乙肝表面抗原（精选十篇）
乙肝表面抗原 篇1
1 材料与方法
1.1 仪器与器材
微型振荡器, 恒温箱, 一次性血凝板, 稀释棒。
1.2 试剂
HBsAg BLISA试剂盒 (华美生物工程公司提供) , HBs纯纸条 (郑州博塞生物技术研究所提供) , 冻干HBsAg诊断血球, 血球稀释液 (上海实业科华生物技术有限公司提供) 。有效期内使用, 按操作说明书进行。
2 结果
120例体检者经过ELISA及HBsAg纸条法有13例阳性, 反向被动血凝法有10例阳性。
3 讨论
三种方法表明:反向被动血凝法消费低廉, 重复性好, 但操作较繁索, 出结果较慢约1h, 灵敏度较差, 易使阳性结果遗漏, 只供做筛选;HBsAg试纸条法操作简便, 结果准确、快速约几分钟, 重复性好, 但在日常工作中价格较高;采血量较多约4mL;ELISA试剂盒操作简便, 特异性强灵敏度高, 重复性好, 出结果较快约35min, 价格较适中, 但洗涤质量, 正规操作至关重要, 否则易出现假阳性。实验结果表明, 在每年的征兵体检工作中, 用质量好的ELISA试剂盒通过正规操作洗涤进行HBsAg的检测, 可疑结果用HBsAg纸条进行复验。
溶血是由于各种原因造成红细胞破坏, 泡内Hb物质和细胞内液游离人血清, 它对生化检脸结果的干扰是多方面的。包括对比色、蛋白质、电解质、酶类等分析的于扰。溶血时ELISA的影响主要是反应孔对溶血血清中Hb的特异性吸附和溶血时细胞内液对血清的稀释作用。Hb具有类过氧化物酶活性, 其作用效应与辣根过氧化物酶类似。如果反应孔因非特异性吸附Hb而残留, 则催化底物显色使本底A值升高甚至造成假阳性;如果反应孔包被, 封闭和洗涤质量好, 操作正规, 则可能大大减少或排除非异性吸附的干扰。有关报道和实验还表明溶血对血清具有稀释作用, 对HBsAg浓度较高的样品没多大影响, 而HBsAg浓度比较适合或稍低的样品其检验结果有一定影响, 甚至可造成假阳性。
总之, 反向被动血凝法灵敏度不如ELISA及HBsAg纸条法, 仅适于筛查。临床应首选质量好的ELISA试剂盒进行HBsAg的检测, 可疑结果用HBsAg纸条进行复验。
参考文献
[1]冯仁丰, 亦锡凉.实用医学检验[M].上海:上海科学技术出版社, 1996.
[2]龙宪和, 童华城.溶血对L型杆炎五项血清标志物检测结果的影响[J].中华医学检验杂志, 1996, 19:47.
乙肝表面抗原 篇2
在临床检测中，常常遇到溶血的标本。溶血对ELISA检测乙肝表面抗原（HBsAg）究竟是否有影响，各文献报道很不一致，本文对标本溶血的原因及其对ELISA检测乙肝表面抗原的影响进行简要的讨论。1 标本溶血的原因
溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。溶血可分为体内溶血和体外溶血［1］。体内溶血可由物理因素（如人工心脏瓣膜或大血管手术后）、化学因素（如恶性疟）和药物毒性反应等因素引起。体外溶血可由物理因素（抽血时负压过大、水浴温度过高、冰冻、振荡等机械性破坏）、化学因素（血样接触表面活性剂）和代谢因素（如遗传病引起红细胞脆性增加）引起。
在临床上常见的引起标本溶血的原因包括 ［2］ :由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。2 标本溶血对乙肝表面抗原检测的影响
一些研究没有发现标本溶血对HBsAg检测的影响。李穗芬 ［3］ 对20例HBsAg阴性和10例HBsAg阳性病人的溶血和非溶血标本包括10例OD值在临界值附近的标本进行了对照，结果非溶血和溶血标本的阴、阳性结果完全一致。20例HBsAg阴性和10例OD值在临界值附近的样本，溶血与对应非溶血标本OD值间差异没有显著性;10例HBsAg阳性样品，溶血标本OD值明显大于对应非溶血标本OD值。因此得出结论，标本溶血不影响HBsAg结果的判定，只是使HBsAg阳性标本的OD值提高。许斌等［4］ 对HBˉsAg强阳性样品的非溶血与溶血（Hb浓度为241g/L）标本的A值作了对照后未发现两者有统计学差异，得出结论:溶血对HBsAg的检测没有影响（严格意义上应表述为:溶血对HBsAg强阳性标本的检测没有影响）。单桂秋等［5］ 的研究也显示，HBsAg阳性样品的非溶血与溶血标本的A值间经t检验差异无显著性。
其他的一些研究则发现，溶血对HBsAg的检测有影响。钱厚明等 ［6］发现，在17例溶血标本中，初检的5例HBsAg阳性标本，经重新抽血复检后有2例仍为阳性，另3例转阴。认为是溶血导致了假阳性的出现。刘玉振等 ［7］ 研究发现，溶血对HBsAg的检测有影响，当红细胞浓度>25%造成的溶血可导致假阳性。龙宪和等［8］ 研究发现，无论在健康人还是乙肝病毒感染者中，溶血均导致了ELISA一步法检测HBsAg假阳性结果的出现，而采用二步法则可以保证结果判读无误。标本溶血对乙肝表面抗原检测影响的可能机制
溶血是由于各种原因造成红细胞破坏，胞内血红蛋白（Hb）等物质和细胞内液进入血清。溶血对ELISA的影响主要是反应孔对溶血血清中Hb的非特异性吸附和溶血时细胞内液对血清的稀释作用。单桂秋等［5］ 的实验也证明了溶 血对血清具有稀释作用。
