关键词： 浓度
复方提取（精选八篇）
复方提取 篇1
关键词：正交试验,醇沉工艺,紫外分光光度法
1 材料与方法
1.1 试药及仪器
秦皮等(西南民族大学动物药理实验室提供);秦皮乙素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110741-200506，纯度为100%);其他试剂均为分析纯。TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司生产);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂生产);RE-3000A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂生产);Eppendorf 5804高速离心机(德国生产)。
1.2 试验方法
1.2.1 药品前处理
供试品制备取原处方(复方秦皮)共450g，按水提工艺最佳条件进行处理后，高速离心10min, 6000r/min，把上清液合并后定容至450mL，以进行醇沉浓度的考察。
1.2.2 考察指标的确定
除杂目的是降低出膏率，最大程度地保留有效成分，因此将浸膏得率作为考察指标之一，在有效成分明显的前提下，浸膏得率越高则纯度越低。把浸膏得率设为负权重系数(-0.3)，以方中君药———秦皮中秦皮乙素的含量作为评价指标，权重系数均定为0.7，进行综合评价，筛选最佳精制工艺。
1.2.3醇沉浓度的考察
量取一定体积的提取液数份，分别浓缩至1∶2 (g/mL)，加入规定量的乙醇，使醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%，放置24 h，离心，上清液定容至100 mL，结果可见：60%、70%、80%的醇沉浓度可保留较多有效成分，澄明度较好，在放置48 h后没有明显的沉淀出现，故选择60%、70%、80%的醇沉浓度分别作为正交试验醇沉浓度的3个水平。
1.2.4 醇沉工艺条件正交试验设计
精制工艺中A、B、C是影响醇沉工艺的主要因素，因此采用这3个因素作为考察对象。选择药液/药材浓度(A)、醇浓度(B)、醇沉时间(C)作为影响因素进行L9 (34)正交试验。影响因素水平见表1。
1.2.5 标准品溶液的制备
将秦皮乙素置五氧化二磷减压干燥器中干燥24 h，称取秦皮乙素约9.980 mg，用甲醇溶解后移至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成0.099 8 mg/mL的对照品溶液，摇匀，备用。
1.2.6 供试样品溶液的制备
取原处方量共450 g，按水提工艺最佳条件进行处理后，分成9份，按正交设计表的实验条件进行实验，定容至100mL。取5m L定容至25mL，经0.45μm微孔滤膜，制成供试品溶液。
1.2.7 线性范围的考察
精密吸取标准品溶液1、2、3、4、5 mL分别置于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀。以甲醇为空白对照，在349nm处测定吸收度。以吸收度作为纵坐标(Y)，浓度作为横坐标(X)进行线性回归，得到回归方程为Y=0.099 8X-0.008 36, r=0.999 6。实验结果表明：药物有效成分———秦皮乙素在3.92～19.96μg/mL范围内呈良好的线性关系。
1.2.8 干膏收率的测定
取原处方量共450 g，按水提工艺最佳条件进行处理后，分成9份，按正交设计表的实验条件进行实验，定容至100 mL，精密吸取20 mL，定容至一定体积后，再精密吸取20 mL置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干。然后于100℃真空干燥箱中干燥3 h后冷却0.5 h，迅速称重，按下式计算干膏收率。
注：综合评分=(干膏收率/最大干膏收率)×30+(秦皮乙素含量/最大秦皮乙素含量)×70
注：F0.05 (2, 2)=19.00;F0.01 (2, 2)=99.00
式中：W′为干膏重量，V为定容的体积，V′为精密吸取的体积，W为药材的重量。
2 结果
2.1 精制工艺条件下所得干膏收率、秦皮乙素及综合评分结果见表2，方差分析见表3。
由表3可知，因素C对有效成分损失的影响极显著，因素A、B对秦皮乙素含量的影响不显著。结合极差可见：各因素对药物有效成分损失的影响程度依次为C>A>B，即醇沉时间(C)>药液/药材浓度(A)>醇浓度(B);最佳醇沉工艺条件为A3B1C3，即优选精制工艺为药液浓度1.1～1.2g/mL，醇浓度60%，放置时间24 h。
3 讨论
本样品为中药复方制剂，且药味较多，秦皮为主药，故采用秦皮的有效成分秦皮乙素作为含量测定的指标。本文先将主要成分给以合理的权重系数，以达到更加有效地控制该药质量的目的。由于注射剂型要求澄明度很高，故选用醇沉工艺，经本试验筛选出了合理的醇沉工艺参数。醇沉时间是主要的影响因素，决定药液里面有效成分的损失;其次，药液的密度也是很重要的。这些都给今后的试验做出了一定的参考。
复方牛胎肝提取物片说明书 篇2
复方牛胎肝提取物片15-30天为一个疗程，复方牛胎肝提取物片用于急、慢性肝炎，肝纤维化，脂肪肝，肝硬化等症的辅助治疗。其中脂肪肝大家肯定都知道了，脂肪肝，是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。
要想药物发挥应有的疗效，除了要对症下药以外，按时按量服用也十分重要，不然哪怕吃对药了，药物的疗效也不明显。疗程是针对病情经用药多长时间后所达到何种程度，然后再决定新的治疗方案，称为一个疗程。疗程的长短是根据临床经验来确定。 如一个疗程7天，服用2个疗程就是连续服用14天。一般慢性疾病或比较长时间用药的疾病就要按疗程用药，就是把一个疾病分段治疗观察，一个疗程治疗后根据情况调整药物，(因为慢性病一两天看不到效果的)但并不是说吃了一疗程就不吃了，要根据病情情况停药。
复方提取 篇3
