氨基酸神经递质

关键词：

氨基酸神经递质（精选三篇）

氨基酸神经递质 篇1

1 材料与方法

1.1 动物模型的建立

大鼠适应性喂养3d后, 按照传统方法, 10%水合氯醛腹腔麻醉 (4mLkg) 大鼠, 将大鼠俯卧位固定在脑立体定向仪上, 头背部皮肤消毒后, 切开额顶部中线皮肤, 暴露颅骨, 以前囟为中心向后1.0mm, 右旁开3.5mm处在颅骨表面穿孔, 用微量进样器垂直插入脑组织, 深度为5.0mm, 向脑组织内缓慢注入胶原酶 (0.5U) , 破坏尾壳核内脑血管基底膜胶原纤维, 造成局部脑实质出血, 留针10min后, 缓慢退出, 缝合切口, 回笼饲养。脑出血加药物干预组与上述操作相同, 但在注血后10min尾静脉注射药物。

1.2 动物分组及给药

造模成功的大鼠随机分为3组。假手术组4只, 脑出血模型组48只, 对照组为脑出血+依达拉奉注射液治疗组48只。对照组给予尾静脉注射依达拉奉0.5mg/kg, 模型组大鼠给予尾静脉注射等量生理盐水。对照组及模型组动物即时给药一次, 超过24h后给药2次。两组分别分为出血前、出血后4h、6h、12h、24h、72h、7d每时间点各8只,

1.3 检测方法

谷氨酸和γ-氨基丁酸测定各组各时间点由乙醚麻醉大鼠, 断头处死, 迅速取坏死周边组织约0.1g, 称重, 加冰冷生理盐水研磨成10%组织匀浆, 在2000r/min, 4℃下离心20分钟以后, 取上清液于-20℃冰箱中冷藏待测。谷氨酸和γ-氨基丁酸测定按试剂盒内的说明操作。

1.4 统计学处理

计数资料的比较采用χ2检验。计量资料数据以均数±标准差表示, 结果采用SPSS13.0软件进行数据分析处理, 多组均数间比较前先进行正态分布及方差齐性检验, 多组均数间比较采用单因素方差分析, 两组均数间比较采用t检验, 以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 治疗结果

2.1 脑出血后6h起, 出血周边脑组织谷氨酸含量较出血前明显增高 (P<0.01) , 24h达高峰, 持续至7d以上, 仍高于出血前。治疗组谷氨酸水平4h起也开始提高 (P<0.05) , 24h达高峰, 至72h起下降, 7d后, 基本与出血前相同。治疗组6h、12h、24h、72h、7d谷氨酸水平明显低于脑出血组 (P<0.05) 。见表1。

与脑出血前相比;▲P<0.01差异具有统计学意义。治疗组与出血组相比;*P<0.05差异具有统计学意义

2.2 脑出血后6h起, 出血周边脑组织γ-氨基丁酸含量明显降低 (P<0.01) , 24h达高峰, 持续至7d以上, 仍低于出血前。治疗组γ-氨基丁酸水平4h起也开始下降, 24h达高峰, 至72h起开始升高, 7d后, 稍低于出血前。治疗组6h、12h、24h、72h、7dγ-氨基丁酸水平高于脑出血组。见表2。

与脑出血前相比;▲P<0.01差异具有统计学意义。治疗组与出血组相比;*P<0.05差异具有统计学意义

3 讨论

已经证明出血后脑缺血及脑组织缺血缺氧均可导致脑内神经递质的变化, 实验发现, 给动物突然造成较严重的脑缺血, 海马的神经元会大量死亡, 兴奋性氨基酸 (EAAs) 的浓度异常升高, 抑制性神经递质明显减少。谷氨酸过度增加所致的神经毒性可致脑损害。在脑功能正常活动中兴奋性和抑制性神经递质间保持着动态平衡。而作为内源性兴奋递质的谷氨酸一旦增加即会打破这种平衡, 导致神经细胞损害。

谷氨酸 (Glu) 是γ-氨基丁酸 (GABA) 的前体, 经谷氨酸脱羧酶催化脱羧后生成GABA, GABA是脑内最重要的抑制性氨基酸 (IAA) 递质, 具有突触后抑制作用, 可通过突触后膜超极化、减少离子内流、降低细胞代谢及氧消耗等机制使突触后神经元处于保护性抑制状态, 并可通过突触前抑制减少Glu的释放。二者存在动态平衡。