在ELISA试验中，酶标反应板孔包被物的浓度是一个相对定值，抗原抗体反应存在最适比例和后带现象，因此，HBsAg浓度与A值只是在一定的范围内呈一定的线性关系;当HBsAg达到一定浓度时A值的变化进入平台期;当HBsAg浓度太高时，A值反而会降低。因此，溶血可以使HBsAg浓度很高的样品的A值升高（在一定程度上解决了后带现象）;当HBsAg浓度与A值呈线性关系时才会因溶血的稀释作用使A值下降;当HBsAg浓度近临界值时，可能造成假阴性。
Hb具有类过氧化物酶活性，其作用与辣根过氧化物酶类似，如果反应孔非特异吸附Hb而残留，则可催化底物显色，使本底A值升高甚至造成假阳性。如果洗涤质量好，则可能大大减少或排除非特异性吸附的干扰。单桂秋等［5］ 的实验未体现血中Hb非特异性吸附的影响。龙宪和等 ［8］ 采用二步法操作可以排除溶血释出的Hb对HBsAg检测的影响也说明洗板质量在ELISA检测中的重要性。
如何正确对待乙肝表面抗原携带者 篇3
【关键词】乙肝；表面抗原携带者；正确对待
【中图分类号】R51 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2013）05-0820-01
国家卫生部在全国人群乙肝等有关疾病血清流行病学调查时发现，全国1～59岁人群乙肝表面抗原携带率为7.18%。1～4岁人群乙肝表面抗原携带率最低，为0.96%。5～14岁人群为2.42%。15～59岁人群乙肝表面抗原携带率最高，达8.57%。1～4岁人群乙肝表面抗原携带率明显低于15～59岁人群。全国人群乙肝抗体阳性率为50.09%。城市高于农村，西部高于东部地区。1～4岁人群乙肝抗体阳性率最高，为71.24%，5～14岁人群为56.58%。15～59岁人群最低，为47.38%。 乙肝疫苗全程和首针及时接种率城市高于农村，东部高于西部，医院出生儿童乙肝疫苗首针及时接种率高于在家出生儿童。
尽管乙肝病毒表面抗原携带者（即所阅“澳抗阳性”，在检验报告单上HBsAg为“+”）没有明显的肝炎症状和体征，肝功能也基本正常，除了部分工作（如饮食服务、幼教保管人员）从业受限制外，其他完全可以与正常人一样地工作学习[1]。但是，大多数乙肝病毒表面抗原携带者的肝组织，都受到不同程度的损害。
1 发病机制
乙型肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。本病广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转化为肝硬化或肝癌。因此，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种传染病。但并不是每个感染病毒的人都会成为乙肝患者，这与患者感染的病毒数量、毒力和感染方式等因素密切相关，每个人的身体素质、免疫反应状态，也在乙肝病情和病程的转归上起着重要作用。所以患者感染乙肝病毒后可能出现下面结果：不发病且产生保护性乙肝表面抗体、长期慢性无症状带毒者、轻度慢性肝炎、重型肝炎。
医学上肝炎可分为甲、乙、丙、丁、戊、己、庚七种类型，其中乙肝是流行最广泛、危害最严重的一种传染肝炎。乙型病毒性肝炎（简称乙型肝炎）是由乙型肝炎病毒（简称乙肝病毒）引起的肝脏炎性损害，本病遍及全球，临床表现为乏力、食欲减退、恶心、呕吐、厌油、腹泻及腹胀，部分病例有发热、黄疸，约有半数患者起病隐匿，在检查中发现。
乙肝表面抗原是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2～6个月，当丙氨酸氨基转移酶升高前2～8周时，可在血清中测到阳性结果。急性乙型肝炎患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙型肝炎患者该指标可持续阳性。
反映乙肝病毒复制的指标很多，如HBsAg，HBV-DNA、抗-HBclgM等，最简便廉的方法就是查一下乙肝五项指标。如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三项阳性，其血液就有高度传染性；如果抗-HBe阳性，其血液的传染性就较低。
一般来说，HBsAg阳性者可以和正常人一样参加工作、学习和社交活动，他们对周围的同志不构成明显的威胁。HBsAg阳性携带者结婚前最好先查一下本人的HBeAg和抗-HBe，如果抗-HBe阳性，说明传染性较低，可以结婚[2]；如果H BeAg阳性，就要再查对方的血清，如果是抗-HBs阳性，说明对方对乙肝病毒已有免疫力，不会再感染。
2 常规检查及意义
乙肝五项是诊断乙肝感染的基本依据，HBsAg（+）提示感染了乙肝病毒，但不提示病毒复制及传染性；抗HBs（+）表示有保护性抗体，对乙肝有免疫力，注射乙肝疫苗及自然感染痊愈后都可产生抗HBs；HBeAg（+）是乙肝病毒复制的指标，提示有传染性；抗HBe（+），一般情况下提示乙肝病毒低复制或不复制，少数情况下结合DNA检测明确是否存在病毒变异；抗HBc提示感染过乙肝；抗HBc-IgM（+）提示病毒复制。
3 指导患者做好自我保健
3.1首先应让患者该明确乙肝病毒携带状态并非疾病状态，不是真正的乙型肝炎患者，而且大部分携带者肝脏本身并无明显损害，对健康也无大影响，完全可以、也应当正常生活。除不能献血和国家法律规定不能从事的特殊职业（如服兵役等）外，可照常学习和工作，不影响招工、上学[3]，也不影响报考公务员。
3.2明确乙肝主要经体液、特别是血液以及母婴垂直传播，不像经呼吸道、消化道传播的疾病那样容易传染，所以即使是所谓“大三阳”，与其他传染病比起来，其传染性并不强。除了必要的隔离措施外，无须处处躲避，事事回避。
