鸡柔嫩艾美尔

关键词：

鸡柔嫩艾美尔（精选七篇）

鸡柔嫩艾美尔 篇1

1一般资料与方法

1.1一般资料

试验用药有常山、青蒿等5种按比例制成的中药散剂。西药采用妥曲珠利,配置成25mg/ml的溶液。球虫卵囊为柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,选用出壳后严格消毒的育雏笼饲养试验用鸡。

1.2方法

先进行预防试验,选出13日龄体重相当的300只试验用鸡分为6组,其中低剂量组、中剂量组、高剂量组、妥曲珠利组分别按照0.5%、1.0%、2.0%、25mg/L的处理拌料,连喂3d,然后进行柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊接种感染试验;阳性对照组感染不给药,阴性对照组不感染不给药。治疗试验选用两周龄的鸡300只分成6组,除了阴性对照组,其他组经口接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊7万个,然后按照同预防试验相同的处理方式开展。

1.3观察指标

在试验期间,每天对鸡的精神状态进行观察,对其便血情况进行记录,人工感染后死亡鸡对其进行解剖,查看其死因。在接种8d后进行称重,对鸡的增重和盲肠病变情况进行观察记录,其中相对增重率是试验组平均增重和阴性对照组鸡的对比。并按照相关标准对鸡群的血便记分和盲肠病变记分。病变值是全组平均病变记分乘以10,抗球虫指数是增重率和成活率的和减去病变值和卵囊值的和所得的差。如果其值大于180,表明效果很高,如果在160~180之间,表明效果一般,中效,如果小于160,表明效果很低。

2结果

经过预防试验和治疗试验发现,其临床症状相似,阴性对照组生活、饮食和排便等都很正常,且精神状态很佳,并没有在粪便中发现球虫卵囊,阳性对照组在感染后,鸡冠出现可视黏膜苍白,排除水样粪便,便血,5d后,鸡群精神萎靡,饮食减少,饮水增加。中药组都在感染后4d后出现便血,并在第6天出现死亡,应用妥曲珠利,虽然在第5天出现便血,但是到试验结束为止,没有任何鸡出现死亡,对每组死亡鸡进行解剖,发现其病理变化非常相似,都是盲肠出现肿胀,暗红色,黏膜出现糜烂并且存在点状出血情况,坏死性脱落,其内部充满凝固或者新鲜的暗红色血液。关于抗球虫效果,其预防试验和治疗试验的存活率和抗球虫指数的试验结果(如表1,表2)。

3讨论

经过试验表明,中药复方对于球虫病具有一定的预防和治疗作用,在复方中常山的主要成分是常山酮。球虫在发育过程中的3个周期,即子孢子、第一二代的裂殖体都能被常山酮有效的击杀。常山酮对于球虫生活周期有非常大的作用范围[2],对于抗球虫有很好的效果,青蒿对于抵抗球虫也有非常好的效果,其在体外对柔嫩艾美尔球虫卵囊的孢子化过程具有一定的抑制作用,药物时间越长,孢子化的概率也随着降低,如果卵囊被青蒿所处理,感染鸡并没有出现异常现象,和阴性对照组没有明显差异[3],这就表明青蒿对于孢子化卵囊具有显著的击杀作用。妥曲珠利能对球虫进行抗制,是由化学药物合制而成,其抗球虫水平很高,具有非常高的抗球虫指数,能对球虫进行抑制和杀灭,所以其被广泛的应用,但是如果应用时间太长,会出现大量的耐药虫株,如果鸡肉被人类食用,其残留的化学成分对人体也会造成非常大的危害。而中药不仅在预防疾病上有非常显著的作用,而且能对机体进行调整,不仅能够扶正驱邪,还没有耐药性,副作用也小,其治疗后的鸡肉人类能够放心食用。中药散剂在预防和治疗上都具有非常显著的效果,和妥曲珠利的效果相比还是具有一定的差异,在应用过程中还很广泛,本次试验中,球虫卵囊是没有和任何抗球虫药接触过的纯系虫蛀,其对妥曲珠利没有耐药性,所以妥曲珠利其效果显著,但是在实际应用中,其效果还有待探讨,所以,中药复方值得在防止球虫病上进行推广。

参考文献

[1]王新爱.中草药对鸡柔嫩艾美尔球虫病防治效果的研究[D].中国农业科学院,2014.

[2]李宏娟,刘聚祥,刘静.中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效观察[J].华北农学报,2008,23(S1):292-296.

鸡柔嫩艾美尔 篇2

关键词：高级脂肪酸,雏鸡,柔嫩艾美尔球虫病,类胡萝卜素,氧化应力

鸡柔嫩艾美尔球虫病是养鸡业中一大重要经济疾病。艾美尔球虫抗药性地不断出现，时刻威胁着养鸡业的发展。在雏鸡组织中，亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等高级不饱和脂肪酸通过过氧反应创造一个使其氧化的应力条件，以不利于寄生虫的生长繁殖(氧化应力就是氧化强化剂与抗氧化剂之间的平衡失调，有利于氧化强化剂作用的发挥)[1]。用精炼鱼油和亚麻油等含有高级脂肪酸的饲料饲喂雏鸡，能够有效降低柔嫩艾美尔球虫对雏鸡的病理损伤;同时在应用高级脂肪酸饲料饲喂雏鸡时，血浆中维生素E和其他一些易被氧化的脂溶性维生素和色素的浓度降低，如维生素A、类胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质等。

1 鸡柔嫩艾美尔球虫病简介

1.1 病原体

鸡柔嫩艾美尔球虫寄生于鸡的盲肠，致病力很强。严重感染时，盲肠高度肿大，黏膜出血。卵囊为宽卵圆形，平均为22.62×18.05μm。原生质呈淡褐色;卵囊壁为淡绿黄色;厚度为1μm。孢子形成时间，平均为27 h。孢子囊大小平均为11.47×6.23μm;无内外残体。人工接种后第7天，在鸡粪内发现卵囊。

1.2 流行病学

鸡感染柔嫩艾美尔球虫的途径和方式是啄食感染性卵囊。凡被病鸡或带虫鸡感染过的饲料、饮水、土壤或用具等，都有卵囊存在;其它鸟类、家畜和某些昆虫，以及饲养管理人员都可以成为鸡柔嫩艾美尔球虫的机械性的传播者。被苍蝇吸吮到体内的卵囊，可以在其肠管中保持生活力达24 h。卵囊的抵抗力非常强，在土壤中保持生活力平均达6个月，温暖潮湿的地区最有利于卵囊的发育，卵囊对高温和干燥的抵抗力较弱。当相对湿度为21%～30%时，在18-40℃温度下，经1-5 d死亡。雏鸡的发病率和死亡率都高，成年鸡几乎不发病，这是一种年龄免疫现象，但成年鸡多系带虫者，成为病原的源泉;发病时间与气温和雨量的关系密切，通常多在温暖的月份流行。

