关键词： 心肌细胞
心肌细胞形态学（精选九篇）
心肌细胞形态学 篇1
1 材料与方法
1.1 实验动物及仪器
健康中国家兔112只,雌雄不拘,体重2.0~2.5 kg,由郑州大学动物实验中心提供。NIKON ECLIPSE E 200生物显微镜(北京中显恒业仪器仪表有限公司)。
1.2 建立动物模型
将家兔随机分为实验组和对照组。两组家兔在自然低温环境(10℃、5℃、0℃、-5℃)下均采用10%水合氯醛耳缘静脉麻醉(5 ml/kg),家兔处于自然呼吸状态,仰卧固定于手术台上。20%硫化钠脱去胸前区毛,碘伏消毒,沿胸骨左缘切口,切断左侧第3~4肋软骨。用开胸器撑开,暴露纵隔和心脏,胸膜完整,兔呼吸平稳。对照组开胸但不阻断冠状动脉血流,实验组进一步纵行切开心包,用棉签轻轻将心脏向右上抬起,结扎左冠状动脉左室支中下1/3处,直视下确定结扎相应供血区域心肌组织颜色变暗,确定制备急性心肌缺血模型成功,整个造模过程用5%葡萄糖氯化钠注射液静脉滴注以保证实验动物存活。
1.3 动物分组
两组家兔均在自然低温环境下(10℃、5℃、0℃、-5℃)暴露不同时间(30 min、60 min)。实验组10℃30 min和60 min各7只,5℃30 min和60 min各7只,0℃30 min和60 min各7只,-5℃30 min和60 min各7只,共56只;对照组10℃30 min和60 min各7只,5℃30 min和60 min各7只,0℃30 min和60 min各7只,-5℃30 min和60 min各7只,共56只。
1.4 标本采集与处理
两组家兔在自然低温环境下(10℃、5℃、0℃、-5℃)暴露不同时间(30 min、60 min)后,于相应时间点空气栓塞处死家兔取出心脏,用蒸馏水洗去心脏中的残血,置于10%甲醛中固定。于左冠状动脉左室支结扎处至心尖部冠状面横切心肌取材,石蜡包埋后切片行HE染色,在光镜下观察心肌细胞形态学的变化。
2 结果
2.1 对照组HE染色结果
10℃组(见图A1)和5℃组(见图A2):心肌纤维平行排列整齐,细胞核清晰,细胞质呈伊红色,心肌间质未见渗出。0℃30 min组(见图A3-1):心肌纤维排列较整齐,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质未见渗出。0℃60 min组(见图A3-2):心肌纤维排列疏松,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质轻度水肿。-5℃30 min组(见图A4-1):心肌纤维拉长,排列疏松,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质水肿。-5℃60 min组(见图A4-2):心肌纤维拉长、变细,排列疏松,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质水肿。
2.2 实验组HE染色结果
10℃30 min组(见图B1-1):心肌纤维排列较整齐,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质未见渗出。10℃60 min组(见图B1-2):心肌纤维拉长、排列较整齐,细胞核清晰,局灶性细胞质呈深伊红色,心肌间质未见渗出。5℃30 min组(见图B2-1):心肌纤维浊肿、排列不整齐,细胞间质小血管扩张、淤血。5℃60 min组(见图B2-2):心肌纤维拉长、局灶性肌浆凝集。0℃30 min组(见图B3-1):心肌纤维拉长、排列不整齐,细胞间质水肿。0℃60 min组(见图B3-2):心肌纤维拉长、排列不整齐,部分呈轻微波浪状,局灶性肌浆凝集,嗜酸性增强。-5℃30 min组(见图B4-1):心肌纤维拉长,呈波浪状排列,嗜酸性增强。-5℃60 min组(见图B4-2):心肌纤维拉长,呈波浪状排列,部分断裂;细胞间质水肿,小血管有明显淤血。
3 讨论
环境温度变化与机体的代谢密切相关,人和哺乳动物的适宜环境温度为10~35℃,对机体代谢无明显影响。当环境温度低于10℃时,机体产生冷感,故将环境温度10℃称为临界温度[3]。邵同先等[4]研究报道,当环境温度从2℃降至-6℃,随着低温状态停留时间延长,家兔直肠温度从36.9℃降至32.1℃,呈下降趋势。何子安等[5]研究发现,低温可致机体血浆产生一种以较大颗粒存在的冷凝蛋白,在微小血管中可能会造成淤积或堵塞,导致微循环障碍,加剧冻伤组织的病变。本研究结果显示,10℃和5℃自然低温环境下对照组心肌纤维形态无明显变化。当环境温度从0℃降至-5℃的过程中,对照组心肌纤维从排列较整齐逐渐变为心肌纤维拉长、排列疏松,心肌细胞间质水肿。实验组从10℃降至-5℃的过程中,心肌纤维逐渐从拉长,排列疏松至排列呈波浪状改变并有部分心肌纤维断裂,心肌细胞间质水肿,小血管明显淤血。提示心肌缺血及心肌细胞损伤逐渐加重。Hoye等[6]研究显示,随着低温刺激强度的不断增加,心肌细胞的损伤越来越严重。邵同先等[4]研究发现,随着环境温度下降,从-2℃至-6℃的过程中,HE染色结果显示,家兔心肌细胞损伤逐渐加重。这些均与本研究结果相符。推测其发生机制可能是家兔的体温随着环境温度下降逐渐减低,内脏血管痉挛,血管中冷凝蛋白增加,微小血管血流变慢、淤积,微循环障碍,导致心肌缺血和心肌细胞损伤。提示机体的抗寒和保暖是防止心肌缺血和损伤的重要措施之一。
综上所述,从0~-5℃,随着时间的延长,心肌细胞损伤明显。在已有心肌缺血的情况下,环境温度10℃时,就可以对已存在心肌缺血的心肌细胞引起形态学改变,提示缺血心肌细胞对低温环境温度变化更加敏感。
参考文献
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心肌细胞形态学 篇2
中华绒螯蟹循环血液中血细胞总数为(13357±7196) cells・mm-3,其中大颗粒细胞所占(49.8±7.5)%,其长轴(16.6±1.1) μm,短轴(10.2±0.6) μm;大小颗粒中间型细胞所占比例(20.6±5.3)%,其长轴(13.1±1.2) μm,短轴(8.4±0.5) μm;小颗粒细胞所占比例(29.3±4.8)%,其长轴(12.4±1.2) μm,短轴(8.1±0.4) μm;无颗粒细胞所占比例(0.2±0.2)%,其长轴(11.3±1.3) μm,短轴(8.9±1.1) μm.血液离体后,在血液完全凝固的(97.7±25.3) s时间内,只有无颗粒细胞和小颗粒细胞形态结构发生变化,细胞及其胞核立即膨大,核质比迅速增大,细胞膜破损崩解,胞浆溢出,血液完全凝固后这些细胞形态结构继续变化,主要表现为胞质内线粒体、内质网等细胞器扩张溶解消失,小颗粒细胞中的小颗粒内含物渗出或溢出,颗粒空泡化或崩解,细胞核固缩等变化过程 .而大小颗粒中间型细胞和大颗粒细胞形态结构的.变化明显慢于前两种血细胞,在细胞离体后5 min时,细胞和细胞核才开始出现膨大,并逐渐出现细胞膜、线粒体、内质网溶解消失,颗粒空泡化或崩解以及细胞核固缩等形态结构的变化.从血液离体后血细胞形态结构随时间变化的特点,推测无颗粒细胞和小颗粒细胞可能类似于脊椎动物的血小板,通过释放胞内凝血物质参与血凝的级联反应.