3.3无须特殊休养，而是应当加强身体锻炼，提高机体免疫功能，保持强健体力。不饮酒，不乱用药，不要轻信虚假广告，咨询专科医生，获得其指导。
3.4防止多种肝炎病毒重叠感染，坚决杜絕性生活混乱、药瘾，尽量避免输血和应用血制品。
3.5定期复查，一旦发病，立即按乙型肝炎正规治疗。复查间隔时间为3～6个月。
4.医生应该做的工作
4.1为乙肝病毒表面抗原携带者应建立健康档案，嘱其定期到医院随访检查。平时要注意劳逸结合，如果发现疲乏无力、食欲不振，就要及时到医院就诊。
4.2如果在检查中，同时发现e抗原阳性，告知他们不能献血，也不能从事餐饮服务、育儿工作。
4.3妇女月经期要注意个人卫生，冲洗外阴部的浴盆和毛巾要单独使用，当有外伤出血时要妥善处理，伤口要认真包扎，被血污染的经济价值不大的物品应焚烧，防止血液对周围环境的污染。
4.4从乙肝表面抗原携带者的唾液中，能检出乙肝病毒，因此生活中应实行分餐制，餐具、牙刷等生活用品要专用；尽量避免夫妻间的深吻。
4.5严防医源性传播，患者使用的注射器、采血针等，必须使用一次性用品，使用后要及时焚烧处理。
4.6对乙肝表面抗原携带的孕妇，分娩前后，要注意卫生防护，防止血液污染环境。同时，对新生儿在出生后24小时内注射高效价乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗，并按程序完成全程免疫。产妇在乳房受伤时，应停止哺乳。
4.7 指导乙肝病毒表面抗原携带者忌烟酒，节制性生活。保持心情舒畅，保持心态的平和。
参考文献：
[1] 晓冉，乙肝表面抗原携带者须知[J]中国卫生标准管理，2010，1：64-68
[2] 秋良，给乙肝病毒携带者一片天[J]劳动保障世界，2010，1：45
乙肝表面抗原 篇4
1 对象与方法
来自2007年1月至2008年11月石拐区来我院就诊和检查的乙肝病毒五项血清标志物检测一项及以上阳性的800例血清标本。采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 对每份标本检测乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg) 、表面抗体 (抗-HBs) 、 e抗原 (HBeAg) 、e抗体 (抗-HBe) 、核心抗体 (抗-HBc) , 试剂盒购自上海实业科华生物技术有限公司, 均在有效期内使用。操作严格按照试剂盒操作步骤进行。结果判断:判断值=阴性对照平均OD值×2.1, 样品孔OD值大于或等于判断值为阳性, 小于判断值为阴性。
2 结果
800例乙肝病毒表面抗原阳性者一般特征见表1, 乙肝五项免疫学指标指标特征见表2。
3 讨论
800例表面抗原阳性者中, 仅单项HBsAg阳性者占40%;HBsAg和抗-HBs阳性者占2%;俗称“大三阳” (HBsAg、HbeAg、抗-HBc阳性) 仅占10%, “大三阳”是乙肝感染严重、传染性强的一群HBV感染者, 现症患者或慢性乙肝患者往往是呈现该模式;俗称“小三阳” (HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性) 的占28%, 此感染人群也具有传染性, 但机体免疫力尚好, HBV在体内的复制受到一定的抑制, 此人群也是乙肝主要传染源之一;还有20%的HBsAg和抗-HBc阳性, 抗HBc是乙型肝炎病毒 (HBV) 既往感染的指标[2]。由此可见表面抗原阳性者中具有强传染性的仅为一小部分。
乙肝病毒主要有血液、母婴垂直 (分娩和围产期) 和性接触3种传播途径, 不会通过呼吸道和消化道传染, 一般接触不会造成乙肝病毒的传播。健康人与乙肝表面抗原携带者在一起工作, 虽然会公用办公桌、椅、门、窗、电话、及书写工具等, 但均属间接传播, 一般不会被传染, 只是乙肝表面抗原携带者的餐饮具及洗漱用具要单独使用, 不要与其他人混用。他们可以正常生活、学习和工作, 但不宜从事餐饮服务和保育工作。这些人除不能献血, 不宜新兵入伍, 不宜从事保育员、炊事员、入口食品行业外, 可照常工作和学习。
我们不能歧视乙肝病人及携带者, 应该多关心爱护他们。他们面临着体检的压力, 日常的生活、人际交往、歧视、求学、就业、失业、婚姻、等等问题无时无刻不在困扰着他们。中华人民共和国就业促进法 (2007年8月30日全国人大常委会通过, 2008年1月1日起施行) 中规定:乙肝病毒携带者在工作和生活能力上同健康人没有区别。由于乙肝传播途径的特殊性, 乙肝病毒携带者在生活、工作、学习和社会活动中不对周围人群和环境构成威胁, 可以正常学习、就业和生活。乙肝携带者在升学、就业、婚姻等方面受到歧视的问题应该引起社会各界的关注, 使公众对乙肝有科学、正确、客观的认识, 防止“谈肝色变”。
医务工作者应该对健康人群, 乙肝病人及携带者进行乙肝病毒传播途径的讲解, 把乙肝病人及携带者的分泌物进行严格消毒、分离处理, 我们的工作重点应放在预防工作上, 人们只有充分了解乙型病毒性肝炎传播的途径, 才能讲究个人卫生, 控制传染源, 切断传播途径, 保护易感人群。正确的接种和定期复种乙型肝炎疫苗, 对防止乙型肝炎传播是非常重要的。
参考文献
[1]朱黎明, 朱英杰.少数民族地区孕妇乙肝病毒感染的调查分析[J].临床肝胆病杂志, 2005, 4:73-74.