1.3 致病作用

鸡柔嫩艾美尔球虫的裂殖体在肠上皮细胞中大量增殖时，破坏肠黏膜，引起肠管发炎和上皮细胞崩解，使消化机能发生障碍，营养物质不能吸收，引起病鸡消瘦、贫血和下痢。

1.4 主要症状

鸡柔嫩艾美尔球虫的急性型病程约1-3周。开始时精神不振，羽毛耸立，头低耳耷，食欲减退，泄殖孔周围的羽毛被液状排泄物粘连。随着病情的加重，病鸡出现翅膀轻瘫，食欲废绝，鸡冠和可视黏膜苍白、贫血，粪呈水样，并带有少量血液。如果病情得不到控制，则发生痉挛和昏迷，不久死亡。慢性型多为成年鸡，症状与急性型相似，但不明显，病程可延续数月。产卵量减少，死亡率较低[2]。

2 试验材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 试验动物及其管理

试验动物为1日龄的商品鸡，分装于若干鸡笼;持续照明，最初温度为32.3℃，以后逐渐降至28-25℃，并持续2周，每个鸡笼的雏鸡供给一种处理饲料(试验饲料和对照饲料统称为处理饲料);要求雏鸡从1日龄到3周龄吃尽所有的规定饲料，饮水自由。

2.1.2 试验饲料

有基础饲料，5%、10%、20%3个水平的甘油三酯饲料，1%、2.5%、5%、10%、20%5个水平的精炼鱼油饲料，10%新鲜亚麻油饲料，10%陈旧亚麻油饲料，15%的亚麻籽饲料。其中甘油三酯是一种非氧化油脂，和基础饲料为对照饲料。基础饲料为商品饲料，含有24%蛋白质、4%纤维素、4%脂肪，维生素E的含量为23.10 IU/kg饲料。其他处理饲料是将相应的饲料成分按百分比称重掺入基础饲料，混匀即可。在掺混之前，鱼油和新鲜亚麻油饲料冷冻保存，以防自氧反应;亚麻籽4%冷藏保存，陈旧亚麻油，甘油三酯和基础饲料室温保存。试验刚开始之前掺混，并贮存于4%的密闭容器，饲喂时取出。

2.1.3 寄生虫

鸡柔嫩艾美尔球虫获于河西的一个中等规模鸡场，并通过感染雏鸡扩大数量。

2.2 试验方法

2.2.1 试验分组

每个试验的每个饲料处理组的雏鸡，在2周龄时按平均体重分成同等的2个小组。其中1个小组的雏鸡口服感染柔嫩艾美尔球虫，另一小组的雏鸡口服饮水作为对照。临接种前称重1次，接种后6 d试验刚结束之前再称重1次，以确定感染期间增加的体重量。最后从心脏穿刺抽血，用颅颈脱位法杀死雏鸡，获取血液和组织进行分析。

2.2.2 分析与统计分析

所有血浆用1︰10的丙酮提出物对类胡萝卜素进行比色分析，对α-生育酚、γ-生育酚、维生素A用高压液体层析法分析，胆固醇和甘油三酯运用离体分析，损伤程度通过病变计分分析。对试验数据用统计学方法进行统计分析，饲料处理中之间的非偶然性差别用新复级差法确定。

2.2.3 试验内容

2.2.3. 1 试验1

比较10%、20%的鱼油饲料与10%、20%的甘油三酯及基础饲料的结果。每小组5只雏鸡，感染组感染剂量为每只雏鸡58 000个孢子化卵囊。测定血浆中类胡萝卜素、对α-生育酚、γ-生育酚、维生素A的浓度。并观察和比较感染组之间球虫对雏鸡组织的损伤程度。

2.2.3. 2 试验2

比较5%、10%鱼油饲料与10%新鲜亚麻油、10%陈旧亚麻油等植物油饲料的结果。10%的甘油三酯饲料和基础饲料作对照。每小组10只雏鸡，感染组感染剂量为每只雏鸡160 000个孢子化卵囊。其结果测定同试验1。只测定血浆类胡萝卜素的浓度

2.2.3. 3 试验3

比较鱼油食物与亚麻籽饲料的结果(15%亚麻籽饲料与5%鱼油饲料的高级脂肪酸浓度要等价)。用5%甘油三酯饲料与基础饲料作对照。每小组10只雏鸡，感染组感染剂量为每只雏鸡50 000个孢子化卵囊。只测定血浆中类胡萝卜素的浓度。2.2.3.4实验4比较1%、2.5%、5%、10%4个水平的鱼油饲料的结果，以确定鱼油饲料减轻球虫损伤雏鸡组织的有效范围。10%甘油三酯饲料与基础饲料作对照。每小组鸡数、感染剂量和测定项目同试验3。

2.2.3. 5 试验5

雏鸡浓缩血浆3 mL，在室温条件下用不同浓度的过氧化氢(H2O2) 感作。H2O2的浓度从5μM-5mM。用丙酮推断类胡萝卜素的浓度变化。

雏鸡浓缩血浆3 mL，在3 mM硫酸亚铁(FeSO4) 或氰亚铁酸钠[Na2Fe (CN) 6]的参与下，用5mM的过氧化氢(H2O2) 感作或不用。置室温24 h。用丙酮推断类胡萝卜素的浓度变化。

3 试验结果

3.1 试验1结果

10%、20%的甘油三酯饲料组的血浆类脂总量都增大，10%、20%鱼油饲料组的血浆类胡萝卜素、对α-生育酚、γ-生育酚、维生素A的浓度明显降低，差异显著。感染组之间，10%、20%的鱼油饲料可明显减轻球虫对雏鸡的病理损伤。

3.2 试验2结果

10%甘油三酯饲料组血浆对α-生育酚浓度明显增大，维生素A浓度明显降低。10%鱼油饲料组血浆类胡萝卜素的浓度及维生素A的浓度明显降低。10%新鲜亚麻油和10%陈旧亚麻油两个饲料处理组血浆维生素A的浓度同样降低，但是，γ-生育酚浓度增大。鱼油、新鲜亚麻油、陈旧亚麻油3种处理饲料能明显减轻损伤。

3.3 试验3和试验4结果

进一步证实，即使对未感染雏鸡饲喂鱼油饲料时，血浆类胡萝卜素的浓度同样降低;试验4中，10%的鱼油饲料组血浆类胡萝卜素的浓度降低最为明显。在感染组中，可以明显降低类胡萝卜素的浓度的处理饲料是5%和10%的鱼油饲料。试验3中，5%鱼油饲料和15%的亚麻籽饲料能明显减轻损伤。试验4中，2.5%、5%、10%鱼油饲料均能减轻损伤。

3.4 试验5结果

雏鸡浓缩血浆中类胡萝卜素的浓度是确定的，为8.91μM。用不同浓度的过氧化氢(H2O2) 感作时，类胡萝卜素的浓度无明显降低。用3 m MFeSO4或3 m M[Na2Fe (CN) 6]感作或与(H2O2) 联合感作24 h，类胡萝卜素的浓度同样降低，波动的范围在15%～46%。

4 讨论

试验看出，含有多量不饱和脂肪酸的饲料能够有效减小或减轻柔嫩艾美尔球虫对雏鸡的病理损伤。主要原因是游离基脂肪酸的过氧化反应产生的一种氧化应力状态，不利于寄生虫的生长繁殖。本试验证实柔嫩艾美尔球虫对氧化应力是敏感的。试验结果对维生素E的评价不尽一致，而所有血样中类胡萝卜素的浓度一致降低，是过氧化氢发生的最佳见证，是敏感的指示剂。

在雏鸡饲料中可适当增加脂肪酸饲料的比例，如鱼油、植物油等，以预防和控制雏鸡柔嫩艾美尔球虫病的发生。

参考文献

[1]武道留, 王会珍.鸡病防治问答[M].北京:化学工业出版社, 2011.

