黄芪多糖注射液（精选八篇）
黄芪多糖注射液 篇1
一、国内外黄芪多糖提取技术发展现状
目前, 国内外黄芪多糖的提取方法有很多, 主要有水提取法、碱水提取法、微波提取法、醇碱提取法、超细粉碎提取法、超滤法等, 这些提取方法各有优劣, 主要技术方法如下。
1. 水提法。
具有工艺简单、易于操作的特点, 是目前比较常用的方法。但是产品纯度低, 易变质, 在长时间煎煮情况下能源消耗严重, 对提取物的选择性差, 不易于后续处理, 多糖收率较低。
2. 碱水提取法。
该工艺多糖的收率可达到水提法的2倍以上, 产品纯度相对较高, 产品稳定性较好。但是滤液不易过滤和浓缩, 黄芪多糖的高级结构及组分变化及其对生物活性产生的影响存在不确定性, 这种方法在实际中较少应用。
3. 微波提取法。
目前这种方法理论研究较多, 虽然多糖收率高于碱水提取, 但是设备可操作性差, 对提取物的选择性差, 产品纯度低, 易变质, 不易于后续处理。
4. 醇碱提取法。
这是一种基本实现产业化的方法, 产品纯度相对较高, 产品稳定性较好, 较水提法和碱水提取法, 多糖的提取率高, 长时间煎煮时, 能源消耗较严重, 同时生产的废水需经过处理, 从而增加了能源消耗, 对生产设备的要求较高。
5. 超细粉碎提取法。
超细粉碎提取法与水煮法和碱提取法相比, 多糖含量最高、最纯, 缺点是后续提取、药渣处理比较复杂, 与水煮醇沉法相比提取的多糖粗提物得量、收得率低, 在实际应用中也比较少。
鉴于以上各类提取方法存在的局限性, 本文, 笔者主要针对兽用黄芪多糖注射液新型提取技术——酶提取法进行研究, 利用酶解技术减少提取时间、降低提取温度, 增加提取物中有效成分含量, 使产品有效成分含量高且质量稳定, 对环境无污染。
二、酶提取法工艺技术原理
近年来对黄芪多糖的抗病毒性能研究较多, 采用黄芪多糖注射液生产的关键是确保黄芪多糖的提取和纯化、产品质量的稳定性及有效成分的保留。该技术利用酶具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特性。根据酶的这些特性, 在提取工艺中加入纤维素酶、果胶酶和蛋白酶, 分别对纤维素、果胶和蛋白进行分解, 可提高有效成分收率, 提高中药材的使用度, 使中药材细胞壁破壁, 使果胶、蛋白等不稳定的成分得到有效分解沉淀, 并且它们均为蛋白质, 能在下一步的絮凝澄清中除去。技术难点在于纤维素酶、蛋白酶、果胶酶和壳聚糖絮凝的加入量和加入条件的确定, 以及运用新工艺从整体上提高中药注射液的制剂水平, 从而确保中药制剂质量与疗效的稳定。
三、酶提取法工艺条件分析
1. 纤维素酶的加入量及条件的确定。
(1) 纤维素酶不同加入量对成分提取的影响。处方量各味中药加10倍水量, 分别加入0.25%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%的纤维素酶并加热至50℃, 保温6.5 h, 加热煮两次, 第二次加5倍水量, 合并两次煎液, 浓缩到与原药材比例约为1∶1.5时, 冷却至40℃左右, 加入果胶酶和蛋白酶量为药液体积的4%, 放置10 h;将上述煎液加热煮沸30 min, 加入两倍体积的纯化水, 加热至80℃左右, 再加1%壳聚糖醋酸溶液为药液体积的10%, 搅拌, 放置10h, 倒出上清液, 调节酸碱度, 过滤, 浓缩, 灭菌, 灌装, 测黄芪甲苷含量, 确定最佳纤维素酶加入量。
(2) 温度对纤维素酶的影响。处方量各味中药加15倍量水, 分别于35℃, 45℃, 55℃, 65℃, 75℃加入纤维素酶1%, 保温5 h, 加热煎煮两次, 第二次加5倍量水, 合并两次煎液, 煎液浓缩至与原药材比例约为1∶1.5时, 冷却至40℃左右, 加入蛋白酶和果胶酶量为药液体积的3%, 放置10 h;将上述煎液加热煮沸30 min, 加入2倍体积的纯化水, 加热至80℃左右, 加入1%壳聚糖醋酸溶液为药液体积的10%, 搅拌, 放置10 h, 倒出上清液, 调节酸碱度, 测黄芪甲苷含量, 确定最佳纤维素酶加入温度。
(3) 保温时间对纤维素酶的影响。处方量各味中药加15倍量水, 加入1%的纤维素酶加热至50℃左右, 分别保温2 h, 4 h, 6h, 8 h, 10 h, 加热煎煮两次, 第二次加5倍量水, 合并两次煎液, 煎液浓缩至与原药材比例约为1∶1.5时, 冷却至40℃左右, 加入蛋白酶和果胶酶量为药液体积的3%, 放置10 h;将上述煎液加热煮沸30 min, 加入2倍体积的纯化水, 加热至80℃左右, 加入1%壳聚糖醋酸溶液为药液体积的10%, 搅拌, 放置10 h, 倒出上清液, 调节酸碱度, 测黄芪甲苷含量, 确定最佳加入纤维素酶保温时间。
