甲基阿魏酸

关键词：

甲基阿魏酸（精选八篇）

甲基阿魏酸 篇1

1仪器与材料

蝉翼藤, 经广西医科大学天然药物化学教研室李梅教授鉴定。高分辨质谱仪:型号Exactive, 美国赛默飞世尔科技;FTIR红外光谱仪联用设备:型号PE Spectrum One FT-IR Spectromete, 美国PE公司;500MHz超导核磁共振波谱仪AVANCE AV500, 瑞士Bruker公司;Sephadex LH220柱层析硅胶, 青岛海洋化工厂。

2甲基阿魏酸提取分离[8]

蝉翼藤茎皮粉碎, 95%乙醇回流提取, 浸膏用100~200目硅胶拌样, 以氯仿回流洗脱。洗脱液减压浓缩, 中压硅胶色谱CHCl3:乙醚 (1∶0-0∶1) 梯度洗脱, 分别收集含化合物Ⅰ~Ⅲ的部分, 再经重结晶和Sephadex LH220凝胶柱色谱纯化 (甲醇洗脱) , 分别得到化合物Ⅰ~Ⅲ。

3化合物Ⅰ的结构鉴定

化合物Ⅰ:白色针晶 (乙酸乙酯) , 熔点 (179~180℃) UV (MeOH, nm, logε) :220 (3.09) , 231 (3.09) , 288 (3.11) , 314 (3.13) 。IR (KBr压片) :3 300, 2 848, 1 700, 1 624, 1 597, 1 514, 1 457, 1 210, 1 128cm-1.1H NMR (DMSO-d6, 500MHz) δ:12.22 (1H, s, COOH) , 7.51 (1H, d, J=16, =CH) , 7.32 (1H, s, Ar-H) , 7.20 (1H, d, J=8.5, Ar-H) , 6.99 (1H, d, J=8.5, Ar-H) 6.43 (1H, d, J=16, =CH) , 3.81 (3H, s, OCH3) , 3.80 (3H, s, OCH3) .13C NMR (DMSO-d6, 125MHz) δ:173, 152, 150, 148, 127, 124, 115, 111, 110, 56.MS z/m:209[M+H]+。综合以上光谱数据并参照文献[9]鉴定其为甲基阿魏酸。化合物I相关图谱见图1、图2、图3、图4。

摘要：目的:对蝉翼藤茎皮中有机酸成分进行化学研究。方法:采用各种色谱技术进行分离纯化, 根据理化性质和光谱分析对蝉翼藤茎皮中的有机酸成分进行结构鉴定。结果:分离得到化合物ⅠⅢ, 其中化合物Ⅰ鉴定为甲基阿魏酸。结论:化合物甲基阿魏酸首次从该属植物中分离得到。

关键词：蝉翼藤,有机酸,甲基阿魏酸,提取,结果鉴定

参考文献

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[6]李勇文, 李丽, 唐爱存.甲基阿魏酸在HepG2.2.15细胞培养中对HBV DNA的抑制作用[J].中药药理与临床, 2010, 26 (6) :39-41.

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[8]杨学东, 徐丽珍, 杨世林.蝉翼藤茎中有机酸成分的研究[J].中国中药杂志, 2001, 26 (4) :258-260.

碱解玉米秸秆制备阿魏酸 篇2

【摘要】本文以玉米秸秆为原料，利用碱水解法制备阿魏酸。提取玉米秸秆中阿魏酸的最佳工艺条件为：氢氧化钠浓度为0.75mol/L，固液比（玉米芯-g/碱液-mL）为1：60，提取温度为50℃，提取时间为12 h，最佳的保护剂是亚硫酸钠，亚硫酸钠的最适浓度是2.5%，在此条件下，阿魏酸的提取量最高可达26.06mg/g。

【关键词】阿魏酸；玉米秸秆；碱水解

秸秆是成熟农作物茎叶（穗）部分的总称。通常指小麦、水稻、玉米、薯类、油菜、棉花、甘蔗和其它农作物（通常为粗粮）在收获籽实后的剩余部分。目前世界秸秆年产量约29亿吨，玉米秸秆占世界秸秆年产量的35%，中国每年产生的玉米秸秆约7亿吨，玉米秸秆占全国秸秆年产量56.6%。我国玉米秸秆的产量也相当之大，但是其经济系数低，资源化利用率低。目前我国大量秸秆被闲置浪费或就地焚烧，不仅造成了资源的浪费，也造成了环境的污染。秸秆大量废弃，将导致其富含的氮、磷、钾等营养物质随雨水进入地面和地下水，与农田营养物质一起造成水体的富营养化；秸秆露天焚烧会导致大气污染，引发火灾，破坏土壤结构，危害人体健康等。因此如何丰富秸秆资源的利用已经成为当前研究的热点话题。玉米秸秆的主要是成分是纤维素、半纤维素、木质素，在其收获和加工过程中会产生很多副产品，其主要成分是富含酚酸的细胞壁物质，近年来，来源于秸秆中的多种具有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力等重要生理活性物质被广泛研究，如阿魏酸、对香豆酸、低聚木糖等，故富含酚酸的生物质原料可作为酚酸的主要来源。

阿魏酸（4-羟基-3-甲氧基肉桂酸）是广泛存在于当归、川芎、红花等中药材的有效成分之一。阿魏酸具很多有益的生理作用，有抗氧化、抗血栓、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗菌消炎、降低血清和肝脏中的胆固醇、提高精子活力以及抑制肿瘤等特性。因此，阿魏酸被广泛应用于食品、保健品、医药等领域，具有较大的市场应用前景。阿魏酸可以用化学合成，但反应时间较长，溶剂用量大，转化率低，成本高；也可以从中药阿魏、当归、红花等中药材中提取，但是成本也较高。植物细胞壁中的阿魏酸的羧基通过酯键与多糖链接，酚羟通过醚键与植物细胞壁的木质素交联在一起。通过强碱处理秸秆，可以使得酯键断裂，从而释放出阿魏酸。探索利用碱解法提取玉米秸秆中阿魏酸的工艺，提高玉米秸秆的附加值，不仅能够产生可观的经济利益，而且能够解决废弃物影响环境问题。

