中药药动学

关键词： 中药 抗病毒 复方

中药药动学（精选七篇）

中药药动学 篇1

1 仪器与试药

岛津公司高效液相色谱(HPLC)系统:SPD-10A VP紫外检测器,LC-10AT VP泵,CBM-102 Communication Bus Module工作站及HT-230A柱温箱;复方(自制,批号060305);五指毛桃根药材提取物(自制);补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110739-200512);氯霉素对照品(中国药品生物制品检定所,批号0303-9613);乙腈(色谱纯,美国TEDIA公司);冰醋酸(分析纯,天津化学试剂有限公司);乙酸乙酯(分析纯,天津化学试剂有限公司);甲醇(分析纯,天津化学试剂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Shim-pack VP-ODS(4.6 mm×150 mm,5.0μm);流动相:乙腈-水(30∶70);检测波长:295 nm;流速:1.0 ml/min;内标:氯霉素;柱温:室温;进样量:20μl。

2.2 血浆样品的处理方法

取血浆样品0.5 ml加入乙醚2 ml,旋涡混合提取3 min,离心(3 000 r/min,5 min)取乙醚层,水相再用2 ml乙醚同法萃取一次,合并乙醚液,37℃水浴氮气吹干,残渣加入100μl甲醇漩涡振荡1 min溶解,高速离心(10 000 r/min,2 min),取上清液20μl进样。

2.3 药动学研究

取健康雄性SD大鼠120只,体重(200±20)g,随机分为24组,每组5只,其中12组给予复方,另12组给予五指毛桃根提取物。实验前禁食(不禁水)12 h,第2天按体重灌胃给予复方(4.30 g/kg)和五指毛桃根提取物[2.24 g(生药)/kg],相当于补骨脂素3.20 mg/kg,灌胃后于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0 h尾静脉采血1 ml,置于预先肝素化的试管中,离心(3 000 r/min,10 min),取上层血浆0.5 ml放入-20℃冰箱保存备用,每1个时间点取5只大鼠。

2.4 分析方法验证

2.4.1 系统适用性试验

理论塔板数按补骨脂素计算不小于5000,该峰与其相邻色谱峰的分离度大于1.5,对称因子小于1.20。

2.4.2 方法专属性

0.5 ml空白血浆不加样,0.5 ml空白血浆中加入补骨脂素和内标物氯霉素对照品及0.5 ml给药后大鼠血浆,按照“2.2”项下处理血浆样品后,分别观察其色谱行为,结果表明血浆中内源性物质不干扰补骨脂素和内标物的测定,并且二者峰形良好。补骨脂素和内标物氯霉素的保留时间分别是14.4、6.6 min,见图1。

(A.空白血浆;B.空白血浆+补骨脂素标准品+内标氯霉素;C.大鼠灌胃复方后的血浆样品;D.大鼠灌胃五指毛桃根提取物后的血浆样品)(A.Blank plasma;B.Blank plasma with psoralen standard and internalstandard chlormycetin;C.Plasma sample of rat intragastric administration with compound recipe;D.Plasma sample of a rat intragastric administration with extractive of hispid fig root)

2.4.3 标准工作曲线及最低检测限测定

精密量取补骨脂素贮备液适量,用甲醇稀释制成10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.25、0.062 5μg/ml的补骨脂素系列对照品溶液,于4℃保存,备用。标准工作曲线的绘制:取500μl空白血浆7份,分别加入不同浓度补骨脂素系列标准品溶液100μl及内标溶液50μl,漩涡振荡混匀后,按“2.2”项下操作,分别记录色谱图。以补骨脂素与内标物的峰面积比值为纵坐标(Y),补骨脂素浓度为横坐标(X,μg/ml)作图进行直线回归,得标准曲线和回归方程:Y=0.049 3X+0.004 8,r=0.999 3,本方法补骨脂素0.0625~10.0μg/ml范围内线性良好。以信噪比S/N≥3时的浓度定为最低检测浓度,得方法定量限为0.062 5μg/ml。

2.4.4 精密度试验

取空白血浆500μl,精密加入浓度分别为10.0、5.0、0.5μg/ml的补骨脂素标准品100μl及内标溶液50μl,漩涡振荡混匀后,按“2.2”项下处理,每一浓度进行6个样本分析,与标准工作曲线同时进行计算血浆样品的浓度,求得方法的日内与日间精密度RSD:日内RSD分别为4.38%、5.10%、8.33%;日间RSD分别为4.68%、5.37%、8.02%。

2.4.5 提取回收率

取空白血浆500μl,精密加入浓度分别为10.0,5.0,0.50μg/ml的补骨脂素对照品100μl,每个浓度取6个样本,按“2.2”项下操作,测得血浆样品浓度,以样品经提取后的色谱峰面积与未经提取直接进样获得的色谱峰面积之比,考察样品的提取回收率及其RSD,结果分别为:回收率81.39%、81.07%、80.97%;RSD 2.35%、3.37%、3.14%。

2.4.6 重复性试验

精密称取适量补骨脂素标准品6份,分别置具塞试管中用10 ml甲醇溶解,每份样品取100μl加入500μl的空白血浆中,并加入50μl内标溶液,按“2.2”项下处理,依法测定,记录色谱图,求得RSD为4.54%,表明本法重复性好。

2.4.7 溶液稳定性

取空白血浆500μl,精密加入浓度分别为10.0、5.0、0.5μg/ml的补骨脂素对照品100μl及内标溶液50μl,每个浓度取6个样本,按“2.2”项下操作,进样20μ记录样品的峰面积,剩余样本置于室温保存(约28℃)6、12、24 h后重新测定,将三个浓度各时间点所测得的峰面积比进行对照,计算RSD(%)。测得各浓度样品的RSD分别为0.97%、6.31%、8.48%,实验结果表明,血浆样品经处理后于室温保存24 h后,血浆中补骨脂素浓度仍可被准确测定。

2.5 药动学研究结果

复方和五指毛桃根中补骨脂素在大鼠体内均呈一室模型主要药代动力学参数主要药动学参数见表1,其平均药-时曲线见图2。

3 讨论

补骨脂素作为五指毛桃根中最有价值的质量评价指标,对机体具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、抗凝、免疫调节、雌激素样作用和影响药物代谢等多种作用,已引起了大家的关注和兴趣。目前对于它的研究已经由简单测定药物中其含量,转化为药物体内代谢动力学等方面的研究,如GC法测定人血浆中补骨脂素和异补骨脂素的浓度[6]LC-MS法测定大鼠体内补骨脂素及异补骨脂素的药动学、组织分布和代谢[7],利用UPLC/MS/MS研究口服给药海狗丸后大鼠血浆中补骨脂素及异补骨脂素药代动力学变化[8],研究中涉及GC、LC-MS、UPLC/MS/MS等仪器,在生物样品的分析中MS较HPLC具有更高的灵敏度及定性能力,但MS存在仪器价格高,使用

两组间比较,*P<0.05,**P<0.01Between the two groups,*P<0.05,**P<0.01

成本费远高于HPLC的缺点,因此HPLC法仍是目前中药活性成分体液药物浓度测定的不可缺少的办法。本研究中为了将血浆中多种成分很好的分离,分别比较乙酸乙酯–正己烷(13∶1,V/V)萃取法,乙醚萃取法,甲醇和乙腈沉淀法处理样品,及采用不同比例的流动相体系进行筛选,以色谱图和回收率作为指标,最后确定使用乙醚萃取法处理,以乙腈∶水(30∶70)为流动相能将补骨脂素与相邻峰的完全基线分离(分离度大于1.5),所得补骨脂素峰形良好(对称因子小于1.2),其保留时间和峰面积能够准确测定。

大鼠灌胃后复方和五指毛桃根后,血药浓度数据经房室拟合后显示,补骨酯素在大鼠体内均呈一室模型,复方中补骨脂素的吸收滞后时间(Lag time)长于单味药材,其吸收速率常数(Ka)小,吸收半衰期t1/2(ka)长,吸收速度较慢,使得复方两次达峰时间较晚;两者消除速率常数(Ke),消除半衰期t1/2(ke)比较,表明复方排泄较慢,在体内的作用时间稍长;曲线下面积复方大于五指毛桃根,吸收多于后者,生物利用度相对高,两者Lag time,Tmax(1)及Tmax(2)经t检验(P<0.05),说明之间具有显著性差异,其他参数在复方和单味药材之间经t检验后并无显著性差异。从血药浓度-时间曲线可以看出,血浆中补骨脂素皆出现明显的“双峰”现象,与文献报道[9,10]情况相符,它可引起药物向组织和器官再分布,延长药物在体内的逗留时间,相应延长药物的作用时间。双峰现象产生的原因有多种,其中主要的有肠-肝循环,胃-肠循环,肠-肠循环,药物吸收时间与吸收速率不一致,伪双峰现象等[11]。补骨酯素双峰现象的原因可能与肠-肝循环有关,因补骨脂素在体内可经胆汁排泄而清除[12],胆汁中的补骨脂素在肝内经历Ⅱ相代谢反应,60%~70%以结合型式存在,补骨脂内酯的葡萄糖醛酸结合物由胆汁排泄进入小肠,被肠内菌丛水解,补骨脂素从结合物中释放出来,被肠上皮吸收,经过肝脏重新进入血液循环。