乙肝表面抗原 篇5
入学和就业权利的通知
（征求意见稿）
为进一步维护乙肝表面抗原携带者公平入学（含入幼儿园，下同）、就业权利，现就有关问题通知如下：
一、取消入学、就业体检中的乙肝病毒血清学检查 在公民入学、就业体检中，取消乙肝病毒血清学检测项目（以下简称乙肝五项，包括乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒表面抗体、乙肝病毒e抗原、乙肝病毒e抗体和乙肝病毒核心抗体检测）。各级各类教育机构在开展各阶段教育招生入学体检时，不得检查“乙肝五项”。用人单位在招工、招聘体检中，不得将“乙肝五项”检查列入体检标准，也不得要求应聘者提供“乙肝五项”检测报告。各级医疗卫生机构不得在入学、就业体检中提供“乙肝五项”检查服务。
因职业特殊确需在就业体检时检查“乙肝五项”的，应由行业主管部门提出研究报告和书面申请，经卫生部核准后方可进行。未经卫生部核准，任何行业、单位不得自行将“乙肝五项”检查项目列入入学、就业体检标准。军队、武警、公安特警的体检工作按照有关规定执行。
在公民入学、就业体检中，可检查丙氨酸氨基转移酶（ALT,简称转氨酶）项目，以评价肝脏功能。如转氨酶异常，再做相应检查以区分病因，以尽早发现乙肝病人、尽早治疗患者。
二、进一步维护乙肝表面抗原携带者入学、就业权利，保护乙肝表面抗原携带者隐私权
各地要认真贯彻落实就业促进法、教育法、传染病防治法等法律法规，切实维护乙肝表面抗原携带者公平入学、就业权利。各级各类教育机构不得以学生携带乙肝表面抗原为理由拒绝招收或要求退学。除报经卫生部核准的特殊职业外，用人单位不得以劳动者携带乙肝表面抗原为理由拒绝招（聘）用。用人单位不得以携带乙肝表面抗原为理由辞退或解聘劳动者。为医学目的而开展的“乙肝五项”检查，检查机构应严格保护受检者的隐私；为健康体检目的而开展的“乙肝五项”检查，检查机构应充分尊重受检者的选择权并保护其隐私，体检组织者不得强制要求受检者接受“乙肝五项”检查。
三、进一步加强监督管理，加大执法检查力度
各地和各有关部门要抓紧对现行有关规定的清理、修订工作，凡是与国家法律、行政法规和本通知要求相抵触的，要坚决废止。
县级以上地方卫生行政部门要对本行政区域内医疗卫生机构开展的健康体检进行监督管理。对医疗卫生机构违规
进行“乙肝五项”检查的，或泄露乙肝表面抗原携带者个人隐私的，县级以上卫生行政部门视情节对其进行处理。
各级教育行政部门要及时调整入学体检项目，规范入学体检表格的内容。要加强对教育机构的监督，督促教育机构严格执行招生体检相关规定，及时查处和纠正违反规定进行“乙肝五项”检查的行为。
各级人力资源社会保障行政部门要加强对用人单位招工、招聘行为的监督检查，督促用人单位严格执行国家相关规定，对用人单位违法要求求职者进行“乙肝五项”检查的，要依法严肃处理。对发生的劳动人事争议，按照有关法律法规进行调处。要及时调整技工院校入学体检项目，督促技工院校严格执行招生体检相关规定。
地方各级人力资源社会保障部门、教育部门、卫生部门要设立并公布投诉、举报电话，认真受理投诉、举报。
四、加强乙肝防治知识和相关政策的宣传教育
各地、各有关部门要高度重视乙肝防治知识和相关政策法规的宣传教育工作。乙肝病毒经血液、母婴垂直和性接触三种途径传播，日常工作、学习和生活接触不会传播乙肝病毒。乙肝表面抗原携带者身体无临床症状，肝功能正常，不是病人，可以正常学习、就业和生活，不会因共同学习、工作等对周围人群构成威胁。要通过宣传引导，帮助社会公众全面正确了解乙肝防治知识，消除公众在与乙肝表面抗原携
带者一起工作、学习问题上的疑虑，形成有利于乙肝表面抗原携带者入学、就业的良好社会氛围。
人力资源社会保障部门要积极帮助用人单位了解相关法律规定，引导劳动者依法维护自身权益。教育部门要面向学校开展系列宣传教育，将乙肝传播途径与防治基本知识纳入中小学生物等相关课程。卫生部门要把加强乙肝防治宣传教育工作纳入当地健康教育规划，广泛宣传乙肝科学知识以及相关政策法规。
人力资源和社会保障部
教育部
卫生部
乙肝表面抗原 篇6
关键词：乙肝病毒;PreS1抗原;乙肝两对半;临床意义
中图分类号：R446.11;R512.6+2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2007）12-078-02
我国是乙肝大国，根据有关流行病学资料，我国乙肝病毒感染率为57.6％，其中乙肝病毒表面抗原携带率为9.8％；全国现患慢性肝炎病人超过2000万例，鉴于人们对病毒性肝炎越来越重视，在健康体检中常常将乙肝两对半作为首选筛查项目。随着实验诊断学的发展，乙肝病毒的血清学指标不断得到发展完善，PreS1作为一项新的乙肝病毒感染的血清学标志物也越来越被临床重视;本研究我们将所有健康体检者和门诊送检病人作乙肝两对半检验将除五项标记物全为阴性外的所有血清标本进行PreS1测定，评价PreS1作为一项乙肝病毒新的血清学标志物的临床意义及流性病学调查的意义。
1 对象和方法
1.1 对象
健康体检和门诊送检病人通过ELASE方法测定HBV，除五项标志物全为阴性的标本共计580份，将他们分成5组；分别是大三阳（在表中及下文中称HBeAg阳性）、小三阳（在表中及下文中称HBeAg阴性）、单纯HBsAg阳性、单纯HBsAb阳性、单纯HBcAb阳性。其分布见表1，所有受检者者均采集静脉血，血清经分离后及时检验，或分装于高压灭菌的1.5mL Eppendorf管，于-20℃冻存。
1.2 方法
1.2.1 乙肝病毒血清标志物（HBVM）的检测