鸡柔嫩艾美尔 篇3

1 材料与方法

1.1 虫种

柔嫩艾美耳球虫 (Etenella) 虫种由江西农业大学寄生虫实验室提供。

1.2 试验动物

1日龄蛋公雏20只 (购自于南昌某孵化场) 。

1.3 药品试剂

食盐, 重铬酸钾, 无水乙醇, 二甲苯, 苏木素色精, 伊红, 硫酸铝钾, 氧化汞, 40%甲醛, 25%～28%氨水, 36%冰醋酸, 37%盐酸, 纯化水。

1.4 器具

离心机, 显微镜, 电冰箱, 生化培养箱, 电子秤等全套寄生虫实验常规器皿, 电热恒温干燥箱, KD-1508A轮转式切片机, 生物组织标准滩烤片机, ZT-12J生物组织自动脱水机。

1.5 试剂配制

1.5.1 饱和食盐水及5%重铬酸钾液

分别按每100 m L清水中相应加入38 g、5 g食盐和重铬酸钾, 加热溶解、冷却即可。

1.5.2 梯度浓度乙醇及福尔马林

用100 m L量筒量取所需浓度数量的无水乙醇或40%甲醛与100 m L纯化水混匀。

1.5.3 苏木素染色液

将甲液 (苏木素2 g+无水乙醇20 m L) 、乙液 (硫酸钾铝40 g+纯化水400 m L) 加热溶解后混合煮沸, 加入1 g氧化汞搅拌冷却, 过滤即可, 用时按该液的4%加入36%的冰醋酸。

1.5.4 伊红染色液

水溶性:药勺取伊红3 g加入盛有100 m L纯化水的烧杯中混匀;醇溶性:药勺取伊红0.5～1.0 g加入盛有100 m L 80%～90%乙醇的烧杯中混匀。

1.5.5 分化液及返蓝液

用50 m L量筒量取37%盐酸2.5 m L和4.0 m L氨水分别加入盛有400 m L的80%乙醇和400 m L纯化水的烧杯中混匀。

1.6 雏鸡分组与饲养

1日龄蛋公雏20只, 购回饲养于经150℃干燥箱杀菌的纸箱内, 7 d后分为柔嫩艾美耳球虫卵囊增殖组 (Ⅰ) 、感染组 (Ⅱ) 和对照组 (Ⅲ) , 每组6只雏鸡, 共3组。均饲养于经高温杀菌的不锈钢笼内, 笼底放置搪瓷方盘用于收留鸡只粪便。禽舍温度控制在30℃左右, 饲料不添加任何药物, 饮水采用煮沸后冷却的自来水。

1.7 毒种增殖

取出冰箱4℃保存的柔嫩艾美耳球虫 (E tenella) 虫种, 检查卵囊的孢子化情况, 离心洗净后经口感染Ⅰ组雏鸡, 收集7 d后含有大量卵囊的鸡粪便。

1.8 卵囊收集、培养

粪便放于500 m L烧杯中捣碎, 加少量饱和食盐水搅拌成糊状, 再加100 m L饱和食盐水后, 经60目及260目筛过滤弃渣, 将滤液倒于2支50 m L的离心管中, 以2 000 r/min离心5 min, 留上清液, 弃沉渣, 上清液分装于几只离心管中兑清水离心, 倾上清液, 留少量沉淀液兑水洗涤卵囊, 使洗涤后的卵囊保存于含有2.5%的重铬酸钾液 (与沉淀液等体积的5%的重铬酸钾液) 的60 m L三角瓶中。置28℃恒温箱中培养备用。

1.9 卵囊计算

取出恒温箱内的卵囊液, 兑水离心洗去重铬酸钾, 获洁净的卵囊原液于60 m L三角瓶中。吸管吹、吸并摇晃三角瓶中的卵囊原液, 用刻度吸管移液1 m L于青霉素空瓶内, 渐稀释, 使10μL卵囊液中卵囊数在40～100个为好。10μL移液器吸卵囊液于载玻片上, 覆盖玻片在16×10倍显微镜下逐行计算, 重复计算3次取平均值推算稀释后体积内的卵囊总数 (微量移液计数) , 得出1 m L原液内的卵囊数。根据试验需要计算鸡只卵囊感染量的原液体积数。

1.1 0 卵囊的感染

在助手协同下打开雏鸡喙, 经口感染1×105个球虫卵囊于试验Ⅱ组的每只雏鸡。

1.1 1 雏鸡盲肠病变的采集

感染后每天注意观察雏鸡症状, 症状明显时照相。第5天宰杀鸡只取出盲肠照相后置5%福尔马林液内备用。

1.1 2 盲肠组织的冲洗、脱水、透明及包埋

用手术剪横截3段盲肠, 长约3 mm, 组织用纱布包好放入500 m L烧杯中, 在自来水龙头下冲洗12～24 h, 经自动脱水机上梯度浓度乙醇自动脱水, 又经二甲苯透明, 后在30℃恒温箱中, 用镊子将组织快速夹于已制好的小纸盒中的溶解石蜡中。蜡盒移出恒温箱, 石蜡凝固后取出蜡块。

1.1 3 切片、贴片及烤片

蜡块装在KD-1508A轮转式切片机上, 调整切片厚度为8μm, 匀速缓慢摇柄切片。切好蜡片置生物组织标准滩烤片机的45℃恒温水槽中, 用洁净的载玻片捞取蜡带, 再用生物组织标准滩烤片机烤片至干燥无水。

1.1 4 染色和封片

贴在玻片上的鸡盲肠组织采用HE染色法染色, 用中性树胶加盖玻片封片。

2 结果

2.1 雏鸡柔嫩艾美耳球虫发病症状及盲肠病理变化

雏鸡感染E tenella卵囊后第5天, 鸡只精神不佳, 羽毛耸立, 头卷缩, 常伫立一隅, 食欲减退, 泄殖孔周围的羽毛为液状物污染、粘连。随后病雏出现共济失调, 翅膀轻瘫, 渴欲增加, 食欲废绝, 嗉囊内充满液体, 黏膜贫血、苍白, 粪便开始为咖啡色, 以后变为完全血粪。末期发生痉挛和昏迷, 不久死亡。鸡尸消瘦, 两支盲肠显著肿大, 其中充满凝固的或新鲜的血液 (见图1、图2、图3) 。