【关键词】 黄芪;黄精;党参;抗衰老;SOD;MDA;GSHPX
文章编号:1003-1383(2009)05-0530-02
中图分类号:R 285.5文献标识码:A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.05.008
黄芪是豆科植物,膜夹黄芪(Radix Astragali Seu Hedysari,RASH),是一种常用的补益中药,具有补气表固,益气活血,排毒等增强机体抵抗力的作用[1,2]。黄精始载于《明医别录》,为百合科黄精属(Liliaceae)多年生草本植物,性味甘平,具有抗衰老、降血脂、降血糖、免疫调节等作用,也是常用的补气养阴药[2]。党参为桔梗科植物(Radix codcnopsitls pilosulas),具有调节血糖、促进造血机能、降压、抗缺氧、耐疲劳、增强机体免疫力等作用,是常用的补中益气药[2,3]。祖国医学家将以上三味药列为滋补上品,对它们给予高度评价。正因如此,本文笔者以D半乳糖致衰老小鼠为实验动物模型,研究复方黄芪、黄精、党参提取液对抗衰老的作用,为祖国医药的开发和研究中草药对抗衰老作用提供参考。
材料与方法
1.药品与试剂 复方黄芪、黄精、党参提取液自制,用蒸馏水配成所需浓度。置于4℃备用,SOD、MDA、GSHPX试剂盒由南京生物制品研究所提供;D半乳糖由上海试剂二厂提供。
2.实验仪器 722分光分度计(上海精密科学仪器有限公司);HH2恒温数显水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);800型离心沉淀器(上海手术器械厂);H1微型混匀器(上海康和光电仪器有限公司)。
3.实验动物 昆明种小白鼠60只,体重18~22 g,由右江民族医学院动物实验中心[许可证号:SCXK(桂)2003-0001]提供。
4.实验方法
(1)复方黄芪、黄精、党参提取液:取黄芪80 g、黄精80 g、党参80 g加自来水1500 ml煎熬2个小时,4层纱布过滤,药渣用1000 ml自来水煎熬2个小时,合并滤液水浴浓缩到500 ml,相当于每毫升提取液中含原生药0.48 g,4℃保存备用。以上三味药均购自右江民族医学院附属医院中心药房。
(2)动物分组及处理:将60只小鼠随机分成4组,每组15只,即空白对照组、衰老模型组、低浓度治疗组、高浓度治疗组。低浓度治疗组和高浓度治疗组分别以4 g•kg-1•d-1和8 g•kg-1•d-1提取液灌胃给药,1次∕日。衰老模型组和正常对照组每日灌胃等量生理盐水,与小鼠造模后第11天开始用药,共用药30天。
(3)动物造模方法:衰老模型组、低浓度治疗组和高浓度治疗组小鼠每日颈背部皮下注射5%D半乳糖0.5 ml,空白对照组则每日颈背部皮下注射生理盐水0.5 ml,共用药40天。
(4)血清中SOD、MDA、GSHPX的测定:于最后一天灌胃和注射D半乳糖2 h后,经眼眶取血,肝素抗凝(4℃保存)用于血清中SOD、MDA、GSHPX的测定,参照南京建成生物工程公司试剂盒说明书的方法步骤测定。最后断头处死小鼠。
5.统计学处理 实验数据用均数±标准差(-±s)表示,采用方差分析处理数据,使用上海科学技术出版社出版《医用统计程序集》版本2.0。
结果
复方黄芪、黄精、党参提取液能显著提高D半乳糖致衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.01),显著降低丙二醛(MDA)的活性(P<0.01),并能提高谷胱甘肽(PSHPX)的活性。见表1。
讨论
自由基学说认为自由基能引起细胞发生不可逆的损坏,从而增加有机体病变和死亡的可能性。因此,可以通过抑制或减少有机体组织中自由基的浓度而延长有机体的寿命。文献报道[4],随着年龄的增长,SOD和GSHPX的活性下降,MDA的含量增加。大量实验研究表明由D半乳糖致衰老小鼠是较理想的动物衰老模型之一,能使小鼠血清中SOD和GSHPX的活性下降,MDA的含量增加。SOD是有机体内唯一能直接清除代谢过程中产生的自由基的酶,GSHPX是有机体内另一个能够帮助清除自由基的酶,而MDA是脂质氧化分解的产物。因此,可将SOD活性的大小作为有机体抗衰老能力的一项重要指标。从实验结果可以看出,实验组小鼠血清中SOD的活性与模型组小鼠血清中SOD的活性相比较差异具有显著性(P<0.01)。说明复方黄芪、黄精、党参提取液具有提高小鼠血清中SOD活性的作用。低浓度治疗组小鼠血清中SOD的活性与正常对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。而MDA是脂质过氧化反应的产物,其生成的多少可以间接地反映组织损伤程度。实验结果还显示,实验组小鼠血清中MDA的含量与模型组比较差异具有显著性(P<0.01)。说明复方黄芪、黄精、党参提取液具有提高小鼠血清中SOD活性的作用,通过提高有机体自由基清除剂的活性,抑制自由基的产生,减少脂质过氧化反应,保护组织免受氧化剂和自由基的攻击,从而发挥其抗衰老作用。GSHPX是存在有机体中另一个能够帮助清除自由基的重要酶,实验结果表明,复方黄芪、黄精、党参提取液能够不同程度的提高D半乳糖致衰老实验小鼠血清中的GSHPX的活性,但与模型组小鼠血清中GSHPX的活性相比较差异无显著性(P>0.05)。实验结果还提示,低浓度组小鼠血清中SOD的活性与MDA的含量和高浓度组小鼠血清中SOD的活性与MDA的含量相比较差异无显著性(P>0.05),且高浓度组小鼠血清中SOD的活性与MDA的含量和正常对照组小鼠血清中SOD的活性与MDA的含量相比较差异也无显著性(P>0.05),因此复方黄芪、黄精、党参提取液的剂量与抗衰老的效果之间的关系尚有待进一步研究,而且是否与实验时间长短,小鼠种系有关,也有待进一步研究。
综上所述,复方黄芪、黄精、党参提取液具有抗衰老作用,由于实验条件的限制,本实验仅对其进行初步研究,对于其确切的作用机理仍需进一步研究。
参考文献
[1]黄承才.黄芪的药理作用[J].中药新药与临床药理,1993,4 (4):50-52.