采用深圳月亮湾生物技术有限公司生产的EIASE立可读一步法试剂盒，按照说明书的操作步骤及阴阳性判断标准进行编程，其中，HBsAg,HBsAb,HBeAg为夹心法，HBeAb为竞争抑制法，HBcAb为中和抑制法。运用MIC-518酶标仪进行检测判读，每次实验都加作室内质控，确保实验结果准确可靠。
1.2.2 PreS1抗原测定
按照上海复星长征生物技术有限公司提供的ELISA操作步骤和结果判定方式进行编程，该实验为两步法，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法，以固相化的人工化学合成的前S1蛋白21~47aa肽进行免疫制备前S1蛋白单抗捕获标本中的乙肝前S1抗原，辣根过氧化酶标记的抗PreS1单抗为二抗来检测PreS1抗原，同样采用酶标仪进行检测判读。
2 结果
见表2。
3 讨论
乙型肝炎病毒的PreS1抗原是由PreS1基因编码的外壳表面抗原蛋白成分之一，与HBV的组装、分泌和入侵肝细胞密切相关，可作为乙肝病毒活动性复制的指标。PreS1抗原的持续存在表明病毒复制和病毒颗粒存在。从实验中可以看出，在HBeAg阳性组PreS1检出率高于HBeAg阴性组总符合率61%，表明PreS1抗原与HBeAg存在密切相关。说明两者有一定的一致性和相关性，由于HBeAg是HBV复制和传染的指标，本研究显示两者有很好的阳性符合率。由于HBeAg是HBV复制和传染的指标，因此可以把Pres1作为判断HBV病毒复制的血清学标志。
目前，国内检测HBsAg绝大多数应用ELISA中双抗体夹心双位点一步法，当标本中HBsAg含量过高时，会因钩状效应出现而引起假阴性。由于HBVM检测所用的试剂为一步法，抗原抗体反应会产生“钩状效应”而产生假阴性结果，PreS1抗原检测是两步法，避免了“钩状效应”的产生，同时检测HBVM、PreS1能够起到相互提示作用，最大程度减少假阴性结果的产生。
在单纯HBsAg阳性的血清标本中检测到PreS1阳性的可以看出PreS1不仅是HBV复制的标志，而且乙型肝炎病毒还是早期感染的标志，在HBV感染早期即可以检出。从试验结果可以看出，在受检者血清中，部分HBeAg阴性，但PreS1为阳性，可见，HBeAg阴性并不意味着乙肝病毒复制的完全终止或病毒血症的消失，所以对于HBeAg阴性而HBsAg阳性的标本，应该检测PreS1抗原，来判断是否存在HBV感染或复制。PreS1能够敏感地反映乙型肝炎病毒的复制情况，尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制。
4 综述
目前，乙型肝炎病毒血清学检测项目主要是HBV-M（即乙肝五项，包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb）。目的是诊断患者的感染状况，病毒复制情况，病程预后和药物疗效的观察等。PreS1抗原的检测能够从以下几个方面弥补和加强乙肝五项检测的不足。
(1)PreS1抗原出现在急性乙型肝炎感染的早期，在转氨酶升高前即可查出，提示可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标。
(2)急性乙型肝炎患者PreS1抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象。反之，PreS1抗原持续阳性，将发展至慢性肝炎（此指标比HBeAg阴转、HBsAb阳转指标提示要早）。
(3)HBeAb（+）慢性乙型肝炎约占慢性乙肝的30%～50%，检测PreS1抗原，提示病毒在机体内继续复制，此类患者更容易演变为肝硬化或肝癌。加查PreS1抗原，弥补了因HBeAg缺失造成的诊断和治疗困难。
(4)HBV无症状携带者中有一定比例的HBeAb（+）者，加查PreS1抗原（+）提示病毒在体内还较活跃。病毒并没有清除，肝脏还有潜在的病理损伤。
(5)抗病毒治疗乙型肝炎，加查PreS1抗原可作为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效判断，尤其对HBeAb（+）的慢性肝炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用。
所以将乙肝两对半检验和乙型肝炎病毒PreS1抗原相结合，可在急性肝炎，慢性肝炎，HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程甚至在流行病学调查中都起到了十分重要的作用。
参考文献：
［1］ 单桂秋，李秋生，肖韶英.检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析［J］.中华检验医学杂志，2002，25(2)：107-108.
［2］ Hu WG, Wei J, Yang XX. Expression of overlapping PreS1 fragment recombinant proteins for the determination of immunogenic domains in HBsAg PreS1 region［J］. Acta Biochim Biophys Sin, 2004, 36(6): 397-404.
［3］ Jin ZZ, Li MH, Wang YS. Binding site of hepatitis B virus preS1 region to the asialoglycoprotein receptor of human liver［J］. J Med Yanbian Univ, 2002(3):157-160.
［4］ 闵福援，孙桂珍，王健.前S1蛋白在乙型肝炎诊断及判断预后中的作用［J］.中华检验医学杂志,2004，27(4)：224-226.
