圆环病毒疫苗

关键词：病毒

圆环病毒疫苗（精选十篇）

圆环病毒疫苗篇1

1 猪圆环病毒2型结构蛋白

ORF2基因是PCV2的第二大开放阅读框, 位于基因组的互补链上, 通常全长为702个碱基, 编码233个氨基酸, 分子量约为30 k Da, 编码的病毒的核衣壳蛋白又称Cap蛋白, 为病毒的主要结构蛋白。NawagitgμL等将ORF2基因克隆后在昆虫细胞中进行表达, 表达产物的分子量为30 k D, 与从纯化的病毒粒子中监测到的蛋白大小相似, 电镜观察发现表达产物可自动组装成类圆环病毒样颗粒, 从而进一步证实ORF2基因编码病毒的核衣壳蛋白为猪圆环病毒的主要结构蛋白。Cap蛋白位于细胞核中, 其N端的前41个氨基酸高度保守并含有丰富的精氨酸及碱性氨基酸, 是其核定位信号区域, 可以使Cap蛋白正确地定位在核上, 通过定点诱变发现其中12-18位 (R-H-R-P-S-H) 和34-41位 (H-R-Y-R-W-R-R-K) 氨基酸残基对ORF2基因的定位起着至关重要的作用。

Truong C通过合成肽及重叠肽技术分析发现, PCV2Cap蛋白在65-87aa, 113-139aa和193-207aa区域内可能存在3个或3个以上的PCV2型特异性表位;69-83aa和117-131aa是2个PCV2特异性的线性B细胞表位, Truong C还发现, 所有实验接种猪均产生针对117-131aa的抗体, 该位点可作为PCV2感染的血清学检测标志。

目前对于PCV研究较深入的是ORF1和ORF2, 由于ORF2的以上特性, 其编码产物就成为分子水平上诊断PCV的理想抗原, ORF2也成为研制基因工程疫苗的首选基因。因此, ORF2的研究已成为PCV2研究的焦点。

2 PCV2疫苗研究

目前针对PCV2病毒设计的疫苗主要有两类, 一类是全病毒灭活疫苗, 一类是亚单位疫苗。在全病毒灭活疫苗方面, 国外已有两个产品成功上市, 一个是Merial公司研制的全病毒灭活疫苗Circovac, 另一个是Fort Dodge公司研制的PCV-1与PCV-2嵌合全病毒灭活疫苗Suvaxyn PCV2 one dose。前者主要用于母猪免疫接种;后者主要适用于仔猪的免疫接种, 且能在不受母源抗体影响的情况下激发免疫应答, 可有效降低仔猪体内的病毒含量, 减少淋巴组织的损伤, 降低死亡率。国内也有两种全病毒灭活疫苗上市, 但PCV2在细胞内增殖度很低, 而且灭活疫苗对机体刺激时间较短, 需要多次接种后才能达到一定的保护效果。在亚单位疫苗研究方面, 目前国内还没有关于圆环病毒亚单位疫苗成功上市的报道。由于猪圆环病毒基因具有高度的变异性, 而现阶段的猪圆环病毒疫苗只能刺激机体针对病毒中的一种毒株产生抗体, 且病毒在细胞内增殖滴度低, 需多次接种才能达到一定的保护效果, 故很难较快、较灵活的应对猪圆环病毒变异株所致的爆发性疫情。因此, 一种安全、快速、有效的疫苗具有很大的发展前景。

PCV2 Cap蛋白被认为是主要免疫原性蛋白, 且与PCV1Cap蛋白无交叉保护性, 因此, 国内外许多学者均将PCV2Cap蛋白单独表达以研制能有效防治PCV2感染的亚单位疫苗。常用的表达系统为杆状病毒表达系统, 利用杆状病毒在昆虫细胞中表达的Cap蛋白能自我组装成类病毒粒子, 免疫动物后可诱导高水平的抗体及PCV2特异性的淋巴细胞增殖反应。

3 类病毒颗粒 (VLPs) 概述

类病毒颗粒 (VLPs) 是一种多聚蛋白复合物, 与天然病毒有着相似的结构与构象, 但是没有病毒基因组, 因此是一种非常安全的疫苗候选者。VLPs的可重复性、表面的高密度抗原表位能有效诱导机体的免疫应答, 使得VLPs成为一种用来生产预防各种疾病疫苗的有效方法之一。病毒样颗粒也可以通过修饰VLP基因的序列来作为呈递外源抗原表位的“平台”, 这一技术在过去20年被人们大量的探索用来生产安全、有效的疫苗。

4 利用BEVS表达PCV2 VLPs

用来表达VLPs的表达系统主要有大肠杆菌表达系统及BEVS。大肠杆菌表达系统具有表达产物较稳定、周期短、收益大、操作简便的优点, 缺点是表达基因的相对分子量不宜过大, 对表达产物不能进行糖基化等翻译后加工、修饰等。BEVS中, 杆状病毒的基因组为单一闭合环状双链DNA分子, 大小约80~160kb, 其基因组可在昆虫细胞核复制和转录。DNA复制后组装在杆状病毒的核衣内, 而核衣壳具有较大的柔韧性, 可容纳较大片段的外源DNA插入, 因此是表达大片段DNA的理想载体;可为表达的外源蛋白在细胞内进行正确折叠、搭配二硫键、形成寡聚物等提供良好的环境, 从而使表达产物在结构及功能上更接近天然蛋白;具有对蛋白质糖基化、磷酸化、酰基化、信号肽切除等完整的翻译后加工能力, 修饰的位点与天然蛋白在细胞内的情况完全一致。对比实验证明, 在昆虫细胞发生的糖基化位点与哺乳动物细胞中完全一致, 但修饰的寡糖种类却不完全一样, 这种不一致对不同目的蛋白的活性影响不同, 所以昆虫表达系统还可作为一个研究糖基化对蛋白质结构与功能影响方面的理想模型;此系统另外一个最突出的特点就是能获得高水平的重组蛋白表达, 最高可使目的蛋白的量达到细胞总蛋白的50%;杆状病毒表达系统还可通过不同的重组病毒同时感染细胞的形式或者在同一转移载体上同时克隆两个外源基因的方式在同一细胞内同时表达多个基因的能力, 表达产物通过加工可形成具有活性的异源二聚体或多聚体;此系统还有对重组蛋白进行定位的功能, 能将核蛋白转送到细胞核上, 膜蛋白则定位在膜上, 分泌蛋白则可分泌到细胞外等;此外杆状病毒对脊椎动物无感染性, 现有研究也表明其启动子在哺乳动物细胞中没有活性, 因此是一个非常安全的蛋白表达系统, 尤其是在表达有潜在毒性的蛋白时候。