1、材料与方法

1.1材料、仪器和试剂

玉米秸秆：购于山东青岛农贸市场。试剂：阿魏酸标准品（纯度>98%）：国药集团化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯）：ROE公司；氢氧化钠、亚硫酸钠、磷酸、冰乙酸均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。

1.2 实验方法

⑴玉米秸秆的预处理：将购买的玉米秸秆粉碎烘干至恒重，过20目筛，装入密封袋放在干燥器备用。

⑵碱法制备阿魏酸的工艺流程：预处理的秸秆→碱浸提→离心→调pH至中性→定容→HPLC检测。

⑶高效液相色譜分析条件：色谱柱选用phenomenex Luna C18柱（150*4.6mm，5um），以甲醇：水：冰乙酸（30：69.3：0.7）为流动相，柱温30℃，流速0.8ml/min，检测波长320nm，进样量20 ul。

⑷氢氧化钠浓度对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米秸秆，在固液比1：40的条件下，室温静置10h，比较碱质量浓度分别为0.2mol/L、0.5mol/L、0.75mol/L、1.0mo/L、1.5mol/L、 2.0mol/L对阿魏酸提取量的影响，从而确定最佳碱浓度，每个样品做三个重复。

⑸提取时间对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米秸秆，在固液比1：40，氢氧化钠浓度为0.75mol/L的条件下，室温静置，分别在2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h取样，确定最佳提取时间，每个样品做三个重复。

⑹固液比对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米芯，选用0.75mol/L的NaOH，在室温条件下静置12h，研究固液比为1：20、1：30、1：40、1：50、1：60、1：70、1：80对阿魏酸提取量的影响，每个样品做三个重复。

⑺提取温度对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米秸秆，选用0.75mol/L的NaOH，在固液比1：60的条件下，研究温度分别为10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃对阿魏酸和香豆酸提取量的影响，在12h取样，确定最佳提取温度，每个样品做三个重复。

⑻不同保护剂对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米秸秆，在固液比1：60，NaOH浓度0.75mol/L，提取温度50℃的条件下，比较焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠四种保护剂对提取量的影响，四种保护剂的浓度为2.5%，以不加保护剂的为空白对照，每个样品做三个重复。

⑼保护剂浓度对阿魏酸提取量的影响：称取2.5g预处理玉米秸秆，在固液比1：60，NaOH浓度0.7mol/L，提取温度50℃的条件下，比较亚硫酸钠终浓度分别为0.5%、1%、2.5%、5%对阿魏酸提取量的影响，每个样品做三个重复。

⑽阿魏酸提取量的计算：阿魏酸的提取量以每克烘干的玉米秸秆最终得到的阿魏酸的质量来表示。式中：C为HPLC法测定的阿魏酸的质量浓度（ug/ml）；m为玉米芯的质量（mg）；Y为HPLC法测定的阿魏酸的峰面积（mAU）；V为NaOH的体积（ml）。

2、结果与讨论

2.1氢氧化钠浓度对提取量的影响

阿魏酸上的羧基通过酯键与多糖类链接，酚羟基通过醚键与木质素链接，形成了木质素/酚酸-多糖的复合物。碱解可以有效水解断裂酯键，因此碱浓度对于秸秆中阿魏酸等酚酸类物质的释放具有显著的影响。实验表明，随着NaOH浓度的增加阿魏酸提取量逐渐增大，当NaOH浓度从0.2mol/L增加到0.5mol/L时，提取量增加了54%；当碱浓度从0.5mol/L增加到0.75mol/L，阿魏酸的提取量增加了26%，当氢氧化钠增加到1mol/L时，阿魏酸提取量比0.75mol/L时增加了1.5%，幅度较小。当NaOH浓度增加到2mol/L时阿魏酸提取量为17.77mg/g，是0.75mol/L时提取量的1.2倍，但是氢氧化钠用量是2.7倍，同时实验中发现，氢氧化钠用量越大，提取液的粘度增大，离心效果不佳，从节约成本的角度考虑，选择较优的碱浓度为0.75mol/L。

2.2提取时间对阿魏酸提取量的影响

实验证明，在2h到12h的范围内，随着时间的延长，阿魏酸提取量变化比较明显，超过12h以后，随着阿魏酸提取量随着时间延长也逐渐增大，但是增加幅度较小，所以从节省时间的角度考虑，选用较优的提取时间为12h。

2.3固液比对阿魏酸提取量的影響

由图1可知，当固液比分为1：20、1：30、1：40、1：50、1：60、时，阿魏酸提取量分别为13.93、14.82、15.29、15.87、16.91mg/g，随着固液比的增加，阿魏酸的提取量不断增加。当固液比继续增加到1：70和1：80时，阿魏酸的的提取量趋于稳定。考虑到提取液体积增加会增加成本，并且会增加离心的能耗，所以固液比选用1：60。

2.4温度对提取量的影响

由图2可知，在10-50℃的范围内，随着温度的升高阿魏酸的提取量逐渐增加，50℃时阿魏酸的最高提取量可达24.20mg/g是10℃提取量的1.71倍，这是因为温度升高，加速阿魏酸与木质素之间酯键断裂，有利于阿魏酸的释放。当提取温度超过50℃时阿魏酸提取量开始下降，这是由于在高温作用下，虽然阿魏酸的释放量增加，但是释放的阿魏酸在高温条件下会被氧化或者分解。