2.2 正常盲肠组织与病雏盲肠组织对比

盲肠组织切片在显微镜下观察, 正常盲肠组织上皮细胞增殖与凋亡平衡, 肠上皮细胞稳态维持 (见图4) ;病雏盲肠细胞因受柔嫩艾美耳球虫有性繁殖过程的破坏, 大量肠上皮细胞凋亡、绒毛脱落, 出现很多红细胞和含有大量裂殖子的裂殖体 (见图5、图6) 。

3 分析与讨论

3.1 雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染量与宰杀剖解时间的确立

笔者试验是通过人工感染复制鸡柔嫩艾美耳球虫病来观察雏鸡的发病症状、盲肠组织病理变化的, 为了保证试验结果, 采用重度感染及根据柔嫩艾美耳球虫第5天在雏鸡体内形成第1～2代裂殖体并产生血便的特性, 确定每只雏鸡感染1×105个球虫卵囊和第5天剖解鸡只。

3.2 柔嫩艾美耳球虫致病机理

孢子化卵囊进入消化道, 在肌胃机械性作用下卵囊破裂, 孢子囊逸出, 在胰酶和胆汁的共同作用下, 子孢子脱囊而出, 侵入、破坏肠的黏膜上皮, 侵入固有膜和黏膜下层发育成为滋养体, 再经裂殖生殖产生裂殖体, 裂殖体发育成熟后释放出裂殖子。每个裂殖体内包含数十个或更多裂殖子, 裂殖子从裂殖体中释放时, 破坏肠上皮细胞, 导致血管破裂, 肠上皮崩解, 从而影响黏膜的完整性, 失去屏障作用, 引起消化机能紊乱, 营养物质不能吸收, 进而出现机体消瘦、血便等临床症状;当感染严重时, 由于肠道继发性感染, 引起肠道炎症和出血, 出现肉眼可见的肠芯等病理变化。

此外, 大量破坏的肠上皮细胞在微生物作用下发生腐败分解, 加之虫体死亡、崩解产生的大量有毒物质, 被机体吸收后常造成自体中毒, 故临床上表现为精神萎顿、食欲减退等全身中毒症状。

鸡柔嫩艾美尔 篇4

1.1 试验材料

1.1.1 虫株

纯种E.tenella卵囊 (山西分离株) , 由山西农业大学兽医病理室提供。通过健康小公鸡传代, 按常规分离、纯化卵囊方法进行分离、纯化, 孢子化后置4℃备用。

1.1.2 试验动物

海兰白产蛋母鸡和公雏鸡, 来自平遥龙海种鸡场;公雏鸡出壳后运回育雏室, 给予连续的人工光照和标准日粮 (不含抗球虫药) , 饲养至10日龄时用于本试验。产蛋母鸡在无球虫环境中照常饲养, 待用。

1.2 试验方法

E.tenella感染鸡Ig G生成细胞和血清Ig G动态变化规律测定:将150只公雏鸡于第10日龄时随时分为T组和C组, 每组50只鸡, T组鸡口服感染E.tenella成熟卵囊8×104个/只, 在感染后第2、3、4、6、7、9、12、16、18、20、22天每次捕杀T组和C组鸡各5只, 取材, 检测各免疫器官及盲肠中的Ig G生成细胞数的动态变化。于第2、3、4、6、7、8、10、12、16、18、20、22、25、27、30天T组和C组各取5只鸡, 心脏采血, 检测循环血液中特异性Ig G含量的动态变化。

2 试验结果

2.1 DOT-ELISA检测结果

2.1.1 特异性试验

以灭菌生理盐水分别代替卵囊抗原、被检血清和酶标抗体, 进行DOT-ELISA检测, 结果表明均为阴性。

2.1.2 可溶性孢子化卵囊抗原与酶标抗体最佳工作条件的确定

通过试验比较两者的最佳工作条件分别为1︰40和1︰6000。

2.1.3 阻断性试验

以1∶10、1∶40稀释的正常鸡血清均能完全阻断, 结果为阴性;1∶80、1∶160可部分阻断, 1∶320不能阻断, 结果为阳性。

2.1.4 雏鸡感染E.tenella后血清中特异性Ig G含量动态变化结果

雏鸡初次感染E.tenella后, 第6天血清中开始检测出特异性Ig G, 随后抗体水平逐渐升高, 于第18天达到峰值, 持续4天后, 开始下降, 第30天时降至感染后第7天的水平。

2.2 球虫病鸡Ig G生成细胞测定结果

2.2.1 酶标抗体最佳工作浓度的确定

通过试验比较酶标抗体最佳工作浓度为1∶1000。

2.2.2 盲肠黏膜中Ig G生成细胞数的动态变化

阳性细胞主要位于淋巴滤泡和弥散淋巴组织, 特征为细胞核为淡蓝色、细胞浆为棕黄色。T组Ig G生成细胞从第3天开始增加, 第12天达到峰值。第9、12、16、18、20天与C组相比差异极显著 (P<0.01) , 第22天与C组差异显著 (P<0.05) 。

2.2.3 胸腺中Ig G生成细胞数的动态变化

胸腺中阳性细胞数量很少, 主要分布于髓质。在攻毒后的整个过程中, 有2个峰值, 分别出现在感染后第4天和第18天, 整体变化起伏不定, 无明显规律。

2.2.4 特异性试验结果

以灭菌生理盐水代替酶标抗体, 染色结果为阴性。

2.2.5 盲肠黏膜中Ig G生成细胞数的动态变化

阳性细胞主要位于淋巴滤泡和弥散淋巴组织, 特征为细胞核为淡蓝色, 细胞浆为棕黄色。T组Ig G生成细胞从第3天开始增加, 第12天达到峰值。第9、12、16、18、20天与C组相比差异极显著 (P<0.01) , 第22天与C组差异显著 (P<0.05) 。

2.2.6 脾脏中Ig G生成细胞数的动态变化

脾脏中的阳性细胞主要分布于白髓的淋巴小结、动脉周围淋巴鞘, 红髓中的脾索内也含有少量的阳性细胞。Ig G生成细胞在感染后第3天开始增加, 第12天达到峰值。从第4天开始直到第20天差异极显著 (P<0.01) , 第22天差异显著 (P<0.05) 。

2.2.7 盲肠扁桃体中Ig G生成细胞的动态变化

盲肠扁桃体中的阳性细胞主要集中于淋巴滤泡和弥散性淋巴组织。Ig G生成细胞在攻毒后的第2天即有显著增加, 峰值在第9天, 然后逐渐下降, 于第18天降至对照组水平, 在第4、6、7、9、12天差异极显著 (P<0.01) 。