BEVS安全性好, 表达水平高, 可进行翻译后加工及表达产物的异源性小, 是一种非常理想的真核表达系统。由于该系统独特的性质, 使其被广泛地应用于基因工程、药物开发、疫苗生产、表达免疫活性分子和某些致瘤病毒蛋白以及基因表达调控研究等多个领域中。NawagitgμL等人利用BEVS的优点, 表达出PCV2的结构蛋白Cap蛋白, 并经实验验证通过BEVS表达的Cap蛋白的VLPs具有很强的免疫原性, 并可引起感染猪产生很高的抗体水平。

5 结束语

PCV2 Cap蛋白基因经BEVS表达后, 能够形成VLPs。VLPs保留天然病毒粒子的空间构象和诱导中和抗体的抗原表位, 具有较强的免疫原性。VLPs进入机体后, 由于其高度结构化且大小适合被抗原提呈细胞 (antigen presenting cell, APC) 摄取, 进行加工处理后能够以抗原肽-MHC I类分子复合物的形式将抗原信息提呈给CD8+T细胞, 发挥CTL特异性地杀伤靶细胞的功能, 同时VLPs能够被B细胞受体所捕获, 刺激B细胞其产生特异性抗体, 所以病毒样颗粒不仅能够激发机体的体液免疫而且可以激发细胞和粘膜免疫, 是最具有发展前景的基因工程疫苗。

摘要：圆环病毒 (Porcine Circovirus, PCV) 是一类无囊膜、单链环状DNA病毒, 能引起多系统衰竭综合征 (Postweaning Mμ Ltisystemic Wasting Syndrome, PMWS) , 给整个养猪业造成严重损失。杆状病毒表达载体系统 (Bacμ Lovirus Expression Vector System, BEVS) 具有表达水平高、能进行翻译后加工修饰等优势, 表达的猪圆环病毒2型结构蛋白能自动组装成无基因组、安全、具有免疫原性的类圆环病毒颗粒 (Virus-like Particals, VLPs) , 类圆环颗粒疫苗是一类非常有潜力的圆环病毒候选疫苗。本文对猪圆环病毒2型结构蛋白表达及其类病毒颗粒疫苗研究作以简洁综述。

关键词：猪圆环病毒,杆状病毒表达载体系统,类病毒颗粒

参考文献

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猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展篇2

猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一，造成猪场损失惨重，疫苗免疫成了救命的稻草。从2011年猪圆环疫苗上市至今，已有17家圆环产品先后上市，目前，出现严重供大于求的现象，同时，养殖场也面临着幸福的烦恼，大量产品的上市，产品价格可能下降，但是，面对玲琅满目的产品，如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题，针对这些烦恼，本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助，避免走弯路，为养殖场服务。

1.PCV-2国内外最新流行动态

由PCV-2引发的疾病已成全球流行之势，在加拿大首次报道该病原引起PMWS后[1]，学者通过调查本国包括SPF猪、部分散养猪以及育肥猪发现，猪群中PCV-2血清中抗体普遍存在，但目前该病在加拿大仍然只是散发。在英国和北爱尔兰，猪群血清中PCV-2抗体阳性率分别为86％和92％。美国、法国、丹麦、意大利、西班牙、荷兰、新西兰、日本、韩国、墨西哥等国家也相继报道猪群中存在PMWS。在我国猪群中PCV-2感染情况也不容乐观。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22个猪群采集了559份血清，用ELISA方法检测PCV-2抗体，其阳性率高达5l％，表明我国猪群中存在PCV-2的感染。王忠田等[3]用PCR方法对我国北京、山东、河北、深圳、山西、天津、广东等省(市)的12个规模化猪场发病猪群进行猪圆环病毒2型感染的流行病学调查，结果表明猪圆环病毒2型感染情况在我国猪群中相当严重。李超等[4]在2010年对安徽省PCV-2流行病学调查，结果表明安徽省14个市(县)的PCV-2抗体阳性率平均为74.36％，表明安徽省猪群中普遍存在着PCV-2的感染。从上述报道表明PCV-2在我国猪群中广泛存在。根据流行病学调查显示，虽然猪群中PCV-2抗体阳性率较高，但很大比例的抗体阳性猪群并不表现出临床症状。PCV-2与其他多种病原混合感染较为严重，调查发现沙门氏菌、大肠杆菌等细菌性病原与PCV-2混合感染率达到了20％[5]。陕西省PCV-2与PRV混合感染率是21.7％[6]。2005年陈义祥等对广西地区197份组织病料检测发现，PCV-2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染占总病料数量的57.73％。2003年王文军等[7]对黑龙江地区PCV-2阳性猪群的病料调查发现，蓝耳病和猪瘟的阳性率也较高。

哈尔滨兽医研究所刘长明[8]在2007年采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验（IPMA）对来自与黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地的健康猪群480份血清和发病猪群424份血清，抗体阳性率分别为79.2%和91.7%，表明PCV-2在猪群中感染率非常高。山东农科院畜牧兽医研究所吴家强博士检测结果也证实PCV-2防控比较糟糕，PCV-2，2010年检出率为34.66%（124/357），2011年检出率为25.59%(174/588)；2012年检出率为2

猪圆环病毒病的防治试验篇3

一、材料与方法

试验分两部分进行，试验Ⅰ为对比试验，即在健康的保育仔猪日粮中添加不同剂量的免疫修复金粉，目的是观察其预防猪圆环病毒病的效果。试验Ⅱ为治疗试验，即在有圆环病毒病症状的育肥猪日粮中添加治疗剂量的免疫修复金粉，目的是观察其治疗猪圆环病毒病的效果。

1. 试验猪群与试验材料

①试验猪群。分别为杭州市种猪试验场健康的保育仔猪和有圆环病毒病症状的育肥猪。

②试验材料。免疫修复金粉为德国某知名公司研发的添加于猪日粮中的免疫修复粉剂，其主要成分为多酚、生物类黄酮、蛋黄磷脂、免疫增强剂、肝脏保护因子、Nano-VE、有机碘、硒、微量元素等。

2. 试验设计

试验Ⅰ选择35日龄左右、健康的保育仔猪141头，根据体重、日龄随机分为3组，即对照组、试验A组、试验B组，每组6个重复，每个重复7～8头（原则上分组以窝为单位）。对照组各阶段使用本场自制的日粮，试验A组所用日粮在对照组基础上添加0.3%免疫修复金粉，试验B组所用日粮为在对照组基础上前两周添加0.6%免疫修复金粉，后期添加0.3%免疫修复金粉直至试验结束。试验期为35～100日龄，共65天。在35日龄、70日龄分别对个体进行称重，计算料重比。100日龄试验结束时再进行称重。观察各组在试验各阶段的发病、淘汰与死亡情况。

