

取本品7.5 g(相当黄芪药材1.5 g),精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40 ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,回流4 h,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10 ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20 ml,合并正丁醇提取液,用氨试液提取2次,每次20 ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5～10 ml使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水50 ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 ml洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继用70%乙醇50 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至2 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷0.0101 g,置10 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。取男科清热胶囊的阴性样品,同法制备[1]。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验

按拟订的色谱条件测定。结果表明阴性对照无干扰。

2.3.2 线性关系考察

精取黄芪甲苷对照品不同浓度溶液批次,分别精取10μl进样,以峰面积为纵坐标、对照品质量浓度(μg/ml)为横坐标进行线性回归,r=0.9990(n=5)。表明黄芪甲苷进样量在2.51～12.55μg之间与峰面积有良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验

取同一份对照品溶液,进样测定黄芪甲苷峰面积,RSD为0.70%(n=6)。

2.3.4 稳定性试验

取同一供试品溶液,测定黄芪甲苷峰面积得RSD为2.92%(n=6),表明供试品溶液在较长时间内内稳定。

2.3.5 重现性试验

取6份同一批号样品,按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量。结果平均含量为0.034 mg/粒,RSD为1.25%(n=6)。

2.3.6 加样回收试验

分别称取已知含量的样品适量,精密加入对照品适量,按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量,计算回收率,回收率达到97.48%。

2.4 样品含量测定

取供试品溶液三批,结果分别为0.035、0.036、0.031 mg/粒,平均0.034 mg/粒。

3 讨论

黄芪在男科清热胶囊处方中是为佐使之药,有补脾益气,固护脾胃的作用,以防止苦寒败谓耗气。它的特有成分黄芪甲苷在控制男科清热胶囊颗粒质量中占有重要地位,可以简便快捷的检测男科清热胶囊颗粒的质量情况。本实验在考察黄芪甲苷测定条件时比较了多种流动相的效果,发现乙腈-水(35:65)为流动相时的效果较为理想,为最佳流动相。

男科清热胶囊颗粒的质量标准中没有对其所含黄芪的质量控制,而作为其重要组成部分,黄芪的质量情况至关重要。因此为了更准确控制该品种药物的含量,将黄芪甲苷作为测定对象。经多次测定,男科清热胶囊颗粒中黄芪甲苷进样量在2.51～12.55μg与峰面积有良好的线性关系(r=0.9990)。通过上述方法学,本实验建立了男科清热胶囊颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法,使其质量标准更趋严谨科学完整。试验结果显示,方法适合于男科清热胶囊中黄芪甲苷含量的测定,具有较好的稳定性、准确性、重复性和均匀性[2,3]。

摘要：目的建立测定男科清热胶囊中黄芪甲苷含量的标准方法。方法高效液相色谱(HPLC)法;色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(35:65),检测波长为205 nm,柱温35℃,进样量10μl。结果黄芪甲苷进样量在2.5112.55μg与峰面积有良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为97.48%(n=6)。结论该方法专属性强、重现性好、简便易行,可用于该品种的质量控制的重要组成部分。

关键词：男科清热胶囊,黄芪甲苷,HPLC

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工业出版社,2010:283.

[2]覃红萍,鲁静,林瑞超.HPLC-ELSD法测定黄芪药材中黄芪皂苷Ⅳ、17、14、15.中草药,2009,40(3):471-473.

黄芪甲苷篇8

关键词：参芪首乌补汁,黄芪甲苷,HPLC

参芪首乌补汁[1]的处方由党参、黄芪、制何首乌、黄精等4味中药组成的口服液体制剂, 其标准收载于卫生部药品标准, 中药成制剂第四册, 标准编号:WS3-B-0762-91, 具有补气养血, 益肝肾的功效, 临床用于气血不足, 肝肾亏损贫血, 神经衰弱, 产后血亏。原标准没有含量测定, 笔者采用高效液相色谱法 (HPLC) 对其进行分析测定, 并作了方法考察。

1 仪器与试药

普利赛斯XB224电子天平, 奥泰高效液相色谱仪 (Model 426Pum P, 蒸发光散射检测器 (ELSD) 3300, CSChrom Plus色谱工作站) ;参芪首乌补汁 (自制, 批号:130101、130102、130103) ;黄芪甲苷对照品 (中国药品生物制品检定所, 供含量测定用, 批号为110781-200613) , 乙腈为 (Merk KGa A) 色谱纯, 水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备

取置五氧化二磷减压干燥12h的黄芪甲苷对照品5.0g, 精密称定, 置2m L溶量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得。

2.1.2 供试品溶液的制备

取本品适量, 摇匀, 用内容量移液管精密量取30.0m L, 置分液漏斗中, 用水饱和和的正丁醇提取4次, 每次30m L, 合并正丁醇提取液, 用1%氢氧化钠溶液洗涤2次, 每次30m L, 弃去氢氧化钠洗涤液, 正丁醇液再用纯化水洗涤2次, 每次30m L, 充去纯化水洗涤液, 正丁醇液蒸干, 残渣用甲醇溶解并转移至5m L容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 即得。

2.2 色谱条件[2]

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 (Apollo C18, 5mm) ;流动相:乙腈-水 (32∶68) ;流速:1.0m L/min, 蒸发光散射检测器 (ELSD) 3300。分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL, 供试品溶液20μL, 注入高效液相色谱仪, 测定, 计算。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。色谱图见图1。

2.3 线性关系考察

取置五氧化二磷减压干燥12h的黄芪甲苷对照品25.0mg, 精密称定, 置25m L量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度。用吸管精密吸取以上对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0m L, 分别置10m L容量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 测定。以对照品进样量对数为横坐标, 峰面积对数为纵坐标绘制标准曲线, 则回归方程为:y=1.30x+12.72 (r=0.9999) ;结果表明黄芪甲苷0.1016~0.6096mg/m L范围内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取上述配置的对照品溶液20μL, 连续进样6次, 计算出黄芪甲苷平均峰面积为1801156, RSD=1.49%。

2.5 稳定性试验

分别于0, 4, 8, 12, 24h测定同一供试品溶液的峰面积, 结果表明供试品溶液的黄芪甲苷在24h内是稳定的, RSD均<2.0%。

2.6 重复性试验

按2.1.2项下制备6份供试品溶液, 进样量20μL。测得平均含量为21.45μg/m L, RSD=1.58%, 表明本品含量测定方法的重复性良好。

2.7 干扰试验

取按质量标准中的【处方】及【制法】制成缺黄芪药材的阴性对照样品, 用内容量移液管精密量取30.0m L, 照2.1.2项下供试品溶液的制备方法制备成缺黄芪的阴性对照溶液。按2.2项下采用的色谱条件进行测定。测定结果阴性对照在黄芪甲苷出峰位置无吸收峰, 表明处方中其他成分对测定无干扰 (图1) 。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的供试品6份, 每份精密量取15m L。并分别精密加入一定量和对照品 (以溶液形式加入) , 按供试品溶液制备方法及色谱条件操作, 计算回收率。结果见表1。

2.9 样品测定

取3批参芪首乌补汁 (130101、130102、130103) 样品, 按2.1.2项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份, 每个号批平行制备2份, 分别精密吸取对照品溶液10μL、20μL, 供试品溶液20μL, 按2.2的色谱条件测定, 计算, 含量测定得到的结果详细见表2。