2.2.8 法氏囊中Ig G生成细胞数的动态变化

法氏囊中的阳性细胞无论皮质、髓质均分布较多, 尤其以髓质部分分布密集。Ig G生成细胞从感染后第3天开始即显著增加, 差异显著 (P<0.05) , 于第6天开始差异极显著 (P<0.01) , 并一直持续到第22天, 峰值位于第16天。

3 分析与讨论

Dot-ELISA具有敏感性高、特异性强、被检样品用量少、不需特殊仪器、操作简便易行、结果便于长期保存等特点。因此, 该试验方法自问世以来, 不断应用于抗原抗体的检测。但在检测鸡球虫感染鸡血清中的特异性抗体和在卵黄中检测抗球虫特异性抗体方面, 尚未见有报道。本试验利用孢子化卵囊作为抗原, 感染球虫鸡血清或卵黄抗体为一级抗体, 酶标兔抗鸡Ig G为二级抗体, 建立了Dot-ELISA, 效果良好, 适合于球虫病鸡血清和卵黄抗体水平的检测。

试验研究结果表明:雏鸡初次感染E.tenella后于第6天即可在循环血液中检测出特异性Ig G, 随后抗体水平逐渐上升, 在第18天达到峰值, 第30天时下降至感染后第7天的水平。这个结果与Mockett (1986) 、Hasbullvh (1992) 等的报道基本一致。揭示了雏鸡感染E.tenella后, 鸡体Ig G生成细胞的动态变化规律为:主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和盲肠局部的Ig G生成细胞于第2天和第3天开始增殖, 并分泌特异性Ig G, 此时, 球虫子孢子已穿过肠上皮细胞, 进入肠腺上皮细胞内进行发育, 并进入第一代裂殖生殖阶段。此期, 子孢子和第一代裂殖子均可刺激细胞产生和分泌Ig G, Ig G生成细胞数量于攻毒后第9天至第16天先后达到峰值, 然后逐渐下降, 盲肠扁桃体中的Ig G生成细胞在第18天降至对照组水平, 盲肠、脾脏和法氏囊中的Ig G生成细胞数在第22天仍高于对照组, 且差异显著。

成熟卵囊被鸡吞食后, 在肌胃中受机构作用囊壁破裂, 释放出4个孢子囊。孢子囊在十二指肠和小肠中部受胆汁和酶的作用, 子孢子逸出, 子孢子一逸出, 就侵入宿主的肠绒毛部黏膜上皮细胞, 然后经巨噬细胞和上皮淋巴细胞进行转移, 再进一步发育。在上述过程中, 巨噬细胞和上皮间淋巴细胞给辅助性T细胞 (TH) 提供抗原信息, TH接受抗原信息后, 通过释放一些可溶性因子作用于B细胞, 使处于休眠状态的B细胞活化, 并增生和分化, 先转化为浆母细胞, 进而增殖为浆细胞, 产生和分泌特异性抗体到体液中, 从而发挥抗体的抗球虫作用。这个作用的形式之一, 是抗子孢子抗体可与子孢子结合, 抑制子孢子侵入到肠上皮细胞内。

摘要：为了揭示鸡柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella) 病的免疫机制, 试验从分子水平、细胞、亚细胞对人工攻毒病鸡特异性抗体、免疫细胞的动态变化及在抗球虫中的作用进行了探讨, 试验结果如下:一是雏鸡感染E.tenella后, 第6天即可在外周血液中检测出特异性IgG, 于第18天达到峰值, 第23天开始下降, 第30天时降至感染后第7天的水平;二是揭示了雏鸡感染E.tenella后, 鸡体IgG生成细胞的动态变化规律为:主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和盲肠局部的IgG生成细胞于第2天和第3天开始增殖, 在第9天至第16天达到峰值, 然后逐渐下降, 盲肠扁桃体中的IgG生成细胞在第18天降至对照组水平, 盲肠、脾脏和法氏囊中的IgG生成细胞数在第22天仍高于对照组, 且差异显著。

鸡柔嫩艾美尔 篇5

1材料与方法

1. 1试验动物

1日龄海兰雏鸡,购自沈阳农业大学孵化场,购回后在严格消毒的环境下饲养,喂食无抗球虫药的全价饲料至14日龄,试验开始前检查有无球虫感染。

1. 2试验虫株

试验虫株分离自沈阳市新民某肉鸡场。从病死鸡的盲肠采集内容物,分离并鉴定为柔嫩艾美耳球虫。经药物敏感性检测,该分离株对地克珠利敏感。

1. 3起始诱导浓度的确定

对14日龄无球虫感染的雏鸡逐只称重,随机分组并调整各组雏鸡的体质、重量基本相同。试验共分7组,每组10只雏鸡,将地克珠利按照0. 05,0. 1, 0. 3,0. 5,1. 0 mg / kg的剂量添加到各试验组饲料中, 另设感染不用药组和不感染不用药组。分组后开始给药直至试验结束,除不感染不用药组外,其余各组每只鸡接种2. 5 × 104个柔嫩艾美耳球虫( 沈阳分离株) 孢子化卵囊。参照参考文献[2]中的方法确定诱导药物的起始浓度。

1. 4抗地克珠利虫株诱导试验

取14日龄无球虫感染雏鸡称重后分成3组,即地克珠利组、感染不用药组和不感染不用药组,每组10只雏鸡。在15日龄时,除不感染不用药组外,其余2组每只雏鸡均经口感染2. 5 × 104个柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊,接种后第8天剖杀所有雏鸡,收集盲肠和粪便中的卵囊,孢子化后供下一次传代使用。

地克珠利组采用药物浓度递增的方法分批对柔嫩艾美耳球虫敏感株进行诱导,从低浓度到高浓度, 地克珠利组每次传代诱导后所收集的卵囊需供下一次感染,根据相对卵囊产量和抗药性程度逐渐提高药物浓度,直至诱导出柔嫩艾美耳球虫对地克珠利的抗药性虫株。当提高药物浓度后,若收集不到足以传代的卵囊,则重复原药物浓度传代。感染不用药组用同样方法重复传代。

1. 5诱导后虫株的抗药性检测

1. 5. 1试验分组取14日龄雏鸡逐只称重,随机分为5组,即敏感组、抗药组及其对应的感染组和感染不用药组,每组10只雏鸡。各感染组每只雏鸡口服接种5. 5 × 104个孢子化卵囊,于感染当天分别在饲料中添加地克珠利1. 4 mg /kg。感染后每天观察雏鸡的体况及第5 ~ 7天血粪便情况; 感染后第8天,逐只称重,剖杀后进行盲肠病变记分; 收集各组雏鸡粪便,计数卵囊产量。