试验Ⅱ为观察试验，选择已明确诊断患有由圆环病毒引起的综合征的病猪17头，在其日粮中添加0.6%免疫修复金粉并辅以一定的临床用药，观察病猪康复率即治疗效果。

3. 试验各阶段所记录的性状

①35日龄、70日龄、100日龄的个体重。试验、对照组均在下午2时称重。

②35～70日龄阶段内记录每个重复的耗料。

③试验各阶段猪只的发病、淘汰、死亡情况。

4. 分析方法

试验数据用spss17.0软件分析，并进行多重比较。

二、结果与分析

1. 试验Ⅰ的结果

①35～70日龄试验结果如表1所示：

从表1可见，3组的平均日增重经单因子方差分析，组间差异均不显著（p>0.05），料重比各组几乎一样。试验中只有试验B组淘汰了1头仔猪，死淘率无明显差异，表明在健康或未发生圆环病毒病的保育仔猪群中添加免疫修复金粉，对提高猪群生产成绩无明显效果。②70～100日龄各项数据如表2所示：

从表2可以看出，两个试验组在增重、死亡率、淘汰率上较对照组均无明显优势，且至试验结束试验组、对照组均未发生明显圆环病病毒病，表明在健康的保育仔猪日粮中添加免疫修复金粉对预防、减少猪群圆环病毒病的发生，对提高生产效益无明显效果。

2. 试验Ⅱ的结果

在试验Ⅱ中17头猪治疗始、末临床症状见表3：

注：1.“+”表示消瘦、精神状态差、有圆环病毒病前期症状；2.“++”表示明显消瘦、脊椎显露、肤色苍白、有明显的圆环病毒病症状；3.“+++”表示严重消瘦、临床表现严重的圆环病毒病症状。

从表3可见，10头病猪基本痊愈，3头症状减轻，痊愈率为58.8%，有效率达76.4%，试验结果表明，免疫修复金粉对圆环病毒病有明显的治疗效果。

三、结论

1. 由于试验Ⅰ直至试验结束（达100日龄）A、B、对照3个组均未发生明显的由圆环病病毒引起的症状，在增重、料比、疾病发生、死亡、淘汰等方面均未发生明显的变化，因而在健康猪群的日粮中添加免疫修复金粉来防治圆环病毒病的措施值得商榷，有待进行多次试验论证。

2. 由试验Ⅱ可见，试验猪痊愈率58.8%，有效率76.4%，可见免疫修复金粉对治疗圆环病毒病有较显著的效果。本次试验猪头数较少，只能看出初步的治疗效果，要有效论证免疫修复金粉对圆环病毒病的治疗效果需进一步试验。

（作者联系地址：夏彩锋浙江省杭州市种猪试验场邮编：311115；冯梦李双盘浙江宁波福宁种猪有限公司邮编：314151；陈斌浙江省德清县新市镇动物卫生监督分所邮编：313201）

圆环病毒疫苗篇4

疫苗预防接种是控制本病的有效手段。而我国对PCV2疫苗的研制遭遇了培养的病毒含量较低、动物感染模型不易复制等难题。针对这些问题, 哈尔滨兽医研究所的科技人员攻克多项科技难关, 掌握了病毒繁殖规律, 培育出高产疫苗种毒, 探索出一系列科学方法, 为疫苗研制铺平了道路。

目前, 该疫苗已经在哈尔滨维科生物技术开发公司投入生产, 在全国范围内推广应用, 该疫苗的研制成功为我国养猪业的健康发展带来了福音。[摘编

猪圆环病毒病相关知识问答篇5

猪圆环病毒病是指以2-型圆环病毒为主要病原、单独或继发/混合感染其它致病微生物的一系列疾病的总称。

2．猪圆环病毒病具体有哪些发病类型？

主要有猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）、皮炎肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、先天性震颤、肠炎等。

3．请介绍一下猪圆环病毒病的流行情况。

本病最早发生于加拿大（1991），此后很快在世界各地（大洋洲除外）流行，亚洲及我国各地有关的报道也越来越多。朗洪武（2000，2001），曹胜波（2001）先后通过血清学方法和PCR技术在河北、北京、天津、山东、吉林、江苏、上海、河南、湖北和广东、广西检测到了PCV-2。中国农业大学杨汉春教授等对北京、天津、广东、山西等12个规模大猪场病原检测和流行病学调查，发现11个猪场存在PMWS的感染，一个猪场存在PDNS的问题，可见PCV-2在我国的普遍性。

4．猪圆环病毒病的病原体是什么？

是2-型圆环病毒，圆环病毒有两个血清型，1-型没有致病性。

5．发病越来越多的原因是什么？

（1）集约化养猪的出现，导致管理及操作体系的巨大变动；2）宿主遗传性状的改变与世界范围内的流动；3）蓝耳病病毒和细小病毒等病原体的混合感染。

6．猪断奶后多系统衰竭综合征的临床症状、解剖病理变化有哪些？

猪断奶后多系统衰竭综合征确诊往往需要有一群猪的一组特征性的临床症状和显微病变，其临床症状有：僵猪比例明显增多、生长不良或停滞、消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、腹泻、苍白、部分猪出现黄疸。但在同一头猪中，不表现出以上全部症状。同时亦有部分猪出现咳嗽、肺炎、发热、胃溃疡、中枢神经症状及突然死亡。其中有些症状与继发感染有关。其特征性显微病理变化表现为淋巴器官的肉芽肿炎症和不同程度的淋巴细胞缺失。病理解剖可见肺斑点状出血，全身淋巴结肿胀，尤其是腹股沟浅淋巴结、肠系膜淋巴结和支气管淋巴结明显肿大，切面浸润，呈土黄色，有的淋巴结皮质出血，使整个淋巴结呈紫红色外观。心脏变形、质地柔软、心冠脂肪萎缩，肾肿胀，皮质变薄，有时有出血点或灰白色病灶。不同猪场所表现的临床症状和病理变化的严重程度不同，这与混合/继发感染的类型以及猪场的饲养管理有关。

7、什么阶段的猪最易感断奶后多系统衰竭综合征？

不同猪场由于饲养管理、母源抗体水平及继发/混合感染的差别，发病年龄和严重程度不同。主要易感阶段有断奶前后（即3-6周）、12-16周龄。如遇转群运输等应激也可出现发病高峰。

8、猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）/猪呼吸道疾病综合征（PRDC）是同一个病吗?不是，猪断奶后多系统衰竭综合征的病原是２－型圆环病毒，有或没有其它致病菌都可发生ＰＭＷＳ。当ＰＭＷＳ病猪继发一些呼吸道病的病原时，可以出现呼吸困难等症状。猪呼吸道疾病综合征是指多病原引起的呼吸道疾病征候群，其病原不一定包含圆环病毒。