大量研究表明, 严重脑缺血缺氧发作可导致脑内谷氨酸等兴奋性氨基酸的浓度异常升高, γ-氨基丁酸等抑制性氨基酸的浓度降低, 从而产生兴奋性神经毒作用。细胞膜上的高亲和性兴奋性氨基酸转运体 (EAATs) 可将兴奋性氨基酸从突触间隙转运至细胞内, 在及时终止兴奋性突触传递以及维持细胞外液兴奋性氨基酸的正常水平中发挥重要作用。本实验发现大鼠脑组织内兴奋性氨基酸神经递质的含量于出血后1~4h内开始升高, 24h达高峰, 以后逐渐下降, 至第7天基本恢复至正常水平。抑制性氨基酸神经递质的含量于出血后1~4h内开始下降, 24h达高峰, 以后逐渐下降, 至第7天仍低于正常水平, 可见抑制性氨基酸神经递质的恢复较慢。

依达拉奉具有清除自由基、抑制脂质过氧化作用, 从而减轻脑出血后缺血引起的水肿及组织损伤[1]。依达拉奉还能抑制迟发性神经元死亡作用[2], 本试验从脑出血缺血后7个时点的动态观察后发现依达拉奉作用在脑出血缺血后24h达高峰, 且1周仍具有脑保护作用。依达拉奉作为一种新的自由基清除剂, 有“自由基清道夫”之称, 在脑缺血方面, 其细胞保护作用可能是通过抗脂质过氧化, 清除自由基及相关神经递质起到细胞保护作用[3]。本研究还表明, 依达拉奉并不影响血液凝固、血小板聚集、纤维蛋白溶解和出血时间, 因此不会增加出血风险。

参考文献

[1]Tanaka K, Wada N, Hori K, et al.Chronic cerebral hypoperfusion disrupts discriminative behavior in acquired learning rats[J].J Neurosci Methods, 2008, 84 (1/2) :63-68.

[2]Fujimura M, Motita-Fujimura Y, Narasimhan P, et al.Copper-zinc super-oxide dismutase prevents the early decrease of apurinic/apyridinic endonuclease and subsequent DNA fragmentation after transient focal cerebral is chemia in mice[J].Stroke, 2009, 30 (11) :2408-2415.

氨基酸神经递质 篇2

急性力竭运动对大鼠下丘脑氨基酸神经递质的影响?

用激光诱导荧光检测的高效毛细管电泳结合微透析技术测定急性力竭运动前后的大鼠下丘脑区细胞外液中的氨基酸神经递质的含量. 实验结果表明, 急性力竭运动后大鼠下丘脑区的细胞外液中的6种氨基酸(精氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸)有统计意义的.增加, 这一结果显示了下丘脑区的氨基酸在应激过程中很可能起着重要的作用. ?

作 者：张东明 张佳民 马万云 陈瓞延 韩慧婉 舒鸿钧 刘国诠  作者单位：张东明,张佳民,马万云,陈瓞延(清华大学物理系,原子分子纳米科学教育部重点实验室,北京100084)

韩慧婉,舒鸿钧,刘国诠(中国科学院化学研究所,北京100080)

刊 名：高等学校化学学报  ISTIC SCI PKU英文刊名：CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 年，卷(期)：2002 23(2) 分类号：O657.7 关键词：微透析   氨基酸神经递质   运动?  

氨基酸神经递质 篇3

1 材料

1.1 药物

芍药甘草汤浸膏:褐黄色, 每克浸膏相当于原生药13.47g, 由重庆市中医院提供, 临用时以蒸馏水配成适宜浓度。

1.2 实验动物

SD大鼠, 一级合格, 重庆市中药研究院实验动物室提供 (合格证:SCXK (渝) 20020004号) 。

1.3 试剂及仪器

谷氨酸 (Glu) 、甘氨酸 (Gly) 、天冬氨酸 (Asp) 、γ-氨基丁酸 (GABA) 、5-羟色胺 (5-HT) 、去甲肾上腺素 (NE) :上海研谨生物科技有限公司。异硫氰酸荧光素 (FITC) :上海江莱生物科技有限公司。用时配成5×10-5mol/L浓度的丙酮溶液 (内含0.1%吡啶) 。硼砂缓冲液 (p H=9.8和p H=10.5) 、乙酸缓冲液 (p H=6.8) :自配。其余试剂均为分析纯。江湾I-C大鼠脑立体定位仪:上海第二军医大学。定位辅助装置:自制。SLY-B四道生理记录仪:上海欣曼科教设备有限公司。Beckman PACE MDQ毛细管电泳仪 (荧光检测器) :美国Beckman公司。石英毛细管柱:35cm×75µm i.d., 有效长度30cm, 河北永年光导纤维厂。FR-530荧光分光光度计:日本岛津。电子分析天平 (d=0.1mg) :上海国营长江科学仪器厂。LF-500R低温冷冻离心机:深圳市超杰实验仪器有限公司。