1. 5. 2抗药性的判定分别用最适抗球虫活性百分率( POAA) 、病变记分减少率( RLS) 、相对卵囊产量( ROP) 、抗球虫指数( ACI) 等4项指标判定抗药性［3］,根据4项指标中出现阳性指标的数量确定抗药程度。判断标准: 1) 无抗药性,4项指标均为阴性; 2) 轻度抗药,4项指标有3项指标为阴性; 3) 中度抗药, 4项指标有2项指标为阳性; 4) 完全抗药,4项指标有3项及3项指标以上为阳性。

2结果与分析

2. 1药物诱导起始浓度的确定

0. 05 mg / kg地克珠利组的相对卵囊产量为63. 7% ,其他计量药物浓度组的卵囊数较少或无卵囊产生,因此确定地克珠利的起始诱导浓度为0. 05 mg / kg。

2. 2抗地克珠剂虫株的诱导试验

以0. 05 mg /kg地克珠利作为起始诱导浓度,逐渐增加药物浓度,经过18次传代,获得了对浓度为1. 4 mg / kg地克珠利的抗药株。 具体过程: 0. 05 mg / kg地克珠利传3代→0. 1 mg / kg地克珠利传3代→0. 2 mg / kg地克珠利传3代→0. 5 mg / kg地克珠利传2代 → 0. 8 mg /kg地克珠利传2代 → 1. 0 mg / kg地克珠利传2代→1. 4 mg / kg地克珠利传3代。

2. 3诱导后虫株的抗药性检测

诱导后虫株对1. 4 mg /kg地克珠利产生了完全抗性,结果见表1。

3讨论

虽然在实验室条件下抗药性产生的时间和生产实践中抗药性产生的时间并无直接的一致性,但若能用实验室诱导的方法检测得知球虫对某种新药产生抗药性的时间,就可以针对该药物的使用时间事先作出准确的预测。研究人员采用过的诱导方法有在较高药物浓度压力下大剂量感染法［4］和药物浓度递增法［5］,这两种方法都可以获得抗药虫株,但笔者认为后者略好一些,虽然诱导的时间较长,但可以获得比较稳定的抗药性,因此本次试验采用的是药物浓度递增法。

在球虫抗药性诱导的两种方法中,一种如韩红玉等［2］对每只鸡接种1 × 105个卵囊,以0. 05 mg /kg地克珠利和2. 0 mg /kg马杜拉霉素作为起始诱导浓度, 分别经过18次和20次传代,获得了柔嫩艾美耳球虫对浓度为1. 2 mg /kg地克珠利和对7. 0 mg /kg马杜拉霉素的抗药株; 另一种就是大剂量接种球虫,如李安兴等［6］对每只鸡接种2 × 106个孢子化卵囊,以0. 125 mg / kg地克珠利作为起始诱导浓度,只经过5次传代,就获得了柔嫩艾美耳球虫对浓度为1. 5 mg / kg地克珠利的抗药株。本试验采用逐渐递增药物浓度的方法,从0. 05 mg /kg地克珠利开始,经过18次传代,获得了柔嫩艾美耳球虫对1. 4 mg / kg地克珠利的抗药株。抗药株的成功诱导为下一步敏感株和抗药株的超微结构对比提供了试验材料。

摘要：为了获得柔嫩艾美耳球虫抗地克珠利虫株,试验采用连续递增药物浓度的方法对柔嫩艾美耳球虫沈阳分离株进行实验室诱导。结果表明:地克珠利从0.05 mg/kg的起始药物浓度开始经18次传代,获得了对浓度为1.4 mg/kg地克珠利的抗药性;经抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)、最适抗球虫活性百分率(POAA)检测,沈阳新民分离株对地克珠利失去了敏感性。说明短时间应用地克珠利,球虫也能够产生抗药性。

关键词：柔嫩艾美耳球虫,地克珠利,抗药性,沈阳分离株,鸡,药物诱导

参考文献

[1]王建民,李驰,姚龙泉,等.鸡柔嫩艾美耳球虫田间分离株对抗球虫药物的敏感性试验[J].湖北农业科学,2009,48(1):150-152.

[2]韩红玉,赵其平,陈兆国,等.柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导[J].中国兽医学报,2004,24(2):138-140.

[3]赵其平,韩红玉,黄兵,等.鸡球虫广东清远分离株对七种药物的耐药性试验[J].中国兽医寄生虫病,2003,11(2):13-17.

[4]WEPPELMAN R M,BATTAQLIA J A,WANG C C.Eimeris tenella:The selection and frequency of drug resistant mutants[J].Exp Parasitol,1997,42(1):56-66.

[5]CHAPMAN H D.Eimeria tenella:experimental studies on the development of resistance to amprolium,clopidol and methyl banzoquate[J].Parasitology,1978,76(2):177-183.

鸡柔嫩艾美尔 篇6

1 材料

1.1 试验动物

供试鸡为商丘利民禽业孵化厂提供的罗曼公雏鸡, 出壳后即在无球虫的环境中分笼单独饲养, 每次饲喂前将无抗球虫成分的饲料经蒸气熏蒸处理15 min, 并合理添加多种维生素、氨基酸, 试验期间饮用煮沸10 min后晾凉的开水。饲养室做到防虫、防蝇、防鼠、保温和干燥。人工感染前每天检查粪便, 连续3 d, 粪便中确认无球虫卵囊的鸡供试验用。

1.2 供试虫种的来源

收集商丘职业技术学院禽病研究所确诊患有柔嫩艾美耳球虫病 (盲肠球虫病) 病死鸡的盲肠内容物及盲肠黏膜于研钵内, 置4 ℃冰箱中保存, 备用。

1.3 主要试剂

重铬酸钾、氯化钠、生理盐水 (国产分析纯) , 均购自商丘市动物疫病防控中心。

2 方法

2.1 球虫卵囊的分离与培养

将收集的盲肠内容物及盲肠黏膜于研钵内轻轻研磨后加适量生理盐水搅匀, 分别置于40目铜丝筛和260目尼龙筛中过滤, 将滤液以3 000 r/min离心10 min;弃去上清液, 在沉淀物中加入饱和食盐水, 充分搅匀后以3 000 r/min离心漂浮10 min;吸取上层液体加入约10倍量清水, 充分搅匀后再以3 000 r/min离心10 min;弃去上清液, 沉淀中加入等量的2.5%重铬酸钾溶液并移入平皿中, 置27～29 ℃生化培养箱中培养72 h;80%以上卵囊孢子化后, 置4 ℃冰箱中保存, 备用。期间每天用吸管反复吹打培养液3～4次, 并视情况滴加2.5%重铬酸钾溶液防止干涸, 但培养液深度不超过2 cm。

2.2 球虫卵囊的继代培养

将孢子化卵囊按3.0×104个/只 (0.3 mL/只) 经口一次性感染1周龄雏鸡进行卵囊继代增数[1], 攻毒后从第72小时开始, 每天用饱和食盐水漂浮法检查粪便中有无卵囊出现, 并观察血便和死亡情况。攻毒1周后逐只剖杀, 取盲肠内容物及盲肠黏膜用上法收集卵囊并孢子化, 之后置2.5%重铬酸钾溶液中, 放入4 ℃冰箱保存, 备用。