2. 蛋白酶、果胶酶的加入量及条件。
(1) 蛋白酶、果胶酶加入量对酶解的影响。加入2%, 3%, 4%, 5%, 6%的果胶酶、蛋白酶, 在室温下搅拌, 静止10 h后过滤, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳果胶酶、蛋白酶加入量。
(2) 不同放置时间对果胶酶、淀粉酶酶解的影响。加入5%淀粉酶、果胶酶, 分别在3 h, 6 h, 9 h, 12 h, 15 h下放置, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳酶解放置时间。
(3) 不同温度对蛋白酶、果胶酶酶解的影响。分别在30℃, 40℃, 50℃, 60℃, 70℃下搅拌, 放置10h后过滤, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳酶解温度。
3. 壳聚糖絮凝条件的确定。
(1) 不同絮凝剂浓度对絮凝效果的影响。在pH值自然的条件下, 加入壳聚糖醋酸溶液, 使浓度分别为200 mg/L, 400 mg/L, 600 mg/L, 800 mg/L, 1 000 mg/L在室温下搅拌, 静止30 min后过滤, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳絮凝剂浓度。
(2) 不同pH值对絮凝效果的影响。用NaOH和HCL将提取液液分别调成3, 4, 5, 6, 7, 加入絮凝剂, 在室温下搅拌, 静止40min后, 过滤, 取上清液稀释, 测OD值, 确定最佳絮凝效果p H值。
(3) 不同搅拌时间对絮凝效果的影响。分别在1 min, 5 min, 10 min, 15 min, 20 min下搅拌, 静止40 min后过滤, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳搅拌时间。
(4) 不同温度对絮凝效果的影响。分别在25℃, 30℃, 35℃, 40℃下搅拌, 静止40 min后过滤, 取上清液稀释测OD值, 确定最佳搅拌温度。
四、技术指标
1. 性状。黄色或黄褐色液体, 长久储存或冷冻后有析出。
2. pH值。为5.0~7.0。
3. 生物活性。给药组与对照组平均脾指数的差值应≥1。
4. 异常毒性。按规定供试小鼠, 经静脉注射、皮下注射、腹腔注射、口服给药, 48 h没有死亡。
5. 含量。含黄芪多糖以葡萄糖 (C6H12O4) 计, 为标示量的90.0%~110.0%。
五、工艺特点
1. 采用纤维素酶作为辅助提取材料。
兽用黄芪多糖注射液项目为中兽药制剂, 它所含中药材有效成分多。中药材主要生物活性成分主要存在于细胞内, 小部分在细胞间隙中, 细胞内的活性成分溶出具有一定的难度。目前, 单纯水提工艺所提出的有效成分有限, 使用纤维素酶辅助提取, 利用酶所具有的催化活性和专一性的特点, 使细胞壁的成分水解, 从而使细胞内有效成分更有效地从中药材中提取出来。
2. 加入果胶酶、蛋白酶。
采用先进的提取工艺, 确保中药注射液的制剂水平大大提高, 进而保证中药制剂质量与疗效的稳定性。中药制剂中的杂质大多为蛋白质、果胶等成分, 在新的提取工艺中可应用相应的酶予以分解除去。同时, 针对中药中含有难溶于水或不溶于水及脂溶性成分较多, 通过加入酶, 使这些有效成分转移到水溶性苷糖中。
3. 引入壳聚糖作为絮凝剂, 效果独特。
黄芪多糖提取纯化工艺研究进展 篇2
关键词：黄芪多糖；提取；纯化；工艺
中图分类号：R932 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2016）09-0039-03
黄芪为豆科植物蒙古黄芪（Astragalus menmbranaceus （ Fisch.）Bge var. mongholicus Hsiao、膜荚黄茛Astragalus membranaceus （ Fisch.）Bge.的干燥根，性温，味甘，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿和托疮生肌之攻效。黄芪多糖是从黄芪中提取的一种生物活性成分，具有增加机体免疫力、降血糖、抗氧化、抗衰老等生物活性。目前，国内对黄芪甲苷的提取、分离纯化工艺进行了大量研究，在查阅收集大量文献的基础上，综述近几年来黄芪多糖的提取、分离纯化工艺研究进展，为未来研究提供参考。
1 黄芪多糖提取工艺
目前，黄芪多糖的提取方法主要有水提取法、碱醇提取法、超声波提取法、微波提取法等。
1.1 水提醇沉法