[2]王 访,张有权.抗衰老中药的药理研究近况[J].时珍国医国药,2002,13 (4):236-237.
[3]朱恩圆,贺 庆,王峥涛,等.党参化学成分研究[J].中国药科大学学报,2001,32(2):94-95.
[4]陈红红,李助乐,章 健.山核桃叶总黄酮抗衰老作用的研究[J].天然产物研究与开发,2008,20:892 - 895.
(收稿日期:2009-03-24 修回日期:2009-09-25)
复方提取 篇4
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 (Agilent 1100 型, Agilent ChemSta-tion色谱工作站) , 塞多利斯电子分析天平 (BS110S型, 北京塞多利斯天平有限公司) , 超声波清洗仪 (KQ-250TD型, 上海必能信超声有限公司) , 电热鼓风干燥箱 (101型, 北京科伟永鑫实验仪器设备厂) 。D (+) -无水葡萄糖标准品 (上海源叶生物科技有限公司, 批号YY90472) ;黄芪甲苷对照品 (北京恒元启天化工技术研究院、北京世纪奥科生物技术有限公司, 批号MUST-13062706) ;党参、黄芪均购于兰州黄河药市 (复兴厚药材有限责任公司) , 甲醇 (色谱纯) , 重蒸水, 其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计
复方中党参、黄芪等的主要活性成分大多为水溶性物质, 因此采用传统水煎煮法进行提取, 采用L9 (34) 正交试验 (表1) , 以浸膏得率、总多糖含量、总皂苷含量的综合评分为指标, 对加水量、煎煮时间、煎煮次数3个因素进行优选。
2.2 出膏量考察
按处方量称取党参、黄芪等饮片, 混合后加水浸泡1h, 按照正交试验设计表分别进行提取。分别将所得提取液浓缩至小体积后, 移入干燥至恒重的蒸发皿, 水浴蒸干, 依照《中国药典》2010年版一部附录ⅨH烘干法进行测定。称定干膏重量, 计算参芪复方的干膏得率。
2.3 多糖含量测定[1,2,3]
2.3.1 对照品溶液制备 精密称取葡萄糖标准品12.20mg于25mL容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 即得浓度为0.488mg/mL的葡萄糖母液, 再取葡萄糖母液10mL, 置25mL容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制得浓度为0.195mg/mL葡萄糖对照品溶液。
2.3.2 供试品溶液制备 精密称取所得各干浸膏粉末20mg, 分别置于25mL容量瓶中, 加娃哈哈纯净水适量, 超声提取20min后定容, 离心20min (3 000r/min) , 精密量取上清液0.2mL并加水至2mL, 即得供试品溶液。
2.3.3 标准曲线绘制 精密量取葡萄糖标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL, 分别加蒸馏水1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4mL, 使成2.0mL, 用移液管精密加入5%苯酚溶液1.0mL, 摇匀, 用移液管缓慢精密加入浓硫酸5.0mL, 混匀, 置于沸水中, 水浴加热15min后, 立即取出, 并马上冷水浴至室温, 在490nm波长处测定吸光度, 以2.0mL蒸馏水中加入相应显色剂为空白。以葡萄糖标准溶液的浓度为横坐标, 测得的吸光度值为纵坐标, 绘制标准曲线, 得线性方程:Y=0.059 9X+0.008 6, r=0.999 3 (n=6) , 结果显示葡萄糖在2.440~14.64μg/mL浓度范围内与吸光度线性关系良好。
2.3.4 换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的参芪复方干浸膏50g, 热溶于100mL蒸馏水中, 趁热过滤, 冷却后加无水乙醇使含醇量达到20%, 离心, 弃去沉淀, 继续加无水乙醇, 使含醇量达到80%, 静置过夜, 过滤, 依次以丙酮、乙醚、无水乙醇反复冲洗沉淀, 冲洗后的沉淀于60℃干燥至恒重。所得干燥物再次溶于热水, 重复上述水溶醇沉的纯化过程3次, 最终所得沉淀物为浅灰白色, 即为较纯的多糖样品。精密称取此多糖样品1g, 加25mL蒸馏水超声溶解, 离心, 取上清液0.2mL, 按标准曲线制备项下的方法, 加蒸馏水使成2mL, 再分别按上述加苯酚试剂和浓硫酸进行反应, 测定吸收度, 代入标准曲线方程计算葡萄糖的含量, 计算换算因子f=1.92。f=M/CD (M=多糖重量, C=多糖中葡萄糖浓度, D=多糖的稀释因子) 。
2.3.5 样品测定 按供试品溶液制备方法分别制备正交试验各样品, 并按标准曲线制备项下相同的方法处理, 测定吸光度, 根据线性方程和换算因子计算得出各样品中的多糖百分含量。
C=供试品溶液中葡萄糖的浓度, D=供试品溶液稀释因子, f=换算因素, W=干膏重量。
2.4 总皂苷的含量测定[1,4,5]