恩替卡韦的体内药动学研究 篇2

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011—2012年间的40例健康男性受试者为研究对象, 年龄20~45岁, 平均 (29.5±4.6) 岁;体质量 (61.3±16.5) kg, 身高 (170.6±2.6) cm。经检查, 受试对象的肝、肾功能正常, 血、尿常规和心电图无异常。受试者均无药物过敏史, 且在试验前及试验过程中未服用过其他任何药物。40名受试者均签署知情同意书, 试验方案通过伦理委员会批准。

1.2 试验用品

本试验使用的主要试验制剂用品为:ETV片、流动相甲醇和试验用水。其中, ETV片为中美上海施贵宝制药有限公司生产, 流动相甲醇为色谱醇, 试验用水均为去离子注射用水。其他试验试剂均符合试验标准。

1.3 试验方法

所有受试者均在试验前1d 20时后禁食, 次晨7时空腹采集血液5ml作为空白对照。然后以240ml温开水空腹口服ETV片0.5mg。为避免外界因素对药物在机体内代谢的影响, 进而影响试验数据的准确性, 要求受试者在服药4h内禁止饮食、睡觉, 2h内禁止饮水, 并对受试者的饮水和饮食均按照科学的时间表来安排。在服药后0.5h、1h、1.5h、2h、4h、8h和24h对受试者分别采静脉血5ml, 置于无菌抗凝管保存, 在14d内完成对ETV片的血药浓度测定。

1.4 观察指标

利用高效液相色谱法 (HPLC) 测定血浆样品中ETV的浓度, 并记录Tmax、Cmax的实测值。应用药动学统计学软件, 计算ETV片在健康人体的相关参数值, 通过这些参数研究ETV片在健康人体的药动学特征。对每批样品进行测定时, 均加入低、中、高即0.31、1.24、4.96μg/ml的质控, 同时确保加入过程中的随机性和平行性, 进而保证测量结果的准确性和科学性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析, 对浓度-时间曲线末端直线部分的血药浓度进行线性回归分析, 观察结果。

2 结果

2.1 即时浓度

40例受试者单剂量口服ETV 0.5mg后, 前期随着时间的延长, 即时浓度逐渐增加, 服药后1h达到最高, 随后逐渐降低 (见表1) 。

2.2 药动学参数

40例受试者单剂量口服ETV 0.5mg后, 药动学参数中Cmax和Tmax分别为3.456和1.543 (见表2) 。

注:MRT=平均滞留时间, AUC=药时曲线下面积

3 讨论

据世界卫生组织报道, 全球约20亿人曾感染过HBV, 其中超过3.5亿人为慢性HBV感染者, 在这3.5亿人中, 75%居住在亚洲。每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌 (HCC) 。原发性肝癌或肝细胞性肝癌, 在许多亚洲国家位列癌症死因的前三名。我国是全球乙型肝炎和肝癌发病率最高的国家, HBV携带者占全球总数的1/3以上, 据估计约有1.2~1.3亿HBV携带者。抗病毒治疗已成为慢性乙型肝炎治疗的关键, 只要有适应征且条件允许, 就应该进行规范的抗病毒治疗[2]。

以往的抗病毒药物 (干扰素、拉米夫定) 在临床应用中均有其局限性[3]。目前, 对于乙肝的治疗通常用综合疗法, 再依据各自的病情给予个性化的辅助治疗。研究表明, 最大限度的抑制HBV的DNA能够减轻细胞炎症坏死和肝的纤维化, 减少肝硬化等并发症的发生, 改善患者的生存质量并延长患者的生存时间, ETV为环戊基鸟嘌呤核苷类似物, 其化学名称为2-氨基-9-[ (1S, 3R, 4S) -4-羟基-3-羟甲基-2-亚甲戌基]-1, 9-氢-6-H-嘌呤-6-酮-水合物。该药对HBV多聚酶具有抑制作用。其能够通过磷酸化成为具有活性的三磷酸盐, 三磷酸盐在细胞内的t1/2为15 h。通过与HBV多聚酶的天然底物三磷酸脱氧鸟嘌呤核苷竞争, ETV三磷酸盐能抑制病毒多聚酶 (反转录酶) 的所有3种活性: (1) HBV多聚酶的启动; (2) 前基因组mRNA反转录负链的形成; (3) HBV-DNA正链的合成;主要适用于HBV活动性复制和血清谷丙转氨酶或谷草转氨酶的持续升高, 或组织学显示活动性肝病的成年慢性乙型肝炎患者[4]。

本试验选取了40名健康男性受试者, 对ETV在健康人体的药动学特征进行了研究。经过测定, 40名受试者在单剂量口服ETV 0.5mg后, 血浆中ETV的即时浓度前期随着时间的延长, 即时浓度逐渐增加, 服药后1h达到最高, 随后逐渐降低。Cmax和Tmax分别为3.456和1.543, 其他参数也比较好, 且整个试验期间受试者未出现任何不良反应, 表明该药具有一定安全性。同时本试验利用HPLC分析方法, 对血浆中ETV的浓度进行了测定, 此方法具有精准度高、专属性强、重复性好的特点, 对于ETV的药动学及生物等效性评价研究具有良好的适用性。本试验阐明了ETV在人体吸收、分布、代谢及排泄的药动学变化特征, 其主要药动学参数与国外文献报道相近, 可为指导临床制定安全、合理的给药方案提供科学理论依据。目前, ETV已经成为世界各地慢性乙型肝炎防治的一线用药和优先选择。

摘要：目的 探讨恩替卡韦的人体药动学情况。方法 选择2011—2012年间的40例男性健康受试者, 使用药物为恩替卡韦, 探讨其在体内的即时浓度与药代学参数。结果 40例受试者单剂量口服恩替卡韦0.5mg后, 血浆中恩替卡韦的即时浓度前期随时间的延长而逐渐增加, 服药后1h达到最高, 随后逐渐降低。药动学参数C max和T max分别为3.456和1.543。结论 恩替卡韦在健康人体内前期随着时间的延长, 即时浓度逐渐增加, 服药后1h达到最高, 随后逐渐降低, 具有很好的临床应用效果。

关键词：恩替卡韦,人体,药动学,研究

参考文献

[1] M Zhu, M Bifano, X Xu, et al.Lack of an effect of human immunodeficiency virus coinfection on the pharmacokinetics of entecavir in hepatitis B virus-infected patients[J].Agents Chemother, 2010, 52 (8) :2836-2841.

[2] 马忠英, 乔逸, 贾艳艳.对恩替卡韦分散片的人体生物等效性研究[J].药学服务与研究, 2010, 10 (5) :33.

[3] 郝光涛, 梁宇光, 曲恒燕.健康志愿者恩替卡韦分散片的生物等效性研究[J].中南药学, 2010, 8 (9) :21-22.