9、抗生素对圆环病毒病有治疗效果吗？

无论是多系统衰竭综合征、呼吸道疾病综合征还是其它的复合感染，其病原均有病毒、细菌等多种致病微生物引起。抗生素对大多数细菌、支原体、原虫有疗效，只要能查清继发感染的病原种类、选用敏感药物，能有效降低发病严重程度，减少死亡率。但由于病毒往往是原发性致病因素，抗生素对病毒无效。所以抗生素的疗效并不理想，一旦停药，往往复发。

10、Ｐ－特产品特点是什么？疗效如何？

Ｐ－特是中药复方制剂，为中药提取后精制而成，易吸收、疗效稳定、用量省、适口性特好，治愈后不会复发。中药的抗病毒作用是早有定论的，正因为Ｐ－特针对原发性病毒直

接起作用，其疗效是目前同类产品屈指可数的．而且Ｐ－特内含免疫增强因子，能迅速恢复病猪被抑制的免疫机能，有效防止复发，使用得当，疗效非常明显。

11、Ｐ－特应如何使用？

因为一旦发病，损失是不可避免的，所以最好是预防用药，可以按每１０００kg饲料添加１kgＰ－特，连用１周的方法使用。早期断奶仔猪由于采食量很低，可以适当增加用量。猪呼吸道疾病的传染性很强，所以在治疗时应对尚未发病的猪进行预防，以防病情蔓延。病猪应及时隔离，治疗可采用饮水给药，为了保证病猪都能有足够的药量可采取喂服。鉴于猪呼吸道疾病的复杂性，一旦形成内脏病变，则需要漫长的恢复期，所以防治重点是预防和早期用药。

12、Ｐ－特能否与抗生素合用？

Ｐ－特是中药制剂，与化药有协同作用，可以降低抗生素的用量，提高抗生素的疗效。如果和抗生素混合在一起使用，则应根据药物的性质决定，Ｐ特是酸性药，应避免与碱性药物和喹诺酮类混合使用。

13、Ｐ－特使用过程中还应注意哪些问题？

由于猪病的复杂性，在使用前应注意对继发／混合感染的诊断，专家建议，下列病猪可按如下治疗方案：混合感染、弓形体、附红细胞体时，则应同时使用对弓形体、附红细胞体有效的药物，如长效土霉素、914A、磺胺六甲氧嘧啶；如果气喘病很严重，则应同时用强力霉素控制支原体；胸膜肺炎放线杆菌、副嗜血杆菌、巴氏杆菌等可选用氟苯尼考。一般来说，呼吸困难、咳嗽越明显、鼻涕呈黄色、体温越高、病程越短、死亡率越高表明继发／混合感染越严重，为提高疗效，宜配合抗生素同时使用。而以消瘦、生长不良等为主要症状的，无需使用抗生素。临床应用表明，对呼吸道疾病综合征，与氟苯尼考、替米考星、阿奇霉素等配合使用，疗效十分显著。

14、为什么有的猪场使用Ｐ－特效果不是很好？

原因有：１）有猪瘟等高致死性的疫病存在；２）存在弓形体、附红细胞体等混合/继发感染；３）发病晚期，机体已形成无法逆转的病变，如坏死、粘连等。

15、Ｐ－特是否应与退热药同时使用？

不需要，Ｐ－特本身含清热解毒成份，退热药不能抗菌、抗病毒，盲目退热只会使机体抗病力下降，病情复杂化。使用Ｐ－特一个疗程后，病猪体温自然下降，表明病猪已经康复。

16、圆环病毒病有疫苗吗？

到目前为止，尚无商品疫苗供应，现有圆环病毒－蓝耳病病毒二联苗中试产品，效果和安全性有待评价。有些猪场应用自家苗，其效果的往往因抗原浓度不足而欠佳。

17、为什么有的病猪治疗后体温和精神都正常，而食欲不佳，应如何处理？

这部分猪主要是重病猪，病程较长，造成机体肠道菌群失调，脾胃虚弱及病原体内毒素引起的。饲养管理方面可以补充电解质或电解多维，以及给予优质易消化饲料和青饲料调理。

18．除治疗外，还应注意些什么？

在积极治疗的同时，应注意：１）全进全出的饲养方式；２）限制寄养和合群；３）尽可能减少应激因素；４）合理按排免疫程序；５）降低饲养密度和增加空气流通；６）及时隔离和淘汰。配图文字：

1、皮炎肾病综合症：病猪后躯密布圆形成不规则丘疹，可见中间呈黑色外周紫红色的病灶。

2、皮炎肾病综合症肾脏肿大，呈土黄色，表面散布大小不一的灰白色坏死点。

3、圆环病毒感染，图为同窝健康猪及病猪体重差异悬殊。

4、典型的多系统衰竭综合症：病猪消瘦、拱背、苍白、生长不良。

5、PCV-2感染心脏变形，心肌松软，冠状沟脂肪萎缩黄染。

6、腹股沟线淋巴结显著肿大、苍白、切面多汁。

7、继发副嗜血杆菌引起的胸膜炎、心包炎、肝周炎。

8、混合感染的肺出现肉样变。

9、圆环病毒引起的相关性肠炎。

10、购入猪出现圆环病毒混合多种病原感染出现的综合症：消瘦、肺炎、肠炎、生长不良。

11、圆环病毒与细菌混合感染：淋巴结肿大，皮质出血。

圆环病毒疫苗篇6

随着养猪业的不断的发展, 猪的抗病毒或者是免疫情况, 成为了养猪场的一件大事, 由于猪圆环病毒类疾病, 在严重时, 会困扰养猪场甚至影响了养猪业的正常发展, 所以本文对由于猪圆环病毒病PCV系列病毒症状进行了分析与研究, 并力求为推动病毒疫苗的研究开发提供一些参考。

2 概述

猪圆环病毒病, 简称 (PCVD) , 与猪圆环病毒相关性疾病 (PCVAD) , 这种疾病是由猪圆环病毒ò型, 简称PCV2所引起的一大类有关猪的疾病统称。与PCV2有关的猪的疾病, 症状主要表现在猪皮炎和肾病综合症上, 也表现在母猪繁殖障碍综合症上、猪的间质性呼吸道感染或肺炎、还包括断奶仔猪的多系统的衰竭综合症 (PMWS) , 还表现在新生仔猪的上面, 表现症状为先天性的震颤等现象。