作 者：陆宏达 张明辉 LU Hong-da ZHANG Ming-hui 作者单位：陆宏达,LU Hong-da(上海水产大学生命科学与技术学院,上海,90)
张明辉,ZHANG Ming-hui(上海市水产研究所,上海,33)
心肌细胞形态学 篇3
（1.郑州大学第三附属医院妇产科，河南 郑州 450052；2.河南省食管癌开放实验室，河南 郑州 450052；
3.新乡医学院人体解剖学教研室，河南 新乡 453003）
摘 要：目的：通过电镜技术观察不同运动负荷下心肌胶原纤维的形态学变化特征。方法：将36只Wistar大鼠随机分成对照（C组）、一般运动负荷组（NS组）、超负荷（O组），每组各12只，分别给予一般负荷、中等负荷、超负荷的运动训练。8周后, 断头处死，取出心脏左心室前壁、左室乳头肌处两组组织块分别作透射和扫描电镜观察。结果：正常组胶原纤维的形态分为粗纤维、细纤维和微细纤维三种；心肌结构完整。一般运动负荷组，心肌束间或肌束内较粗胶原纤维大量增生；心肌细胞体积略显增大，体积增大。超负荷组，心肌细胞间胶原纤维大量增生，心肌束间或心肌束粗大胶原纤维过度增生。结论：运动超负荷可致胶原纤维增生，从而导致心肌扩张功能与收缩功能的降低。
关键词：运动负荷；胶原纤维；超微结构；心脏
中图分类号：G804.2文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)10-1365-04
Morphology Changes of Collagen Fibers in Rats Heart in Electronmicroscope under Different Exercise Loads
ZHAO Bing1,2, WANG Qing-zhi3, WEN Xiao-jun3, WANG Li-dong2, ZHANG Xi1
（1.Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan China; 2. Laboratory of esophageal cancer in
Henan Province, Zhengzhou 450052, Henan China; 3. Xinxiang Medical College, Xinxiang 453003, Henan China）
Abstract:Objective: To observe the changes of collagen fibers in rats' cardiac muscle (CM) in electron microscope under different exercise loads. Methods: Thirty-six rats are divided into control group (C group), normal swimming group (NS group) and overload group (O group) .Three groups are given normal, middle and overload swimming training respectively for 8 weeks. Then all rats are killed by decapitation, and taken out the antetheca and papillary muscle of left ventricle, and the changes of collagen fibers are observed through transmission and scanning electron microscope. Result: In control group, crude fibers, small fibers and microfilament of collagen fibers can be seen, and the cardiac muscle architectonic is integrated. In normal swimming group, the crude fibers much increase in muscle bundle blank and muscle bundle inner. And the bulk of cardiac muscle cell slightly increases, the number of mitochondrion increases. In overload group, the crude fibers remarkably increase in muscle bundle blank, and the cardiac muscle architectonic is destroyed. Conclusion: Overload training can lead to the crude fibers of cardiac muscle cell increasing, and it may be lead to broaden function and retracted function depressing.
Key words: exercise load; crude fiber; ultramicrostructure; heart
心肌是由心肌细胞和心肌间质（extracellular matrix, ECM）构成，心肌间质又以胶原纤维为主，构成心肌的框架结构，是维持心脏结构和功能不可缺少的重要组成部分。近年研究表明，心肌胶原纤维不仅对心肌细胞具有支持和连接作用，而且在协调心肌肌力的传递、营养物质的输送、信息的传递等方面都起着重要的作用[1]。通过电镜观察不同运动负荷下心肌胶原纤维的形态学变化特征及其对心功能的影响，为最终阐明运动与心脏的生理、病理变化机制提供理论依据，并为科学制定训练计划和有效预防心脏损提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物分组和训练 ┆雄性Wistar大鼠36只，体重180～220 g（新乡医学院实验动中心提供），随机分成3组，每组12只: 对照组，常规饲养，不加干预；一般运动负荷组，进行中等强度游泳训练，游泳池体积为200 cm×70 cm×80 cm，水深60 cm，水温34～36℃，每周训练6 d，1次/d。第一次下水10 min，此后逐日累加到第1周末时游泳时间达到60 min，第2周末时每天达到120 min。以后维持这一运动量直至第8周; 超负荷组，前2周的训练安排同一般运动负荷组，第3周给予高强度训练：开始时每天在大鼠尾部负体重1％的重量游120 min。以后逐渐增加负重，在周末时负重重量达到体重4%～5%。从第4周开始每天上、下午各训练一次，游泳时人为地用玻璃棒驱赶大鼠使其不停游动，发现有力竭表现时（在水下10 s不能浮上），捞上水面休息5 min后继续训练至满120 min，以后保持这一运动量直至第8 周[3～5]。
1.2 标本收集与切片制作 ┆各组大鼠训练满8周后断头处死,取出心脏左心室、左乳头肌处取两组组织块分别作透射和扫描电镜观察。透射电镜组织块大小均为1 mm×1 mm×1 mm，前者置入4％戊二醛固定液，4℃固定。然后组织块经1％锇酸后固定、脱水、包埋、超薄切片、染色后在日立H-7500透射电镜下观察组织亚微结构。扫描电镜的组织块大
小分别为2 mm×3 mm×5 mm, 呈成条状，4％戊二醛4℃固定, 经冲洗、脱水、干燥、喷金后在扫描电镜下观察、照相。
2 结 果
2.1 不同运动负荷组左心室与左乳头肌扫描电镜观察