黄芪多糖的提取一般采用水提醇沉法，该法工艺简单，但收率和含量都较低。李金芳采用正交试验对水提醇沉法提取黄芪多糖的提取条件进行优化。采用蒽酮-硫酸法测定黄芪多糖含量，确定黄芪多糖提取的最佳工艺为：提取时间45 min、提取温度100 ℃、料液比1‥10、提取次数3次，提取率为10.35%。崔红花等以粗多糖提取率和葡萄糖计总多糖得率为指标，通过单因素及L9（34）正交试验（温度、时间、次数和固液比）考察黄芪中黄芪多糖的水提取工艺，再用单因素试验考察黄芪多糖的醇沉工艺条件（乙醇浓度、醇沉时间），确定的最佳水提取工艺条件为：在70 ℃恒温中回流提取3次，每次提取3 h，加纯化水量40 mL；醇沉条件为：加95%乙醇至终浓度90%进行醇沉静置4 h，收集沉淀物。
1.2 碱醇提取工艺
黄芪多糖是极性大分子化合物，作为黄芪纤维质的组成部分，其提取收率取决于黄芪纤维质的溶胀作用和溶解性，而纤维在碱中的溶胀作用和溶解性均显著增加。在碱性条件下，纤维之间的酯键易断裂发生剥皮反应，使更多的多糖得以游离并被提取出来，同时醇的渗透作用增强。在碱与醇的共同作用下，多糖渗透率增加，多糖残留量降低，多糖收率提高。金芬芬等考察不同提取方法（水提醇沉法、醇提后水提法、碱水提取法、碱醇提取法）对黄芪多糖含量的影响，结果表明：碱醇提取法的提取率为9.74%，碱水提取法的提取率为7.64%，醇提后水提法的提取率为3.62%，水提醇沉法的提取率为2.81%；碱醇提取法的提取率最高，其次是碱水提取法和醇提后水提法，水提醇沉法提取率最低。
1.3 超声波提取
超声波辅助提取是在水浸提的同时加超声波辅助，提取时间短，提高提取率，避免高温对有效成分的影响。李晓芳等采用响应面法对主要工艺参数进行优化，优化得到的提取工艺为：超声功率600 W，提取时间45 min和料液比35‥1，黄芪多糖得率3.034%。李利红等以蒙古黄芪为材料，采用正交设计对循环超声辅助法提取黄芪多糖的工艺进行优化，确定各因素对黄芪多糖提取率的影响大小依次是：提取时间>超声时间/间隙时间>超声波功率；最佳提取工艺为：提取时间40 min、提取功率1 000 W、超声时间/间隙时间比值1/1；在优化后的最佳工艺参数下，多糖提取率最高可达11.44%，比传统煎煮方法高3.38%。陈寿妮采用4因素3水平正交试验得到的最优提取工艺为：超声波功率300 W，提取温度50 ℃，材料比1∶30，提取次数4次。
1.4 微波提取
微波提取是在水浸提的同时加入微波，与传统的水浸提法相比，微波辅助提取具有选择性高、操作时间短、溶剂消耗小、有效成分收率高等特点。
周桃英等对黄芪多糖进行微波辅助提取，采用单因素试验及正交试验优化提取工艺，探讨料水质量比、微波功率、微波处理时间、pH对黄芪多糖提取率的影响，结果表明，最佳工艺条件是料水质量比1‥15、微波功率450 W、微波处理时间90 s、pH 8.5。
陈玉霞等采用水提醇沉法、微波提取法提取黄芪多糖，试验结果表明：水提醇沉法的黄芪多糖提取率为4.468%，含量29.40%；微波提取法的黄芪多糖提取率为4.502%，含量31.25%；微波提取法具有省时、高效、节能等优点，在提高黄芪多糖产率和有效缩短提取时间等方面优于传统的水提醇沉法，是获得较高黄芪多糖提取率及含量的方法。
1.5 纤维素酶解提取法
纤维素是黄芪细胞壁的主要成分，亦是胞内多糖等大分子溶出的主要屏障，利用纤维素酶水解细胞壁及胞内成分溶出，增加提取率，但此方面研究较少，提取物药效需进一步研究验证。
张嘉怡等考察水提温度、水提时间、水提次数、料液比4个单因素对黄芪多糖提取率的影响，在单因素试验的基础上，选择4因素3水平正交试验优化工艺参数，结果表明，蒙古黄芪用纤维素酶解预处理后，水提温度对黄芪多糖提取率影响显著，其次是料液比和水提次数，水提时间影响较小；在料液比1‥12、水提温度100 ℃、水提时间1.5 h、水提3次条件下，黄芪多糖提取率达4.76%，比传统水提法（3.09%）提高54.05%。康家胜的研究结果表明，纤维素酶不降解APS，仅破坏黄芪粉末中的纤维素，提高细胞通透性，减小内扩散阻力，从而有利于APS提取。
1.6 其他提取方法
除以上常用的提取方法外，还有很多研究采用其它提取技术，如超声-微波协同提取、超声联合酶法提取、沸水冲泡法提取、发酵提取等，均取得了较好的提取效果。
2 黄芪多糖纯化
nlc202309081457
黄芪多糖提取物内含有色素、蛋白质等杂质，在做进一步研究前需将这些杂质除去。牟魯霞等以多糖损失率、蛋白脱除率、色素脱除率结合可见光区光谱曲线下面积为测定指标，考察不同方法除蛋白、脱色素的效果及对黄芪多糖含量的影响，结果表明：去除蛋白采用胃蛋白酶结合Sevage法，脱色素采用DE52，两法合用是去除蛋白和脱色素的最佳精制工艺。焦光联等以截留分子量为200 kDa1、0 kDa的超滤膜对黄芪多糖进行超滤分离，考察压力、温度、流速、初始料液浓度等对超滤提取的影响，确定最佳超滤提取条件为：初始料液浓度20 g/L、压力0.35 MPa、温度30 ℃、进料流速0.467 L/s，此条件下多糖含量由36.0%提高到86.8%，有效实现了活性多糖与大分子蛋白多酚等物质的分离。