猪圆环病毒 (PCV) , 其归属于圆环病毒科中的圆环病毒属, 可以分为PCV1及PCV2两种病体类型, 这种疾病, 是已知脊椎动物病毒当中最小的一种病毒。其中PCV1病毒主要广泛存在于正常的猪体内的各个组织器官当中, 没有致病性, 可是却能够产生血清抗体。PCV2则是PMWS主要的病原, 根据其症状, 可以分为PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d以及PCV2e等等几个亚基因型, 其中的PCV2a和PCV2b, 主要为亚型, 其中有比较强的致病性的亚型病毒则是PCV2b。

3 PCV2弱毒疫苗

由于猪圆环病毒中的PCV2疾病, 严重的威胁了养猪业的发展, 并对猪的健康生长产生了较大的影响;近些年来, 我国对猪圆环病毒中PCV2弱毒疫苗进行了研究。这种疫苗又称为减毒活疫苗, 原理是将病原体对猪的致病力, 通过自然筛选或者是人工致弱等方式进行减弱制备而成的一种疫苗。国内外的报导中, 对于PCV2的弱毒疫苗的相关的研究类的报道非常的少, 在国际上, 目前还没有商品化的PCV2弱毒疫苗出售, 这种情况的主要的原因, 有可能和病毒毒力的易返性强、致弱毒株毒力的评价性质较为困难等一些因素相关。

其中, 在病理实验过程中, 将病毒Pev2的分离株, 在PK15细胞上进行连续的传代培养, 其结果, 发现了第120代病毒 (v P12o) 的滴度, 经过测量后约为第1代病毒 (VPI) 滴度的10倍还多, 其中VP120感染的仔猪, 其感染病毒血症的发生率, 要明显的低于VPI感染的仔猪, 而且感染仔猪的血清当中, PCV2DNA的拷贝数量更是较低, 通过对仔猪的眼观, 仔猪病理组织学的变化也更加的轻微, 这项研究表明, 体外传代是可以促进PCV2在猪体的细胞内的繁殖能力的, 而且还能够减弱这种病毒的致病力, 这为研制PCV2弱毒疫苗, 提供了有力的科学性依据。同时由于单一的PCV2感染, 对于猪的致病性表现还不十分的典型, 而且病毒在猪的体内持续的存在的情况下, 其毒力是否有返强等等这类的关键性的问题, 还没有一定的科学数据, 且试验数据还很有限, 所以并未对PCV2在猪体内返强现象阐述清楚, 所以, 通过这种方法取得的毒力减弱毒株, 将其作为疫苗使用, 这条路离实际应用上, 还有很长的一段路。

4 免疫对疾病的促进作用

通过了对病毒感染的病体的观察中发现, 由于在病体上出现的PMWS症状, 比亚临床的PCV2的病毒的感染需要更高数量的病毒载量, 所以, 如果对于猪的免疫系统给予刺激以后, 如果注射疫苗或者是注射非特异性的免疫调节剂, 这种情况就有可能使得PCV2的复制能力增强, 从而导致PMWS病情的发生。通过Kyriakis等, 曾经报道过, 在一次暴发了PMWS的养猪场当中, 使用了一些痘类的病毒免疫调节剂[Baypamum (r) ], 以及猪的支原体肺炎疫苗[Respisure (r) ], 这类使用疫苗的猪, 却比没有任何刺激的猪, 有着更严重的相应病理性变化, 且死亡率也更加超出未注射疫苗的猪, 在这类死亡的猪体内, 通过病毒滴度检测, 发现比未经过刺激的猪体病毒滴度更高。本来通过免疫刺激, 原以为是可以提高巨噬细胞以及NK细胞的活性, 而且还可以提高淋巴细胞的增殖以及促进INF-C分泌的Baypa-mum (r) 以及Respisure (r) , 可是, 在使用以后却发现, 这类疫苗使猪的机体对于PCV2的易感性加强了, 而且还造成了更加严重的发病情况, 这种机制是很值得我们进行探讨的。Krakowka等还曾报道过, 如果将PCV2疫苗接种在1日龄的限菌猪体中, 并分别在第3日和第7日龄时分别注射KLH (Keyhole limpet heamocyanin) 的弗氏不完全佐剂混合物, 在通过对猪的生长与观察中发现, 结果是只接种了PCV2的仔猪, 没有一例出现过PMWS的症状;可是, 在出生第3日和第7日龄仔猪接种过PCV2以及KLH弗氏不完全佐剂混合物的仔猪, 却都表现出了中等或者是更加严重的PMWS的症理状况。

在最近几年以来, 相对于猪的养殖上面, 通过各种疫苗的使用, 以及促进猪的免疫应答的加强的方式, 来抵抗各种病原的入侵。但却因为免疫缺陷或者免疫抑制的关系反而最终使猪在使用某些疫苗后更加容易诱发PMWS的症状。

同时, 通过Kawashima等的研究我们还发现, 如果只是单独给猪接种PCV2病毒或地塞米松, 猪体反而没有表现出明显的PMWS的症状。但是, 如果只是单独的使用了地塞米松, 那么猪外周血中的CD4+T的细胞数量, 就会呈现出明显的低于没有使用的猪的情况, 这种状况也说明了, 地塞米松的合理与适量的使用, 会使得细胞当中的免疫的水平降低, 而与此同时, 在接种PCV2以及地塞米松的猪的体内的CD4+T细胞数量则表现更低, 这也就说明了, PCV2的感染, 进一步的减少了CD4+T细胞的数量。这种现象也正说明了对猪正常使用地塞米松没有影响到Ig G以及PCV2抗体的生成。

5 防治措施

5.1 合理布局猪舍

在养猪场的建设过程当中, 要进行合理的分区与布局, 而且在猪舍的建造上面, 要保证猪舍的通风以及向阳;并且猪舍之间的距离相对不能过小。在猪的饲养数量上, 密度也不易过大;既要注意通风, 也要注意消毒。要控制猪舍内温度湿度始终维持在一个合适的范围内, 并且还应该对猪舍进行定期的清洗与消毒。

5.2 做好免疫与生物安全工作

定时定量合理及时有效的使用各类疫苗。疫苗使用后及时对废弃物做无害化处理, 特别是减毒活疫苗的废弃物不能随意丢弃, 以免引起意外的交叉感染。在新猪进场之前, 要划出隔离区对新猪进行隔离饲养观察, 如有条件可进行血清学抗原抗体检测, 在确保新猪无疫病以后方可引入猪舍。出入栏要严格的遵守全进全出的操作规程。猪舍的工作人员, 要相对的固定, 尽量避免轮换, 同时不同的猪舍员工尽量避免串舍;对于来访的人员和车辆, 都要进行严格消毒以后才可以进入猪场, 同时, 相对于环境上, 要严格杜绝啮齿类动物、其他哺乳动物以及鸟类的进入。