2.1.1 正常组左心室与左乳头肌胶原网络的立体形态 在扫描电镜下,心肌胶原纤维比较丰富。胶原纤维呈粗纤维、细纤维和微细纤维三种。粗纤维数量较少，跨越若干个心肌细胞，环绕与心肌细胞群外，有纵、横两种走向，纵向纤维体平行，横向纤维与心肌细胞近乎垂直比心肌细胞大，似“腰带”状把心肌细胞捆扎成束。横向纤维再走行上可以发出分支或斜行。细纤维数量较多，从层面上看，位于粗纤维深层，连于粗纤维之间，交织成网。细纤维的编制形式复杂，规律性不明显。细纤维一般比较短，在几个心肌细胞表面，或跨越邻近的几个细胞（图1）。细纤维可以是粗纤维的分支，向深层像树根一样延伸为微细纤维。微细纤维紧贴心肌细胞表面，排列紧密而细腻，形似“毯膜”,包裹心肌细胞。正常情况下微细纤维形成心肌细胞完整的膜鞘。在相邻的心肌细胞边缘微细纤维存在局部交织粗、细、微细三种胶原纤维相互交织，形成层次分明、立体明显的胶原网络结构，均有一定张力。在心肌细胞表面贴附一些散在的大小不等纤维细胞，有些纤维细胞被悬吊在纤维网之间，形成了细胞外的一个三维空间结构（图2）。
图1 正常组左心室肌，图2 正常组左乳头肌，
扫描电镜，×1 200扫描电镜，×2 000
2.1.2 一般运动负荷组胶原纤维变化情况 一般运动负荷组时，心肌束间或肌束内较粗胶原纤维大量增生，呈“条索状”或“树枝状”样向下逐级延伸，呈波浪形弯曲或线形分布，并相互交织，网络着心肌束(图3)。在乳头肌上也可见到胶原束打成的结节，粗细不等的胶原纤维多呈“条索状”以垂直或斜交的方式借肌内膜心肌纤维连接。心肌细胞肥大且细胞间胶原纤维连接紧密（图4）。
图3 一般负荷组左心室肌，图4 一般运动负荷组左乳
扫描电镜，×2 000头肌，扫描电镜，×2 000
2.1.3 运动超负荷组胶原纤维变化情况 超负荷组，心肌细胞及细胞群间胶原纤维大量增生，胶原从粗到细分级明显，从一大束胶原形成的结节处向下均为细胶原，相互交织成网形成心肌细胞的“网格状”居室，包裹着心肌细胞（图5）；在心肌束间或心肌束过度增生的粗大胶原纤维成束成网呈波浪状、螺旋式或网格型相互编织分布，粗细明显分级分布，细纤维形成明显的网格,心肌束间隙较粗的胶原纤维向心肌层伸入；同时发现左乳头肌有肌纤维与胶原纤维断裂现象（图6、7）。
图5 超负荷组左心室肌，图6 超负荷组左心室肌，
扫描电镜，×2 000扫描电镜，×1 200
2.2 不同运动负荷组左心室与左乳头肌透射电镜观察
2.2.1 正常组心肌超微结构的变化 心肌结构清晰，肌丝排列整齐，Z线、M线、I带、A带清晰，肌膜完整；线粒体数量较多，呈带状排列，嵴排列整齐，规则，线粒体膜完整，核双层结构清晰，核仁明显，闰盘未见扩张(图8)。
图7 超负荷组左乳头肌，图8 正常组左心室肌
扫描电镜，×2 000透射电镜×2 000
2.2.2 一般运动负荷组心肌超微结构的变化 一般运动负荷组大鼠心肌组织结构肌丝排列整齐,数量增加,明暗带相间,结构清晰。心肌细胞体积略显增大，T管亦稍有扩张，同时和肌浆网分布于Z线，线粒体数量明显增多，体积增大，核膜双层结构清晰可见，核仁清楚，线粒体膜完整(图9、10)。
图9 左心室一般负荷组图10 左乳头肌一般负荷组
透射电镜×4 000透射电镜×6 000
图11 左心室超负荷组透射电镜×8 000
2.2.3 超负荷组肌超微结构的变化 超负荷组大鼠心肌组织结构完整度破坏，肌纤维粗细不均，Z线不规则增宽，肌丝排列紊乱，肌节阶段性变宽或变短，肌丝扭曲断裂明显，部分肌纤维阶段性变性，闰盘失去台阶状结构，闰盘出现明显扩张、甚至有的闰盘失去正形性状。肌纤维与线粒体的排列关系严重破坏，排列混乱；线粒体膜完整性破坏，嵴排列欠完整，发生不同程度的断裂，髓样变，结构模糊不清，甚至消失，基质电子密度降低，有的基质溶解呈空泡结构，核膜还基本完整，但可见周边有切迹或皱缩(图11)。
3 讨 论
3.1 扫描电镜下不同负荷组心肌胶原纤维变化特征 在以往的研究中大多是对心脏与心肌细胞、毛细血管等方面，特别是在运动对心肌超微结构的影响，蛋白质代谢调控在运动心肌适应机制以及心肌内分泌功能，蛋白合成激素受体功能和其他因子调节功能上进行了大量研究，为揭示运动心肌肥大变化机制提供了重要途径。但却忽视了对运动与ECM的探索，而实质上许多心脏病患者都与心肌胞外间质密切相关，ECM的形态结构与生化重塑都会以不同程度影响心脏的功能[6,7],心肌中胶原网络结构的生理意义及其在心脏疾病时的改变成为现代心脏病学研究领域中的一个新的热点。Weber等[8]首次提出了间质性心脏病的概念，从而对心脏病的研究开创了一个新的领域。ECM中的微妙结构较心脏本身更易在不同运动负荷中发生变化，甚至影响心脏的功能，进一步观察分析心肌间质胶原网络结构的分布方式对阐述运动心脏的功能变化具有重要现实意义。本文观察发现，心肌间质胶原网络结构在心肌、毛细血管及心内膜之间大量的胶原纤维基本上以下几种方式相联接，即“网格状”联接，横向纤维与心肌细胞近乎垂直比心肌细胞大，似“腰带”状把心肌细胞捆扎成束，广泛分布于心肌细胞群及肌内膜上，形成心肌细胞的居室，此结果证实了Weder等[9]的观点。“树枝样”联接，细纤维是粗纤维的分支，向深层像树根一样延伸为微细纤维, 以垂直或斜角方式存在于肌束膜、肌内膜上;直线型联接，所有的胶原纤维彼此连续成网，形似蜂窝，相邻的心肌细胞间为一层胶原纤维膜相隔。在若干个心肌细胞之间有较粗大的胶原纤维，这些粗纤维与其他胶原纤维连接成网，粗的胶原纤维位于若干个心肌细胞之间，把心肌细胞分割形成细胞群。陈小讯等认为心肌间质的胶原主要以粗、细两种纤维形式存在，粗纤维主要走行于心肌细胞间，组呈粗大的框架结构；细纤维则以粗纤维为支架编织成网，包裹于心肌细胞和毛细血管的表面，将心肌细胞固定于其间。心肌间质胶原网络的这种组合形式对稳定心壁的结构很有意义,在阻止心肌肌小节的过度伸张,防止心肌细胞在收缩时移位;细胶原纤维编织成的包裹在细胞和血管的鞘状结构可以使心肌收缩时,产生的力在细胞间迅速传导,保证各心肌细胞的功能协调一致。并认为胶原纤维与细胞表面的任何部位均可连接[10～13]。
本研究与以往研究在胶原纤维束的分类和排列上有所不同。实验观察到粗纤维多位于心肌细胞束间，纵、横两种走向，纵与心肌细胞平行，横与心肌细胞近乎垂直，这些粗纤维主要功能是约束细胞群，使其成为较大的收缩单位；细纤维一般行程短，相互交织成网，笼罩邻近的心肌细胞，这种排列对心肌细胞舒缩时力的传递、防止细胞滑脱和错位、维持心肌张力起重要的作用；微细纤维包裹心肌细胞，形成一层绝缘膜，可能有利心肌电位的传导[14],存在于心肌细胞间及细胞群间，在乳头肌切片上更为常见;总之心肌间质胶原网络是一个由心肌束、细胞群到细胞间、细胞内及心内膜和心肌毛细血管间的一个三维空间结构网络。田振军等[15,16]认为在细纤维之间存在许多纤维同交一点的聚集点，这些聚集点附于心肌细胞表面，细纤维由聚集点向四周辐射，是细纤维的附着点。本研究在不同组均发现有较大的胶原纤维束交一点相汇打结，像树根一样分级延伸为微细纤维，微细纤维附着在心肌细胞表面，排列紧密而细腻，形似“毯膜”,包裹心肌细胞，决定心肌硬度，粗细两种纤维均不与细胞接触,而纤维之间拥有较大的网眼,这一层纤维密度很大,把心肌细胞全部包裹,因此微细纤维是保持心肌细胞正常电位传导非常重要的绝缘体,如果此膜损坏或断裂,可能会影响心脏功能。本文观察结果表明，一般运动负荷条件下，心肌束间，心肌细胞间借肌束膜及肌内膜胶原纤维增生，以适应心肌细胞肥大收缩力增加从而保证心肌间力的传递;运动超负荷条件下，心肌束间，心肌细胞群及细胞间大量胶原纤维不成比例增生，可见胶原纤维粗大成束成网以波浪形或网格状广泛分布，在小动脉壁上及心内膜下胶原纤维过度增生，限制了心肌细胞的伸长与缩短，增加了心肌的僵硬度，使心肌细胞之间力的传递受阻，血管壁的弹性降低，心肌血氧供应功能遭到破坏。发现的乳头肌有肌纤维与胶原纤维断裂现象也许也是因为心脏长期强有力的收缩导致缺氧情况而引起的损伤。同时心内膜对缺血缺氧很敏感，运动超负荷导致心内膜胶原纤维层增厚，内皮细胞受到损伤，这可能是因心肌肥厚的原因导致。此结果与Weber等[9]报道的压力超负荷性心肌肥厚结果相类似。