邱本军将黄芪多糖粗提液经过去蛋白、去色素、DEAE-纤维素离子层析柱、透析，最终得到两种黄芪多糖——APS Ⅰ和APS Ⅱ，纯度分别为93.4%和91.6%。冯俊采用醇沉淀法纯化多糖水提液并得到醇沉工艺：溶液浓缩到1 g生药/mL，醇沉3 h，醇沉2次，乙醇添加至浓度达到80%。杂质去除率平均达到48.12%，多糖保留率平均达到82.29%。对比后选择木瓜酶处理多糖溶液，酶法除蛋白最佳工艺为：溶液pH值调节到5，酶用量5%，在50 ℃的恒温下酶解3 h，蛋白质清除率和多糖损失率分别为88.04%，12.56%。酶法处理后用Savage试剂处理1次，蛋白质清除率更高，去除率达到91.20%，多糖损失率14.45%。
3 结语
传统水提醇沉、碱醇提取等提取工艺的黄芪多糖提取率低，并且存在提取温度高、时间长等缺点。而微波辅助提取、超声提取、超临界二氧化碳提取、纤维素酶解提取等新技术在提高黄芪多糖提取率、缩短提取时间等方面起到了重要作用。因此，开展黄芪多糖的提取、分离纯化等方面的研究，对黄芪多煻的进一步开发利用具有重要意义。
参考文献
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黄芪多糖注射液 篇3
1 黄芪多糖的成分
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。近年来的研究发现黄芪中含多糖、皂甙、黄酮、氨基酸等多种有效成分, 这些活性成分均有促进抗体生成和免疫反应的作用, 其中以对黄芪多糖的研究报道为多。黄芪多糖是黄芪的主要活性成分之一, 经过高科技萃取、分离而得到的。
2 了解黄芪多糖的药理作用
2.1 抗病毒作用
是一种干扰素诱导剂, 其抗病毒原理是刺激巨噬细胞和T细胞的功能, 使E环形成细胞数增加, 诱生细胞因子, 促进白细胞介素产生, 而使动物机体产生内源性干扰素, 从而达到抗病毒的目的。
2.2 抗细菌作用
抗菌作用机制是多方面的, 一方面是药物对细菌及其毒性产物的直接抑杀和解毒作用, 另一方面更主要的是通过调动机体免疫防功能而发挥扶正、祛邪、抑菌、杀菌作用。
2.3 治疗心肌炎
黄芪提取物中的黄芪甲苷可以扩张血管和冠脉、清除自由基、治疗病毒引起的继发性心肌炎。
3 黄芪多糖在畜禽保健中的应用
3.1 增强疫苗免疫力的应用
黄芪多糖除本身具有增强机体免疫力外, 还使疫菌苗的免疫力增强, 并且对疫菌苗具有很好的保护效果, 中国农业科学院中兽医研究确认黄芪煎剂作为口蹄疫疫苗佐剂, 保护率提高20%。畜禽在做疫苗防疫时应配合使用黄芪多糖, 做为疫苗保护剂与增效剂, 使疫苗作用效价提升快, 效价水平高, 且群体效价水平整齐。
3.2 对肝脏的作用
可以促进肝细胞、DNA、RNA合成, 减轻肝毒性物质引起的病变, 增强肝脏解毒功能, 对肝细胞起保护作用。
3.3 对肾脏作用
可以改善肾细胞代谢和肾功能, 降低血肌酐水平, 对肾病综合征, 急性肾功能衰竭, 肾肿大尿酸盐沉积等症均有良好放治效果, 调节免疫功能同时起到健肾的目的, 有利于畜禽的生长繁育功能。
3.4 抗衰的作用
黄芪多糖具有稳定细胞、抗衰老、抗自由基和抗氧化的作用, 长期定期使用, 可明显提高种畜禽的使用寿命和使用效率。
3.5 抗肿瘤的作用
黄芪多糖抗肿瘤, 可改善机体肿瘤而致的免疫功能低下, 促进免疫细胞活化释放内源因子, 防止过氧化作用从而造成对肿瘤细胞的杀伤。
综合上述, 如果不了解黄芪多糖的性能、功效等, 就会在临床应用中走人误区: (1) 不能正确选择正规药厂的产品, 喜欢使用价格低廉的, 导致使用伪劣产品; (2) 畜禽发病后将黄芪多糖作为抗病毒药使用, 导致其不能发挥功效, 延误疫病的最佳治疗时间; (3) 不注意使用黄芪多糖的阶段, 长期低剂量的使用, 反而起不到应有的作用, 并且用药成本增加。所以, 黄芪多糖不能直接杀灭病原微生物, 当畜禽发生疫病时, 黄芪多糖应与抗菌药或抗病毒药物联合应用, 才能更好的发挥黄芪多糖应有的作用。
黄芪杂多糖的小肠吸收机制研究 篇4
1 材料与方法
1.1 材料
试验动物: Wistar大鼠, 体重250～300 g, 由山西医科大学实验动物中心提供。
黄芪杂多糖:由山西农业大学普通病实验室提取精制, 呈乳白色粉末, 分子质量为1.1×104 u, 纯度为97.16 %。
1.2 方法
1.2.1 大鼠外翻肠囊模型的制作