乙肝表面抗原 篇7
1材料与方法
1.1标本来源
6620例血清标本均来自本院门诊及住院病人, 病人年龄21～62岁, 平均年龄44.3岁。
1.2方法及试剂
时间分辨荧光免疫分析法, 采用AT-2006时间分辨荧光分析仪及配套试剂, 由上海新波生物技术有限公司提供。
1.3统计学处理
所有资料均用例数或百分率表示。
2结果
在6620例血清标本中, HBsAg阳性者共597例。其中HBsAg浓度在5ng/mL以下者共129例, 占受检人数的1.95%, 占HBsAg阳性人群的21.61%, 对这129例HBsAg浓度在5ng/mL以下的病人的乙肝血清标志物模式进行分析, 共发现有6种模式, 见表1。
在HBsAg低水平的病人中, 以A模式最常见, 占76.674%;HBsAg和HBcAB同时阳性 (A/B+C) 占94.57%;HBsAg及HBeAg同时阳性 (B/F) 占11.63%;有1例HBsAg和HBsAb同时阳性的模式, 其HBsAg浓度为0.64ng/mL;单独HBsAg阳性者5例, 占低水平HBsAg病人总数的3.87%。
3讨论
慢性乙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的疾病, 我国是病毒性肝炎的高发区, 近年来的研究表明, 在部分乙肝病毒感染的人群中, 血清表面抗原呈低水平存在, 容易造成漏检。对低水平存在的血清标志物进行有效检测, 具有重要的临床和流行病学意义。尤其是目前普遍采用的酶标检测方法, 对低水平人群更容易造成漏检。随着免疫学技术的不断发展, 时间分辨荧光免疫分析技术的应用, 使低水平乙肝病毒得以检出。本文发现, 血清HBsAg浓度在5ng/mL以下者共129例, 占受检总人数的1.95%, 占HBsAg阳性人数的21.61%, 这足以表明血清低水平HBs Ag人群占有相当的比例。
本文发现, 低水平HBsAg病人的乙肝病毒血清标志物模式中, 以HBs Ag、HBeAb和HBcAb阳性最多见 (76.64%) , 大部分情况下, HBsAg和HBc Ab同时存在 (94.57%) , HBs Ag单独存在的情况并不多见 (3.87%) 。因此, 建议在做HBs Ag检测的同时, 能够同时检测相关的乙肝病毒其他指标, 这对保证输血安全和控制院内感染有重大意义。本文检测到1例HBs Ag和HBsAb共存的模式, 其HBsAg浓度为0.64ng/mL, 推测二者同存的原因可能是HBV发生变异引起的。另有5例HBs Ag单独存在的模式, 这种低浓度的表面抗原携带者最容易漏诊, 值得进一步探讨。
摘要：目的了解血清低水平乙肝病毒表面抗原的分布状态及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征。方法采用时间分辨荧光免疫分析技术对6620例门诊及住院病人的血清进行乙肝两对半定量测定, 确定浓度在5ng/mL以下的HBsAg阳性倒数, 并分析相关乙肝病毒标志模式。结果6620例受检者中HBsAg阳性共597例, 其中HBsAg在5mg/mL以下者共129例, 占受检者总人数1.95%, 占HBsAg阳性人群的21.61%。在129例低水平HBsAg病人的乙肝病毒标志物模式中, 以HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性为主, 共99例占76.71%;单纯HBsAg阳性者5例, 占3.87%。结论在乙肝病毒感染的人群中, 有相关比例的患者HBsAg的含量呈低水平状态, 提高HBsAg检测的灵敏度有很重要的意义。
关键词：时间分辨荧光免疫分析,乙肝病毒,乙肝表面抗原
参考文献
乙肝表面抗原 篇8
1 血标本的影响
1.1 溶血、脂血、细菌污染。
溶血的标本和脂血严重的标本都会造成结果错误。有的患者体内存在嗜异性抗体、补体、类风湿因子等, 这些物质在操作中都能与酶标记的第二抗体Fc段结合, 从而导致假阳性结果。
1.2 标本采集后不要马上离心, 应让血凝块更好地收缩, 使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活, 降低非特异性反应所致的假阳性率, 待血液完全凝固后再离心。
如不能当日测定, 也不要放冰箱内保存过久 (3 d之内可保存于4~8℃冰箱中) , 因为血清中Ig G可聚合成多聚体, 可造成假阳性。此外, 标本在冰箱内放置过久, 抗原免疫活性会减弱, 可使弱阳性标本造成假阴性[1]。取出后的标本应在37℃下放置10 min后再进行操作, 最好使用负压胶管抽血, 血液用后便于存放, 避免溶血。
2 离心机转数和离心时间
用不同的转速和时间对同一批标本进行离心, 再用ELISA法检测乙肝表面抗原, 发现同一批标本, 通过增加标本的离心时间和提高离心速度, 假阳性结果明显降低。
3 标本及试剂的加样量不准确
必须使用经过鉴定和校准的加样器, 加样量要准确, 酶免分析仪都处于正常状态, 避免出现抗原或抗体过量现象。手工操作中加样板前后标本间隔时间不宜过长, 操作应熟练或分批操作。
4 温度
试剂盒在使用前平衡至室温, 标本加酶反应后, 要严格掌控孵育温度 (37℃恒温) 及孵育时间。
5 洗板不彻底
5.1 洗涤液的配制浓度、洗板的次数是否按规定严格执行。
5.2 血浆中纤维蛋白原和酶结合物一起易黏附到ELISA检测板上不易洗掉, 可造成假阳性。免疫球蛋白聚合物、免疫复合物易吸附于塑料表面, 可造成非特异性吸附, 也可导致假阳性。血清中的细胞成分中含有过氧化物酶成分, 产生辣根过氧化物酶样作用, 当离心不充分的血清、血浆标本加样于反应板孔时, 细胞成分黏附于酶标板而不能洗去, 会产生酶促反应而呈现阳性显色, 导致出现一些假阳性。
5.3 若用洗板机洗板要按规定设置好程序, 要注意洗涤液的量是否充足, 检测是否有堵孔现象发生, 要做好洗板机的维护。
5.4 花板是我们大家都曾经遇到过的问题, 在排除患者自身血液成分因素外, 加酶时的迸溅、洗板的不彻底, 都可造成花板, 导致结果难以判断。