5.3 加强仔猪的管理

对于仔猪, 要选择合适的断奶日龄, 并且在保证仔猪摄入足够的初乳以后方可断奶;对于断奶以后的仔猪, 应当及时免疫, 并尽量避免与大猪进行混群饲养, 同时还应减少猪群的移舍次数, 以及移舍数量, 以此来减少应激;同时对于断奶的仔猪, 还要确保这类仔猪的饲料品质。

6 结束语

圆环病毒疫苗篇7

11月10日, 江苏南农高科技股份有限公司圆环病毒灭活疫苗“圆克清”上市会在南京盛大召开。江苏省科技厅陶静副厅长、江苏省农委王春喜副主任和省动物卫生监督所、省农科院的多位领导出席了本次发布会, 各省市养殖集团总经理和各地代理商共320余人参加, 四川民生药业公司相关领导及客户代表也应邀参加了此次上市发布盛会。

发布会上, 姜平教授就圆环病毒病的发生历史、流行范围、引起的疾病种类、国内外的疫苗特点和“圆克清”的特点等做了生动精彩的报告。南农高科的“圆克清”为PCV2b, 与国内PCV2流行毒株完全一致, 能给国内养猪户提供更好的保护, 疫苗早在2004年就开始研发, 基本和国外的研究同步, 疫苗采用克隆细胞增殖病毒, 病毒滴度高, 选用进口双相佐剂, 疫苗起效快、效力持续时间长, 副作用较小, 能对免疫猪只提供好的保护。

圆环病毒疫苗篇8

关键词：猪圆环病毒2型(PCV-2),类型,免疫,频次,效果,生产性能

猪圆环病毒2 型( Porcine circovirus type 2,PCV- 2) 是已知的感染哺乳动物最小的DNA病毒之一,其非折叠病毒粒子直径为12 ~ 23 nm[1]。目前,全球已鉴定PCV - 2 有5 种基因型: PCV - 2a、PCV - 2b、PCV - 2c、PCV - 2d和PCV - 2e[2,3]。PCV - 2 感染猪只后可导致产生圆环病毒病( PCVD) /圆环病毒相关疾病( PCVAD) ,如断奶仔猪多系统衰竭综合征( PMWS) 、猪呼吸道病综合征( PRDC) 、猪肾病皮炎综合征( PNDS) 和增生性坏死性肺炎( PNP) 等疾病[4]。PMWS的最早报道见于1991 年加拿大农场仔猪感染,此后PCV - 2 感染猪只在其他国家也有相应报道。2001 年,郎洪武等[5]在我国首次从猪群中分离得到PCV - 2。由于PCV - 2 感染猪群可引起免疫抑制,继发或并发感染其他疾病,给养猪业造成巨大的经济损失。尽管有消毒和精细化管理等措施,在一定程度上可降低PCV - 2 的风险,但PCV - 2 疫苗是控制PCVD/PCVAD最直接、最有效的方法。2007 年,PCV - 2 疫苗首先在国外上市,而我国在2010 年推广应用PCV - 2 疫苗,目前市场使用的PCV - 2 疫苗类型主要有进口基因工程疫苗及国产SH株、LG株、DBN - SX07 株、WH株、ZJ / C株等全病毒灭活疫苗。为了更好探索PCV - 2 疫苗的应用方法和效果,本研究以进口疫苗和两种主要国产疫苗的免疫频次对猪生产性能、防病情况和猪血清PCV - 2 抗体等指标的影响开展田间试验,为研制合理的PCV - 2 免疫程序提供依据。

1 材料与方法

1. 1 试验动物

仔猪由襄阳市某规模化猪场提供,该猪场为PCV - 2 型阳性场。随机选取14 日龄、体重为( 4. 10 ± 0. 15) kg的“杜 × 长 × 大”仔猪180 头,备用。

1. 2 疫苗

3 种PCV - 2 型灭活疫苗,分别是进口疫苗1( 基因工程疫苗) 、国产疫苗1( SH株) 、国产疫苗2( LG株) ,由湖北瑞通畜牧有限公司提供。

1. 3 主要试剂

PCV - 2 型ELISA抗体检测试剂盒,购自深圳康百得生物科技有限公司; PCV - 2 型PCR检测试剂盒,购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1. 4 主要仪器

酶标仪( 型号为GF - M2000) ,山东高密彩虹分析仪器有限公司生产; 实时荧光定量PCR仪( 型号为FTC - 3000) ,加拿大Funglyn Biotech公司生产。

1. 5 疫苗安全性预试验

选择14 日龄仔猪12 头,随机分为3 组,每组4头,分别注射进口疫苗1、国产疫苗1、国产疫苗2 各2 m L,分2 点注射,观察1 周,所有试验猪发育良好,精神状态、食欲正常,有一过性肿胀,无其他异常反应,说明疫苗免疫安全,可开展后续试验。

1. 6 疫苗免疫效果试验

将180 头仔猪随机均分为6 组,依次为进口疫苗1 免疫组( 1 组) 、国产疫苗1 单针免疫组( 2 组) 、国产疫苗1 双针免疫组( 3 组) 、国产疫苗2 单针免疫组( 4 组) 、国产疫苗2 双针免疫组( 5 组) 和对照组。进口疫苗1 免疫组在仔猪14 日龄时注射1 m L疫苗; 国产疫苗1 和2 单针免疫组14 日龄时注射2 m L疫苗;国产疫苗1 和2 双针免疫组14 日龄时注射1 m L疫苗,28 日龄时再注射1 m L疫苗; 对照组14,25 日龄时注射1 m L生理盐水。每组30 头仔猪,每组确保有同窝猪1 ~ 2 头,并用耳标号对所有仔猪进行编号。

所有试验仔猪在21 日龄时断奶,断奶前同窝不同组的仔猪混合饲养,断奶后相同试验组仔猪集中饲养,10 头/栏。各试验组除疫苗免疫存在差异外,其他卫生防疫和日常管理等均保持一致。

1. 7 样本的采集与检测

1.7.1血清的采集

分别在14,28,41,120日龄时于仔猪前腔静脉采集血样5 mL,将血样平放静置30 min,待血清析出后3 000 r/min离心5 min,取上层血清进行抗体检测。

1.7.2组织样本的采集

对淘汰猪只进行剖检和病理组织学观察,采集肺脏、脾脏和淋巴组织对疑似感染的猪只采集血样。采集的组织样本用于PCR检测。

1. 8 临床观察

每日观察猪群精神状态、采食状况是否异常,记录仔猪在试验期间的发病情况,如咳嗽、喘气、消瘦、死亡等指标。

1. 9 生产性能的测定

记录各组仔猪14,60,90,120 日龄的体重以及饲料消耗量、发病情况、残次猪数、死亡情况,计算仔猪平均日增重和饲料转化率。计算公式: 平均日增重= ( 试验末试验猪体重- 试验初试验猪体重) / 试验天数; 饲料转化率( 料肉比) = 试验猪采食饲料总量/试验猪总增重。