2.5保护剂对阿魏酸提取量的影响

由图3可知，在碱液中添加不同的保护剂对阿魏酸的提取量都略有提升，这是因为阿魏酸不稳定，尤其是在温度较高时，容易被氧化，这四种阿魏酸以亚硫酸钠的效果最好，添加2.5%的亚硫酸钠作为保护剂，阿魏酸的提取量为26.06mg/g，因此在提取阿魏酸时，选取亚硫酸钠作为保护剂。

2.6亚硫酸钠浓度对阿魏酸提取量的影响

由图4可知，当亚硫酸钠浓度在0.5-2.5%范围内，随着亚硫酸钠浓度的升高，阿魏酸的提取量逐渐增加，当亚硫酸浓度为2.5%时，阿魏酸的提取量26.06mg/g。

3、结论

利用玉米秸秆为原料，探索碱法提取阿魏酸的工艺条件，当氢氧化钠浓度为0.75mol/L，提取时间为12h时，固液比为1：60，提取温度为50℃，亚硫酸钠的浓度为2.5%时，阿魏酸的提取量可达26.06mg/g，此方法简便、快捷，可以用于以玉米秸秆提取制备天然阿魏酸。

参考文献

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[3]王舒娟.江苏省农户秸秆综合利用的实证研究[D].南京：南京农业大学，2012.

[4]赵阳阳.玉米芯中对香豆酸和低聚木糖的制备及分为成分分析检测的研究[D].广州：暨南大学，2011.

注：本文受

1.基金资助：泰州市社会发展项目（TS201337）

2.基金资助：泰州市社会发展项目（TS201516）

3.基金资助：南京师范大学泰州学院第二批精品课程《酶工程》

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超微提取当归阿魏酸工艺研究 篇3

关键词：当归阿魏酸,正交试验,超微提取

当归为伞形科植物当归(Angelica sinensis (Oliv.) Diels)的干燥根,它的主要作用是补血和血、调经止痛、润燥滑肠。当归的主要有效成分是阿魏酸、多糖类、苯酞类和藁本内酯类化合物,阿魏酸是当归的主要药理活性成分,功能抑制血小板聚集、增强前列腺素活性、镇痛、缓解血管痉挛等,是生产治疗心脑血管疾病及白细胞减少等症的药品的基本原料,同时在人体中也有健美和保护皮肤的作用。

超微粉碎是通过物理方法,直接将物料颗粒粉碎至粒径小于10μm 以下,达到细胞破碎的级别,从而使中药中的有效成分无需细胞渗透,通过自由扩散作用就可迅速从细胞质中进入到溶剂,该技术已广泛应用于生产领域,将其应用于中药有效成分的提取有重要意义。传统的提取方法主要是煎煮,比较耗费时间和资源,超微提取与传统提取相比有较强的优越性,但也有部分问题存在。本实验先将当归超微提取阿魏酸与常规提取做对比,再通过正交试验探索提取的最佳工艺条件,同时就超微提取过程中出现的问题提出自己的见解,以期为今后的大规模动态超微提取提供参考依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津2010A高效液相色谱仪(日本岛津),恒温水浴锅。

1.2 试剂

阿魏酸对照品,批号:26119;阿拉丁试剂:上海有限公司提供;当归超微粉:长沙博健生物科技有限公司提供。甲醇色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。

2 实验方法及结果

2.1 阿魏酸含量的测定方法

色谱条件:色谱柱:C18柱(4.6mm×250mm);流动相:甲醇-1%冰醋酸溶液(35∶65);流速:1.0mL·min-1;检测波长:315nm;柱温:20℃,进样量:20μL。在该色谱条件下,样品中阿魏酸峰与其他峰能够达到基线分离,结果见图1、图2。

2.2 方法学考察

2.2.1 标准曲线的绘制

称取3mg的阿魏酸标准品,放入25mL容量瓶中,加入流动相甲醇-1%冰醋酸(35:65)至刻度,得到0.12mg/mL溶液母液。从中分别吸取0.5、1、2、3、4mL放入5mL 棕色容量瓶中,用流动相定容至刻度,即得到0.012、0.024、0.048、0.072、0.096mg/mL阿魏酸溶液。以阿魏酸的进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线,线性回归方程Y=4E+08X-644653,r=0.9961。阿魏酸在0.012～0.096mg/mL间有良好的线性关系。

2.2.2 精密度实验

精密吸取对照品溶液0.012mg/mL,在所选色谱条件下连续进样5次,测得峰面积的平均值为4 176 441,其RSD=0.23%。由实验结果看出,实验仪器的精密度良好。

2.2.3 重复性实验

精密称取当归超微粉5份,约1g/份,并按“2.3”项所述方法操作,共配制5份供试品溶液,各进样20μL,测定峰面积值的平均值为9 384 839,其RSD=0.29%。结果表明,方法重复性良好。

2.3 常规提取与超微提取的比较

取当归40目粗粉1g,加入20mL70%乙醇,于90℃水浴回流提取2h,过滤后浓缩定容至10mL,作为常规提取工艺的供试液。同样取超微当归粉1g,加入20mL 70%乙醇,于90℃水浴回流提取2h,过滤后浓缩定容至10mL,作为超微提取工艺的供试液。以上供试液都经过摇匀,静置,取上清液过0.45μm微孔滤膜,取续滤液,即得。采用上述测定方法对常规提取和超微提取供试品液进行测定,结果见表1。

由上述实验可知,超微提取比常规提取在同等工艺条件下的提取率要高得多。

2.4 超微提取正交试验设计

通过单因素实验可以确定影响超微提取相关因素为:提取温度、提取时间、溶剂浓度和料液比,每个因素3个水平,采用L9(34)正交试验,正交试验水平见表2,结果见表3。

每次称取当归超微粉1g,按照正交试验表安排实验,将提取液过滤后浓缩定容至10mL,作为超微提取的供试液,共得9份供试液。

由上述结果分析,各因素对当归主要成分阿魏酸的提取影响的大小顺序为:C>D>B>A,直观分析最佳工艺为:A3B3C2D1。提取的料液比与提取时间对提取的影响最大,提取温度和溶剂浓度对超微提取的影响不大,从节约能源的角度考虑,并参考单因素实验,选择70%的溶剂在90℃提取为最佳。故而优化工艺条件为料液比1∶20,提取时间1h,溶剂浓度70%,提取温度90℃。