6 显色时间及温度
应严格按操作规程进行避光显色和孵育。
7 加终止液
加终止液时避免产生气泡, 保证酶标板清洁。结果判断须在10 min内完成, 以免出现孔内结晶, 影响酶标仪的测试。
操作者要有高度的责任心, 做好操作前的校对工作, 熟练掌握操作的规程及该方法的操作注意事项。在确保试剂的质量及有效期的同时, 对于复查后的异常结果应重新采集标本再予复查。要想保证结果的可信, 则必须在整个实验过程中加入外部质控血清进行严格的质量控制。
参考文献
乙肝表面抗原 篇9
关键词：乙肝病毒表面抗原 (HBsAg) ,定性试验检测系统方法学,性能验证
在临床实验室中, 乙肝病毒表面抗原 (HBsAg) 定性试验可用于筛查、诊断、确认、或监测为目的的测定。试验的敏感性、特异性、预测值和效率等决定了其在临床应用的范围。从临床应用的角度来看, 定性实验可分为筛查实验、诊断实验和确认实验。要求检验方法有较高的敏感性, 以保证不漏掉真阳性结果。故此, 我们在申报IS0 15189认可该项目时, 对HBsAg的定性试验检测系统 (方法学性能) 进行了验证和评价, 现报告如下。
1 材料与方法
1.1 检测系统
美国伯乐 (BIO-RAD) 680型酶标仪, 试剂、质控品及耗材等。
1.2 评价材料
购买卫生部临检中心指定的低浓度质控血清, 卫生部临床检验中心的室间质量评价标本, 北京万泰生物药业有限公司的HBsAg试剂、深圳丽珠公司的HBsAg中和试验的试剂。
1.3 操作人员
经科主任进行岗位授权的技术人员。
1.4 方法
1.4.1 校验
请厂家工程师对酶标仪的滤光片、读板速度、温度控制系统, 操作系统菜单进行校验。使仪器各项功能使用均正常, 符合国家ZB/BIO-R 003-2001的相关技术标准要求。
1.4.2 精密度试验
购买卫生部临检中心指定的低浓度弱阳性质控血清, 进行日间重复性试验, 重复测定20天次, 分别计算定性试验的A值、s/co均值、s和CV值。评价方案按照文献[1-2]进行。
1.4.3 阳性和阴性符合率
以2008年1年3次的卫生部临床检验中心的感染性疾病血清标志物A的EQA标本为材料, HBsAg以酶联免疫吸附试验 (ELISA) 为初筛结果, 以中和试验的结果为最终结果;对初筛结果和最终结果相比较, 可计算阳性、阴性符合率。
1.4.4 临界值判定
在临界值基础上准备出-20%浓度的样本和+20%浓度的样本, 分别测定20次, 记录阴性及阳性结果数之间的样本浓度范围。
2 分析性能验证标准
2.1 精密度验证标准
若不精密度在规定的允许范围内, 精密度性能符合要求。
2.2 阴、阳性符合率验证标准
若检测结果和最终结果相比较一致, 则视为验证的检测系统阳性符合率性能符合要求。
2.3 临界值验证标准
在临界值基础上, 准备出-20%浓度的样本和+20%浓度的样本;对以上低、高浓度样本分别测定20次, 记录阴性及阳性结果数。厂家给定的HBsAg的临界值为0.5U/ml。HBsAg“+20%”临界值浓度的血清制备:0.6U/ml (6ml的1U/mlHBsAg质控血清+4ml的阴性对照血请) 。“-20%”临界值HBsAg浓度的血清制备:0.4U/ml (4ml的1U/mlHBsAg质控血清+6ml的阴性对照血清) 。对于+20%、-20%临界值浓度的血清分别检测20次, 用酶标仪测定其A值, 根据试剂盒给的cut-off值判别阴性和阳性, 并记录。
3 结果的判定
3.1 精密度
具体验证结果详见各检测系统的检定校准验证报告书。检验项目的不精密度均小于规定的允许范围, 表明验证的检测系统精密度性能符合要求, 重复性好。
3.2 阳性符合率
检测结果和最终结果相比较一致, 则视为验证的检测系统阳性符合率为100%, 性能符合要求。
3.3 阴性符合率
检测结果和最终结果相比较一致, 则视为验证的检测系统阴性符合率为100%, 性能符合要求。
3.4 临界值
-20%浓度的样本的结果≤95%结果是阴性:+20%浓度的样本的结果≥95%结果是阳性, 说明试剂生产厂家提供的检测项目临界值大致可靠的。
4 结果与讨论
HBsAg的定性试验常用于鉴别人体是否感染了乙肝病毒, 以及对乙型肝炎的治疗效果进行判定的常用指标之一。厂家提供了其精密度、灵敏度、阴阳特异性等指标, 但是, 这些参数都是厂家在最佳条件下完成的, 并不是强制达到的性能指标, 每个实验室应按照各自的检测系统进行评价或建立方法学性能参数。
精密度是检验项目测定中最基本的性能指标, 实际工作中, 对定量试验研究得较多, 而定性试验研究得较少, 由于多种原因, 其精密度的CV值变化较大, 是ELISA检测的难点之一, 一般要求, 临床免疫学室内控制CV的控制规定:纳克 (ng) 级可接受的CV在30%[3]。我们检测的各个项目精密度的CV值均≤30%, 达到其最低要求。
对于定性试验, 只能使用阴性、阳性符合率来说明结果的准确程度, 我们使用参加2008年卫生部临床检验中心每年3次的感染性疾病血清标志物A的室间质评标本作为阴性、阳性符合率的标准, 每次的5个标本的HBsAg结果均与给定的结果相符合, 符合率为100%。
实验结果处于 (阴、阳性) 分界点时的样本中分析物浓度值为临界值, 低于此值, 定性实验的结果为阴性;高于此值, 定性实验的结果为阳性。对定性实验来讲, 临界值是唯一的医学决定水平, 当样本中被测物浓度处于临界水平时, 定性实验重复检查同一样本, 将产生50%的阳性结果和50%的阴性结果。定性试验临界值的高低直接关系到试验的成败, 我实验室HBsAg定性试验的临界值为0.55U/ml。HBsAg与厂家给定的临界值 (是0.5U/ml) 接近。所以每个实验室根据自身检测系统的条件特点, 建立自己的检测项目参数是十分必要的。
综上所述, 通过分析建立HBsAg定性实验的方法学参数, 使我们的检测工作更加科学、合理。
参考文献
[1]冯仁丰.临床检验质量管理技术基础.上海:上海科学技术文献出版社, 2007:76-226.