3.2 透射电镜下不同负荷对心肌亚微结构的影响 心脏的机能状态是决定运动训练水平的重要因素之一，直接关系运动成绩的好坏，尤其对耐力运动员。本研究通过不同运动负荷观察了心肌的超微结构变化。心脏超微结构改变能较直观地反映心肌细胞及间质重塑。构成心脏的细胞中，心肌细胞仅为心脏细胞总数的1/3，而体积却占心脏结构的75%，所以心肌细胞重塑是心脏形态结构重塑的重要方面。心肌间质部分有成纤维细胞、胶原纤维、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等。适宜负荷后运动心脏的超微结构特点:1) 心肌细胞体积增大，心肌纤维增粗。2) 线粒体均匀增大，线粒体变密，基质电子密度增强。3) 横小管扩张增大，闰盘连接不同程度改变。长期过度负荷可导致心肌肌丝紊乱，部分肌丝断裂，并出现心肌纤维化、结缔组织增生肌节异常、线粒体肿胀、峭断裂及钙超载、毛细血管密度下降等现象[5]。佟长青等[18]发现运动性心脏心肌超微结构亦有病理变化，主要是水盐代谢障碍，表现为肌浆网扩张，钙超载，而病理性心脏主要表现为蛋白质合成及能量代谢受损。目前研究较一致认为，过度负荷导致心肌损伤的机制是血液动力学及内分泌改变引起心肌缺血缺氧及代谢障碍，并形成恶性循环所致。本研究从微观上证实了运动心脏与功能相适应的结构改变。过度负荷组超微结构显示肌丝、闰盘、线粒体发生一系列病理性改变，可能是由于长期缺血缺氧，或缺氧累加使细胞发生不可逆的结构改变，如肌丝断裂、线粒体膜的融合、嵴结构模糊消失、空泡的出现。一般运动组心肌表现为与有氧代谢功能增强相适应的生理性肥大，线粒体随着细胞体积的增长而成比例的增长，和线粒体数量增加，肌节排列整齐而更适应心脏快速收缩的协调性。可见适宜的运动负荷提高心脏的机能，相反，长时间的超负荷训练对心脏造成损伤。
总之，实验证明运动超负荷可致心肌胶原纤维增生，
可能是导致心肌扩张功能与收缩功能降低的主要原因之一。而有关运动负荷与心肌间质胶原网络重塑的调控及分子生物学机制有待作进一步研究。
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心肌细胞形态学 篇4
1 资料与方法
1.1 一般资料
拟2014年3月开始,募集本院就诊的冠心病患者,根据冠心病各分型的诊断标准分为三组:稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组,每组40例,其中男72例,女48例,年龄50~70岁,平均年龄(57.8±3.5)岁。选择同期心内科门诊或住院患者40例,以“胸痛”入院,最终排除冠心病可能者为对照组。纳入标准:稳定型心绞痛入组标准:(1)典型心绞痛表现;(2)诱发因素及缓解方式:慢性稳定型心绞痛的发作与劳力或情绪激动有关,如走快路、爬坡时诱发,停下休息即可缓解。舌下含服硝酸甘油可在1 min内迅速缓解症状;(3)心肌酶、肌钙蛋白正常或升高<2倍正常值;(4)心电图:一过性2个以上导联ST段下移>0.1 m V,或T波倒置>0.2 m V;(5)运动平板试验阳性;(6)冠脉造影示:1支以上血管狭窄>50%。不稳定型心绞痛入组标准:(1)典型不稳定型心绞痛临床表现;(2)心肌酶、肌钙蛋白正常或升高<2倍正常值;(3)心电图:新发或一过性2个以上导联ST段下移>0.1 m V,或T波倒置>0.2 m V;(4)冠脉造影示:1支以上血管狭窄>50%。急性心肌梗死入组标准:(1)缺血性胸痛临床病史;(2)心电图动态演变;(3)心肌坏死血清标志物浓度动态改变。3项中符合两项。排除标准:中重度贫血及其他血液系统疾病、糖尿病、肾功能不全、肝硬化、恶性肿瘤、类风湿关节炎等。四组患者年龄、性别等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组
患者入院静脉采血若干管,分别检测血常规、心肌酶谱、血脂。对照组空腹8 h,清晨静脉采血,检测血常规和心肌酶谱。
1.2.2 急性心肌梗死组
入院即明确诊断急性心肌梗死患者,静脉采血检测血常规、心肌酶谱、血脂。采取临床综合治疗,明确诊断后6、12、24、48 h、第3、7、10、14、21、30天复测患者血常规,研究红细胞形态学参数变化趋势。明确诊断后12、24、48 h、第3、7、10、14天复测心肌酶谱。
1.2.3 超声心动图检查
入院3 d内采用HP-SONOS5000型彩色脉冲多普勒超声显像仪测量,探头频率2.5 Hz。用M型超声心动图测量左心房内径(LAD)、左心室舒张期末内径(LVDd)和左心室射血分数(LVEF),连续测量3~5个心动周期,取平均值。心肌梗死后3、14、21、30 d复查,明确心肌梗死后心脏功能。
1.2.4 并发症组和非并发症组
急性期并发症定义:心功能衰竭、心律失常或心源性休克。心功能衰竭:Killip分级≥2级且左心室射血分数<50%;心律失常:新出现的由心电图或心电监护仪记录到的窦性停搏、重度窦房传导阻滞、心房颤动、心房扑动、Ⅱ度及以上房室传导阻滞、频发室性早搏(每分钟>5次)、室上性及室性心动过速、心室颤动等。休克:收缩压<90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa),有烦躁不安、面色苍白、皮肤湿冷、脉细而快、尿量减少等临床表现。远期并发症定义:乳头肌功能失调或断裂(彩超检查可明确);室壁瘤或室壁瘤破裂(彩超可明确诊断);室间隔穿孔(彩超检查明确)。
1.3 统计学方法
所有数据采用SPSS15.0统计学软件进行分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,正态性采用Shapiro-Wilk检验法;方差齐性采用Levenes’检验,若方差不齐,采用t’检验,否则采用t检验;多组计量资料采用单因素方差分析的Anova分析,组间比较采用LSD-t分析;影响心肌梗死后并发症的因素采用Cox多因素回归分析。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 四组红细胞形态学参数指标的评估比较
四组的RDW、MCHC、MCH、MCV等红细胞形态参数指标差异具有统计学意义(P<0.01);四组的谷草转氨酶(AST)、LDH、CK-MB、c Tn T、c Tn I等心肌酶指标差异具有统计学意义(P<0.01)。见表1,表2。
2.2 急性心肌梗死组红细胞形态学参数MCV、MCH、MCHC、RDW变化趋势
MCV、MCH、RDW逐渐升高,而MCHC逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。
2.3 影响心肌梗死后并发症发生的Cox多因素回归分析
RDW、LDH、CK-MB、c Tn T、c Tn I等指标对心肌梗死后并发症的发生有影响(P<0.05)。见表4。
注:四组比较,P<0.01
注:四组比较,P<0.01
注:不同时间红细胞形态学参数比较,P<0.01
3 小结
心肌酶谱是目前临床诊断心肌疾病的“金标准”[3]。CK-MB测定对于诊断急性心肌梗死的特异性和敏感性都优于CK的总活力测定,研究显示CK-MB在急性心肌梗死发生后3~6 h开始升高,8~24 h达高峰,为正常数倍至近10倍,且升高持续时间短,在治疗后2~3 d内CK-MB多可恢复至近正常[4]。心肌缺血性损伤发生后,细胞膜的通透性增高,c Tn I及其复合体通过细胞膜进入细胞间质,在外周血中出现的主要是c Tn I-Tn C复合体。c Tn I是心肌损伤的特异性指标,急性心肌梗死发生后3~6 h内c Tn I升高,14~20 h内达峰值,5~7 d恢复正常,测定c Tn I来反映心肌损伤的敏感性和特异性已作为心肌炎诊断的重要依据之一。c Tn I与心力衰竭的严重程度和转归急性冠状动脉综合征的近期危险度分级密切相关,对于实施病情监测和预后评估极为重要。