3 讨论

中药中的有效成分主要存在于细胞质中,有效成分需经过细胞膜和细胞壁才能析出,一般情况下,只有通过煎煮和浸泡才能使其有效成分析出,超微提取过程可以将植物细胞壁打碎,减少有效成分析出的阻力,同时超微后的物料具有很强的表面吸附力、亲和力、分散性和溶解性,提高了有效成分的溶出速度及溶出率,故而有效提高了当归中阿魏酸的提取率。实验证明,细胞级超微粉碎技术能明显提高提取率,特别是对于大分子成分提取率的提高更为明显。由实验结果可知,超微提取当归有效成分,提取的料液比与提取时间对提取的影响最大,提取温度对其的影响最小,最佳提取工艺为料液比1:20,提取时间为1h,溶剂的浓度为70%,提取温度为90℃。与常规提取对比,提取率提高了约40%,而时间则缩短了一半。

超微提取过程中,超微当归粉由于其自身很强的表面吸附力、亲和力特点,很容易吸附在提取容器的内壁,引起糊化,同时在过滤时很容易堵塞,不容易过滤。一种方法是在提取过程中不断搅拌,但搅拌的力度和频率要适中,搅拌力度太大易使过轻的超微粉离开溶剂吸附在容器上内壁,搅拌力度太小又达不到目的,故不好控制;另一种方法是将温度控制在90℃左右,让溶液不断沸腾,这样可以让沸腾的溶剂带动溶质翻滚,太高的温度易使超微粉糊化,因此温度的控制很重要。过滤时,可先将溶液离心,使超微粉沉淀,再行抽滤,这样可以大大节省时间,过滤效果也较好。

由于本次实验为探索性实验,只在料液比、提取时间、提取温度、溶剂浓度4个影响因素方面做了有限研究,但实验结果还是比较明显的,超微提取与常规提取无论是在提取效率还是在提取时间上,均有其优势。如能将其广泛应用于中药有效成分的提取上,可极大节约中药资源,提高生产效率,节约能源,提高中药在世界制药产业中的竞争力。

参考文献

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甲基阿魏酸 篇4

1 材料与方法

1.1 实验材料

昆明系小鼠70只, 体质量18-22克, 雌雄各半。阳性药物:阿司匹林、氯比格雷。生化指标在地奥制药国家安全评价中心测定。

1.2 实验方法

小鼠先在动物房正常饲养3d后, 按体质量随机分成7个组, 设正常组、阿司匹林组、氯比格雷组、阿魏酸哌嗪片高低剂量组、阿魏酸钠高低剂量组。给药方法:各组均灌胃0.2mL,

其中正常组为生理盐水, 阿司匹林组为50mg/kg、氯比格雷组12.5mg/kg、阿魏酸哌嗪片高剂量组为100mg/kg、阿魏酸哌嗪片低剂量组为50mg/kg、阿魏酸钠高剂量组为100mg/kg、阿魏酸钠低剂量组为50mg/kg。给药时间均为7d。在给药第3天时, 各组小鼠动物眼眶取血测定毛细玻管凝血时间, 继续给药, 7d后以同样方法再次测定凝血时间。然后每只小鼠眼眶取全血0.7mL, 经枸橼酸抗凝处理, 交地奥制药国家安全评价中心以ELISA法测纤维蛋白原 (FIB) 。

2 实验结果

见表1。

注:与正常组比较;**表示P<0.01, *表示P<0.05

3 讨论

实验结果显示阳性药阿司匹林、氯比格雷凝血时间与正常组比较有极显著的延长作用, 阿魏酸钠和阿魏酸哌嗪也有极显著的延长作用, 但与阳性对照相比没有明显差异, 提示阿魏酸钠和阿魏酸哌嗪具有较强的抗凝作用。生化指标纤维蛋白原方面实验各组与正常组比较没有明显差异, 但阿魏酸哌嗪低剂量组有显著差异, 提示阿魏酸哌嗪对纤溶系统可能有一定的作用。

抗凝治疗目前广泛心房颤动、急性冠脉动综合征、肾病综合征等。由于目前所使用的抗凝药物众所周知的缺点, 推动着人们对理想抗凝药物的寻求。目前的治疗方法, 如肝素以及维生素K拮抗剂, 在临床使用时都有这样或那样的局限性, 因此并未得到充分应用。阿魏酸哌嗪是我国自主研制的化学合成药物, 作为中药现代化的典范, 具有优异的安全性和广泛的适用范围, 本研究提示:阿魏酸钠和阿魏酸哌嗪具有较强的抗凝作用, 低剂量组阿魏酸哌嗪对纤溶系统可能有一定的作用, 为该药在抗凝治疗方面的应用提供了解药理学依据, 其临床疗效尚待进一步验证。

参考文献

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HPLC法测定当归中阿魏酸的含量 篇5

关键词：HPLC,当归,阿魏酸

当归 (Radix Angelica Sinensis) , 本品为伞形科植物当归Angelicasinensis (Oliv.) Diels的干燥根。中国第一部本草学著作《神农本草经》有记载:“当归这味药, 味重, 因而古人用来补血;气轻、辛, 因而能使血运行通畅。补中有行, 行中有补, 因此被誉为血中的气药, 也被称为血中的圣药。”当归被认为是没有毒的上品药, 本品具有补血和血, 调经止痛, 润燥滑肠的功效, 临床上主要治疗血虚萎黄, 眩晕心悸, 月经不调, 经闭痛经, 虚寒腹痛, 肠燥便秘, 风湿痹痛, 跌仆损伤, 痈疽疮疡等症, 是在临床上使用频率最高的中药之一, 素有“十方九归”之称[1]。