2.4.1 对照品溶液制备 精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量, 加甲醇溶解定容, 即得浓度为0.603mg/mL的对照品溶液。
2.4.2 供试品溶液制备 分别精密称取各干浸膏2g, 加水20mL, 超声处理30min使溶解, 所得水溶液用水饱和正丁醇萃取4次, 每次25mL, 合并萃取所得正丁醇液, 并用氨试液萃取洗涤2 次, 每次30mL, 合并所得氨试液层, 再用30mL水饱和正丁醇反洗氨试液1次, 所得洗液并入上述正丁醇液中, 水浴蒸干正丁醇, 残渣加甲醇溶解并移至25mL量瓶中, 定容至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液5mL, 置10mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
2.4.3 标准曲线绘制 精密量取黄芪甲苷对照品溶液0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2mL, 分别置于具塞试管中, 水浴蒸干, 分别精密加入1mL 5%香草醛的冰醋酸溶液和4mL高氯酸, 摇匀, 60℃水浴处理15min, 立即冷却, 再精密加入15mL冰醋酸, 摇匀, 以相应试剂为空白, 在530nm处以紫外-可见分光光度法测定吸光度。以吸光度值A为纵坐标, 以黄芪甲苷量X为横坐标, 进行线性回归, 得方程:A=0.843 9X-0.014 6, r=0.998 4。结果表明, 在0.12~0.72mg范围内, 吸光度与黄芪甲苷的量呈良好线性关系。2.4.5 测定方法精密量取供试品溶液1mL, 置具塞试管中, 水浴蒸干溶剂, 按上述标准曲线项下方法进行处理, 并测定吸光度, 计算, 即得。
2.5 正交试验结果分析
由表2显示的试验统计结果可直观分析, 极差RC>RA>RB, 表明影响参芪组合物的提取因素主次顺序为:提取次数 (C) >加水量 (A) >提取时间 (B) ;各因素不同水平的影响次序为:A3>A2>A1, B3>B2>B1, C3>C2>C1, 因此从上述实验数据分析其最佳提取工艺为A3B3C3, 即加12倍量水, 煎煮提取3次, 每次2h。
而表3所得综合评价指标方差分析结果显示, 因素A和因素C的P<0.01, 表明加水量和提取次数两个因素分别对提取效率具有显著性影响, 而因素B的P>0.01, 表明提取时间对提取效率不具有显著性影响。因此, 综合以上分析结果, 并考虑实际生产提取过程中需要节约时间成本、缩短生产周期, 综合考量最终确定的最佳工艺为A3B1C3, 即12倍量水, 煎煮提取3次, 每次1h。
2.6 验证试验
按复方量称取药材5份, 按正交试验所选择的工艺路线, 即A3B1C3, 即加水12倍量, 提取3次, 每次1h进行提取, 计算干膏平均得率为30.49% (n=5, RSD=2.67%) ;多糖含量为15.13% (n=5, RSD=2.16%) , 总皂苷含量为0.34% (n=5, RSD=2.33%) 。
3 讨论
本研究以优选参芪复方的最佳水提工艺条件为目的, 采用L9 (34) 设计法, 以浸膏得率、总多糖含量、总皂苷含量的综合评分为指标, 对加水量、煎煮时间、煎煮次数等影响其提取率的重要因素进行了优选。以葡萄糖为对照, 采用苯酚-浓硫酸法测定多糖的含量;以黄芪甲苷为对照, 采用香草醛-高氯酸法测定总皂苷含量。优选出的参芪复方的最佳水提工艺条件为A3B1C3, 即加水12倍量, 煎煮3次, 每次1h。结果显示优选出的参芪复方的水提工艺稳定、合理、可行, 为参芪复方的制剂开发工艺提供了科学依据。
为了在遵循中医药理论的基础上较全面地对参芪复方的水提取工艺进行优选, 本文采用多糖含量、总皂苷含量、出膏量作为实验指标, 并设出膏量权重系数为0.35, 多糖含量权重系数为0.35, 总皂苷含量权重系数为0.30, 综合评价=出膏量/最大值×0.35×100+ 多糖含量/最大值 ×0.35×100+总皂苷含量/最大值×0.30×100。
参芪组合物的提取浓缩过程对于实验数据的准确与否有绝对影响, 因此在浓缩干燥过程中要控制好温度, 采用减压干燥法进行干燥, 真空干燥箱的温度控制在60℃, 避免干浸膏产生糊化, 影响试验后续过程。香草醛-高氯酸显色法原理主要是使待测物结构中的羧基脱水, 增加其结构中双键的数量, 之后通过双分子缩合、双键移位等反应, 使其生成共轭双键体系, 进而在酸性条件下反应形成阳碳离子盐而显色。但实验过程也表明, 实验操作对数据结果有较明显影响, 因此必须严格控制好操作细节, 尽量减少人为误差。
黄芪、党参皆为补气常用药, 在临床使用中多伍用, 用以增强补中益气之功效, 党参主要有效成分为多糖、党参炔苷等;黄芪主要有效成分为黄芪甲苷等皂苷类。为了更好地开发利用参芪复方, 更好地发挥其临床药效, 本试验对其提取工艺进行优化筛选, 为其成方制剂的开发研究提供依据。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社, 2010:67.