摘要：目的 分析心肌酶和红细胞形态学参数与心肌梗死的相关性。方法 120例冠心病患者,根据冠心病各分型诊断标准分为三组:稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组,每组40例,选择同期心内科门诊或住院患者40例,以“胸痛”入院,最终排除冠心病可能者为对照组,对比冠心病患者和对照组患者血常规及心肌酶谱;分析急性心肌梗死红细胞形态学参数变化趋势;ROC曲线分析对心肌梗死诊断的敏感性和特异性;分析红细胞形态学参数和心肌酶谱相关关系;做心肌梗死并发症组和非并发症组多因素回归分析,分析影响心肌梗死后并发症的危险因素。结果 四组红细胞形态参数指标差异具有统计学意义(P<0.01);四组的心肌酶指标差异具有统计学意义(P<0.01);急性心肌梗死组变化趋势平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞体积分布宽度(RDW)逐渐升高,而平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);RDW、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(c Tn T)、肌钙蛋白I(c Tn I)等指标对心肌梗死后并发症的发生有影响(P<0.05)。结论 急性心肌梗死与心肌酶指标及红细胞形态学密切相关,可用于评估病情严重程度及预后。
关键词：心肌梗死,红细胞形态学,心肌酶
参考文献
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心肌细胞形态学 篇5
关键词：全血细胞减少,细胞形态学
全血细胞减少是指外周血中白细胞、红细胞及血小板均减少。它不是一种独立的疾病,而是多种病因在血液学检查时出现的一种共同表现,可由造血系统疾病引起,也可由非造血系统疾病引起,根据骨髓细胞和外周血细胞形态、细胞化学染色,结合临床资料为临床提供诊断性意见或参考性意见。本文收集2007年1月-2008年8月718例全血细胞减少患者的细胞形态学资料进行回顾性分析。
1 临床资料
1.1 一般资料
2007年1月-2008年8月到上海瑞金医院就诊的全血细胞减少初诊患者718例,均除外白血病复发、肿瘤放化疗及透析后状况。男368例,女350例;年龄3岁~92岁,其中成人(≥15岁)688例(男∶女=1.05∶1),儿童(≤14岁)30例(男∶女=1.14∶1)。全部患者均符合以下诊断标准:多次血常规至少2次或2次以上WBC<4.0×109/L,PLT<100×109/L,男性Hb<120 g/L,女性(非妊娠)Hb<110 g/L,孕妇Hb<100 g/L,6个月龄~6岁小儿Hb<110 g/L,>6岁~14岁Hb<120 g/L(海平面)[1]。
1.2 检测方法
(1)应用美国Beckman Coulter血液分析仪及其配套试剂测定血常规,瑞特染色血涂片进行细胞分类,并做中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色计分。(2)瑞特染色骨髓片分类200个有核细胞,并进行形态观察。选用新鲜的、含有骨髓小粒的骨髓涂片进行铁染色。急性白血病骨髓标本进行细胞化学染色包括:过氧化物酶(POX)、特异性酯酶(CE)、非特异性酯酶(AE)、Na F抑制试验、过碘酸-雪夫反应(PAS)。(3)参照张之南等《血液病诊断及疗效标准》[1]。
1.3 临床表现
患者三系下降,一般伴有不同程度的贫血、发热、出血等特点,部分患者可有淋巴结、肝脾肿大等浸润体征。
1.4 既往病史
肝硬化、乙肝、甲亢、丙肝、冠心病、类风湿、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、高血压、肺炎、红斑狼疮(SLE)、胆囊结石等。
2 结果
2.1 骨髓增生程度的分级采用五级分类法[2]:增生极度活跃43例(5.99%),增生明显活跃185例(25.77%),增生活跃285例(39.69%),增生减低160例(22.28%),增生极度减低44例(6.13%),其中1例骨髓坏死无法分级。虽然外周血都表现为三系减少,但骨髓中的增生程度表现不一,增生低下和增生极度低下只占204例(28.41%),可见全血细胞减低并不代表骨髓增生程度也减低。
2.2 王霄霞等[3]把骨髓检查诊断意见的种类分为6类:(1)肯定性诊断;(2)提示性诊断;(3)符合性诊断;(4)疑似性诊断;(5)排除性诊断;(6)形态学描述。按以上分类,本组718例骨髓象的分类及特点如下:(1)肯定性诊断:219例(30.50%);(2)提示性诊断:123例(17.13%);(3)符合性诊断:10例(1.39%);(4)疑似性诊断:55例(7.66%);(5)排除性诊断:33例(4.60%);(6)形态学描述:278例(38.72%)。
2.3 根据骨髓细胞和外周血细胞形态,细胞化学染色,结合临床提供的信息,可确定全血细胞减少的血液病病因229例(包括肯定性诊断和符合性诊断),见表1。
2.4 铁染色共437例,内铁、外铁均阴性34例(7.78%),仅外铁阴性137例(31.35%),仅内铁阴性56例(12.81%);外铁阴性,而内铁阳性率为1%~14%者28例(6.41%);外铁阳性,而内铁阳性率为1%~14%者12例(2.75%)。
3 讨论
3.1 急性白血病在全血细胞减少症患者中的分布
本文718例全血细胞减少患者通过骨髓细胞和外周血细胞形态、细胞化学染色,结合临床资料,可得到肯定性病因的有229例。其中急性白血病为126例,分化差或增生低下而不能分型的占12例;通过细胞化学染色急性髓细胞白血病(AML)92例,其中不能确定亚型13例,M1型1例,M2型7例,M3型32例,M4型20例,M5型12例,M6型7例。急性淋巴细胞白血病(ALL)22例,未确定亚型6例,L1型1例,L2型14例,L3型1例。由于受白血病细胞多态性,观察者认知水平、主观因素等影响,王霄霞[3]认为只有60%~70%患者通过形态学检查能确定白血病的类型,与本文75.4%相符,而其他则需要结合细胞免疫学、细胞遗传学及分子生物学检查进行综合分析。
3.2 细胞形态学与临床、相关实验室信息的关系
细胞形态学检查结合临床症状、体征及相关实验室信息是保证诊断结果可靠性的重要依据。如已知为肺癌患者,在骨髓中可见数量不等、成堆的转移癌细胞,即能确定为肺癌骨髓转移。如三系减少患者脾脏肿大,骨髓出现成熟障碍,即符合脾功能亢进的骨髓象表现。如骨髓增生明显活跃,巨幼红细胞>10%,结合MCV>100 fl,血清叶酸或维生素B12缺乏,就可诊断为MA。本文103例分别诊断为MDS、AA、MM,脾功能亢进、MA、LPD、淋巴瘤骨髓浸润、HPS、骨髓坏死、ITP、骨髓转移癌,既是骨髓呈特异性变化,临床表现又典型者,临床便可确诊。
3.3 骨髓细胞形态学检查的局限性
骨髓细胞形态学检查反映了骨髓造血功能,但仅反映穿刺点的情况,常存在抽样误差,如涂片是来自窦血,易发生外周血液稀释或取材不理想而影响诊断。本文718例患者中骨髓完全稀释标本占15例(2.09%),部分稀释标本占19例(2.65%),其中有3例原始细胞易见,但<20%。有4例(0.56%)标本无稀释,原始细胞易见(<20%),病态改变不明显。有47例标本(6.55%)骨髓三系增生低下。以上标本要建议重新穿刺送检并结合骨髓活检,进一步确认是否为低增生性白血病、低增生性MDS、不典型AA等。有5例标本骨髓中浆细胞易见,但<20%,且红细胞呈缗钱状排列,需结合骨髓活检、扁平骨X线摄片、血尿免疫球蛋白电泳检查,进一步确定是否为MM。
3.4 为临床提供有效信息