2.3 地方虫株的致病性试验

2.3.1 试验设计

试验鸡共分4组, 每组15只:1～3组为试验组, 第4组为不感染对照组。攻毒前2天逐只称重, 并按体重排序, 然后采用从前到后再从后到前的交叉法分为4组, 使各组鸡的平均体重几乎相等 (相差0.1 g以内) [1]。在鸡13日龄时, 除不感染对照组外, 每组每只的攻毒剂量分别为5.0×103 (0.05 mL) 、2.0×104 (0.2 mL) 、8.0×104 (0.8 mL) 个卵囊。感染后每日观察雏鸡精神状况、食欲、粪便等临床症状, 对死亡鸡随时称重、剖检并记录。感染后第8天逐只称重并剖杀全部试验鸡。

2.3.2 致病力的判定方法和标准

按J.Johnson和W.M.Reid [2]所述方法进行盲肠病变记分:试验组个别鸡只盲肠肿大或稍肿大, 盲肠壁呈粉红至暗红, 浆膜面可见针尖大出血点, 表示致病力较强, 病变记分为2分;若试验组多数鸡只盲肠肿大, 盲肠壁增厚呈暗红色, 表示致病力强, 病变记分为3分;若试验组鸡只盲肠高度肿大, 其内充满新鲜的或凝固的暗红色血液, 盲肠黏膜坏死、脱落, 与血凝块混合形成肠芯, 表示致病力极强, 病变记分为4分;若试验组鸡只盲肠无病变, 病变记分为0分。

3 结果 (见表1)

3.1 临床表现

试验观察到攻毒后第4天, 除不感染对照组外, 各试验组鸡相继出现临床症状。病初食欲减退, 翅膀下垂, 羽毛松乱, 缩头闭眼, 呆立或伏卧, 呈昏睡状, 随病情发展至排血便时采食量明显减少, 严重者死亡。第1组鸡在攻毒后的第5天出现血便, 到第7天共有6只排血便 (其中3只相继死亡) , 其余9只精神和食欲无明显变化;第2组鸡在攻毒后的第4天出现血便, 到第7天共有12只排血便 (其中10只相继死亡) , 其余3只精神高度沉郁, 采食量明显减少甚至废绝;第3组鸡在攻毒后的第4天出现血便症状并相继死亡, 到第8天15只鸡全部死亡;第4组临床表现未见明显变化, 粪便中没有发现卵囊, 无死亡。

3.2 增重

试验开始和结束时分别对鸡只进行称重, 试验过程中死亡的鸡只以死亡时作为终末体重计算。各试验组鸡在攻毒后7 d内的平均增重量不一, 均低于第4组, 各试验组间的体重随着攻毒剂量的增加而明显减少, 可见鸡柔嫩艾美耳球虫对增重的影响比较明显。

3.3 盲肠病变记分

剖检死亡鸡只发现, 盲肠高度肿胀, 盲肠壁增厚并呈暗红色, 盲肠内充满血性内容物。第8天, 对所有鸡只称重、剖杀并进行盲肠病变记分, 第1组鸡病变记分为2分, 肠道病变不明显, 个别鸡只盲肠肿大或稍肿大, 盲肠壁呈粉红至暗红, 盲肠浆膜面可见针尖大出血点;第2组鸡病变记分为3分, 多数鸡只盲肠肿大, 盲肠壁增厚呈暗红色;第3组鸡病变记分为4分, 病变最为典型, 表现为盲肠高度肿大, 盲肠壁增厚呈暗红色, 其内充满大量血液, 盲肠黏膜坏死、脱落, 与血凝块混合形成肠芯, 部分鸡只直肠内也充满血液;第4组鸡无病变, 记分为0分。

4 讨论

4.1 鸡柔嫩艾美耳球虫的分离培养

根据鸡柔嫩艾美耳球虫寄生部位的特殊性, 直接采取盲肠内容物及黏膜分离球虫卵囊比采用饱和食盐水漂浮粪便得到的球虫卵囊纯净。将分离的球虫卵囊置2.5%重铬酸钾溶液中培养效果最好, 这是因为重铬酸钾既能抑制其他微生物的繁殖, 又可持久地保持球虫卵囊形态的完整和生命力。而在饱和食盐水中培养的球虫卵囊, 由于溶液浓度高, 1～2 d后球虫卵囊皱缩变形, 影响球虫卵囊的致病性。

4.2 鸡柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定

寄生于鸡体内的球虫有柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫、变位艾美耳球虫、和缓艾美尔球虫和早熟艾美耳球虫9种[3]。其种类不同, 形态特征和寄生部位也各不相同。因此, 很早就有学者对寄生于鸡体内的各种球虫进行形态描述和寄生部位的研究, 并以此来区分它们。尤其是形态学方法一直是国内外学者进行鸡球虫种类鉴定常用的方法, 但是, 由于鸡柔嫩艾美耳球虫寄生部位的特殊性有助于纯种的分离鉴定。鸡柔嫩艾美耳球虫的显著特征是寄生在盲肠, 轻度感染时盲肠稍肿大, 盲肠浆膜面可见针尖大出血点, 严重感染时病变可以发展到小肠下段和直肠, 盲肠高度肿胀并大量出血, 肠浆膜面和黏膜面有大量出血点, 肠腔中充满凝血和肠黏膜碎片, 后期盲肠内容物逐渐变硬形成干酪样肠芯, 内混有大量球虫卵囊。本试验根据鸡柔嫩艾美耳球虫寄生部位的特殊性, 再结合感染雏鸡试验过程的病理变化并对照国内外相关文献[4,5], 初步确定分离的球虫种为柔嫩艾美耳球虫。

4.3 柔嫩艾美耳球虫商丘地方株的致病性

在本试验过程中, 潜伏期3 d, 感染后第4天开始出现明显的临床症状, 攻毒剂量为5.0×103个/只 (0.05 mL/只) 卵囊以上时, 第6天出现鸡只死亡, 盲肠呈典型病变, 而且血便率和死亡率均随着攻毒剂量的增加而升高, 试验结果与有关报道一致。相关资料还表明, 鸡柔嫩艾美耳球虫的致病力存在地理上的差异[7]。本次分离到的商丘株致病性试验结果表明:当感染量达到5.0×103个/只 (0.05 mL) 卵囊时, 致死率为20.0%;每只鸡感染2.0×104个/只 (0.2 mL) 卵囊时, 致死率为66.7%;当每只鸡感染量达8.0×104个 (0.8 mL) 卵囊时, 致死率为100%, 说明本次分离到的商丘株致病力较强。

参考文献

[1]宁长申, 张龙现, 菅复春, 等.中药防治人工感染鸡柔嫩艾美尔球虫病药敏试验[J].中兽医医药杂志, 2006, 25 (3) :31-33.