[2]李艳, 孙萍, 刘霞, 等.新疆党参多糖的提取、含量分析及免疫功能的初步研究[J].中成药, 2005, 27 (7) :839-840.
[3]杜清, 秦明坚, 郭巧生.明党参多糖提取工艺的研究[J].现代中药研究与实践, 2005, 19 (4) :51.
[4]苏瑞强, 俞世昌, 辛建玲, 等.正交试验法优选黄芪甲苷提取工艺的研究[J].中成药, 1998, 20 (12) :40-41.
复方提取 篇5
1 材料与仪器
1.1 材料
十子代平方组方 (均购自唐山市同仁堂药店) ;无水乙醇、石油醚、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝等均为分析纯;芦丁对照品 (中国食品药品检定研究院, 批号:0080-9705) 。
1.2 仪器
电子天平 (上海第二天平仪器厂) , 微型高速粉碎机 (深圳化试科技有限公司) , 电热恒温水浴锅 (上海器械五厂) , 旋转蒸发器RE-SZAA (上海亚荣生化仪器厂) , 循环水式真空泵 (北京中兴伟业仪器有限公司) , KQ-700DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) 。
2 方法与结果
2.1 紫外吸收法测定提取物中总黄酮含量[3]
2.1.1 芦丁对照品溶液制备
精密称取芦丁对照品10mg, 置于50mL容量瓶, 加70%的乙醇适量, 置水浴微热溶解, 加蒸馏水至刻度线, 摇匀静置, 即得0.2mg/mL的芦丁对照品溶液。
2.1.2 测定波长选择
精密量取芦丁对照品溶液1.5mL, 置于10mL容量瓶, 加5%的亚硝酸钠0.3mL, 摇匀, 放置6min;加10%的硝酸铝0.3mL, 摇匀, 放置6min;加4%的氢氧化钠2mL, 摇匀, 并用70%的乙醇定容至刻度线, 摇匀, 放置15min。采用紫外分光光度计于200~700nm波长范围内扫描吸收光谱, 结果显示对照品在510nm波长附近有最大吸收锋, 故确定其波长为510nm。见图1。
2.1.3 标准曲线的绘制
精密量取芦丁对照品0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL置10mL容量瓶中, 按“2.1.2”项方法, 在510nm处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标、芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线, 标准曲线方程为:Y=0.038 2X-0.018 7, R=0.998 4。结果表明, 线性关系良好。
2.1.4 提取物中总黄酮含量测定
精密量取“2.1.1”项提取液, 置10mL容量瓶中, 按“2.1.2”项方法于510nm处测定其吸光度, 按标准曲线方程计算提取物中总黄酮的含量。
2.2 中药复方十子代平方黄酮提取工艺[4,5]
2.2.1 回流提取
精密称量中药复方十子代平方组方粉末12.0g, 置索氏提取器, 用石油醚于70℃回流2h除去脂溶性物质, 挥干石油醚, 再以80%的乙醇于热水浴中回流浸提2h, 提取结束后抽滤除去不溶性杂质, 收集滤液并浓缩, 按“2.1.2”项方法测定其含量。
2.2.2 超声振荡提取
精密称量中药复方十子代平方组方粉末12.0g, 置索氏提取器, 用石油醚于70℃回流2h除去脂溶性物质, 挥干石油醚, 再以80%的乙醇于30kHz条件超声提取1h, 温度为60℃, 提取结束后抽滤除去不溶性杂质, 收集滤液并浓缩, 按“2.1.2”项方法测定其含量。
2.2.3 正交实验
采用超声振荡法提取中药复方十子代平方总黄酮成分, 并优化提取工艺, 设计L9 (33) 正交实验, 实验因素水平见表1。
实验结果表明, 极差比较为RB>RC>RA, 十子代平方复方成分总黄酮提取率的主要影响因素为提取时间, 其次为乙醇质量分数、料液比。根据K值优选最佳提取条件, 即温度60℃, 料液比1∶20, 乙醇65%, 时间为90min。正交实验设计方案及极差分析结果见表2。
2.2.4 最佳工艺验证实验
取粉碎的十子代平方组方1.0g, 按“2.2.1”项方法, 于最佳提取条件提取1次, 重复试验3次取平均值, 验证试验结果见表3。
3 讨论
预试验中比较回流提取与超声波提取两种方法, 结果表明:超声振荡方法提取率相对较高, 提取时间短, 故选择超声振荡法提取中药复方十子代平方总黄酮成分, 并设计正交实验, 优选最佳提取条件, 方法具有快速、高效、节能等特点。本实验采用比色法以芦丁为对照, 是测定黄酮类化合物含量的常用方法, 操作简便、准确、灵敏、稳定性好, 适用于十子代平方复方中总黄酮含量的测定。
本实验优选中药复方十子代平方中总黄酮的最佳提取工艺, 为进一步研究其药理活性提供实验依据。