[2]CLSI.EP6-A2, evaluation of the linearity of quantative analytical meth-ods, 2003:1-47.
乙肝表面抗原 篇10
1 ELISA法的优点
较高的灵敏性。测定法最高的灵敏度其实是报告集团中的酶所起的作用。酶是一种常用的有机催化剂, 即使很少量的酶也能诱导很多的催化反应, 就会有一些明显的可以观察的现象产生, 主要是显色反应。所以, 在该体系很多时候被叫做酶的放大体系。所以, ELISA检测法在亚细胞或细胞水平上, 实现了示踪抗原以及抗体所在的部位, 可以对其进行定量, 如微克、纳克。
较强的特异性。特异性其实是抗体以及抗原的选择上。抗原与抗体进行结合, 实际上, 只是在抗原中的抗原决定簇和抗体中的抗原结合位点间进行结合。因为二者化学结构以及空间构型是属于互补关系, 致使抗原抗体的反应有较强的特异性。
2 ELISA法的检测2.1材料和方法
2.1.1材料:
某医院临床患者标本200份。
2.1.2试剂与仪器:
试剂采用的是上海实业科华公司生产的HBsAgELISA试剂盒。仪器是美国宝特ELX-50型生产的全自动洗板机, 美国生产的宝特ELX-800型全自动酶标测定仪, 北京生产的LDZ5-2离心机。
3 方法
对200例患者进行静脉血的抽取, 抽取血清标本进行离心。离心后, 严格按HBsAg的SOP进行检测的要求检测。在离心的过程中要经历4个程度, 转速1000rpm, 时间5 min;转速2000rpm, 时间5 min;转速3000rpm, 时间15min;转速3000rpm, 时间30min。
4 结果
200例标本的检测结果, 统计值P<0.05, 具有统计学意义。
5 讨论
ELISA检测会受到很多的影响因素, 比如血细胞[3]、检测时间、洗板方式[4]、加样量、血清分离等。通过200份标本的检测结果进行分析和比较后发现, 试剂的空白、阴阳性的对照、室内的质控孔OD值都处于正常范围, 血液的标本孔OD值却出现了异常情况, 仔细分析后发现, 原因是出在了标本离心时和放置血液的时间上。
在对标本进行留取检验之前, 采用金标试剂进行检测, 其检测结果皆为阴性, 运用ELISA法对HBsAg进行检测的过程中, 所有标本阳性率理论上不应很高[3]。在临床应用中, 通过对标本的离心时间进行增加, 对离心速度进行改进, 就解决了很多影响临床应用的关键问题。
在对标本进行彻底离心后, 分离不会溶血, 这样就能得到较为准确的结果。这样也说明, 对标本进行离心处理, 好或者坏都直接影响着临床的准确性。
同时, 运用ELISA法对血标本进行检测, 影响结果的最主要原因如下[4]: (1) 血清里所有的补体都能和IgG中的Fc段相结合, 这是假阳性产生的原因之一。 (2) 血浆里的纤维蛋白原与酶的结合物, 混在一起后最容易粘附在ELISA的检测板上, 并且难于洗掉, 这是假阳性产生的原因之二。 (3) 血清里如果有类似的风湿因子 (RF) , 其能够和抗体相结合, 这是假阳性产生的原因之三。 (4) 免疫球蛋白聚合物、免疫复合物易吸附于塑料表面, 可造成非特异性吸附, 导致假阳性。为了避免ELISA试剂“检测时假阳性的出现”, 为了降低检测的假阳性率, 取得准确的结果,
6 ELISA法的临床应用
(1) 试剂盒使用前, 要平衡与室温相同。 (2) 检测时尽量用抗凝血的标本。 (3) 溶血的标本要重新抽血[1,2]。 (4) 冬天抽血后, 放置于温水中2h, 待凝块收缩后再检测。 (5) 检测离心标本之前, 离心速度加大至 (3000 rpm) , 离心时间增加15 min, 让红细胞与纤维蛋白能够完全地沉淀、以至离心完全。 (6) 放置标本10 h后检测好, 血凝块可很好地收缩, 标本里的非特异性活性物质能够部分或全部地失活, 降低了非特异性反应, 这样会需时间长。但这样能降低ELISA法检测的假阳性率, 增强临床效果。
参考文献
[1]黄秋芳, 王微, 李永.ELISA检测HBsAg复检结果的分析[J].检验医学, 2004, 19 (4) :603.
[2]陈传德, 冷霜.ELISA一步法检测HBsAg影响因素分析[J].中国卫生检验杂志, 2003, 13 (3) :853.
[3]施纪文, 徐简华, 温惠萍.ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原的比较[J].现代检验医学杂志, 2005, 20 (5) :48-49.