718例患者尚有489例是不能以一次骨髓检查而得到明确诊断的,只能为临床提供提示性的信息。可见以下情况:(1)骨髓中出现少量异常细胞,如见少量噬血细胞性组织细胞,临床表现发热、肝(脾、淋巴结)肿大,可考虑感染(病毒、细菌、真菌、寄生虫)、药物性(如使用苯妥英钠后)、自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮)、恶性肿瘤(如恶性淋巴瘤);如骨髓中见戒指样组织细胞,提示要做血清肥达、外斐试验,排除伤寒的可能;如骨髓中见淋巴样异常细胞,可考虑淋巴系统疾病,建议做细胞免疫标记检测。(2)骨髓三系均有病态改变,而程度较轻,可建议随诊或进行骨髓活检。骨髓中细胞巨幼变和类巨幼变在形态上可有部分重叠,通过形态MA与MDS不能鉴别时,建议结合维生素B12和叶酸检查、骨髓活检及染色体检测进行鉴别诊断,也可诊断性治疗观察疗效。(3)部分患者在骨髓穿刺前使用了药物如G-CSF,可刺激骨髓中的早(中)幼粒细胞数量的增加,而颗粒增多增粗,易与感染骨髓象混淆。这种情况可通过了解病史和NAP积分计数进行鉴别。(4)本文有10例疑似AA患者骨髓象有较特异的改变,但外周血出现幼红细胞,或NAP积分正常,或淋巴细胞比例不高,或网织红细胞计数未见明显降低而为临床提供疑似性诊断,建议临床随诊和结合骨髓活检。
3.5 内铁、外铁检查的意义
骨髓铁染色检测是反映机体储存铁的金标准,正常人细胞外铁(+)至(++),细胞内铁阳性率为14%~44%[3]。本室对初诊时有贫血的骨髓检查患者,铁染色作为常规细胞化学染色项目。经铁染色可将贫血分为细胞外铁消失和内铁减少的铁缺乏性贫血(缺铁性贫血及其他缺铁的贫血),细胞外铁增加或正常而细胞内铁粒增加和环形铁粒幼细胞增多(MA、AA、MDS-RAS等),细胞外铁增加而细胞内铁减少的继发性或慢性病性贫血[4]。
3.6 NAP积分计数的辅助作用
NAP存在于中性成熟粒细胞中,在不同疾病情况下酶活性有所变化,可协助疾病的鉴别诊断。初诊患者的骨髓检查,外周血NAP染色作为常规细胞化学染色项目,如NAP积分增高可见于细菌感染、AA、骨髓纤维化、ALL、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌等,本文中诊断为AA的22例NAP积分为108~352分。NAP积分降低可见于阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、MDS、AML等。
3.7 外周血涂片是血液病诊断的重要窗口
血涂片在骨髓细胞形态检查中是一个联检项目。本文126例急性白血病患者中有106例(84.13%)在外周血发现一定数量白血病细胞,为疾病提供快速的诊断。外周血涂片对AA和MDS鉴别具有重要意义,MDS外周血中可出现幼粒细胞和晚幼红细胞甚至原始细胞;而AA患者的外周血中均不出现幼粒细胞,只有少数病例可发现少量晚幼红细胞;骨髓纤维化最主要的特点是外周血涂片中幼红、幼粒细胞及泪滴形红细胞较易见。骨髓瘤细胞在外周血中>2.0×109/L时,诊断为浆细胞白血病。
细胞形态学(骨髓和外周血)只是诊断全血细胞减少症病因的多种检查方法之一,有条件的单位通过细胞形态学分析,结合病情可选择骨髓病理学、细胞遗传学、细胞免疫学、分子生物学、血清铁、铁蛋白、Coombs试验、Ham试验、ENA谱检测、乙肝、丙肝病毒检测、HIV检测、肥达反应、外斐反应、肝肾功能检查、免疫球蛋白定量、腹部B超、扁平骨X线摄片等综合检查;糖皮质激素、丙种球蛋白、维生素B12或叶酸等诊断性治疗等。大多数全血细胞减少患者要明确病因,必须通过多项检查并结合临床分析。
参考文献
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心肌细胞形态学 篇6
1 材料与方法
1.1 实验动物 8周龄无特定病原体级(SPF)SD幼鼠60只,雌雄各半,体质量100～150g,购自广东医学院动物饲养中心;采用析因设计方法,将大鼠随机分为慢性缺氧组(慢性缺氧14、21、28d)和正常对照组(正常对照14、21、28d)共6组,每组各10只。
1.2 仪器与试剂 CYK-50型数字控氧仪(浙江省建德市利达仪器厂生产);Hoechst3325染色试剂盒购自碧云天生物技术研究所, 原位末端标记法(Tunel法)试剂盒:德国罗氏诊断公司。
1.3 常压慢性持续缺氧动物模型的建立 参照《常压缺氧性大鼠肺动脉高压模型的改进》中的常压缺氧动物模型[1],实验组SD幼鼠在CYK-50型数字控氧仪控制9.5%～10.5%氧浓度下复制慢性缺氧动物模型,对照组SD幼鼠于普通饲养笼中饲养。
1.4 右心室肥大检测 实验组SD幼鼠各在14、21、28d当天上午9∶00时参照常压缺氧大鼠模型中的实验方法,用10%乌拉坦腹腔麻醉后称重体质量(BW),取出心脏,剪去心房组织,沿室间隔边缘分离出右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S),称重,计算RV/(LV+S)、RV/BW及(LV+S)/BW比值。以RV/(LV+S) 和RV/BW作为右心室肥厚标准。迅速分离出右心室,一部分保存于10%的甲醛溶液中,进一步做组织切片用于HE染色、荧光染色和原位末端标记;余保留组织作分子生物学检测。
1.5 右心室心肌细胞凋亡的检测 取切取的右心室组织常规包埋切片后,分别行HE染色,Hoechst荧光染色原位末端标记染色,具体步骤参见各试剂盒说明书,每张切片随机选10个视野,先在低倍显微镜下统计该视野中的细胞总数并找出被标记的心肌细胞,然后经高倍显微镜(400倍) 下计数每张切片凋亡阳性细胞核数目及其与总细胞核数目比例,取其平均值为心肌细胞凋亡指数(AI) 。即凋亡指数(AI) = 凋亡细胞数/ 总观察细胞数×100%。
1.6 统计学方法 采用SaS软件(8.0版)统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差
2 结 果
2.1 右心室心肌肥厚指数的改变
慢性缺氧组14、21、28d大鼠RV/(LV+S)、RV/BW比值均明显高于正常对照组(P<0.01)。慢性缺氧组缺氧21dRV/(LV+S)、RV/BW比值均高于缺氧14d(P<0.01);缺氧28dRV/(LV+S)、RV/BW比值均高于缺氧21d(P<0.01)。见表1。
注:与正常对照组比较,*P<0.01;与同组14d比较,#P<0.01;与同组21d比较,△P<0.01
2.2 右心室心肌细胞凋亡率的结果
各组右心室心肌细胞组织切片Turnel染色,正常对照组未见或偶见Tunel阳性细胞,慢性缺氧组可见多量Tunel阳性细胞。实验结果显示,慢性缺氧组14、21、28d大鼠AI值均较对照组显著增高(P<0.01)。慢性缺氧组缺氧21d AI值高于缺氧14d(P<0.01),缺氧28d AI值高于缺氧21d组(P<0.01)。见表2。
注:与正常对照组比较,*P<0.01;与同组14d比较,#P<0.01;与同组21d比较,△P<0.01
3 讨 论
本研究通过建立慢性缺氧大鼠模型,检测右心室心肌肥大指数RV/(LV+S)、RV/BW比值,发现慢性缺氧组均明显高于正常对照组(P<0.01),且随着缺氧时间的延长, 其比值增高。提示缺氧可诱导右心室心肌肥大,且时间越长右心室肥大越明显。 同时,本研究对心肌细胞凋亡进行形态及计量分析。结果显示正常对照组未见或偶见Tunel阳性细胞,慢性缺氧组可见多量Tunel阳性细胞,心肌细胞凋亡指数显示,均较正常对照组显著增高(P<0.01)。慢性缺氧组细胞凋亡指数随着缺氧时间的延长而增高。提示慢性缺氧可诱导大鼠右心室心肌细胞凋亡,且随着缺氧时间延长而增加。
缺氧是右心室心力衰竭最常见的原因,目前左心室心肌重构的研究已比较清楚,心肌细胞凋亡是左心室由代偿性心肌肥大发展为心功能不全的重要因素[2,3,4]。右心室发生肥厚扩张、细胞凋亡,尤其是心肌肥大的同时存在心肌细胞凋亡的报道很少。虽然在肺动脉结扎所致压力负荷过重的动物模型中发现右心室肥厚的同时存在心肌细胞凋亡[5] ;但是慢性缺氧引起右心室心肌肥大的同时是否存在心肌细胞凋亡仍不清楚。