1.4 模型制备

痉挛模型制作采用吴氏[1]提出的方法, 并加以改进。取SD大鼠56只, 雌雄各半, 体质量200~250g, 随机取40只, 以戊巴比妥钠 (35mg/kg) 腹腔麻醉后, 卧位固定于大鼠脑立体定位器上, 并使用定位辅助装置。沿颅顶矢状缝作纵行切口, 暴露前囟, 采用改良的de Groot定位系统, 选择前囟后1.8mm, 矢状缝左侧3.5mm, 用小型电钻在颅板上钻孔, 直径约2mm, 将阳极针电极 (直径0.5mm) 垂直插入6.0mm, 切口处接阴极针电极。通直流电刺激以毁损椎体束, 刺激后拔出电极, 关闭切口, 碘伏消毒。术后死亡5只, 另有2只未出现瘫痪, 弃之不用。将剩余33只随机分成4组, 模型组、芍药甘草汤大、中、小剂量组, 每组各8只 (模型组9只) 。剩余16只随机分成2组, 即空白对照组、假手术组。空白组不做任何处理, 假手术组仅在颅板相同位置钻孔, 但不毁损椎体束, 术后第2天开始按等容积法 (1m L/100gb.w.) 经灌胃给药, 每日1次, 连续3周。

1.5 检测方法

1.5.1 测定肌张力[2]

将电刺激针插入痉挛侧后肢股四头肌内, 另一端连于WQ9E痛阈测量仪。在大鼠后肢下端系一丝线, 丝线经传感器与SLY-B四道生理记录仪相连, 定时对股四头肌进行刺激, 通过记录仪记录后肢伸直的幅度, 肌张力评定采用改良的Ashworth痉挛量表 (MAS) 进行。

1.5.2 单胺类递质检测

脑和脊髓内5-羟色胺 (5-HT) , 去甲肾上腺素 (NE) 的测定均参照王孝媛等[3]的方法。采用荧光法分光光度进行检测。动物经麻醉后, 断头处死, 在冰浴上迅速剥离大脑和脊髓, 锡箔纸包裹后速置液氮冻存, 24h后置于-75℃冰箱保存。取适量脑或脊髓组织, 称湿重, 放入10m L离心试管内, 加入3m L冷酸化正丁醇, 振荡5min, 4℃, 8000rpm/1min离心10min。取2.5m L上清液, 依次加入5m L正庚烷、1.0m L0.1N HCl, 振荡5min, 3000rpm/1min离心5min, 弃有机相。取水相约0.4m L, 依次加入0.1m L0.5%半胱氨酸、3m L (6.0/100m L11N HCl OPT、0.1m L0.02%Na IO4, 沸水浴10min, 流水冷却后, 365/480nm处测定5-HT。另取水相约0.5m L, 依次加入1.5m L乙酸缓冲液 (p H6.8, 2M) 、0.4m L EDTA (p H7.0, 0.1M) 、0.2m LI (0.2N) , 摇匀, 静置2min, 加入0.4m L碱性Na2SO3摇匀, 静置2min, 加入0.4m L5N HAC, 沸水浴2min, 流水冷却后, 365/480nm处测定NE。

1.5.3 脑和脊髓内谷氨酸 (G 1 u) , 天门冬氨酸 (A s p) , 甘氨酸 (G1y) 和γ-氨基丁酸 (GABA) 含量检测[4,5]