甘草提取物对阿米替林药动学的影响 篇3

关键词：甘草提取物/药理学,阿米替林/药代动力学,阿米替林/拮抗剂和抑制剂,大鼠

甘草属于豆科植物, 其药理作用多样、临床应用广泛, 许多中药方剂和中成药含甘草, 素有“十方九草”之称, 是临床最古老和常用的中草药之一。甘草也是现代制药工业的重要原料, 其提取物目前在临床上有效地用于消化系统、呼吸系统疾病及皮肤病、肝脏疾病等治疗, 在食品加工中作为调味品和甜味剂而广泛使用, 目前已扩展到保健品、化妆品领域, 因此甘草的使用存在大剂量、长期性以及与其他药物合用的普遍性问题。

甘草对机体代谢酶系统的影响较为复杂, 有研究[1,2]显示甘草提取物具有CYP3A4酶抑制活性, 其中的黄酮类成分起主要作用, Kent UM等[3]报道甘草提取物及其天然成分光果甘草定以时间、浓度依赖方式使CYP3A4酶失活。而另一方面, Paolini M等[4]报道长期大剂量使用甘草或其天然成分甘草甜素可诱导肝药酶CYP450, 尤其对CYP3A酶具有显著诱导作用, 可能导致临床合用药物的代谢增加。MuY等[5]同样报道甘草提取物对大鼠CYP450具有显著诱导作用, 通过激活孕烷X受体 (pregnane X receptor, PXR) 诱导CYP3A和CYP2C的表达。另有报道[6], 甘草中的主要成分甘草甜素具有抑制P-糖蛋白 (P-glycoprotein, P-gp) 作用, 促进乌头碱在大鼠胃肠道中的吸收, 导致口服生物利用度和血药浓度增加。而何丹等[7]研究发现, 甘草提取物及其主要成分增强Caco-2细胞膜上P-gp的功能与表达, 甘草甜素可能是影响P-gp的有效成分。总之, 甘草无论通过代谢酶还是P-gp功能的影响, 均可能改变合用药物的药动学过程。

阿米替林 (amitriptyline) 为临床常用的三环类抗抑郁药, 选择性抑制5-HT和去甲肾上腺素的再摄取而发挥抗抑郁作用, 至今仍是治疗重度抑郁症的选择药物之一。但由于阿米替林治疗浓度范围较窄、个体差异大, 许多患者可能需要长期服药, 一旦药物过量易导致严重的中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统的毒性反应[8,9,10], 因此有必要监测血药浓度甚至个体化给药, 以保证临床治疗的安全有效。阿米替林在体内主要经过CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP1A2代谢[11], 另有研究[12,13]表明阿米替林是药物转运体P-gp底物。

本实验旨在研究甘草提取物对阿米替林的药动学影响, 探讨可能发生的药动学相互作用及其作用机制, 为临床用药安全提供依据。

1材料

1.1 仪器

HP-1100高效液相色谱仪系列 (包括G1322A脱气装置、G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站) :Agilent公司;AB204-E电子天平:瑞士;TGL-16G台式离心机:上海安亭科学仪器厂;XW-80A漩涡混合器:原上海医科大学仪器厂。

1.2 药品与试剂

甘草配方颗粒:江阴天江药业有限公司, 规格:0.5g/包, 相当于饮片3g, 批号:1104023;盐酸阿米替林片:南洞庭药业股份有限公司, 规格:25mg/片, 批号:B11031;盐酸阿米替林对照品:中国药品生物制品检定所, 批号:100518-200401;阿普唑仑原料药:纯度99.7%, 太原市振兴制药有限责任公司, 批号:20091001。乙腈为色谱纯, 磷酸、三乙胺为分析纯, 水为灭菌注射用水。

1.3 实验动物

雄性Sprague-Dawey (SD) 大鼠, 体重 (180±10) g, 由浙江省实验动物中心提供, 合格证号SCXK[浙]2008-0033。

2方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent HC-C18 (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:水 (内含三乙胺0.5%、磷酸0.3%) -乙腈 (63:37, V/V) ;检测波长:240nm;流速:1.0ml·min-1;柱温:室温;进样量:25μl。

2.2 样品处理

取0.2ml待测大鼠血浆置于10ml离心管中, 精密加入20μl内标液阿普唑仑 (3μg·ml-1) 和NaOH溶液 (2mol·L-1) 100μl, 漩涡混合10秒, 加入1ml提取液正己烷-乙酸乙酯 (80:20, V/V) , 涡旋混合1分钟后离心 (4000r/min, 10分钟) 。移取上层有机相, 50℃水浴中N2吹干, 残渣用50μl流动相复溶后测定。

2.3 标准曲线制备

在10ml离心管中分别加入阿米替林标准液适量, N2吹干后加入空白血浆0.2ml, 涡旋混匀, 配制成5.8、11.6、29、58、116、232ng/ml的系列标准血浆样品, 按“2.2”项下方法处理样品后进样测定。测定结果以血浆中阿米替林的质量浓度 (X) 为横坐标, 阿米替林与内标物的峰面积比 (Y) 为纵坐标进行线性回归, 求得标准曲线方程:Y=0.0068X-0.0014, r=0.9993。结果表明, 阿米替林在5.8～232ng/ml浓度范围内线性关系良好。

2.4 方法的专属性

分别将大鼠的空白血浆、空白血浆加阿米替林和内标、血浆样品, 按“2.2”项下方法处理后进样测定。阿米替林的保留时间约为6.4分钟, 内标阿普唑仑的保留时间约为11.7分钟, 内源性杂质不干扰待测物的分离测定, 见图1。

2.5 回收率与精密度

按“2.5”项下方法制备高、中、低浓度的质控样品, 配成标准浓度为5.8、58、232ng/ml的血浆样品, 按“2.2”项下方法操作, 进行相对回收率和日内、日间精密度考察, 结果见表1。

2.6 药动学研究

14只雄性SD大鼠随机分为空白对照组和甘草组, 甘草组每天灌胃给药甘草提取物 (0.5g·kg-1, qd) , 对照组则予相应体积的生理盐水, 共8天。禁食12小时, 于第8天清晨灌服甘草提取物后, 进行阿米替林 (50mg·kg-1, 片剂碾碎后用生理盐水配成溶液) 单剂量口服给药的药动学实验。分别于给药前和给药后20、40、60、90、120、180、240、360、480、600、720分钟尾静脉取血约0.5ml, EDTA抗凝, 分离血浆, 处理后测定血药浓度, 结果见图2。

2.7 药动学参数

根据血药浓度-时间曲线, 采用DAS2.0软件通过非房室模型分析方法计算药代动力学参数。其中, 峰浓度 (Cmax) 和达峰时间 (tmax) 均为实测值;AUC0→24h按每个时间点的血药浓度以梯形法计算;AUC0→∞按下式计算:AUC0→∞=AUC0→48h+C48h/λ, C48h为最后一点的血药浓度, λ为末端消除速度常数;λ用对数血药浓度-时间曲线末端直线部分的斜率求得, t1/2=0.693/λ;CL/F为表观清除率;MRT为平均滞留时间。两组间药动学参数采用SPSS17.0统计软件进行t检验。见表2。

与空白组比较*P<0.05

3讨论

甘草对机体药物代谢酶的影响较为复杂, 有研究报道[1,2,3]甘草提取物具有CYP3A4酶抑制活性, 其中的黄酮类成分起主要作用, 但另有研究[4,5]表明甘草提取物诱导CYP450酶, 包括CYP3A和CYP2C。阿米替林在体内由多种细胞色素氧化酶参与代谢转化, 包括CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYPlA2等[11]。本文研究结果显示, 甘草使阿米替林的t1/2延长约1.5倍 (P<0.05) , 其作用机制可能是由甘草抑制代谢酶而导致的, 但其他主要药动学参数Cmax、tmax、AUC0→24h、AUC0→∞、CL/F和MRT均无显著性差异 (P>0.05) 。甘草对机体代谢酶影响这看似矛盾的研究结果, 显示了中药的复杂性。甘草化学成分众多, 不同成分对药物代谢酶作用可能相同但也可能相反, 王宇光等[4]报道甘草中18位构型不同的两差向异构体18β-甘草酸、18α-甘草酸在转录水平上分别上调和下调大鼠肝细胞CYP3A的表达。Tsukamoto S等[2]将甘草的醇提取物分离、纯化后, 发现多种黄酮类成分具有抑制CYP3A4作用, 而甘草中的主要成分甘草酸予小鼠多次给药后诱导CYP3A[4], 因此甘草对代谢酶的影响是不同活性成分综合作用的结果, 仅仅根据体外研究无法完全预测是否在体内产生作用, 本研究结果显示甘草可能通过代谢酶抑制作用使阿米替林的t1/2延长。但甘草对代谢酶的抑制作用具有剂量依赖性[1,2,3], 在本文的给药条件下仅影响阿米替林的消除相, 并未对其他药动学参数产生具有统计学意义的改变。

Chen L等[6]报道甘草中的主要成分甘草甜素具有抑制P-糖蛋白 (P-glycoprotein, P-gp) 作用, 促进乌头碱在大鼠胃肠道中的吸收, 导致口服生物利用度和血药浓度增加。而何丹等[7]研究发现, 甘草提取物及其主要成分增强Caco-2细胞膜上P-gp的功能与表达, 甘草甜素可能是影响P-gp的有效成分, 研究者认为甘草通过此功能减少口服毒物在肠道的吸收而发挥解毒作用。两者的研究结论刚好相反, 可能是由于研究方法的差异所致, 但真正原因尚有待于进一步的探究, 有研究确认阿米替林为药物转运体P-gp的底物[12,13], 奎尼丁 (P-gp抑制剂) 使阿米替林的口服生物利用度增加3倍。但本研究结果显示, 甘草并未使阿米替林的Cmax、AUC等药动学参数产生具有统计学意义的变化, 表明甘草对P-gp的作用有限甚至可能没有影响。