参考文献
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复方提取 篇6
关键词：复方中药提取物,西瓜枯萎病原菌,黄瓜枯萎病原菌,抗菌活性
天然植物源农药的研究不仅在我国受到重视,在西方发达国家也受到高度的关注。传统中药本身就是植物源,某些中药既可以用于人体治疗疾病,同时还能有效地杀灭植物害虫。我国具有丰富的中草药资源,药用植物的种类达11 020种[1],从天然植物源中寻找活性物质替代化学农药,以减少化学农药对人体的伤害和对环境的污染,已成为当前农业研究的热门课题。为此,课题组进行复方中药提取物抗植物枯萎病原菌研究,取得了良好的防治结果。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
药用植物:黄柏、川穹、白头翁等,购自山东省济南市地道药材公司。供试菌种:西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum),均由山东农业大学重点实验室提供。试验试剂:95%乙醇、苯甲酸,山东诚挚生物技术有限公司生产;牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂,葡萄糖,济南鲁健试剂材料有限公司生产。试验仪器:WG-5磁力加热搅拌器,北京创先科技有限公司生产;RT-Ⅱ旋振荡仪,成都医疗器械厂生产;ZH-TI超声波振动器,北京朝阳科技医疗器械总公司生产。自动双重蒸馏器,上海黄浦科技有限公司生产;LXD-5培养箱,江苏南京医疗器械公司生产;抑菌圈测量器,上海红星医疗开发责任有限公司生产。
1.2 试验方法
1.2.1 复方中药提取物制备。
取黄柏、川穹、白头翁等药材粉碎成粗粉,加蒸馏水1 000 m L浸泡1 h、振荡、煮沸30 min,滤除煎液,药渣加蒸馏水500 mL,煎煮20 min,合并滤液。按2∶1加助溶剂,超声波振动。所滤药渣加95%乙醇,磁力搅拌4 h,恒温振荡仪中振荡3 h,静置24 h,回收乙醇,合并水煎及醇提药液,于旋转蒸发仪上减压低温浓缩,即得复方中药提取物,含生药0.5 g/mL,4℃冰箱保存备用。
1.2.2 样品溶液制备。
复方中药提取物加无菌水按2倍稀释法稀释成0.500 0、0.250 0、0.125 0、0.062 5、0.031 3 5个浓度梯度的样品溶液。
1.2.3 供试菌液制备。
取西瓜枯萎病原菌和黄瓜枯萎病原菌斜面活化,置35℃培养箱中培养16 h。取活化好的斜面,加入无菌水振荡摇匀,配制成浓度为107cfu/mL菌悬液,于20 min内接种至平板培养基进行抑菌试验。
1.2.4 抗菌活性测定。
取直径为6 mm的滤纸圆片,100℃干热灭菌2 h,灭菌滤纸片放入药液中浸泡30 min,取出晾干。将配制好的菌悬液注入固体培养基的平皿,用无菌涂布器均匀涂布于培养基表面,无菌镊子夹取含药纸片,放入菌悬液培养基中,轻轻按压,使含药纸片紧贴培养基,置恒温培养箱中30℃培养48 h。每个培养器皿放药纸3片,各纸片间距相等,重复3次,取平均值,最后用抑菌圈测量器测定药物纸片的抑菌圈直径。
2 结果与分析
试验结果表明,复方中药提取物对西瓜枯萎病原菌和黄瓜枯萎病原菌具有明显的抑制作用,其抑制作用随浓度增高而显著增加。即使在低浓度0.031 3 g/mL时,对该2种病原菌仍有较好的抑制效果,具体结果见表1。
(mm)
3 结论与讨论
植物枯萎病是瓜类作物常见的主要病害,全国各地均有发生,其中以西瓜和黄瓜发病的情况最为严重。该试验研究结果表明,复方中药提取物对植物枯萎病原菌具有显著的抑制效果,当浓度为0.500 0 g/mL时,抗菌作用最强,对西瓜枯萎病原菌抑菌圈直径为30 mm,对黄瓜枯萎病原菌抑菌圈直径为31 mm。即使在低浓度0.0 313 g/mL时,对该2种病原菌仍有较好的抑制效果,抑菌圈直径分别达到了13、11 mm。复方中药提取物含有天然的活性物质,对植物枯萎病原菌具有显著的抑制作用,同时符合当今新型农药的健康理念和发展方向,如进一步开发应用,将产生广阔的市场前景,获得良好的经济、社会效益。
药用植物所含化学成分复杂,既有水溶性成分也有脂溶性成分。采用不同的提取方法,活性物质的含量也不同[2],因而抗菌的作用和效果也就不一样。鉴于此,课题组对上述复方中药进行了水溶性成分的提取(水煎),同时又进行了脂溶性成分的提取(醇提),使活性物质的含量更多,抑制植物枯萎病原菌的作用更强。目前,国内外农业生产均提倡使用高效、低毒、对环境和人体具有较高安全性的农药。植物源农药来源于药用植物[3],含有天然的活性物质,对环境和人畜安全、无毒,有相当一部分植物源农药对人体还具有防病治病的作用[4],如黄柏、川芎、白头翁等均为清热解毒中药,具有显著抗菌消炎的功能,临床上常用来治疗各种湿热感染的疾病,对多种细菌引起的皮炎、湿疹以及痢疾、结肠炎等具有明显的治疗作用。传统中药治疗疑难病症,在我国已有几千年的历史。近年来,作为植物源农药已被逐渐发现并开发利用。因此,植物源农药是未来农业杀虫剂研究的重点[5,6,7]。