1. 10 统计学分析

通过Excel对试验数据进行初步处理,应用SAS9. 2 软件进行统计学分析,以邓肯氏检验法进行组间的多重比较,P < 0. 05 表示差异显著,P < 0. 01 表示差异极显著。应用U检验比较试验期间的增重变异系数。

2 结果与分析

2. 1 PCV - 2 疫苗类型和免疫频次对仔猪生产性能的影响( 结果见表1)

由表1 数据经统计学分析可知: 14,60 日龄时各组仔猪体重差异不显著( P > 0. 05) ; 1 ~ 5 组90 日龄仔猪体重分别为42. 2,40. 7,42. 1,40. 1,41. 8 kg,显著高于对照组( P < 0. 05) ; 1 组、3 组和5 组120 日龄仔猪体重分别为56. 9,56. 6,55. 8 kg,显著高于对照组、2 组和4 组( P < 0. 05) 。1 组、3 组和5 组仔猪的料肉比分别为2. 76,2. 76,2. 87,显著高于对照组、2组和4 组( P < 0. 05) 。

2. 2 PCV - 2 疫苗类型和免疫频次对仔猪发病和成活率的影响( 结果见表2 和图1)

注: * 表示在整个试验阶段,1 头猪只发病1 次记录为1 头次。

由表2 数据经统计学分析可知: 1 组、3 组和5 组仔猪的发病率分别为7. 4% 、7. 1% 和8. 0% ,显著低于2 组和4 组( P < 0. 05) ,且各试验仔猪发病率极显著低于对照组( P < 0. 01) 。1 组、3 组、5 组仔猪的死亡率分别为6. 7% 、3. 3% 和6. 7% ,低于4 组( 13. 3% ) 和对照组( 20. 0% ) ,差异显著( P < 0. 05)2 组仔猪死亡率( 10. 0% ) 显著低于对照组( P <0. 05) ,显著高于3 组( P < 0. 05 ) 。1 ~ 5 组PCV - 2阳性率极显著低于对照组( P < 0. 01) ,且1 组、2 组、4组、5 组PCV - 2 阳性率极显著高于3 组( P < 0. 01) 。从各组仔猪发病情况来看,进口疫苗免疫组、国产疫苗1 和2 双针免疫组能够显著降低仔猪发病率、死亡率及PCV - 2 感染,国产疫苗1 和2 单针免疫组防控疾病的效果较差。

2. 3 PCV - 2 疫苗类型和免疫频次对仔猪血清PCV- 2 抗体水平的影响( 结果见表3)

由表3 数据经统计学分析可知: 14 日龄时,各组仔猪血清PCV - 2 抗体水平差异不显著( P > 0. 05) ;28 日龄时,1 ~ 5 组仔猪抗体水平显著低于对照组( P < 0. 05) ,1 组显著高于2 ~ 5 组( P < 0. 05) ,2 组、3 组、4 组、5 组间差异不显著( P > 0. 05) ; 41 日龄时,1 ~ 5 组仔猪抗体水平显著低于对照组( P < 0. 05 ) ,1组、3 组、5 组显著高于2 组和4 组( P < 0. 05) ; 120 日龄时,1 组、3 组、5 组育肥猪PCV - 2 抗体水平显著低于对照组( P < 0. 05) ,而2 组、4 组与对照组比较差异不显著( P > 0. 05) 。在120 日龄,1 组、3 组、5 组抗体水平相当,且各组与41 日龄时的抗体水平比较变化不大,而2 组、4 组抗体水平相对于41 日龄显著增加,与对照组抗体水平接近,这可能是这两组猪只PCV - 2 疫苗保护不足,后期感染了PCV - 2 野毒引起抗体水平增强。

3 讨论

3. 1 PCV - 2 的防控形势

猪感染PCV - 2 最早发生在1962 年,PMWS的典型组织学损伤与PCV - 2 抗原在1985 年被鉴定[6]。除澳大利亚未有PCV - 2 感染外,亚洲、欧洲、南美洲、北美洲和非洲等五大洲饲养的猪均被诊断出PMWS[7,8]。我国所有地区均受到PCV - 2 的感染[8],因此猪PCV - 2 的有效防控尤为重要。早在2009 年我国引进勃林格殷格翰动物保健( 美国) 公司的PCV - 2 疫苗,此后我国许多高校( 如南京农业大学、华中农业大学和浙江大学) 和研究机构( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所) 研发了PCV - 2 疫苗。然而猪场PCV - 2 的防控形势仍很严峻,熊江林等[9]对鄂西北地区47 家规模猪场进行了调查,结果表明,PCV - 2 阳性率为80. 4% 。

3. 2 PCV - 2 免疫对猪健康状况的影响

本试验中PCV - 2 疫苗能降低仔猪发病率、死亡率及PCV - 2 感染率,国产疫苗1 和2 双针免疫和进口疫苗的免疫效果优于国产疫苗1 和2 的单针免疫。沈庆炜[10]和赵建乐等[11]研究发现,PCV - 2 疫苗可降低仔猪PCV - 2 发病率,提高保育和育肥阶段的生产水平。本试验中28 日龄对照组仔猪PCV - 2 抗体水平达到强阳性水平,这可能是哺乳后期仔猪血清中母源PCV - 2 抗体耗尽,感染PCV - 2 野毒产生的抗体。沈庆炜[10]和赵建乐等[11]研究发现,未免疫PCV - 2 疫苗的仔猪在21 日龄时感染PCV - 2。

3. 3 PCV - 2 免疫对生产性能的影响

本试验中进口疫苗和国产疫苗均能显著提高猪群的生产性能,且国产疫苗1 和2 双针免疫组对生产性能改善效果明显优于国产疫苗单针免疫组。沈庆炜[10]研究发现,仔猪注射PCV - 2 疫苗可以提高其生产性能,但PCV - 2 疫苗免疫次数并未影响猪的生产性能,这可能与本研究的免疫时间和所用疫苗类型有关。

4 结论

使用国产疫苗1 和2 在14 日龄时进行首免,间隔14 d后二免,得到的免疫效果与进口疫苗14 日龄时单针免疫的效果相当,免疫PCV - 2 疫苗后可提高猪群PCV - 2 抗体水平、降低猪群PCV - 2 发病率,从而提升猪群的生产水平。

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[10]沈庆炜.不同猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗对猪生产性能的影响[J].上海畜牧兽医通讯,2014(2):26-27.