中药药动学 篇4

本文介绍万古霉素在肾功能衰竭患者的血药浓度监测及用药方案的调整, 使万古霉素给药方案个体化, 指导万古霉素在临床上的合理用药。

1 病例情况介绍

1.1 患者男性, 39岁, 以“‘肾移植术’10年余, 透析21个月, 发热10余天”为主诉, 入住我院。

拟:诊“ (1) 慢性移植肾失功能; (2) 发热待查”, 于2012-03-03 11:15收住入院。病史:10年余前诊断为“尿毒症”, 21个月前血肌酐升至800μmol/L, 目前血透替代治疗, 每周3次, 无尿。

1.2 入院后查体

T 37.7℃, P 88次/分, R 20次/分, BP 160/118mmHg。神志清楚, 咽部充血, 扁桃体Ⅰ度肿大, 双肺呼吸音低, 闻及少许湿啰音, 心率88次/分, 心律齐, 各瓣膜听诊区未闻及杂音。全腹平, 左下腹可触及移植肾, 无肿大, 无压痛。胸片:右肺部下野纹理模糊。初步诊断:慢性移植肾失功能:发热待查, 肺部感染?。

1.3 治疗经过

3月4号至3月16号患者反复发热, 咳嗽, 咽部充血, 双侧扁桃体П度肿大, 已先后用过左氧沙星、头孢哌酮舒巴坦和依替米星等抗生素抗感染治疗。3月4号:血常规:WBC计数15.62×109/L, GR92.8%, Hb97g/L, PLT183×109/L。。3月17号患者仍发热, 呼吸急促, 双肺闻及较多湿啰音, 散在干啰音, 心率86次/分, 心律齐。考虑原有肺部感染加重。痰培养正常菌群。期间两次癫痫发作。予:美罗培南静滴q8h, 万古霉素0.5g静滴q8h, 并请药学部会诊。药学部会诊意见:癫痫发作, 考虑癫痫误吸所致;应考虑口腔阳性菌或厌氧菌感染可能;建议:1.加甲硝唑2.因患者肾功能缺失, 应监测万古霉素血药浓度。

1.4 万古霉素个体化给药方案设计

1.4.1 患者用药情况

患者3月17日~18日万古霉素0.5, q8h;3月19日q12h。患者无尿, 万古霉素应用3天后已达一定的蓄积, 3月20日晨起采集患者血液标本。采用荧光偏振免疫法测得万古霉素血药浓度为38.85μg/mL。

1.4.2 万古霉素动力学参数及患者病例参数

万古霉素动力学参数[1]:万古霉素谷浓度:10μg/mL左右;治疗浓度区间:10~20μg/m L;Vd=0.47L/kg;F尿=95%;t 1/2=7h

患者病例参数:年龄39岁, 体重47kg;表观分布容积V=Vd×体重 (kg) =22.1L;血清肌酐浓度Cs=478.5umol/L;患者连续给药3天后测得血药浓度值C0=38.85μg/mL。

1.4.3 数据处理及调整给药方案

1.4.3.1 肾功能衰竭患者的肾清除率, 先求该药正常消除速率常数, 再推算患者药物肾清除。

该药正常人肾消除半衰期t1/2为7h, 则正常人消除速率常数由下式可得0.099。

再由一点法求肾功能衰竭竭患者的肾清除率:

由肾清除率估算药物消除速率常数:

(注:S值, 男性性患者为0;F尿为原形药物从尿中排出的分数。CLcl为正常人肌酐清除率, 一般取值120mL/min。)

1.4.3.2 预测血药浓度降至安全浓度需要的时间:

(注:万古霉素谷浓度Ct=10μg/mL;C0=38.85μg/mL;k (r) =0.0145 h-1)

按照预测, 理论值需要93小时 (约合3.8天) , 血药浓度降至10μg/mL。实际临床是72小时后再次抽血监测血药浓度, 测得血药浓度为13.09μg/mL, 接近目标浓度。故临床可根据该数据开始实施调整后的用药方案。

1.4.3.3 预测治疗浓度需要的维持剂量和给药间隔

设定静脉滴注时间为1h, 治疗浓度区间介于10~20μg/mL;下式计算维持剂量为221mg。

由治疗浓度区间可求算给药间隔时间τ=48 (h)

1.4.3.4 模拟预测拟合方案并做适当调整:理论给药间隔约为48小时, 剂量为221mg/d。剂量为方便临床取用, 按250mg近似剂量q48h拟合:

(其中k0=250mg/h;R=1.994;k=0.0145h-1;T=1h;τ=48h)

拟合结果显示, 48小时给药1次, 剂量250mg, 在该患者肾功能状态下, 血药浓度区间为11~22μg/mL, 基本接近目标要求。该方案剂量和给药间隔基本符合临床给药习惯, 暂不做调整。

1.4.4 结果

经治医师采纳该方案, 于d4晨开始给药250mg q48h, 1周后复测血药谷浓度为14.29μg/mL。经治14天, 患者肺部炎症影像基本吸收, 临床表现好转。

2 讨论

主要注意以下药学监护点

2.1 尿毒症患者, 入院后反复发热, 原有肺部感染加重, 痰培养正常菌群。已用过多种抗生素感染仍无法控制, 虽肺部病原体不明确, 后因抽搐误吸, 应考虑口腔及消化道正常菌群含肠球菌和厌氧菌。故临床给予万古霉素治疗, 同时建议其酌加甲硝唑加强抗厌氧菌。

2.2 患者肺部感染, 经痰培养仍无法明确病原体, 推荐在患者发热给药前进行肺部采痰或肺部灌洗液进行细菌培养。

2.3 注射用盐酸万古霉素说明书示:万古霉素每次静滴时间应不少于60min, 若静滴速度过快会引起红人综合征等不良反应。故该临床万古霉素静滴时间为1h。

2.4 长期以来的报道显示, 万古霉素具有肾毒性及耳毒性, 可通过监测药物浓度进行干预, 以降低毒性。2009年美国多家学会联合制定了《万古霉素治疗成人金黄色葡萄球菌感染的治疗监测实践指南》, 指出万古霉素血清谷浓度是监测疗效最准确而实用的方法[2]。而万古霉素峰浓度监测并不能降低肾毒性发生率。根据《万古霉素临床应用中国专家共识2011》推荐, 一般谷浓度约为10~15μg/mL, 治疗重症感染需15~20μg/m L[3]。

该患者肾功能已丧失, 万古霉素不能经普通血透滤除, 容易蓄积。该患者起始治疗万古霉素0.5gq8h~q12h, 血药浓度迅速蓄积达38.85μg/mL, 极易中毒。需要密切监测血药浓度, 实行个体化调整用药。

2.5 该患者万古霉素蓄积谷浓度为38.85μg/mL, 已明显超出安全的血药谷浓度20μg/mL, 立即药。经预测, 该稳态血药浓度理论上需93h降至推荐的最低有效谷浓度10μg/mL。而实际临床是72h再次抽血测得血药浓度为13.09μg/mL, 这里存在误差: (1) 计算理论肌酐清除率的血清肌酐值是抽血前一天测得而非血药浓度当时的肌酐浓度, 谷浓度采血时间点差异也会影响血药浓度波动, 且仪器检测存在偶然误差; (2) 拟合所用的参数, 如尿排泄分数和表观分布容积等存在个体差异。 (3) 理论预测时间为93h, 不符合临床实际操作时间, 实际监测时间本应在96h后可能数值更接近目标谷浓度10μg/mL, 而临床医嘱则在72h后监测血药浓度, 因此可以认为13.09μg/mL已基本接近目标谷浓度。

调整为250mg每48h静滴一次, 理论血药浓度可达11~22μg/mL, 基本接近治疗浓度区间目标。该方案于d4晨用于患者, 一周后测得万古霉素血药浓度为14.29μg/mL。此浓度在治疗浓度范围内, 且根据患者临床表现、影像学结果明显好转。故该方案设计合理, 可用于指导临床用药。

经肾排泄的药物如万古霉素, 在肾功能衰竭患者其肾排泄速度比正常人慢, 如按常规剂量极易引起蓄积而中毒, 且万古霉素不良反应较多, 个体差异大, 故对肾功能衰竭患者需进行个体化给药。本研究通过实例显示安全范围窄的药物, 经药动学方案设计, 其血药浓度在临床治疗浓度范围内, 达到安全有效的治疗, 可用于指导临床合理用药。开展个体化给药服务, 是今后临床药物治疗的大势所趋。

参考文献

[1]黄守坚, 黎明涛, 陈汝筑.个体化用药剂量设计[M].北京:人民卫生出版社, 2004:286.