参考文献
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复方提取 篇7
1.1 试验药物
草药复方提取物, 将鱼腥草、甘草、板蓝根、白前、天花粉、款冬花、虎仗和枇杷叶等草药按照一定比例混合, 冷水浸泡30分钟, 水煎2次, 合并滤液, 将滤液与一定比例的95%乙醇溶液混合, 常温浸泡3小时, 抽滤 (重复3次) , 合并滤液减压蒸馏, 挥去乙醇并在真空旋转蒸发仪上浓缩 (水浴恒温65℃) , 制成生药含量为1克/毫升的溶液;新城疫高免11 Log2。
1.2 试验动物
1.2.1 主诉
江苏省海安市一养殖户饲养的2000余只l86日龄的海兰褐蛋鸡发病。主诉近日鸡群精神不好, 粪便稍稀, 咳嗽声增加, 产蛋量和蛋壳质量下降, 畸形蛋、白壳蛋破损蛋比率增加, 并出现零星死亡, 20天前曾用鸡新城疫Ⅳ疫苗系饮水免疫。
1.2.2 临床症状及剖检变化
鸡群精神沉郁、轻度腹泻, 少数张口呼吸、肉髯暗红, 白壳蛋和沙皮蛋的数目积聚增加。随机抽取4只病死鸡和12只症状严重的病鸡剖检, 可见喉头潮红出血、气管出血或有干酪样物质、肠管斑点样出血、肠系膜扁桃体出血、泄殖腔出血、腺胃乳头水肿、出血和卵巢潮红等。
1.2.3 实验室检查
取喉头、气管、肠系膜扁桃体用新城疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒 (深圳市匹基生物工程股份有限公司生产) 检测, 结果为阳性, 血清新城疫抗体检测阳性;无菌取病死鸡心脏、肝、脾和肾脏等组织触片, 用瑞氏染色和革兰氏染色, 镜检, 末检出细菌。
根据发病情况、临床症状、病理变化和实验室检查结果诊断该病为非典型新城疫。
1.3 分组处理
将鸡棚、料槽和饮水槽清扫、消毒, 挑出1000只病鸡随机分成草药复方提取物的高、中、低剂量组、治疗对照组和空白对照组。草药复方提取物高剂量组250只, 用草药复方提取物按1.5克/千克饮水给药;草药复方提取物中剂量组250只, 用草药复方提取物按1克/千克饮水给药;草药复方提取物低剂量组150只, 用草药复方提取物按0.5克/千克饮水给药。以上用药每天1次, 连用5天。治疗对照组, 250只, 一次皮下注射新城疫高免卵黄抗体1毫升;空白对照组100只 (按畜主要求) , 不给药。
1.4 疗效判定
每日观察记录鸡群的精神状态、呼吸状态、采食量、产蛋量、产白壳蛋的数目和死亡数, 于处理后1周按以下标准判定和统计疗效:
治愈:鸡群的临床症状消失, 咳嗽停止, 粪便、精神、采食量恢复正常, 白壳蛋明显减少, 产蛋量恢复正常。
好转:精神、饮食、粪便基本恢复正常, 咳嗽等临床症状明显减轻、白壳蛋略有减少。
无效:症状不减轻甚至加重或死亡。
总有效率=治愈率+好转率。
2 治疗结果
草药复方提取物组的治愈率和总有效率显著高于不治疗的空白对照组。草药复方提取的高、中剂量组的治愈率和总有效率显著高于低剂量组和空白对照组 (P<0.05) , 稍低于治疗对照组, 但差异不显著 (P>0.05) , 高、中剂量组之间的差异不显著 (P>0.05) , 表明草药复方提取物对鸡非典型性新城疫有很好的疗效 (见表1) 。
注:同列数据上标不同字母者差异显著 (P<0.05)
3 讨论
试验结果表明, 草药复方提取物对鸡非典型性新城疫有很好的治疗效果, 高、中剂量的治疗效果与卵黄抗体的效果相当。
草药复方提取物是由鱼腥草、甘草、板蓝根、白前、天花粉、款冬花、虎仗和枇杷叶等草药组成的方剂, 方中鱼腥草和板蓝根清热解毒、凉血为主药;辅以白前和天花粉温化寒痰、热痰;佐以款冬花和枇杷叶润肺化痰、止咳平喘;黄芪和甘草补中益气, 和中缓急、解毒、调和诸药。诸药相合, 宣肺祛痰、清热解毒、补脾益气。现代药理研究表明, 方中多数中药具有抗病毒、抗菌、消炎、镇咳和提高免疫力的作用;其中鱼腥草、甘草、板蓝根、天花粉和虎杖具有抗病毒和提高机体免疫力的作用;甘草、白前、款冬花和枇杷叶具有抗炎、镇咳的功效, 从而达到标本兼治的目的。
此外, 本制剂通过提取精制, 具有有效成分浓度高、容易吸收、快速发挥药效等优点。
复方提取 篇8
关键词：复方五仁醇软胶囊,正交筛选法,芍药苷,HPLC
复方五仁醇软胶囊为国家药品部颁标准 (第三册) 复方五仁醇胶囊的改剂型, 规格为0.65 g/粒, 是由北五味子、白芍、茵陈、大豆油等组成的复方制剂, 具有清热利胆, 平肝养血, 降低血清谷丙转氨酶;用于治疗迁延性、慢性肝炎;原工艺对其中白芍、茵陈提取参数并没有明确, 按国家新药研究的有关规定, 我们对其中的一些未定技术参数进行研究, 实验及结果如下[1,2,3,4]。