采用毛细管电泳 (CE) 异硫氰酸荧光素 (FITC) 柱前衍生法进行。动物经麻醉后, 断头处死, 在冰浴上迅速剥离大脑和脊髓, 锡箔纸包裹后速置液氮冻存, 24h后置于-75℃冰箱保存。取适量脑或脊髓组织, 称湿重, 放入玻璃匀浆器内, 加9倍量蒸馏水, 冰浴匀浆, 低温 (4℃) 离心 (5000rpm) 15min, 取上清液20μL, 加异硫氰酸荧光素 (FITC) (0.01mol/L) 100μL和硼砂缓冲液 (p H=9.8) 200μL, 混匀器混匀, 25℃恒温避光静置12h后测定。电泳条件:硼砂缓冲液 (p H=10.5) , 电压20KV, 进样时间3sec, 0.2psi, 进样体积20μL, 测试时间30min。氨基酸标准曲线:将0.01mol/L的Glu、Asp、Gly、GABA标准品混合, 衍生及测试方法同样品, 再把它稀释成1/2、1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 得到峰面积, 做出标准曲线及回归方程, 以峰面积 (外标法) 定量, 结果以µmol/g (g为脑组织湿重) 表示。

1.6 统计方法

应用SPSS10.0统计系统进行处理。计量资料数据以 (χ—±s) 表示, 组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析, 方差不齐时采用近似t检验。

2 结果

由表1~5可知, 芍药甘草汤口服给药显示明显升高痉挛大鼠模型脑内Gly、GABA、5-HT含量 (P<0.05或0.01) 及明显增加上肢伸直幅度, 而降低肌张力 (P<0.05或0.01) , 同时增加脊髓内GABA含量 (P<0.05) , 但对脊髓内其他神经递质无明显影响。实验结果表明:芍药甘草汤对痉挛大鼠脑和脊髓内与痉挛相关的神经递质有一定的调节作用。

注:与模型对照组比较, *P<0.05;**P<0.01

注:与模型对照组比较, *P<0.05;**P<0.01

注:与模型对照组比较, *P<0.05;**P<0.01

3 讨论

偏瘫痉挛根据中医对痉挛基本病机的认识, 辨证论治, 包括中风后痉挛, 脑外伤后痉挛等;针对产生偏瘫痉挛的具体病机, 主要以养血柔肝、活血通脉为主, 以期缓解偏瘫肢体的痉挛。本实验重点研究痉挛中枢机制, 在痉挛早期给予芍药甘草汤治疗。研究结果表明:芍药甘草汤对中枢性痉挛大鼠脑和脊髓内兴奋性递质Glu、Asp无明显影响, 但能增加脑和 (或) 脊髓内抑制性递质Gly、GABA含量, 能改善肌张力, 表明芍药甘草汤对神经递质的调控具有广泛性、复杂性, 且在高级和低级中枢的层面对递质均有影响, 以高级中枢为主。

注:与模型对照组比较, *P<0.05;**P<0.01

注:各组治疗前后比较:*P<0.05;**P<0.01

芍药甘草汤出自东汉张仲景所著的《伤寒论》, 主要由芍药和甘草两味药组成, 和营散逆, 舒挛止痛。主治:伤寒伤阴, 筋脉失濡, 腿脚挛急, 心烦, 微恶寒, 肝脾不和, 脘腹疼痛。后世医家用于面肌痉挛, 腓肠肌痉挛, 胃肠平滑肌痉挛等。现代用于血虚津伤所致的腓肠肌痉挛、肋间神经痛、胃痉挛、胃痛、腹痛、坐骨神经痛、妇科炎性腹痛、痛经;以及十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃肠神经官能症、急性乳腺炎、颈椎综合征等属阴血亏虚, 肝脾失调者。均有确切的临床疗效, 但其作用机制不清。

关键词：芍药甘草汤,大鼠,中风,痉挛模型,神经递质

参考文献

[1]吴珊鹏, 罗永湘, 熊革.大鼠痉挛性脑瘫模型建立的改进[J].中国康复, 1998, 13 (3) :103.

[2]韩群英, 荆志伟, 孟庆法, 等.脑瘫康胶囊对痉挛性脑瘫大鼠模型细胞因子及肌张力的影响[J].中国中医药信息杂志, 2005, 12 (8) :31.

[3]王孝媛, 顾萱娣, 张建伟.鼠脑和脊髓中5-羟色胺、5-羟吲哚醋酸、去甲肾上腺素养和多巴胺的快速测定法[J].苏州医学院学报, 1985, 5 (1) :10.

[4]张春虎, 胡随瑜, 陈昌华.白松片对应激大鼠模型海马Glu、Asp、GABA含量的影响[J].中国心理卫生杂志, 2004, 18 (6) :383.