[2]万古霉素治疗成人金黄色葡萄球菌感染的治疗监测实践指南[J].中国感染控制杂志, 2009, 8 (5) :373

中药药动学 篇5

关键词：氟苯尼考,仔猪,混饲给药,药动学

氟苯尼考(Florfenico1),又称氟甲砜霉素,其化学名称为D(+)-苏-1-对甲砜基苯基-2-二氯乙酰氨基-3-氟丙醇,是氯霉素类广谱抗菌药物中甲砜霉素的3位氟衍生物,呈白色、类白色的结晶性粉末,无臭,在二甲基甲酰胺中极易溶解,在甲醇、乙醇中溶解,在冰醋酸中略溶,在水或氯仿中极微溶解。乙醇、聚乙二醇400与二甲基甲酰胺以适当比例混合能增加氟苯尼考在水中的物理稳定性[1]。0.5%水溶液pH值为4.5~6.5。

氟苯尼考可用作饲料添加剂,用于预防和治疗牛、猪、禽及鱼类等的细菌性疾病,其最大特点是抗菌谱广、吸收良好、体内分布广泛,在体内残留量较低或无残留,特别是无潜在致再生障碍性贫血作用。氟苯尼考体外抗菌活性与氯霉素、甲砜霉素相似,但对耐氯霉素和甲砜霉素的细菌仍然敏感,如沙门氏菌、大肠杆菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、嗜血杆菌等,且抗菌活性优于氯霉素和甲砜霉素。猪的胸膜肺炎放线菌对氟苯尼考高度敏感。

体外抑菌试验表明,氟苯尼考在低浓度时抑菌,在高浓度时缓慢杀菌,其对大多数细菌的MBC(最小杀菌浓度)值等于或是MIC(最小抑菌浓度)值的2~4倍,且均具有不同程度的抗菌药后效应[2]。

由于氯霉素有严重的致再生障碍性贫血的不良反应,食品动物养殖生产过程现已禁止使用。研究表明,氯霉素的化学结构中芳香环上对位硝基是引起再生障碍性贫血的主要基团,而氟苯尼考在化学结构上以CH3SO2取代了NO2基团,用药后不产生再生障碍性贫血的不良反应。因此,在动物的疾病防治上,尤其是猪等食品动物上,氟苯尼考具有广阔的应用前景。临床上氟苯尼考主要用于牛、猪、家禽及鱼类的多种细菌性疾病的治疗,如由敏感菌引起的牛(各种年龄的牛)的呼吸道感染、乳腺炎,猪的传染性胸膜肺炎、仔猪黄、白痢,鸡的大肠杆菌病、支原体病、禽霍乱、雏鸡白痢及禽的慢性呼吸道病,鱼的假结核巴氏杆菌病和链球菌病等。

目前临床上氟苯尼考在用药上采用内服或者注射,但在用药后部分可能出现短暂的厌食、饮水减少和腹泻等不良反应,有时注射部位可能出现炎症[1]。另外氟苯尼考水分散性很差,入水即迅速沉淀,这在很大程度上影响了动物体对它的吸收[4]。所以本实验采用群体给药中的混饲给药法对保育仔猪进行给药。混饲是将药物均匀混入饲料中,让动物采食的同时能摄入药物。此方法适应于一些用量小、安全范围窄、长期投药、不溶于水的药物。但在混饲时必须掌握药物混饲拌料浓度,且必须混饲均匀,动物摄入量过多则会中毒,过少则达不到防治的应用效果,故在拌料时采用逐级递增混合法。

本实验中并不采用临床上氟苯尼考单纯口灌给药或者注射给药,而是采用群体给药中的混饲给药法对保育仔猪进行用药。旨在研究氟苯尼考的混饲给药在实际情况中、在存在外界因素的作用下在猪体内的实际吸收情况,并与正常的口服法做对比。

在检测方法上,已报道的氟苯尼考制剂的含量测定方法有电位滴定法、紫外分光光度法、旋光法、高效液相色谱法及毛细管气相色谱法等,其中后两者是国外文献报道中的主要测定方法。本实验中采用高效液相色谱法,简称HPLC,此方法分析对象广泛,对于挥发性低、热稳定性差、相对分子质量大的样品以及离子形的化合物等都可用各类高效液相色谱法分析[8]。此外,该方法还具有分离效能高、选择性高、监测灵敏度高、分析速度快、色谱柱可反复使用等优点[9]。

本实验对保育仔猪一次混饲给药后,于给药后的数个特定时间点,对仔猪前腔静脉采血2~3 mL并离心分离血浆,加入乙酸乙酯两次提取,提取物蒸干后加入流动相,在残留物溶解后进行离心,吸取中层的清液进行HPLC检测。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 药物标准品与试剂:

氟苯尼考标准品,购自中国兽药监察所;氟苯尼考标准贮备液;氟苯尼考标准工作液;乙腈(色谱纯);乙酸乙酯(分析纯);双蒸水,自制;流动相(乙腈∶双蒸水=1∶1)。

1.1.2 仪器设备:

高效液相色谱仪(Aglient 11000,色谱柱Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.8 mm,5μm)、氮吹仪、旋涡混合器、超声波清洗器、高速台式离心机、电子天平等。

色谱条件:流动相为乙腈∶水=30∶70(V/V),流速1 mL/min,紫外检测波长,223 nm。

1.2 方法

1.2.1 实验动物给药:

取6只保育猪,25日龄,体重6.5~7 kg。试验前,舍内饲喂不含抗菌药物的全价日粮,自由饮水。在饲料中加入氟苯尼考,按添加量66 mg/kg拌料,在拌料时采用逐级递增混合法。从仔猪开始进食为起点,在各个时间点采血。进食0.5 h为第一个时间点,并将余料清走,加药的当天停止喂食。

1.2.2 标准曲线制备:

取氟苯尼考标准贮备液和氟苯尼考标准工作液适量,加入空白猪血浆样品中,使药物浓度范围为0.03、0.1、0.3、1.0、3.0、10、30mg/L。取以上标准样品1 mL于10 mL离心管中,加入乙酸乙酯3 m L,旋涡混合4 min,超声处理5 min,4 000 rpm,离心5 min。取上清液于另一离心管中。残液中加入乙酸乙酯3 mL,旋涡混合3 min,4 000 rpm,离心5 min,合并两次提取的上清液。在氮吹仪内50℃水浴中氮气流挥干,加入1 m L流动相,旋涡混合1 min,超声处理5 min,微孔滤膜过滤,取20μL进样。

1.2.3 方法精密度和回收率:

取氟苯尼考标准贮备液适量,加入空白猪血浆样品中,配制成0.1、1.0、10.0 mg/L浓度,按照样品处理方法进行提取和测定,根据结果计算精密度和回收率。

mg/L、%

1.2.4 用药和血样采集:

氟苯尼考以66 mg/kg的添加量拌料饲喂仔猪。于给药后0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、5.0 h、7.0 h、12 h、24 h、36 h、48 h分别对实验仔猪前腔静脉采血约3mL,分离血浆,-20℃冰箱保存,待测。

1.2.5 样品检测:

将实验所得血浆按1.2.1中的检测方法进行氟苯尼考含量的测定。

2 结果

2.1 标准曲线

氟苯尼考的液相色谱峰形尖锐且对称,各组织中杂质分离良好,无干扰峰。线性回归方程Y=0.022349X-0.05106,相关系数r=0.999。

2.2 精密度和回收率

回收率的测定数据见表1。氟苯尼考混饲喂料后,于1.38 h达到最高,然后开始逐渐下降,药物在体内的浓度变化情况见图1。

2.3 色谱图

色谱条件:流动相为乙腈∶水=30∶70(V/V)时的色谱图,见图2。

2.4 药动学参数(n=6)