参照参考文献[3,4]中的方法。
1.2.2 测定项目
(1) 吸收部位对AHPS吸收的影响:
分别取十二指肠 (自幽门1 cm处开始) 、空肠 (离幽门15 cm处开始) 、回肠 (离盲肠20 cm处开始) 建立大鼠外翻肠囊模型, 向肠囊内加入浓度为0.3 mg/mL的AHPS溶液, 吸收时间为1 h, 测定肠囊中AHPS的浓度并计算药物的吸收率。
(2) 吸收时间和给药浓度对AHPS吸收的影响:
用小肠缓冲液配制浓度为0.03, 0.06, 0.30, 0.60 mg/mL的AHPS溶液进行吸收试验, 分别在30, 45, 60, 75, 90, 105, 120分钟取样, 计算各个时间段的累计药物吸收量和吸收率, 考察吸收时间和给药浓度对AHPS吸收的影响。
(3) pH值对AHPS吸收的影响:
分别用pH值为5.0, 6.8, 7.4的小肠缓冲液配制浓度为0.30 mg/mL的AHPS溶液进行吸收试验, 吸收时间为1 h, 计算累计吸收量和吸收率, 考察pH值对AHPS吸收的影响。
(4) 吸收促进剂对AHPS吸收的影响:
配制浓度为0.30 mg/mL的AHPS溶液 (作为空白溶液) , 分别加入0.5%的牛磺胆酸钠、0.5%的十二烷基硫酸钠、0.5%的吐温80, 吸收1 h, 测定AHPS吸收量, 每次试验后测量肠囊的表面积, 计算表观渗透系数以比较不同吸收促进剂对AHPS的促吸收作用。
1.3 统计学分析
采用SPSS 10.0 统计软件对试验结果进行分析。
2 结果与分析
2.1 不同吸收部位对AHPS吸收的影响
给药浓度为0.30 mg/mL, 吸收时间为1 h, AHPS在各吸收部位的吸收情况见表1。
由表1可知, 回肠、空肠和十二指肠之间的药物吸收率没有明显差异, AHPS在小肠的整个肠段均有吸收, 各肠段1 h内的吸收量也无明显差异。
2.2 给药浓度和吸收时间对AHPS吸收的影响
分别用浓度为0.03, 0.06, 0.30, 0.60 mg/mL的AHPS溶液进行吸收试验, 每隔15 min将肠囊内液体全部取出并补充新鲜的无糖台式液, 用硫酸-蒽酮法测定AHPS浓度。根据不同时间点所取样品的含药量分别计算各时间段的累计药物吸收量和吸收率, 结果见图1和图2。
由图1、图2可知, AHPS的累计吸收量随着时间的延长呈增加趋势, 在各时间段累计吸收量随着给药浓度的增加而增加, 但是当AHPS浓度由0.30 mg/mL增加到0.60 mg/mL时累计吸收量增加缓慢。同时AHPS吸收率也随着时间的延长呈增加的趋势, 并且给药浓度越低药物的吸收率越大, 在给药浓度为0.03 mg/mL、吸收时间为60分钟时, 药物的平均吸收率可达到72.33 %。可见AHPS是顺浓度梯度转运的, 而且在转运过程中有饱和现象。AHPS不是通过单纯方式扩散透过小肠上皮, 可能是通过小肠细胞转运。
2.3 pH值对AHPS吸收的影响
5 cm长的大鼠肠囊在不同pH值的0.30 mg/mL AHPS溶液中吸收1 h, 累计吸收浓度和吸收率见图3、图4。
由图3、图4可知, pH值对AHPS的吸收有影响, 在pH值为6.8时AHPS的吸收最好, 证明AHPS的吸收是pH值依赖的。
2.4 不同吸收促进剂对AHPS吸收的影响 (见表2)
由表2可知, 不同吸收促进剂对AHPS均有吸收促进作用。牛磺胆酸钠、十二烷基硫酸钠和吐温80对AHPS都具有促进吸收的作用。通过比较各吸收促进剂渗透系数可以发现吐温80和十二烷基硫酸钠对AHPS有较强的促进吸收作用。
3 讨论
试验首次采用大鼠翻转肠囊法考察AHPS的小肠吸收情况。研究发现:AHPS在小肠的吸收没有部位专属性;在15～120 min, 随着吸收时间的增加, AHPS的累计吸收量呈增加趋势;给药浓度从0.03 mg/mL到0.06 mg/mL, AHPS的累计吸收量增加较快, 给药浓度由0.30 mg/mL到0.60 mg/mL, AHPS的累计吸收量增加较为平缓;而AHPS的吸收率随着给药浓度的增加而降低, 吸收过程存在饱和现象;AHPS在小肠的吸收受pH值影响, 其中pH值为6.8时吸收最好。吸收促进剂牛磺胆酸钠、十二烷基硫酸钠和吐温80对AHPS都具有明显的促进吸收作用。结合药物在小肠中各种吸收方式的特点, 可以推测AHPS在小肠中主要是通过小肠细胞转运的。吸收促进剂通过改变小肠细胞膜的流动性促进AHPS的吸收。但此次试验属于急性离体试验, 外翻肠囊法作为一种离体药物吸收的模型, 肠管的状态与动物体内情况有很大的不同, 清洗步骤在去除肠内容物的同时很可能降低了肠内多种酶系的活力, 外翻的过程也可能对肠管的组织结构造成一定的影响, 因此AHPS在体内的吸收情况可能与此次试验有一定的差异。
参考文献