细胞凋亡(apoptosis)由Kerr等在1972年提出,又称程序性细胞死亡(PCD) ,是正常机体细胞在受到生理和病理性刺激后出现的一种受基因调控的细胞主动自杀过程。原来的观点认为心肌细胞是终末分化细胞,主要以坏死的方式死亡。近年来这种观点受到很多研究的挑战,目前认为心肌细胞凋亡普遍存在于缺氧、缺血再灌注损伤、扩张型心肌病、肥厚型心肌病等各种原因所致的心力衰竭中。在心肌梗死大鼠模型中已经证实,用caspase-3抑制剂或钙蛋白酶抑制剂可抑制左心室重构中心肌细胞凋亡的发生,从而减轻心力衰竭[6]。国外研究发现一方面细胞凋亡是促使心肌肥大进展到心力衰竭重要因素,另一方面肥大心肌细胞对凋亡刺激因子的敏感性增加,更容易发生凋亡[7,8]。这与本文的研究结果相符合。
从本实验中可得出常压慢性持续缺氧可致SD鼠右心室肥大、右心室心肌细胞凋亡,暴露时间越长,其心室肥厚和细胞凋亡严重程度越大,呈现出明显的时间-效应趋势。
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心肌细胞形态学 篇7
关键词：儿童,急性淋巴细胞白血病,骨髓细胞,形态学
骨髓是人体的重要组成部分,对维持人体身体结构平衡有重要作用,其中血细胞的质和量是血液病的重要病理变化[1]。而骨髓细胞形态学检查主要用于各种血液病导致血细胞发生质和量的改变,采用骨髓细胞形态学检查,并结合原始临床资料,对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的鉴别和诊断具有重要临床意义[2]。 该检查方法具有操作简单、参考价值大、报告及时等特点,但在检查过程中因骨髓取材及检验人员判断能力的不同,使的该方法的诊断技术缺乏统一的标准。 因此对儿童急性淋巴细胞白血病骨髓细胞形态检查进行综合评价具有非常重要的临床价值。 报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料选择2009 年9 月~2014 年10 月来院治疗的ALL患儿32 例作为本次研究对象。 其中男18 例,女14例,年龄0.5~15(4.37±1.20)岁。 儿童白血病协会组对ALL患儿采用统一的入组标准,其中低危组11 例,中危组12 例,高危组9 例;入选患儿随访时间为0.5 ~36(18.46±2.57)个月。
1.2 方法首先采集、登记入院患者的基本资料;其次,明确骨髓检查的时间及诊断资料,包括患者初诊资料、复诊第1 次、复诊第2 次及复诊第3 次的骨髓细胞涂片及原始报告;由专业检验人员对骨髓细胞涂片进行复检,内容包括:骨髓细胞分类、骨髓细胞特征、提出检验结论;最后,由血液形态学检验师对骨髓细胞涂片的复检及原始报告进行对比分析,并提供意见。
2 结果
2.1 骨髓取材及增生程度、染色情况本组有26 份(6.19%)骨髓细胞涂片复检与原始报告均判断取材稀释,且均未描述骨髓增生程度。 其余394 份(93.81%)骨髓细胞涂片复检报告与原始报告均判断骨髓取材良好,其骨髓增生产程度与原始报告基本吻合。 本组复检报告中有8 份(7.84%)初诊骨髓细胞涂片染色偏深,有5 份(4.90%)初诊骨髓细胞涂片描述染色偏浅,其余89 份均描述染色良好。 报告存在分歧的13 份骨髓细胞涂片经复审,支持复检报告结论。 见表1。
2.2 检验结果本组394 份骨髓细胞涂片复检与原始报告检验结果基本吻合,其中103 份初诊骨髓细胞涂片检验确定为ALL;在93 份复诊第1 次骨髓细胞涂片中,完全缓解、部分缓解、未缓解分别为74、12、7 份;在96 份复诊第2 次骨髓细胞涂片中,完全缓解、部分缓解、未缓解分别为84、8、4 份。见表2。
3 讨论
在临床检验中,骨髓细胞形态学检查发挥着重要作用,尤其是在急性白血病分型及治疗评估中,具有重要的临床价值[3]。 但是,在实际操作中,因检验人员对细胞形态学检查操作的不熟练,可能造成骨髓细胞取材、染色等情况与理论要求不同,导致该诊断技术缺乏标准化[4]。因此建立统一的骨髓细胞形态学检验标准及报告格式是非常重要的。
骨髓细胞学检查中,骨髓细胞取材是最基础的部分,但采集骨髓标本时,往往出现混血稀释,对骨髓细胞学检查结果造成一定影响[5]。 因此正确判断骨髓稀释及增生程度是评估ALL患儿治疗效果及调整治疗方案的重要保证[6]。 除此之外,骨髓细胞涂片染色情况也对骨髓细胞学检查结果有一定影响,在检验过程中应结合涂片中有核细胞数量、实验室温度、染液与缓冲液比例等[7,8]。 总的来说,目前骨髓细胞形态学检查方法已相对较为成熟,但在实际操作中,因检验人员操作技术的不同,造成骨髓细胞涂片在检验结论中出现差异,因此定期对检验人员进行培训和考核,强化检验人员综合素质,对于保证骨髓细胞形态学检查标准一致性作用确切。
综上所述,针对急性淋巴细胞白血病患儿的骨髓细胞涂片进行对比分析,有利于提高医院骨髓细胞形态学诊断综合水平和提高检验人员骨髓细胞形态识别能力,对于建立规范的细胞形态学检查模式具有重要意义。
参考文献
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心肌细胞形态学 篇8
1 资料与方法
1.1 研究对象
2009年3月—2012年3月来我院就诊的全血细胞减少初诊患者117例,均除外白血病复发、肿瘤放化疗及透析后状况。男60例,女57例,年龄20岁～86岁。
1.2 临床表现
一般伴有不同程度的头晕、乏力、食欲不振等贫血症状,可伴有发热、皮肤瘀斑、牙龈出血、鼻血、月经量增多,部分患者可有淋巴结、肝脾肿大及骨关节疼痛等。
1.3 既往病史
肝硬化、乙型肝炎、甲状腺功能亢进、冠心病、类风湿、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、高血压、肺炎、红斑狼疮(SLE)等。
1.4 诊断标准
多次血常规至少2次或2次以上白细胞(WBC)<4.0×109/L,血小板(PLT)<100×109/L,男性血红蛋白(Hb)<120 g/L,女性(非妊娠)Hb<110 g/L,孕妇Hb<100 g/L。
1.5 检测方法
应用美国Beckman Coulter血液分析仪及其配套试剂测定血常规,外周血及骨髓片均做瑞氏染色血涂片进行细胞分类,必要时辅以细胞化学染色[如中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色计分、铁染色、过氧化物酶(POX)等]。参照张之南等《血液病诊断及疗效标准》[1]进行分析。
2 结果
2.1 骨髓增生程度:骨髓涂片增生程度的分级采用5级分类法[2]:增生极度活跃3例(2.56%),增生明显活跃31例(26.50%),增生活跃56例(47.86%),增生减低20例(17.09%),增生极度减低5例(4.2%),有2例骨髓坏死无法分级。由此可见,虽然外周血均表现为三系减少,但并不代表骨髓增生程度都是减低的。
2.2 根据骨髓检查诊断意见[3]可分为6类:(1)肯定性诊断15例(12.82%);(2)提示性诊断21例(17.95%);(3)符合性诊断8例(6.84%);(4)疑似性诊断23例(19.66%);(5)排除性诊断13例(11.11%);(6)形态学描述37例(31.62%)。
2.3 根据骨髓细胞和外周血细胞形态、细胞化学染色等相关检查,结合临床表现得出临床诊断,分布结果见表1。
2.4 非造血系统疾病26例,占22.22%,经临床确诊,病因分布见表2。
3 讨论
3.1 全血细胞减少是一组高度异质性疾病的共同表现[4],据国内外统计,血液病占全细胞减少疾病原因的80%,非血液病占20%[5]。本组资料显示,血液系统是引起全血细胞减少最常见的原因,占77.78%;非血液系统疾病引起占22.22%。近年来文献报道全血细胞减少最常见的病因排列顺序是再生障碍性贫血、急性白血病、脾功能亢进、自身免疫性疾病等[6]。而本组资料显示,血液系统疾病中引起全血细胞减少的原因前5位依次为急性白血病、巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、脾功能亢进。白血病是一种起源于造血干细胞的克隆性造血障碍疾病,我市是以纺织、服装、化工、电子、机械、塑料等为主的制造业城市,所以电子辐射、空气污染、三废治理不够完善等因素都将成为白血病的诱因。