本实验中测得的主要的药动学参数见表2。

3 讨论

3.1 对色谱条件的讨论

氟苯尼考出峰时间受色谱条件的影响,在乙腈∶水=30∶70时的出峰时间为4.59 min,试验中发现,由于我们的提取过程没有样品的纯化过程,虽然药物的回收率比较高,但血浆中的杂质也比较多,极个别样品由于在3.5min的杂质峰特别大,而干扰了氟苯尼考出峰。对于这样的样品,我们另外将流动相比例调整为乙腈∶水=25∶75,此时药物的出峰时间为8.07 min,杂质的干扰可以消除。

3.2 对药动学结果的讨论

为本实验中采用25日龄的仔猪,混饲66 mg/kg氟苯尼考,消除缓慢,T1/2β为(25.54±6.66)h,生物利用度高。测得AUC为(230.878±5.955)mg/(h·L),Cmax为(7.441 9±0.120 7)μg/mL。刘建忠等[10]采用42日龄的仔猪,直接口灌给与20 mg/kg氟苯尼考,测得T1/2β为(12.39±7.23)h,AUC为(65.89±12.79)mg/(h·L),Cmax为(10.84±2.71)μg/mL。

本实验中采用25日龄的仔猪,刘建忠等采用42日龄的仔猪,从而考虑猪只体重和年龄对氟苯尼考药动学的影响,猪只体重对药动学参数中表观分布容积、机体清除率有显著影响,其原因可能是随着动物体重的增加,细胞外液含量相应增加,药物的分布更为广泛。而机体清除率随着体重增加可能是因为表观分布容积增加的原因。不论是同一动物种属内还是不同动物种属间体重都可能对药动学参数产生影响,但随具体药物、具体动物及具体的药动学参数而不同,或产生影响的数学模型不同。关于动物年龄对药动学参数的影响在多种动物体内有一系列的报道,年龄对药动学参数有无影响要视具体药物、具体动物及具体药动学参数而定,新生幼畜在其出生后的早期阶段由于其肝、肾功能尚未健全,对药物的代谢、处置能力可能与生长期或成年动物有显著差别,若动物的主要脏器功能基本完善之后动物日龄或年龄的增加可能对药动学参数不会产生很大的影响[11]。

给药途径影响药物的生物利用度、药效时间及持续时间。以不同的方式给药,因药物吸收、分布和代谢等过程会发生较大变化,药物的生物利用度也会有所改变。混饲给药法要考虑其他能对药物吸收和分布产生影响的因素,如饲料中的各种营养物质的存在对药动学参数的影响。本试验中虽然添加剂量是刘建忠试验的3.3倍,而Cmax仅达到单纯口灌给药的70%,体现了饲料中其它因素对药物吸收具有显著的影响。比较二者的消除半衰期,发现本试验中的T1/2β大于刘建忠的试验,同样说明由于药物的吸收受到抑制,大大延长了药物在体内的消除半衰期。令人感兴趣的是,本试验中的氟苯尼考用量是刘建忠的试验的3.3倍,而AUC值是刘建忠试验的3.5倍,说明两种给药方法虽然在药物吸收和分布、代谢方面存在差异,但二者的生物利用度是相当的。

在保育猪饲料中混饲氟苯尼考后吸收非常迅速,给药1.38 h后血药浓度已达到最高值。氟苯尼考以其他方式加药在猪体内的吸收速度也都很快,有关资料显示:猪内服氟苯尼考后吸收迅速,给药5 min后即可在血液中测到,且血中浓度较高[12]。氟苯尼考在其他动物体内的吸收速度也都很快,Beret等研究氟苯尼考在大西洋鲑体内的代谢时,肌注给药3 h后开始取样,测得血药浓度最高[13]。

药物在体内分布的广泛程度由表观分布容积Vd来体现,本次试验中混饲66 mg/kg氟苯尼考在保育猪的Vd为(1.420 6±0.334 9)L/kg,与所报道在中国对虾体内(1.301 L/kg)[7]、鸡(1.15 L kg)[3]、绵羊(1.87 L/kg)[14]、猪(1.53 L/kg[15]、大西洋鲑(1.122 L/kg)[16]体内的分布情况相差不大。

本试验中,氟苯尼考在猪体内的的消除半衰期T1/2β为(25.54±6.66)h,比报道中大西洋鲑(12.2 h)[13]、绵羊(10.07 h)[14]、肉鸡(2.68 h)[3]等的T1/2β都要大的多。而杨先乐等[17]认为,像甲壳类这种低等的水生动物主要通过触角腺和肝胰腺对药物进行排泄和降解,而鱼类等可以通过肾脏、呼吸器官等进行扩散消除,哺乳动物还可以通过肾脏等器官的主动运转对药物加以消除,因而不同动物种属间代谢器官的差异,造成其对药物代谢消除机能的差别。由此可以得到哺乳动物体内的药物代谢的消除半衰期比水生动物短。而本试验中的T1/2β却比水生动物大,也远高于刘建忠的试验测得的(12.39±7.23)h,说明由于药物的吸收受到很大的影响,混饲给药时抑制药物的吸收,其作用远大于因不同动物种属间代谢器官的差异而造成其对药物代谢消除机能的差别,从而大大延长了药物在体内的消除半衰期。

经验交流

营养调控有助增强猪免疫力

饲料对猪免疫力影响最大的是添加高铜、高锌、高碱贮(p H5.6~6.5)、高剂量抗生素,以及添加同源蛋白(如血浆、血球、肠膜、肉骨粉等)。高铜高锌对肝脏、肾脏与淋巴细胞都有破坏作用;高碱贮不利于维持体内胃的酸性环境和杀灭沙门氏杆菌等病原微生物;高剂量抗生素长期添加既增加耐药性又损伤脏器;同源蛋白主要存在传染病的安全隐患(如蓝耳病、伪狂,圆环病毒,萎缩性鼻炎等都是上世纪90年代以后出现的)。

中药药动学 篇6

关键词：腰痛宁胶囊,马钱子粉(调制),黄酒,士的宁,药动学

腰痛宁胶囊以马钱子粉(调制)为君,以土鳖虫、川牛膝、甘草、麻黄、乳香(醋制)、没药(醋制)、全蝎、僵蚕(麸炒)、麸炒苍术为辅,按一定比例配伍而成,伴以黄酒吞服。具有消肿止痛、疏散寒邪、温经通络之功效,用于寒湿瘀阻经络所致的腰椎间盘突出症、坐骨神经痛等疾病,现收载于《中国药典》2015年版一部[1]。君药马钱子为有毒中药,士的宁既是其主要有效成分又是有毒成分,占马钱子总生物碱的50%左右[2],故本课题以士的宁作为研究成分;黄酒被用于药用,历史悠久,多用于炮制[3,4,5],有研究显示,从机体细胞层面考察,黄酒配腰痛宁全方可增大各组分间的协同作用[6,7]。目前科学工作者们对腰痛宁胶囊的有效成分检测[8,9,10]、作用机制[11,12,13]、药理毒理[14,15,16]、临床观察[17,18,19]等方面已做了大量研究,但鲜见关于腰痛宁胶囊药代动力学的研究报道[20],已报道的腰痛宁胶囊药动学研究中[21,22],均是以混悬液灌胃,而非胶囊剂型给药,结果可能出现偏差,不能真实反映腰痛宁胶囊的药动学行为;且腰痛宁胶囊作为国家中药保护品种,验证其配方的合理性,既是对患者负责,也为指导临床安全合理用药提供参考。本课题比较了马钱子粉(调制)胶囊组、腰痛宁胶囊组以及腰痛宁胶囊配黄酒组中士的宁在家兔体内的药动学行为,为腰痛宁胶囊全方配伍合理性提供了依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验仪器Agilent Technologies 1260Infinity高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),AL 104型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司),AE 240型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司),MX-S可调式混匀仪(北京大龙兴创实验仪器有限公司),KQ-700DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司),TDL-40B型离心机(上海安亭科学仪器厂),TG16-WS台式高速离心机(长沙湘仪离心机有限公司),TDA-8002型水浴锅(余姚明伟仪表厂)。

1.1.2药品与试剂士的宁对照品(中国食品药品检定研究院,供含量测定用,按97.1%计,批号:110705-201307),肝素钠注射液(常州千红生化制药股份有限公司),庚烷磺酸钠、磷酸(色谱纯,天津市光复精细化工研究所),磷酸二氢钾(分析纯,天津市标准科技有限公司),甲醇、乙腈(色谱纯,赛默飞世尔科技有限公司),氢氧化钠(分析纯,天津市佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司),二氯甲烷(分析纯,天津市科密欧化学试剂有限公司),试验用水(超纯,由Milli-Q制备),马钱子粉(调制)胶囊(课题组自制),马钱子粉(调制)(由颈复康药业集团有限公司提供),腰痛宁胶囊、黄酒(由颈复康药业集团有限公司提供,批号:491203)。