当归含有的化学成分是非常复杂的, 现在研究表明含化学成分包括多糖类、苯酞类、香豆素类、黄酮类、挥发油类化合物及其他成份[2]。主要的药效成分为挥发油、当归多糖、有机酸类。其中有机酸类主要是包括阿魏酸、邻苯二甲酸酐、丁二酸、癸二酸、茴香酸、烟酸等。现代从当归各提取物中发现有许多功能, 而最开始从当归中分离出来的药效成份是阿魏酸。其活性成份阿魏酸具有抗氧化, 清除自由基, 保护血管内膜不受损伤;降低胆固醇, 防止脂质沉积于血管壁;抗血小板功能, 具有防止血管附壁血栓的生成;阻断信息系统。某些环节抗肿瘤, 逆转染色体畸变抗辐射等生物学效应[3]。阿魏酸还具有防癌作用, 而且是公认的天然抗氧化物质[4]。本实验旨在以当归中有效成分阿魏酸为考察指标, 探讨高效液相色谱法测定当归中阿魏酸的含量, 建立可靠的检测方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200半制备高效液相色谱仪, 美国安捷伦公司;Milli-Q Reference超纯水系统, 美国密理博公司;华志HZK-210电子天平, 福州华志科学仪器有限公司;KQ2200DV型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试药

阿魏酸对照品 (中国食品药品检定研究院, 批号110773-201012) ;甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水;当归为甘肃岷县当归。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 色谱条件

色谱柱:InertsilODS-SP 5μm 4.6 mm×150 mm;流动相:乙腈-0.085%磷酸溶液 (17∶83) ;流速:1.0 m L/min;柱温:35℃;检测波长:316 nm。进样量为10μL。

2.1.2 对照品溶液制备

取阿魏酸对照品 (0.002 4 g) 精密称定, 置棕色量瓶中, 加70%甲醇定容至50 m L制成每1 m L含48μg的溶液, 即得。

2.1.3 供试品溶液的制备

取本品当归粉末 (过三号筛) 各0.2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70%甲醇溶液20 m L, 密塞, 称定重量, 加热回流30 min (80℃的水浴加热) , 放冷, 再称定重量, 用70%甲醇溶液补足减失的重量, 摇匀, 静置, 取上清液, 滤过, 取续滤液, 即得。阿魏酸的对照品和供试品色谱图分别见图1和图2。

2.2 结果

2.2.1 线性关系考察

精密吸取阿魏酸对照品溶液0.5 m L, 1.0 m L, 2.0 m L, 4.0 m L, 6.0 m L, 8.0 m L, 分别用70%甲醇稀释至10 m L。按上述色谱条件进样测定, 以阿魏酸平均峰面积积分值为纵坐标 (Y) 、浓度为横坐标 (X) 进行线性回归, y=23.988x+9.92 (r=0.9997) 。结果表明阿魏酸在进样2.4~38.4μg·m L-1范围内呈良好的线性关系。

2.2.2 精密度试验

为考察方法的可靠性, 做精密度实验, 精密吸取阿魏酸对照品溶液, 按“2.1.1”项色谱条件连续进样6次, 测得阿魏酸的峰面积的RSD为0.4658%。结果表明本法精密度良好。

2.2.3 重现性试验

精密称取当归粉末0.2 g, 共6份, 按“2.1.3”项供试品溶液的制备操作, 按“2.1.1”项色谱条件下分析, 测定每份样品中阿魏酸的含量, 结果样品中阿魏酸的RSD为0.4310%, 表明当归中阿魏酸重现性良好。

2.2.4 稳定性试验

精密称取当归粉末0.2 g, 取1份, 按“2.1.3”项供试品溶液的制备操作, 按“2.1.1”项色谱条件下分析, 分别在0、1、2、4、6、8 h, 测定样品中阿魏酸的含量, 结果阿魏酸含量的RSD为0.3716%, 表明当归中阿魏酸在室温条件下保存8 h稳定。

2.2.5 加样回收率试验

精密称取当归粉末0.2 g, 共6份, 分别精密加入阿魏酸对照品适量, 按“2.1.3”项供试品溶液的制备操作, 制得供回收率用的供试品溶液, 按“2.1.1”项色谱条件下分析测定, 结果得平均回收率为103.1463%, RSD为0.4547%, 结果见表1。

2.2.6 样品测定

精密称取当归粉末 (同批当归样品) 0.2 g, 共6份, 按“2.1.3”项供试品溶液的制备操制得溶液, 按“2.1.1”项色谱条件下分析测定, 得到当归样品溶液的RSD分别为0.3628%, 结果见表2。

3 讨论

(1) 在选择流动相条件时, 曾采用4种不同系统的流动相进行测定:乙腈-0.1%磷酸、乙腈-1%冰乙酸、甲醇-0.1%磷酸、甲醇-1%冰乙酸, 同时考察了各个系统不同组成比例流动相的测定[5]。最终选定流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液 (17∶83) , 使阿魏酸与其他组分分离完全, 达到较佳的结果。

(2) 选择提取方法时, 取样品2份, 其中1份加热回流处理, 另1份超声处理, 结果是回流提取测得样品阿魏酸含量高于超声处理的样品, 故选择回流提取的方法。

(3) 考虑提高样品溶液的浓度和减少阿魏酸的加热损失, 故进行了对浓缩温度的选择, 本实验以60℃、80℃作为考察温度, 结果发现虽然80℃水浴加热浓缩温度比60℃水浴加热浓缩温度要高, 容易造成阿魏酸加热损失, 但其大大缩短了浓缩时间, 对阿魏酸的含量也不大影响, 故确定80℃水浴加热温度为浓缩温度。

4 结论

本文为了充分提取当归中的阿魏酸, 采用了甲醇加热回流提取方法。以当归中有效成分阿魏酸为指定性指标, 对当归中阿魏酸进行含量测定。高效液相色谱法可用于当归药材中阿魏酸含量的测定, 本方法简单准确, 灵敏度高, 重复性好。

参考文献

[1]高学敏.中药学[M].北京:中国中医药出版社, 2002:9.