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黄芪多糖三种提取工艺比较 篇5
1 仪器、材料与试剂
1.1 仪器
电子天平 (FA2004N, 上海恒平科学仪器有限公司) , 紫外可见分光光度计 (Spectrukgab54, 上海棱光技术有限公司) , 超声波清洗器 (KQ-500E型, 昆山市超声仪器有限公司) , 超速离心机 (LXJ-ⅡB型, 上海安亭科学仪器厂) , 循环水式多用真空泵 (SHB-Ⅲ, 郑州长城科工货有限公司) 。
1.2 材料
黄芪 (Radix Astragali Bunge) 产地:内蒙古, 购于佳木斯金天药店。D101型大孔吸附树脂, 购于天津市汇达化工有限公司。薄层色谱硅胶预制板 (SG100X50, 烟台市化学工业研究所) 。
1.3 试剂
蒸馏水 (实验室自制) , 氢氧化钠 (分析纯, 哈尔滨市新达化工厂) , 95%乙醇 (分析纯, 沈阳市华东试剂厂) , 盐酸 (分析纯, 哈尔滨市新达化工厂) , 邻苯二甲酸苯胺 (分析纯, 天津市瑞金特化学品有限公司) 。
2 方法
2.1 黄芪多糖的提取分离
2.1.1 水提取大孔树脂分离法
称取黄芪饮片50g, 加入8倍量水浸泡12h, 回流提取2h, 滤出溶液, 药材再加入5倍量的水回流提取2h, 弃去滤渣合并滤液, 浓缩得到浓缩液50mL, 浓缩液过滤, 上大孔吸附树脂柱分离, 用水洗脱, 收集洗脱液, 浓缩至50mL, 调醇度为75%, 室温静置12h, 抽滤, 真空干燥, 即得多糖。
2.1.2 水提醇沉法
称取黄芪饮片50g, 加入8倍量水浸泡12h, 回流提取2h, 滤出溶液, 药材再加入5倍量的水回流提取2h, 弃去滤渣合并滤液, 浓缩得到浓缩液50mL, 浓缩液上超速离心机, 分离过滤的滤液浓缩至50mL。调醇度为75%, 室温静置12h, 抽滤, 真空干燥, 即得多糖。
2.1.3 超声提取法
称取黄芪饮片50g, 加入5倍量95%的乙醇, 超声提取脱脂30min, 滤出溶液, 药材再加入3倍量95%乙醇超声30min。将脱脂后的药材按“2.1.2”的方法得多糖。
2.2 黄芪多糖的含量测定
2.2.1 5%苯酚溶液的配制
精密称取苯酚50g, 加铝片0.1g, 碳酸氢钠0.05g, 用加热套加热蒸溜, 收集182℃馏分, 冷却, 称取5.0g稀释至100mL, 摇匀后, 装入棕色试剂瓶中备用。
2.2.2 标准液的配制
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10mg于100mL容量瓶中稀释至刻度, 摇匀得标准液。
2.2.3 样品配制
分别取三种方法提取多糖各10mg用水溶解后过滤定容于100mL容量瓶中。
2.2.4 标准曲线的制备
精密量取标准储备液1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10mL分别置于10mL容量瓶中定容, 取稀释液1.0mL于10mL具塞试管中, 加入苯酚1.0mL摇匀, 迅速加入浓硫酸5mL, 震荡混匀。置于沸水浴中加热30min, 取出, 冷却至室温。另取1.0mL水同法配成空白参比液, 在490nm处测定吸光度A, 以吸光度A为纵坐标, 葡萄糖浓度C为横坐标, 得回归方程为y=0.042x-0.041 (r=0.9992) 。
2.2.5 稳定性实验
取供试液1mL按“2.2.4”项方法操作, 每隔30min测定一次, 连续3h考察其稳定性, 结果RSD为0.27%。
2.2.6 精密度实验
分别取同一试液按“2.2.4”项方法操作, 测定吸光度, 结果RSD为0.33% (n=5)
2.2.7 样品含量测定
精密吸取供试品溶液2mL, 按“2.2.4”项方法分别测定吸光度。结果计算:多糖含量 (%) = (C·D) /V×100式中:C-供试液葡萄糖浓度 (mg/mL) ;D-试液的稀释因素;V-供试液体积 (mL) 。多糖含量:水提取大孔树脂分离法为26.19%;水提醇沉法为29.40%;超声提取法30.95%。
3 实验结果
黄芪多糖三种工艺提取结果见表1。
4 讨论
本实验中, 超声提取在三种方法中得到多糖含量最少, 但纯度最高;水提醇沉法在纯度上仅次于超声提取法, 但多糖含量最多, 由此可以看出水提醇沉法是黄芪多糖提取率及含量比较理想的方法。
参考文献
[1]贺珍俊, 那日苏, 黄芪多糖提取工艺研究综述[R].内蒙古石油化工, 2003, 29:5-6
黄芪多糖对动物作用机制的研究 篇6
关键词：黄芪多糖,免疫调节,抗肿瘤,抗病毒,抗氧化活性