1.1.3实验动物新西兰兔,体重(2.5±0.5)kg,雌雄兼备,由北京隆安实验动物养殖中心提供,许可证号:SCXK(京)2014-0003。

1.2马钱子粉(调制)胶囊制备

取马钱子粉(调制)装1号胶囊,备用。

1.3动物给药方案及样本采集

新西兰兔禁食不禁水12h后,随机分为3组,每组5只。根据文献[10]及预实验结果,结合士的宁在马钱子粉和腰痛宁胶囊中的质量分数计算,折合给药剂量:马钱子粉(调制)胶囊组(以下简称马钱子粉组)为166.4mg/kg;腰痛宁胶囊组为416mg/kg;腰痛宁胶囊配黄酒组为腰痛宁胶囊416mg/kg,黄酒3.45mL/kg。按上述剂量以胶囊形式灌胃给药,腰痛宁胶囊配黄酒组用灌胃器送服黄酒。每只新西兰兔分别于给药前及给药后0.25、0.50、0.75、1.0、1.50、2.0、2.50、3.0、3.50、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0h耳缘静脉取血3mL置肝素化离心管中,3 000r/min离心10min,分离血浆,-20℃冷冻保存。

1.4血浆中士的宁浓度检测

1.4.1色谱条件Agilent 5TC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),Agilent TC-C18预柱;以乙腈为流动相A,0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调pH=3.0,临用前配制)为流动相B,甲醇为流动相C,梯度洗脱条件:0~22min,A从20%→20%,B从79.5%→79.5%,C从0.5%→0.5%;22~30min,A从20%→40%,B从79.5%→60%,C从0.5%→0%;30~35min,A从40%→20%,B从60%→79.5%,C从0%→0.5%;35~40min,A从20%→20%,B从79.5%→79.5%,C从0.5%→0.5%。VWD检测器,检测波长为254nm;流速为1.0mL/min;柱温为25℃;进样量为70μL。

1.4.2血浆样品处理方法取待测血浆样品,37℃水浴解冻,精密吸取1.5mL置50mL离心管中,加乙腈和2mol/L NaOH溶液各0.5mL,涡旋30s,置冷水中超声15min,加二氯甲烷5mL,涡旋1min,3 000r/min离心10min,收集下层液;残液再加二氯甲烷4mL重复提取;合并两次下层液于37℃水浴氮气吹干,100μL流动相复溶,涡旋1min,12000r/min离心15min,取上清液,即得供试品溶液。

1.4.3标准溶液配制标准储备液配制:取士的宁对照品适量精密称定,置10mL棕色容量瓶中,甲醇溶解并定容,配成浓度为0.8351mg/mL的士的宁储备液,-20℃冷藏备用。

标准溶液配制:精密吸取士的宁储备液适量,用流动相稀释并定容,得到质量浓度为0.04、0.22、0.38、0.75、1.50、4.45、7.52、15.03μg/mL士的宁系列标准溶液,4℃冷藏备用。

标准样品、质控样品制备:分别吸取新西兰兔空白血浆1.5mL,分别加入士的宁系列标准溶液20μL,涡旋30s,配成质量浓度为0.60、3.01、5.01、10.02、20.04、55.67、100.21、200.41μg/L的系列标准含药血浆样品,按“1.4.2”项下操作,制成不同浓度的标准供试品溶液。同法操作,制备定量下限(0.60μg/L)、低(1.80μg/L)、中(55.67μg/L)、高(150μg/L、200.40μg/L)不同质量浓度水平的质控样品供试品溶液。

2实验结果

2.1选择性

依照本实验条件,士的宁峰与其他峰分离良好,峰形对称,血浆中内源性物质无明显干扰。结果见图1。

2.2残留

通过先后注射高浓度质控样品、空白样品后,在空白样品色谱图士的宁峰相应位置无残留。

2.3标准曲线与定量下限

按照“1.4.3”项下制备3批不同浓度的标准供试品溶液,按照“1.4.1”项下色谱条件自动进样分析。以士的宁血药浓度C(μg/L)为X,峰面积为Y,用加权(1/C2)最小二乘法进行线性回归运算,结果表明,士的宁血药浓度在0.60~200.41μg/L范围内线性关系良好,三批线性回归方程分别为:Y=1.340X+1.479,r=0.9980;Y=1.487X+1.710,r=0.9985;Y=1.454X+1.323,r=0.9980。定量下限为0.60μg/L。

2.4准确度与精密度

按照“1.4.3”项下方法于制备定量下限(0.60μg/L)、低(1.80μg/L)、中(55.67μg/L)、高(150μg/L)4个不同质量浓度水平的质控样品供试品溶液,平行样5份,测定;连续测定5天,每天每个浓度制备1个样品,每个样品测定1次。记录士的宁峰面积,根据随行标准曲线线性回归方程计算质控样品浓度,求得批内、批间准确度与精密度,准确度表示为:(测得值/真实值)×100%,精密度表示为RSD值,结果均符合生物样品定量分析方法验证要求。数据见表1。

(n=5,%)

2.5稳定性

标准储备液稳定性:考察士的宁标准储备液在室温放置0、4、8、12h稳定性以及士的宁标准储备液在-20℃储存0、1、3、5、10、15、30d的稳定性,按照“1.4.3”项下方法稀释成15.03μg/mL,进样10μL测定峰面积,RSD值分别为室温:1.81%;-20℃:1.64%,均小于2%,符合生物样品定量分析方法验证要求,表明士的宁标准储备液在室温储存12h、-20℃储存30d稳定性良好。

标准溶液稳定性:考察士的宁标准溶液(0.22、4.45、15.03μg/mL)在4℃储存0、1、3、5、10、15、30d稳定性,分别进样10μL测定峰面积,RSD值分别为1.96%、1.34%、0.25%,均小于2%,符合生物样品定量分析方法验证要求,表明士的宁标准溶液(0.22、4.45、15.03μg/mL)在4℃储存30d稳定性良好。

质控样品稳定性:按照“1.4.3”项下方法制备低(1.8μg/L)和高(200.4μg/L)浓度质控样品,考察质控样品在室温放置0、4、8、12、24h的稳定性;-20℃到室温冻融循环0~3次稳定性;-20℃保存0、5、10、15、20d稳定性以及质控样品按照“1.4.2”项下操作所得供试品溶液在室温放置0、4、8、12、24h的稳定性。结果-20℃保存10d内稳定,0~10d测得每一浓度的均值与标示浓度的偏差分别为5.99%、0.14%;质控样品室温存储偏差:9.93%、3.01%;-20℃冻融循环偏差:10.79%、4.36%;质控供试品溶液室温静置偏差:8.93%、0.41%。每一浓度的均值与标示浓度的偏差均在±15%以内,符合生物样品定量分析方法验证要求,表明质控样品(1.8、200.4μg/L)分别在室温放置24h、-20℃冻融循环3次、-20℃保存10d稳定性良好,质控供试品溶液室温静置24h稳定性良好。

2.6药物代谢动力学行为

按照“1.3”项下方法进行动物分组及处理,按照“1.4.2”项下方法操作测得马钱子粉组、腰痛宁胶囊组、腰痛宁胶囊配黄酒组血浆样品中士的宁的浓度,以血样采集时间T(h)为横坐标,平均血药浓度C(μg/L)为纵坐标,绘制士的宁血药浓度-时间曲线,见图2。

采用DAS 3.2.7软件包进行房室模型拟合,利用统计矩法计算药物动力学参数(非房室模型),并对主要参数进行t检验,结果见表2。结果表明,家兔灌胃马钱子粉(调制)胶囊、腰痛宁胶囊、腰痛宁胶囊配黄酒后,以1/C2为权重系数,三组士的宁代谢过程均符合三室开放模型。t检验结果表明,腰痛宁胶囊组与马钱子粉(调制)胶囊组的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、CL、V、Cmax有显著性差异,腰痛宁胶囊配黄酒组与马钱子粉(调制)胶囊组的CL、V、Cmax有显著性差异;腰痛宁胶囊配黄酒组与腰痛宁胶囊组药动学参数虽无显著性差异,但AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax均大于后者。

3讨论

前期研究中已对含士的宁血样处理方法、色谱条件进行了探索[22],后根据2015版《中国药典》中“生物样品定量分析方法验证指导原则”进行了调整并验证,方法准确,重复性高,所测项目均符合指导原则验证要求。