[2]宋萍萍, 孙明毅, 徐增莱, 等.三种当归属植物的化学成分研究[J].中草药, 2007, 38 (6) :833-835.

[3]马瑞君, 王钦, 陈学林.当归的研究进展[J].中草药, 2002, 33 (03) :280-282.

[4]欧仕益, 包惠燕, 蓝志东.阿魏酸及其衍生物的药理作用研究进展[J].中药材, 2001, 24 (03) :220-221.

甲基阿魏酸 篇6

关键词：高效液相色谱法,佛手散,阿魏酸

佛手散出自明·龚信纂辑的综合性医书《古今医鉴》, 由当归、川芎和益母草三味中药组成, 功能补血活血, 调经止痛, 主治血虚或兼有瘀滞的月经不调, 痛经, 或胎动不安, 胎死腹中, 恶露不下, 疼痛不已等。现代药理研究表明, 方中主要有效成分是当归的阿魏酸, 川芎的阿魏酸和川芎嗪, 以及益母草中的益母草碱等。目前还未见佛手散有效成分的含量测定文献报道, 为了便于进一步研究和质量控制, 参考相关文献[1,2,3], 建立了高效液相色谱法测定佛手散中阿魏酸含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters高效液相色谱仪 (Waters 515泵, Waters2487检测器) ;AUW120D十万分之一分析天平 (日本岛津) 。

1.2 试药与试剂

阿魏酸对照品 (Fumalic acid, 中国药品生物制品检定所, 供含量测定用, 批号:110773-200611) 。乙腈 (色谱纯, Dikma Company, Inc.) , 水 (超纯水, 临用前制备) , 其他试剂为分析纯。

2 供试溶液的制备

2.1 对照品溶液

精密称取置P2O5干燥器中干燥至恒重的阿魏酸6.80mg, 置50mL的棕色容量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 作为贮备液;精密量取上述贮备液各0.25、1.0、3.0、8.0、12.0、20.0mL, 分别置25mL棕色容量瓶中, 加甲醇定容, 摇匀, 制成系列对照品溶液。

2.2 供试品溶液

取本品10g, 研匀, 取约1.0g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入50%乙醇50mL, 称定重量, 加热回流提取45min, 放冷, 再称定重量, 用50%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液置于棕色进样瓶, 即得。

2.3 阴性对照溶液

按佛手散方制备缺当归和川芎药材的阴性制剂, 再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3 色谱条件与系统适应性试验

3.1 色谱条件

色谱柱:迪马Platisil ODS (250mm×4.6mm, 5μm) ;流动相:乙腈-0.5%冰醋酸 (40∶60) ;流速1m L·min-1, 检测波长为316nm;外标法定量。

3.2 系统适应性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各1 0μL, 进样分析, 结果表明阿魏酸在H P L C图谱中保留时间约12.8min, 峰形良好, 分离度>1.5, 理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于6000。见图1。

(A阴性对照, B阿魏酸对照品溶液, C样品溶液)

4 方法学考察

4.1 线性关系考察

分别精密吸取上述对照品溶液各10μL, 进样, 记录阿魏酸峰面积积分值, 以峰面积积分值为纵坐标Y, 对照品的浓度为横坐标X, 绘制标准曲线, 进行线性回归得方程:Y=57953.4X–1391.3, r=0.9998。结果表明, 阿魏酸进样量在1.36～108.80μg/mL范围内线性关系良好。

4.2 最低检测限

用甲醇稀释对照品溶液配制一系列浓度溶液, 精密吸取10μL进样, 记录色谱图, 得出最低检测限 (S/N=3) 。结果阿魏酸的最低检测限为1.5ng。

4.3 精密度试验

精密吸取同一阿魏酸对照品溶液, 重复进样6次, 每次10μL, 按上述色谱条件, 进样测定, 结果阿魏酸的平均峰面积积分值为2587456.3, RSD为0.16%, 表明仪器精密度良好。

4.4 稳定性试验

取同一批佛手散供试品溶液, 于0, 2, 4, 6, 8, 12h分别精密进样10μL, 测定, 结果阿魏酸的平均峰面积积分值为2528766.7, RSD为2.36%, 说明供试品溶液在12h内稳定。

4.5 重复性试验

精密称取同一批佛手散 (批号20111003) 6份, 每份10.0g, 按照“2.2”项下方法分别制成供试品溶液, 依法测定, 结果阿魏酸平均含量为2.185 mg·g-1, RSD为2.89% (n=6) , 表明该方法重复性良好。

4.6 回收率试验

采用加样回收试验法, 取已知阿魏酸含量的佛手散样品约0.5g (批号20111003) 6份, 分别按低、中、高剂量加入一定量的阿魏酸对照品, 按照“2.2”项下方法分别制成供试品溶液, 分别进样测定, 结果见表1。

5 样品测定

取三批次的佛手散, 按照“2.2”项下方法制备供试品溶液, 分别精密吸取10μL, 按上述色谱条件进样测定, 并随行进对照品溶液, 按外标法计算佛手散中阿魏酸的含量, 结果见表2。

6 讨论

6.1 提取工艺考察

6.1.1 提取溶剂的考察

结合中国药典2010年版一部和参考文献方法[1,2,3], 考察了甲醇、乙醇、50%乙醇、水作为溶剂, 回流提取并测定, 结果阿魏酸的含量有一定差异。甲醇、乙醇提取阿魏酸含量较低, 50%乙醇和水提取较高, 但水提取的杂质峰较多, 故确定以50%乙醇为提取溶剂。