3.2 本组117例全血细胞减少患者通过骨髓细胞和外周血细胞形态、细胞化学染色,结合临床资料,可得到肯定性诊断的只有15例,而更多的则是提示性诊断(17.95%)、疑似性诊断(19.66%)和形态学描述(31.62%)。这些年随着细胞免疫学、细胞遗传学及分子生物学的迅速发展,越来越多的血液病并不单单依赖细胞形态作为诊断标准,同时受到细胞多态性、观察者认知水平等一些主观因素的影响,细胞形态学存在局限性。王霄霞[3]认为只有60%～70%的患者能通过形态学检查确定白血病类型,而其他则需结合细胞免疫学、细胞遗传学及分子生物学检查进行综合分析。虽然不能以1次骨髓形态学检查而得到明确诊断,但是骨髓形态学检查还是为临床提供了重要的、可靠的提示性信息。若骨髓三系均有病态改变,而程度较轻,尤其是骨髓中细胞出现巨幼变和类巨幼变,MA与MDS难以鉴别时,可提示维生素B12和叶酸检查、骨髓活检及染色体检测进行鉴别诊断。若骨髓中出现少量异常细胞,如噬血性组织细胞,临床表现为发热、肝脾淋巴结肿大,可考虑感染,药物性、自身免疫性疾病,恶性肿瘤等。
3.3 在非造血系统疾病中,其骨髓象表现无明显特异性,以脾功能亢进、感染性疾病及骨髓转移癌多见,由此提示,应当详细询问病史、查体、相关检查,还要注意骨髓中特殊细胞的出现如印戒样组织细胞、寄生虫、肿瘤细胞、狼疮细胞等,对疾病的诊断有重要意义。
全血细胞减少不是独立的疾病,它是不同疾病在某个侧面的共同表现,细胞形态学只是诊断全血细胞减少症病因的多种检测方法之一,临床上要密切结合症状、病史、体征及其相关检查作出正确诊断。
摘要：目的 分析全血细胞减少患者骨髓和外周血细胞形态在病因诊断中的价值。方法 对117例全血细胞减少患者的骨髓和外周血细胞形态进行分析。结果 117例患者通过骨髓和外周血细胞形态分析得到肯定性诊断15例(12.82%),提示性诊断21例(17.95%),符合性诊断8例(6.84%),疑似性诊断23例(19.66%),排除性诊断13例(11.11%),形态学描述37例(31.62%)。结论 形态学检查是诊断全血细胞减少症病因的多种检查方法之一,必须结合症状、病史、体征及其相关检查作出正确诊断。
关键词：全血细胞减少,病因,诊断,细胞形态学
参考文献
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血细胞形态学的讨论 篇9
1 分析仪与形态学的关系
文献评价原始细胞仪器结果与镜检结果的Kappa值只有0.39[1], 二者一致性弱, 如对单纯原始细胞提过而不伴其他异常的病例进行考察, 一致性会进一步下降。当提示可靠时还应对敏感性进行评价。文献中血涂片阳性标准为原始细胞≥1个、早/中幼阶段细胞≥1个、不典型的淋巴细胞>5个等[2]。为了保证血液分析结果准确, 要求每个血液都实施镜检, 但目前化验人员少, 工作量大, 要使用规范的镜检发出报告时困难的, 只有通过细胞分析仪的检测进行过筛, 对异常结果进行规范化镜检, 综合两种检测方法的优点, 才能为临床提供快速、准确的分析结果。
筛选需要一定的标准, 当仪器的结果达到制定的标准时, 可视为仪器所得白细胞分类结果能客观反映血象状况无需镜检, 反之, 须进一步涂片镜检。制定筛选标准内遵循下列原则。
第一, 根据仪器对细胞形态识别能力, 决定筛选标准的宽严程度, 识别能力越差, 标准越严。
第二, 筛选范围应涵盖多有人工镜检范围。第三, 在保证质量基础上, 尽量使复检率低。第四, 假阴性率是关键参数, 最有诊断意义的参数不能出现假阴性率。第五, 白血病患者不能漏检。第六, 临床医生提出阅片者, 必须镜检。第七, 不同仪器筛选标准不同。
2 血细胞形态学基本概念
血细胞形态学作为临床血液病基础诊断。
2.1 观察血细胞形态和数量及其比例的变化来研究造血器官的结构和功能是血液学的重要组成部分, 是诊断造血系统疾病最基本、最简便实用的检查方法, 被临床普遍应用。
2.2 正常人的血液及造血器官中, 各种血细胞的数量有一定的正常范围, 不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。
2.3 在造血系统疾病中, 如果造血功能发生紊乱, 就会从血细胞形态学的量变和质变中反映出来。
2.4 血细胞形态学检查应包括外周血和骨髓两部分组成, 必须平行进行检查。因为, 外周血的血细胞改变往往反映骨髓病变的信息, 从而有利于诊断。
3 血细胞涂片自身的特点
3.1 涂片不易均匀:
由于血液是混悬液, 其中白细胞、有核细胞、RBC、血小板的形态大小、比重及生物活性和血浆成分等的不同和制片技术差异、质量分布不均匀性差异颇大。
3.2 细胞分布和检查的非随机性
(1) 细胞分类标准与观念不一。 (2) 采样和计数100~200个白细胞的局限性。 (3) 细胞分布的生理变动。
3.3
与疾病的相关性。
4 细胞形态检查的缺点
第一, 技术细胞数量少, 固有误差大。检验人员形态学水平参差不齐, 难以统一。第二, 操作步骤繁琐, 难以标准化。第三, 费工费时, 难以在短期时间完成大量标本检测。
5 血涂片细胞形态学检测的意义
5.1 血涂片检查是确认白血病最重要的手段之一
有些白血病早期的患者都是用过血常规检查被发现的, 在疾病的早期多数是血细胞数量和质量的变化。有的白血病是在体检中发现的, 例如慢性淋巴细胞白血病, 临床表现为周围淋巴结肿大, 血常规检查白细胞偏高, 涂片检查为清一色成熟的淋巴细胞。
5.2 为贫血的诊断提供依据。
贫血的原因很多, 细胞的形态往往不一样的。如缺铁性贫血, 地中海贫血, 铁粒幼细胞贫血都是血红蛋白合成障碍引起的贫血。也有不同的地方, 缺铁性贫血时小细胞低色素性贫血, 细胞大小不等非常明显, RDW明显异常。地中海贫血, 血红蛋白合成障碍, 细胞大小均一, 中心染色过浅, RDW基本正常。
5.3 了解疾病感染的程度
一般来说, 感染了白细胞数量增多。但是有时候感染严重, 白细胞反而降低, 所以光看数量反映不出感染的程度, 而细胞形态就可以, 感染越严重, 细胞病理变化就越大, 细胞经历核凝-核溶-核分裂-消亡的过程, 此时细胞数量少了, 感染越发严重。
5.3 提示血小板疾病
血小板的质量和数量决定机体出血、凝血功能。有些疾病, 血小板的功能和他的形态是相关的, 例如血小板无力症的患者因基因缺陷使血小板膜GPⅡbⅢa复合物合成、减少、缺乏、质量异常, 导致血小板聚集、黏附功能障碍、血块收缩不良。血细胞分析仪只能分析出血小板数量, 聚集功能只能通过涂片检测。
6 形态学检测的体会
6.1 骨髓片分析是为临床诊断服务的, 因此需与临床提供的申请单连接起来。
在血液系统疾病诊断中尤要注意淋巴结、肝、脾大小。如:在遇到血三系减少、骨髓增生低下的患者是, 能考虑的疾病很多, 但若临床提供患者脾脏明显增大, 则诊断再生障碍性贫血要小心。
6.2 分析骨髓片时, 大局观是重要的。
即先在低倍镜下综观片的特点, 了解增生情况、观察异常细胞、了解巨核细胞等。
6.3 骨髓片分析不能无头绪。
应该自细胞外—细胞膜—细胞浆—细胞核或相反的过程一一进行分析, 尤要注意染色情况、细胞膜、颗粒分布、染色质、核仁。
细胞形态学检查是多学科联合、技要求较高的技术。检验人员不但要掌握细胞形态学知识, 还应具有全面的临床和血液学知识以及综合分析能力。因为细胞学诊断具有很大的困难性和主观性, 有时患者症状并不典型, 会以各种临床表现就诊于不同的科室。血细胞分析仪不能完全代替显微镜涂片检查, 制定血细胞显微镜复检标准非常必要, 保证血细胞检查的准确性, 为临床诊断、治疗提供有价值的信息。
参考文献
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