1 材料
1.1 仪器
日本岛津公司LC-10ATvp型高效液相色谱仪 (日本岛津公司) RE-52C型旋转蒸发仪 (上海青浦沪西仪器厂) FQC-100超声波清洗机 (无锡福尼达电子公司 频率为40KHZ) , SC202-1型电热恒温干燥箱 (通州市沪通制药机械设备厂) , FA1004型十万分之一电子天平 (上海精密科学仪器有限公司) , 电热恒温水浴锅 (上海医疗器械五厂) 。
1.2 药材及试剂
白芍、茵陈 (均符合《中国药典》2010年一部规定) ;芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供 供含量测定用 批号:091221) 乙醇 (分析纯) 氯仿 (分析纯) 浓盐酸 蒸馏水 乙睛 (色谱纯) 纯净水 (乐百事牌) [5]。
2 白芍、茵陈加水煎煮研究[1,2,3]
2.1 实验设计
处方中投料量以白芍、茵陈的水提取物干浸膏计, 白芍、茵陈中的活性成分也大多为水溶性成分, 故仍沿用原工艺的水煎煮提取法, 选取“浸泡时间”、“加水量”、“煎煮次数”、“煎煮时间”等四个因素, 并结合原工艺及生产实际, 每个因素选取3个水平, 结果见表1。
2.2
实验数据处理[1,2,3]按照试验设计方案, 分别称取1/10处方量的白芍、茵陈进行提取, 以各因素的设计水平进行正交实验, 以提取液中芍药苷的转移率和干浸膏得率为考察指标, 对提取工艺进行优选, 结果见表3、表4、表5。
说明: (1) 每次实验用白芍100 g、茵陈50 g;药材检测, 白芍中芍药苷的含量为1.72 %。 (2) K1、K2、K3为以芍药苷转移率为指标评判结果;KⅠKⅡKⅢ为以干浸膏得率为指标评判结果。 (3) 芍药苷含量测定, 色谱条件与系统适用性试验, 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙睛-水 (15 ∶ 85) 为流动相;柱温30℃;检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计算不得低于2000。对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量, 加稀乙醇溶解并稀释制成每1 ml含50 μg的溶液, 即得。 供试品溶液的制备:精密量取药材取提液1 ml, 转移至5 ml容量瓶中并以流动相稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45 μm) 滤过, 取续滤液, 即得。
测定法, 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl, 注入液相色谱仪, 记录色谱图, 按峰面积以外标法计算芍药苷的含量。
注:F1-0.10 (2, 2) =9 F1-0.05 (2, 2) =19 F1-0.01 (2, 2) =99
以芍药苷转移率为指标进行评判时, 由表3中K值可知, A2>A1>A3、B2>B1>B3、C1>C2>C3、D2>D3> D1, 故直观分析最佳工艺为A2B2C1D2;表4方差分析结果表明:各因素对实验结果的影响为A 、B、D无显著性差异, C有显著性差异 (P<0.1) , 且从K值可以看出, C1、C2、结果较为接近, 从工艺条件可以看出A2B3C2D1更符合工业化生产的要求, 因此从生产实际及经济效益等因素考虑, 应选择A2B3C2D1[3,4]。
注:F1-0.10 (2, 2) =9 F1-0.05 (2, 2) =19 F1-0.01 (2, 2) =99
以干浸膏得率为指标进行评判时, 由表3中K值可知, A3>A1>A2、B1>B2>B3、C1>C2>C3、D1>D2>D3, 故直观分析最佳工艺为A3 B1C1 D1;表5方差分析结果表明:各因素对实验结果的影响为A 、B、D无显著性差异, C有显著性差异 (P<0.05) , 且从K值可以看出, A2、A3, B1、B2、B3, C1、C2结果较为接近, 从工艺条件可以看出A2B3C2D1更符合工业化生产的要求, 因此从生产实际及经济效益等因素考虑, 应选择A2B3C2D1[6,7,8,9]。
3 讨论与小结
3.1 白芍、茵陈的最佳水提工艺为:药材加15倍量水浸泡1 h后, 煎煮1 h, 滤过, 药渣再加10倍量水煎煮1 h的提取工艺基本合理。
3.2 通过正交筛选法确定复方五仁醇软胶囊中白芍、茵陈药材的最佳提取工艺, 为扩大生产提供必备的技术参数, 可以更好的保证生产出产品的可重复性、稳定性。
参考文献
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