[2]JOHNSON J, REID W M.Anticoccidial drugs:Lesion scoring tech-niques in batery and floor-pen experiments with chickens[J].ExpParasitol, 1970, 28:30-36.

[3]谢拥军, 崔平.动物寄生虫病防治技术[M].北京:化学工业出版社, 2009:172-177.

[4]韩玲, 李培英, 顾有方, 等.柔嫩艾美耳球虫合肥株的分离与鉴定[J].安徽科技学院学报, 2006, 20 (1) :1-4.

鸡柔嫩艾美尔 篇7

1 发病情况

河南省平顶山市叶县一养殖户饲养2 000只麻鸡, 是用简易的大棚饲养, 棚外用塑料网围有500 m2的运动场。2013年3月26日即鸡42日龄时, 发现鸡群有似烂肉色、黑红色、黄绿色的粪便, 大群采食量下降, 并有几只离群呆立、缩脖趴卧、不愿行走的鸡和死鸡。用氨丙啉和地克珠利治疗不见好转。3月30日笔者前去就诊, 根据养殖户的描述以及对鸡场养殖环境的了解, 并对死亡鸡只进行剖检、化验进行全面诊断和治疗。

2 临床症状

大群鸡有呼噜和咳嗽声, 病鸡精神沉郁, 羽毛松乱、无光泽, 食欲减退或废绝, 肛门周围可见粪污, 垫料上可见烂肉似的血便和黄绿便。部分鸡发病3 d后食欲废绝, 饮水增加。有的呈现贫血, 消瘦, 鸡冠、肉髯可视黏膜苍白;有的可视黏膜发绀, 死亡逐渐增加, 从每天1~3只到每天8~10只。

3 剖检病变

剖检死鸡, 气管上部有点状出血内有粘液, 心冠脂肪、心肌、腿部脂肪上都有出血点, 小肠中段显著肿大, 是正常的2~3倍, 并且明显缩短, 整条小肠外观形似香肠, 其浆膜表面布满针尖大小的白点和红点, 而且红白相间。剪开肠管, 盲肠扁桃体出血, 十二指肠、卵黄蒂处及两盲肠之间的淋巴滤泡成枣核样出血、坏死, 中段小肠黏膜严重坏死脱落, 内容物脓性或呈胶冻状。腺胃乳头出血, 直肠有条状出血, 泄殖腔出血。

4 实验室诊断

4.1 病毒分离与鉴定

在无菌的条件下取病鸡脑、肺、脾含毒量高的组织器官各2 g加入3 m L无菌生理盐水, 经过研磨、离心后, 取上清液并加入适量的青霉素后通过尿囊腔接种10枚9日龄SPF鸡胚。取24 h后死亡鸡胚的尿囊液进行血凝试验和血凝抑制试验, 结果均为阳性, 由此证明组织中有新城疫病毒感染。

4.2 寄生虫分离

取小肠中段深层的黏膜剖取物, 涂在载玻片上, 在光学显微镜下进行检查, 在100倍镜下可观察到许多大型的裂殖体, 裂殖体内充满条状裂殖子, 裂殖体与周围组织的界线明显。符合毒害艾美尔球虫裂殖体的形态特征。

5 诊断

根据流行特点、发病情况、临床症状、剖检变化及实验室诊断结果。综合分析表明, 该鸡群发生鸡新城疫和有毒害艾美尔球虫感染所致的急性小肠球虫病。

6 防治措施

发病当天即用保定瑞普的锐必新新城疫La Sota弱毒活疫苗2羽份点眼滴鼻, 饲料拌提高免疫力的纯中药1 g拌料500 g, 煎煮后集中投服, 防疫间隔4 h后, 用磺胺氯吡嗪钠按推荐量使用, 首次加倍。连用4 d, 中药连用5 d。5 d后, 鸡群发病死亡逐渐得到控制, 为巩固疗效, 从第5天开始用修复肠黏膜的中药连用4 d, 鸡群采食量明显增加, 粪便转好。第10天, 鸡群恢复正常。

7 体会

春季气候变化不定, 昼夜的温差大, 是新城疫病的流行季节, 外界野毒强, 雏鸡对环境变化的适应性差, 抗病能力低, 若饲养管理粗放, 免疫跟不上。或者为省事采用饮水免疫的方法最易导致鸡群发生鸡新城疫病。建议养殖户加强饲养管理, 尽可能地减少饲养环境的变化, 免疫要活苗和油苗联合使用, 活苗尽可能点眼滴鼻, 以提高免疫的质量, 并且定期投喂抗病毒的纯中药, 提高鸡群的抗病能力, 避免发病。

正常的新城疫HI抗体 (单位:log2) 范围:雏鸡, 维持20~30 d;青年鸡, 维持1个月左右;产蛋鸡维持1.5~3.0个月, 管理良好可达3~6个月。新城疫HI抗体值4以下, 遇强毒感染可发病死亡;新城疫HI抗体值4~6遇强毒可发病而不死亡。新城疫母源抗体在21 d左右降到最低, 如果免疫不及时或者免疫失败, 遇到野毒感染就可发病甚至死亡。建议有条件化验抗体的, 在免疫前后7~10 d检测。

采用简易大棚养鸡, 鸡舍投资少, 适应于小农户养鸡, 但必须掌握好干湿度。过于干, 易造成粉尘过大, 使发生呼吸道疾病的几率增加;过于湿, 再加上闷热, 易发生肠道病。必须做好鸡舍内的通风换气工作。运动场地要经常清扫, 低洼地要定时洒生石灰, 以消毒和吸收水分, 饲料内定期投喂一些纯中药的抗球虫药, 以防止鸡群发病, 造成不必要的损失。

球虫卵囊抵抗力强, 常规的戊二醛、季铵盐、碘制剂、过氧乙酸等均不能有效杀灭球虫卵囊, 在湿热的环境下容易感染鸡群, 因此球虫病是一个典型的环境病。建议在发生过球虫病的养鸡场, 鸡群出栏清理消毒后, 每隔5 d用5%的火碱溶液消毒地面1次, 连续消毒2~3次, 并空舍15~30 d以上, 可以杀灭球虫卵囊, 而且对新城疫、禽流感、法氏囊等病毒清除效果显著。

摘要：介绍了鸡新城疫和毒害艾美尔球虫病混合感染的诊治, 包括发病情况、临床症状、剖检病变、实验室诊断、防治措施等方面的内容, 并总结了相关的体会, 以期为该病的防治提供参考。

关键词：鸡新城疫,毒害艾美尔球虫病,混合感染,诊治

参考文献

[1]甘孟侯.中国禽病学[M].北京:中国农业出版社, 2003.

[2]孙永亮.鸡新城疫防控要点[J].畜牧与饲料科学, 2013 (3) :121-122.

[3]刘素琴.鸡新城疫发生的新特点及防治对策[J].中国畜禽种业, 2013 (3) :146-147.