黄芪是我国传统中药材之一, 主要功效为补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌, 为历代常用的补益中药。现今研究发现, 黄芪中含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮类、甙类、微量元素等多种生物活性物质, 其中多糖的生物活性尤为突出[1]。
黄芪多糖 (APS) 是从中药黄芪中提取的天然有效活性成分, 具有多方面的功能。黄芪多糖可从不同层面、以多种机制发挥作用, 如对免疫功能的双向调节及对免疫细胞内核酸代谢的影响等。目前, 黄芪多糖在人类及动物中的应用十分广泛, 为此本文就其对动物的部分作用机制进行综述, 以供同行借鉴。
1 对动物免疫的调节作用
1.1 调节动物机体的细胞调节因子
黄芪多糖可以通过调节动物机体的细胞调节因子发挥免疫作用。胡庭俊等[2]研究发现, 黄芪多糖可以通过一氧化氮 (NO) 介导信号传递通路, 调节脾淋巴细胞内游离钙离子浓度, 提高细胞蛋白激酶C (PKC) 的活性, 从而影响机体免疫细胞的信号转导, 发挥其免疫调节作用。刘艳艳等[3]研究了以植物血凝素 (PHA) 和黄芪多糖为主药组成的复方制剂对鸡免疫功能相关因子的调节作用, 结果表明:在体外条件下, 黄芪多糖在调节Th2型白细胞介素-10 (IL-10) 时发挥主要作用;在体内条件下, 该复方制剂短时促进鸡外周血Th2型IL-10的产生, 降低Th1型细胞因子γ干扰素 (IFN-γ) 的产生, 因而其作用机理与调节Th1/Th2细胞因子有关。罗燕等[4]研究发现, 黄芪多糖组分A2 (60%乙醇提取沉淀物) 可显著提高肉杂鸡血清中白细胞介素-2 (IL-2) 含量, 而IL-2是由活化的T淋巴细胞产生的一种重要细胞因子, 能激活T淋巴细胞和促进B淋巴细胞分化及分泌抗体, 诱导产生干扰素, 增强单核细胞及自然杀伤 (NK) 细胞的杀伤活性, 从而对机体的免疫功能进行调节。吴旋等[5]研究发现, 饲喂适宜剂量的黄芪多糖 (1 200, 1 500 mg/kg) 可以显著提高黄颡鱼头肾巨噬细胞氧 (或氮) 呼吸爆发活性, 提高鱼机体免疫细胞活性, 从而增强机体免疫力。邱河辉等[6]研究发现, 用10 μg/mL黄芪多糖作用于刀豆素A (ConA) 或脂多糖 (LPS) 刺激的犬脾淋巴细胞, 结果表明, 黄芪多糖对IL-2、IFN-γ和肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 的mRNA表达有显著增强作用, 因而通过对犬脾T淋巴细胞Th1型和Th2型细胞因子mRNA表达的整体调节来促进细胞免疫。陈蔚等[7]研究了黄芪多糖对糖尿病鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节作用, 结果表明, 黄芪多糖可明显下调小鼠胰岛IL-1β、IL-2、白细胞介素-6 (IL-6) 、白细胞介素-12 (IL-12) 、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平, 说明黄芪多糖能纠正非肥胖糖尿病 (NOD) 小鼠Th1型细胞/细胞因子的免疫失衡状态。汤菊芬等[8]研究了黄芪多糖对吉富罗非鱼热应激蛋白 (Hsp70) 基因表达的影响, 结果发现:高剂量 (20 mg/kg) 黄芪多糖可显著提高吉富罗非鱼腮、头、肾脏、肝脏中Hsp70基因的表达;低剂量 (2 mg/kg) 黄芪多糖可使脾脏中Hsp70基因表达上调, 说明黄芪多糖可通过诱导吉富罗非鱼Hsp70基因表达来保护免疫细胞免受应激损伤。
1.2 免疫增强作用
黄芪多糖也可通过其免疫增强作用发挥免疫调节功效。常娟等[9]综述了黄芪多糖通过免疫调节、抑制肿瘤、调节造血细胞、促进细胞因子基因表达等方面发挥促进细胞因子生长的作用。张玲等[10]通过试验发现, 用黄芪的水溶液和脂溶液灌胃小鼠后, 胸腺指数和淋巴细胞增殖转化试验呈阳性, 抑制正常小鼠分泌TNF-α, 具有增强免疫的作用。房宇等[11]认为, 黄芪提取物可以增加脾脏、胸腺重量, 提高黏膜免疫功能, 调节与免疫相关的细胞因子含量, 提高NK细胞的杀伤能力, 促进巨噬细胞、树突状细胞的吞噬作用, 增加T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及活性, 从而使特异性免疫和非特异性免疫具有不同程度的增强。张训海等[12]研究发现:加入不同剂量黄芪多糖的油苗组在一些时间点能显著提高罗曼蛋公雏的ND-HI抗体效价;同时黄芪多糖含量为300 mg/L时能显著促进鸡脾淋巴细胞的增殖, 因而可作为体液免疫增强剂。
1.3 影响黏附分子活性