6.1.2 提取方法与时间的考察

试验中对比考察了回流法和超声提取法, 结果表明回流提取法测得的阿魏酸含量较高。再以50%乙醇作为提取溶剂, 考察了不同回流时间:15、30、45、60min的提取效果, 结果以45min和60min含量相近, 故选用回流提取45min。虽然有文献报道阿魏酸的不稳定性[3], 但实验结果表明在本实验条件下样品稳定性良好, 为了保险起见各样品溶液均装于棕色容量瓶。

6.2 流动相的考察

结合中国药典2010年版一部和相关文献报道[1,2,3,4,5,6], 对不同比例的甲醇-水和乙腈-水体系选择比较, 并加冰醋酸和磷酸调pH改善峰形。结果以乙腈-水体系较佳, 加入0.5%冰醋酸峰形良好, 故最终确定流动相为乙腈-0.5%冰醋酸 (36∶64) 。

6.3 佛手散质量控制

方法学考察结果表明, 所建立的HPLC含量测定方法, 能够准确、简便地测定佛手散中阿魏酸的含量, 可用于控制本品的质量。依据三批次佛手散的测定结果, 可暂定本品含阿魏酸每克不低于1.8mg。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [Z].北京:化学工业出版社, 2010:124.

[2]王利胜, 郭琦, 张英丰, 等.芎冰微乳的制备及质量评价[J].中国中药杂志, 2011, 36 (2) :142-146.

[3]宋浩亮, 罗华菲, 官洪义.阿魏酸及其制剂稳定性研究[J].安徽医药, 2003, 7 (4) :252-253.

[4]屈扬, 黄熙, 任平, 等.HPLC法测定含川芎当归的常见煎剂中阿魏酸的含量[J].中草药, 2004, 35 (10) :1123.

[5]兰顺, 叶冬梅.HPLC测定复方川芎胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药, 2004, 26 (10) :附18-20.

甲基阿魏酸 篇7

1 仪器与试药

Agilent-1200高效液相色谱仪;TU-1901紫外分光光度计;电子天平;甲醇;纯水;磷酸 (分析纯) ;乙腈;阿魏酸对照品 (购于中国药品生物制品检定所, 批号:110773-200611) ;强筋壮骨丸供试品和去当归的强筋壮骨丸阴性对照品 (山西临汾黎光中医骨伤科医院制备) 。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择

通过190～400nm波长紫外扫描, 阿魏酸在320nm波长处有特征吸收, 故选择为检测波长。

2.2 色谱条件

色谱柱:Venusil ASB C18 (5μm:4.6mm×250mm) ;乙腈-0.085%磷酸 (12∶88) 为流动相;流速1.0mL/min;检测波长320nm;柱温25℃;理论塔板数按阿魏酸计算应不低于3000。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品适量, 加70%甲醇制成每1mL含阿魏酸为50μg的溶液, 即得。

2.4 供试品溶液的制备

取强筋壮骨丸供试品约10g, 精密称定, 置圆底烧瓶中, 精密加入70%甲醇20mL, 密塞, 称定重量, 加热回流40min, 放冷, 再称定重量, 用70%甲醇补足减失的重量, 摇匀, 静置, 用微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。

2.5 阴性对照品溶液的制备

处方中除去当归, 按强筋壮骨丸制法, 制得去当归的强筋壮骨丸阴性对照品。将上述阴性对照品, 按供试品溶液的制备项下的方法制得去当归阴性对照品溶液。取阿魏酸对照品和强筋壮骨丸供试品溶液, 按上述色谱条件分别进样20μL, 结果阿魏酸在约28min出峰, 样品中阿魏酸峰与杂质峰分离良好, 而阴性对照无干扰。

2.6 线性关系的考察

取浓度为50mg/mL的阿魏酸对照品储备液, 分别精密吸取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.5mL置于10mL的容量瓶中, 用70%甲醇溶液稀释至刻度, 得阿魏酸对照品溶液。精密吸取上述溶液各20μL, 依上述色谱条件测得峰面积为纵坐标 (y) , 浓度为横坐标 (x) , 绘制标准曲线。回归方程为:阿魏酸y=97.42x-20.487 (r=0.9999) , 结果表明阿魏酸在浓度为0.5～12.5mg/m L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取阿魏酸对照品溶液 (5μg/mL) 20μL, 在上述色谱条件下重复进样6次, 测定峰面积值, 计算得其RSD为2.82% (n=6) 。

2.8 加样回收率试验

精密称取已测定的强筋壮骨丸供试品5g共6份, 分别精密加入50μg/mL阿魏酸对照品溶液0.8mL, 按供试品溶液的制备方法制备供试液。分别进行测定, 计算含量, 平均回收率:99.63%, RSD:2.53%。

3 讨论

有文献报道, 阿魏酸性质不稳定, 遇光和热易分解, 置于棕色瓶中的阿魏酸对照品溶液在4℃下2周后开始分解。因此在试验中阿魏酸对照品溶液与供试品溶液均为现用现配, 于棕色瓶中避光保存。阿魏酸为有机酸类成分, 易溶于热水、醇和乙醚, 而乙醚的毒性较大;热水和乙醇的沸点较高, 参考中华人民共和国药典2010版, 本试验采用毒性较小、沸点较低的甲醇作为提取溶剂。在提取溶剂剂量考察试验中, 本试验先后采用15mL、20mL、25mL、30mL70%甲醇溶剂进行回流提取, 结果发现提取溶剂超过20mL后阿魏酸的提取量无显著差异, 因此本试验选用20mL甲醇溶液进行回流提取。

本文建立的强筋壮骨丸中阿魏酸的含量检测方法简便、准确、重现性好, 可用于强筋壮骨丸的质量控制。

摘要：目的 建立HPLC法测定强筋壮骨丸中阿魏酸含量的方法。方法 色谱柱为VenusilASB C18, 流动相为乙腈-0.085%磷酸 (12∶88) , 流速1.0mL/min;检测波长320nm, 柱温为25℃。结果 阿魏酸的检测浓度在0.5～12.5mg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。结论 该方法简便、准确、重现性好, 可用于强筋壮骨丸的质量控制。

关键词：强筋壮骨丸,阿魏酸,高效液相色谱

参考文献

[1]胡益勇, 徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药, 2006, 28 (2) :253-255.