圆环病毒疫苗篇9

近年来, 为了更好地预防PCV2 感染, 国内外都相继开展了有关PCV2 灭活疫苗和基因工程疫苗的研究, 并取得了一定效果[3,4,5] 。研究使用北京大北农动物医学研究中心分离的PCV2型强毒株 (PCV2-SX株) 制成灭活疫苗对猪只进行免疫攻毒试验, 通过测定免疫后ELISA抗体效价、体温和体重变化以及抗原免疫组化检测等对疫苗进行效力评价, 现报道如下。

1 材料与方法

1.1 疫苗

猪圆环病毒2型油乳佐剂灭活疫苗 (PCV2-SX株) , 毒价为1×106.0TCID50/mL, 自制。

1.2 试验动物

18～21日龄三元杂交猪30头, 经PCV2抗体ELISA检测试剂盒 (武汉科前生物技术有限公司生产) 和PCV抗原PCR检测试剂盒 (北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产) 检测均为阴性。

1.3 攻毒毒株

猪圆环病毒2型 (PCV2-SX株) , 毒价为1×105.0 TCID50/mL, 由北京大北农动物医学研究中心自行分离。

1.4 试验动物分组及免疫攻毒方案

将18～21日龄健康三元杂交猪分为3组, 每组10头, 第1组为空白对照组, 不免疫, 不攻毒, 隔离饲养;第2组为安慰剂 (乳化的DMEM营养液) 对照组, 免疫接种安慰剂;第3组为免疫组, 免疫接种自制油乳佐剂灭活疫苗, 一免后第2周进行第2次免疫;二免后第21天对第2, 3组猪攻毒, 每头猪肌肉注射2 mL, 逐日观察。攻毒后第4天, 分别在第2, 3组猪的两侧腋下及两臀部肌肉注射弗氏不完全佐剂乳化的钥匙孔血蓝蛋白 (KLH/ICFA, 0.5 mg/mL) , 4.0 mL/头;腹腔注射巯基乙酸培养基, 10 mL/头[6]。攻毒后第11, 19天, 对第2, 3组试验猪再次腹腔注射巯基乙酸培养基, 10 mL/头。攻毒后逐日观察试验猪临床症状并测量体温, 攻毒前后对试验猪进行称重并比较生产性能;解剖全部试验猪, 观察病理变化, 并采集肺脏、脾脏、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结进行免疫组化检测。

2 结果与分析

2.1 试验猪抗体监测

接种油乳佐剂灭活疫苗后14, 28, 35, 42, 49, 60天采血, 分离血清, 用PCV2型抗体ELISA检测试剂盒测定抗体效价, 结果空白对照组抗体一直为阴性;安慰剂对照组攻毒后第2周出现抗体, 抗体阳性率为20%, 攻毒后第25天抗体全为阳性效价, 最高达到1∶160;免疫组一免后第2周抗体阳性率为80%, 二免后第2周ELISA抗体效价达到1∶320的猪占90%, 二免后第3周40%的猪抗体效价能够达到1∶640, 攻毒后抗体效价进一步升高达到1∶2 560。

2.2 临床观察

攻毒后观察试验猪临床症状, 安慰剂对照组试验猪在攻毒后第10天出现发热症状, 体温超过40.5 ℃, 到第11天有8头猪发热, 个别猪体温达到41.2 ℃, 至第13天所有猪表现出发热症状并持续2～5 d;伴随体温升高的同时试验猪也表现出精神疲倦、厌食、生长缓慢。攻毒前后免疫组和空白对照组比较相对日增重没有差异, 安慰剂对照组明显低于空白对照组且差异显著;空白对照组和免疫组生长状态一直良好, 体温均未超过40.5 ℃, 见157页彩图1 (图中不同曲线代表不同个体猪) 。

2.3 PCV2抗原免疫组化检测 (见157页彩图2)

攻毒后第25天, 剖杀试验猪进行观察发现, 空白对照组试验猪所有组织正常, 安慰剂对照组攻毒后肺部间隙增宽, 淋巴结肿大, 免疫组攻毒后肺部和淋巴结病理变化不明显。采集所有试验猪肺脏、脾脏、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结进行免疫组化检测, 空白组对照和免疫组均观察不到阳性信号, 安慰剂对照组肺脏能观察到阳性信号, 脾脏和淋巴结均观察到极强的阳性信号 (图2中箭头所指即为强阳性信号) 。

3 讨论

PCV2是引起PMWS的主要病原, 能抑制免疫系统, 使机体免疫力下降。猪群感染PCV2时常发生多疾病混合感染, 典型性临床症状有消瘦、皮肤苍白、腹泻、呼吸障碍及轻度的黄疸, 还包括神经症状、繁殖障碍、皮炎等。PCV2及其相关的猪病死亡率为10%～30%, 较严重的猪场在爆发该病时死淘率高达42.9%[7], 给养猪业造成严重的经济损失。

PMWS主要发生在6～12 周龄断奶仔猪, 母源抗体可保护仔猪免受PCV2 侵害, 而仔猪断奶后母源抗体水平下降, 不能形成有效保护, 导致病毒感染。目前, 国内外都相继开展了有关PCV2 灭活疫苗和基因工程疫苗的研究[8], 并取得了一定效果。研究用实验室分离、鉴定的PCV2-SX株制成疫苗, 免疫攻毒猪只, 对该毒株的免疫效力进行研究。

在研究中, 免疫疫苗后第4周ELISA抗体效价达到1∶320, 攻毒后1～3周ELISA抗体进一步上升, 免疫对照组试验猪攻毒后精神状态、食欲和生长情况均好于安慰剂对照组, 免疫组相对日增重高于安慰对照剂组并且差异显著, 而与空白对照组间没有差异;攻毒后第10天, 安慰剂对照组出现发热反应, 体温均超过40.5 ℃并维持2～5 d, 免疫组未出现发热反应, 表明使用油乳佐剂灭活疫苗后能够对猪产生有效的保护。免疫组肺脏和免疫器官的病理变化明显比安慰剂对照组轻, 在免疫组化检测中, 免疫组抗原均为阴性, 而安慰剂对照组全部为阳性, 表明油乳佐剂灭活疫苗的使用能够有效抑制病毒在组织器官中的生长。

猪只感染PCV2后可以引起很强的体液免疫应答, 同时还可以诱导产生细胞免疫反应。它可以在猪体内持续存在而不发病, 当猪体受到其他病原感染或不良诱因应激, 则可以引起临床发病。研究结果显示, 通过对断奶前仔猪接种灭活疫苗, 能够诱导机体产生免疫应答, 减少病毒对组织器官的损害, 有效抑制其他继发性感染, 同时还能够提高猪只在疾病流行时期的饲料报酬。

参考文献

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