中药药动学 篇7

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1200型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);高速离心机(北京京立离心机有限公司);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司);DL-360A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司),AB265-S分析天平(Mettler Toledo公司);组织捣碎机(上海思伯明仪器有限公司);旋转蒸发仪(巩义市英峪仪器厂)。

1.2 试药

藤甲酰酐纳米乳剂(辽宁省新药研发重点实验室制备);肝素钠(国药集团化学试剂有限公司);生理盐水(辽宁民康制药有限公司);医用酒精(湖北兴银贺化工有限公司)。

1.3 动物

雄性Sprague-Dawley(SD)SPF级大鼠,体重(200±20)g(辽宁长生生物技术有限公司提供,许可证号:SCXK2010-0001)。

2 方法与结果

2.1 大鼠体内药物动力学

2.1.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm);R流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(87∶13,V/V)为流动相,流速:1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长:331 nm,进样量:20μL。

2.1.2给药方案

取SD大鼠9只,随机分成高剂量(16.80mg/kg)、中剂量(2.76 mg/kg)和低剂量(1.38 mg/kg)3组,每组3只。实验前禁食一夜(自由饮水),大鼠尾部静脉分别注射三种剂量的藤甲酰苷纳米乳剂,于给药后5、15、30、45、60、120、180、240 min眼眶出取血0.5 mL,放入经肝素处理过的离心管中,以2000 r/min转速离心15 min,精密吸取上层血浆,置于干净的样品管中,放入冰箱中冷冻保存备用。

2.1.3 血浆样品的处理及测定[4]

精密吸取大鼠血浆样品100μL,加入甲醇400μL,超声10 min后,于4000 r/min离心15 min后取上层清液过0.45μm滤膜,取20μL注入高效液相色谱仪。

2.2 大鼠体内组织分布

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm);R流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(87∶13,V/V)为流动相,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:331 nm,进样量:20μL。

2.2.2给药方案

取SD大鼠15只,随机分成心、肝、脾、肺、肾5组,每组3只。实验前禁食一夜(不禁水),给药剂量为16.8 mg/kg,分别于给药后10、15、45、60、120、180 min(每个时间点3只大鼠)断头处死大鼠,放尽血后,取出心、肝、脾、肺、肾,用生理盐水将血冲洗干净,用滤纸吸干水分,至冰箱中冷冻保存备用。

2.2.3 组织样品处理及测定处理方法:

大鼠心、肝、脾、肺、肾组织各取0.5 g,加入生理盐水1 mL,剪碎,制成匀浆液。精密取匀浆液100μL,加入甲醇400μL,超声10 min后,于4000 r/min离心15 min后取上层清液过0.45μm滤膜,进行测定。

2.3 大鼠体内药物动力学结果

2.3.1 专属性试验

按“2.2.3”项下方法处理和检测空白血浆、加药血浆、和血浆样品,结果表明血浆内源性物质对药物检测无影响分离度高,专属性好,见图1～3。

2.3.2 标准曲线的建立精密称取藤甲酰苷25.

0 mg于10 mL容量瓶,加30%DMSO的水溶液,超声溶解,配制成藤甲酰苷标准品溶液。取空白血浆,精密加入藤甲酰苷标准品溶液0.5 L,分别用甲醇稀释成浓度为250.000、188.125、126.250、64.375、2.500μg/mL的藤甲酰苷溶液,按“2.1.3”项下方法处理,以峰面积为纵坐标,药物浓度为横坐标进行线性回归,结果得线性方程为:A=2.5260C-5.0136,r=0.9998,藤甲酰苷在2.95～250μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.3.3 空白血浆的回收率与精密度药物藤甲酰苷高、中、低三个浓度(150.

20、90.80、2.95μg/mL),平均回收率为107.49%、105.64%、109.51%(n=5),日内精密度的RSD值分别为4.43%、2.38%、2.66%(n=5),日间精密度的RSD值分别为4.35%、3.66%、3.81%(n=5)。

2.3.4 大鼠体内药代动力学

大鼠尾静脉注射高、中、低三个剂量的藤甲酰苷纳米乳剂后,其体内血药浓度—时间曲线见图4。采用3P97药动学软件处理后根据AIC法和F检验,求算其药代动力学参数,结果表明藤甲酰苷纳米乳剂在体内过程符合2室模型,权重系数为1/c,主要药动学参数见表1。

2.4 大鼠体内组织分布结果

2.4.1 专属性考察

按“2.3.3”项下方法处理和检测空白组织匀浆,加药组织匀浆和组织匀浆样品,结果表明组织匀浆的内源性物质对药物检测无影响分离度高,专属性好。

2.4.2标准曲线的制备

精密称取藤甲酰苷标准品2.36 mg于10 mL容量瓶中,用30%DMSO水溶液稀释成浓度为236、118、59、29.5、14.75μg/mL的藤甲酰苷标准品溶液,取大鼠心、肝、脾、肺、肾各组织匀浆0.1 mL,分别加藤甲酰苷标准品溶液0.1 mL,再分别加入甲醇0.3 mL,配制成47.20、23.60、11.80、5.90、2.95μg/mL系列浓度的标准品溶液,超声,离心,取上清液,进样,以峰面积为纵坐标,药物浓度为横坐标,得到各组织标准曲线方程,见表2。

2.4.3 精密度和回收率实验

取高、中、低三个剂量(23.6、11.80、2.95μg/mL)的藤甲酰苷水溶液,对日内、日间的药物精密度和回收率进行考察,结果高、中、低三种浓度的组织样品中方法回收率在85%～115%,日内和日间精密度的RSD均小于10%,均符合要求。

2.4.4 大鼠体内组织分布

大鼠尾静脉注射剂量为16.80 mg/kg的藤甲酰酐纳米乳剂后于10、15、45、60、120、180 min处死大鼠,取出各组织,按“2.3.3”项下方法,得出各组织的药物含量,见图5,由实验结果可知,高剂量注射藤甲酰酐纳米乳剂后,大鼠体内的各组织均有一定的分布,在体内最高浓度的大小顺序为脾>肺>肾>肝>心,所以说藤甲酰苷纳米乳剂有脾靶向性的特点。

3 讨论

藤甲酰苷具有一定的毒性,制成纳米乳剂后改变其体内行,增强其靶向性,大大降低了药物的毒性,而且具有一定的缓释效果。

本实验结果表明,通过拟合后,平均血药浓度-时间曲线在大鼠体内符合二室模型[5]。大鼠尾静脉注射藤甲酰苷纳米乳剂后,呈现一定的缓释作用,由药动学参数可知,藤甲酰苷纳米乳剂在大鼠体内的血药浓度是呈单指数下降的方式[6],表明乳滴在大鼠体内是属于物理消除。通过中、低剂量给药后藤甲酰苷药动学参数对比发现,AUC随剂量增加而成比例增加,T1/2α无显著性差异,说明在此剂量范围内藤甲酰苷的消除为线性消除[7];而高、中剂量给药后AUC不成比例,将使血药浓度与之不成比例的升高或下降。T1/2α显著延长表明藤甲酰苷在高剂量范围内大鼠体内消除过程呈现非线性动力学特征,剂量微小变化。

从本研究结果可以看出,静脉注射高剂量的藤甲酰苷纳米乳剂后,药物在大鼠体内的各个组织都有一定量的分布,并且在体内组织分布的最高浓度的大小顺序为脾>肺>肾>肝>心。藤甲酰苷在各组织中的浓度,脾内的药物浓度较大,并且在15 min左右,药物的浓度达到最大值;其次是肺,在50 min左右处达到药物的最大浓度,而肝是在60 min左右达到药物的最大浓度,肾是在20 min左右的时候达到药物的最大浓度。而心脏的药物浓度是最低的。并且随着时间的增长,大鼠体内各个组织器官中藤甲酰苷药物的含量迅速下降,到180 min后,藤甲酰苷在各个组织器官的含量比较低,并且各个组织中藤甲酰苷含量没有明显的差别,产生这种现象的原因与静注其他胶体系统(如脂质体、纳米粒等)相同[8],即网状内皮系统巨噬细胞(RES)截留[9]。

由以上实验结果可知,藤甲酰苷在脾中的分布较多,在剂型研究过程中应考虑通过某些方式来改变其体内分布[10],使药物在肝脏中有更多的分布,使药物发挥更强大的药理作用。

参考文献

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[3]Guo QL,Q Qi,You QD,et al.Toxicological Studies of Gambogic Acid and its Potential Targets in Experimental Animals[J].Basic&Clinical Pharmacology&Toxicology,2006,99:178-184.

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