甲基阿魏酸 篇8

关键词：阿魏酸,正交试验,白洋淀芦根,提取工艺

0 引言

芦根为禾本科植物芦苇新鲜或者干燥根茎[1], 它性寒、味甘, 入肺、胃经, 具有清热泻火、生津止渴、除烦、止呕、利尿之功效, 临床常用于热病烦渴, 肺热咳嗽, 肺痈吐痰, 胃热呕吐, 热淋涩痛等症的治疗。芦根作为中国传统药物, 在中医临床治疗中有着广泛的应用[2,3]。而白洋淀地区的芦苇资源丰富, 自古就有“芦苇之乡, 甲于河北”的美誉。该地区出产的芦根产量大、质量好, 作为河北省特色药材, 是北方地区芦根药材的重要来源之一。经查阅相关文献, 发现目前关于芦根药材的质量控制研究较少, 主要是以阿魏酸的高效液相含量测定和药材HPLC指纹图谱为主[4,5,6], 而关于白洋淀地区芦根的研究更是未见报道, 缺乏白洋淀芦根相关的质量控制标准及方法。本研究通过以阿魏酸为指标, 采用高效液相色谱 (HPLC) 法, 观察不同提取时间、提取次数、溶剂用量及提取溶剂的浓度对白洋淀芦根中阿魏酸提取的影响, 选取最佳提取工艺, 为白洋淀芦根的质量控制提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪Agilent 1100 (美国安捷伦科技有限公司) ;CX-250型超声波清洗器 (北京医疗设备二厂) ;电热恒温水浴锅 (天津中环实验电炉有限公司) ;赛多利斯BS210S电子天平 (北京赛多利斯天平有限公司) ;乙醇浓度检测仪 (河北省河间市宏利仪表厂) ;白洋淀芦根 (购自安国金康迪中药饮片厂) ;乙腈、甲醇为色谱纯;水为屈臣氏蒸馏水;阿魏酸 (中国药品生物制品检定所, 批号:110773-200813) 。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈-水溶液 (26:2:72) ;检测波长:320 nm;流速:1.0 m L/min。

1.2.2 考察因素选取

白洋淀芦根中主要活性成分阿魏酸易溶于甲醇[4], 因此确定甲醇为提取溶剂, 以阿魏酸为检测指标, 观察提取时间、提取次数、甲醇用量 (相对于药材质量) 及甲醇浓度为考察因素, 每个因素设定3个水平层次 (见表1) , 采用4因素3水平8次[L9 (34) ]正交试验进行研究测定。

1.2.3 供试品溶液制备

按处方比例分别称取5种中药材, 放入具塞锥形瓶中, 精密称重, 分别用规定浓度的甲醇按照正交设计进行超声提取9次, 放凉, 再用同等浓度甲醇补足重量, 定容, 称重, 合并提取液, 用0.45μm的微孔滤膜过滤, 备用。

1.2.4 对照品溶液制备

精密称取阿魏酸对照品7.20mg, 置100m L容量瓶中, 加50%甲醇溶液定容至刻度, 摇匀;从中精密吸取5m L至10m L容量瓶中, 加50%甲醇溶液定容至刻度, 摇匀, 作为阿魏酸对照品溶液。

1.2.5 标准曲线制备

精密吸取对照品溶液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL注入液相色谱仪, 按1.2.1项色谱条件下记录色谱图, 测定峰面值。以阿魏酸素峰面积值为纵坐标, 进样量为横坐标, 做线性回归, 得回归方程:Y=7.73×104X-1.84×104, r=0.999 9。结果表明, 阿魏酸对照品在0.038-0.38μg的范围内进样量和峰面积与峰面积呈现良好的线性关系。

1.2.6 样品测定

精密吸取供试品溶液15μL, 注入高效液相色谱仪, 按1.2.1项色谱条件下记录色谱图, 测定其峰面积值。

2 结果及分析

2.1 L9 (34) 正交试验结果 (见表2)

注:F0.05 (2, 2) =19.00;F0.01 (2, 2) =99.00

由表2、表3可见, 以阿魏酸为指标, 对白洋淀芦根中阿魏酸提取工艺因素影响大小是:A>D>B>C, A因素对提取工艺影响最大, 即提取时间, B、C、D因素因素在实验水平上的影响无显著意义。正交实验结果显示, 白洋淀芦根中阿魏酸的提取工艺最佳条件:A2B2C3D2, 即采用10倍药材量的70%乙醇, 提取2次, 每次45 min。

2.2 工艺验证

取白洋淀芦根适量, 按照最佳工艺条件确定的提取时间、提取次数、乙醇用量及浓度, 平行试验测定3组 (见表4) 。

由表4可见, 本方法检验结果稳定可靠。

3 讨论

本研究选取阿魏酸为测定白洋淀芦根的观测指标, 采用HPLC法检测, 以甲醇为提取试剂。取适量阿魏酸对照品, 加甲醇制成溶液, 用紫外分光光度计扫描, 结果在320 nm处有最大吸收, 参考2010年版《中华人民共和国药典》, 确定检测波长是320 nm。经L9 (34) 正交试验得出影响白洋淀芦根中阿魏酸提取工艺的因素:提取时间>提取次数>乙醇用量>乙醇浓度, 提取时间因素对提取工艺影响最大。冠心2号冻干粉针剂最佳提取工艺条件为:用药材10倍量75%的乙醇, 提取2次, 每次45min。本方法简便易行, 准确可靠, 可用于白洋淀芦根的质量控制与检测。

参考文献

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