黄芪多糖还可通过影响细胞黏附分子 (CAMs) 的活性发挥其免疫调节作用。糖类不仅给细胞提供碳源和能源, 而且是生物体内一类重要的信息分子。细胞黏附分子是一类重要的糖蛋白, 糖链则在细胞黏附分子识别和调控中起关键作用。作为多糖家族的重要成员, 黄芪多糖对细胞黏附分子的影响日益受到重视。郝钰等[13]研究了黄芪多糖对人淋巴细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响, 结果表明, 黄芪多糖通过提高细胞表面黏附分子的表达促进淋巴细胞与内皮细胞的黏附。张涛等[14]认为, 中药对内皮细胞黏附分子的表达具有重要的影响, 可以调控内皮细胞黏附分子的表达。周宏超等[15]认为, 黄芪多糖通过抑制志贺样毒素Ⅱe (SLT-Ⅱe) 诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、内皮素-1 (ET-1) 、血栓素A2 (TXA2) 及可溶性细胞间黏附分子-1 (sICAM-1) 的过量分泌, 缓解肠道微循环障碍, 减轻局部炎症反应。徐先祥等[16]认为, 黄芪多糖可对疾病过程中细胞黏附产生干预作用, 下调内皮细胞表面CD34的表达, 减少肥大细胞在微血管旁的聚集与脱颗粒, 抑制炎性细胞与微血管内皮细胞的黏附, 从而发挥抗炎作用。
2 抗肿瘤和抗病毒作用
2.1 抗肿瘤作用
癌症作为世界头号杀手, 一直威胁着人类的健康。西方国家对癌症的治疗, 包括手术、放疗、化疗和免疫疗法, 或者难以达到完全缓解症状, 或者产生严重的不良反应, 且随着时间延长会出现耐受性。为解决这样的问题, 一些人将注意力转移到开辟新的抗癌策略上, 如采用东方国家的医药法, 希望抗肿瘤的同时又没有严重的不良反应。黄芪多糖可以抑制肿瘤的发展, 降低化学治疗的毒副效应, 提升组织器官的免疫功能, 最终改善恶性肿瘤患者的生活质量。研究发现, 来自黄芪中的多糖能恢复肿瘤患者的免疫功能, 同时有助于改善病人生活质量, 提升治疗效果。通过对T淋巴细胞功能分析发现, 黄芪中的多糖组分使癌症病人T淋巴细胞的功能缺失恢复到健康个体的正常水平。据报道, 黄芪多糖注射剂增强了树突状细胞的抗肿瘤扩散活性, 有效提升了荷瘤宿主的免疫反应, 因此明显抑制了体内癌细胞的转移。有学者通过黄芪的体内外抗肿瘤研究发现, 黄芪多糖注射剂能促进荷瘤小鼠产生TNF-α, 诱导产生细胞毒性细胞以对抗肿瘤, 恢复荷瘤小鼠的部分免疫抑制功能。肖顺汉等[17]研究表明, 黄芪多糖能提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数, 以及荷瘤小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α的水平, 因而具有明显的体内抗肿瘤活性。张小梅[18]认为, 黄芪多糖的抗肿瘤作用是通过调节整体细胞免疫功能来增强IL-2/LAK的抗肿瘤作用, 或者通过促进抗癌细胞素的分泌、IL-2受体的表达、LAK前体细胞的增生而达到抗肿瘤作用。
2.2 抗病毒作用
黄芪多糖具有促进机体对抗病毒诱导产生干扰素的能力, 一定程度上抑制了病毒的繁殖。安静等[19]研究发现, 黄芪多糖能使动物机体诱生内源性干扰素, 作用于细胞, 使其产生抗病毒蛋白而抑制病毒蛋白合成, 进而起到抗病毒感染的作用。对不同的病毒来说, 黄芪多糖可能通过干扰、吞噬、结合等方式杀灭病毒。沈小君等[20]研究发现, 黄芪多糖是一种干扰素诱导剂, 其抗病毒原理是:刺激巨噬细胞和T淋巴细胞, 促使E环形细胞数量增加, 诱生细胞因子和白细胞介素, 使动物机体产生内源性干扰素, 从而达到抗病毒的目的。
3 抗氧化作用
3.1 活性氧簇 (ROS) 简介
在正常细胞生长过程中, 会产生ROS, 包括超氧阴离子 (O2-) 、羟基自由基 (OH) 、过氧化氢 (H2O2) 。活性氧的产生和消除保持着一种动态平衡, 这主要依赖于机体完整的抗氧化防御体系的预防性或阻断性控制。现已认识到人类的某些疾病, 包括肿瘤、心血管疾病及其他与老化相关的健康问题, 都与ROS有关。如ROS导致血管壁脂质过氧化, 被认为是动脉粥样硬化的过程之一。消除活性氧, 减少脂质过氧化物 (LPO) 及其降解产物的产生, 有助于提高动物机体的抗病力。
3.2 黄芪多糖抗氧化活性
现今, 黄芪多糖的抗氧化作用得到了广泛关注。黄芪多糖具有抗氧化活性, 包括羟自由基清除活性、过氧化氢清除活性、螯合亚铁离子效应等。在动物机体抗氧化防御体系中, 超氧化物歧化酶 (SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 活性在清除自由基、抗氧化损伤和维持细胞结构方面起着重要作用。曲琪环等[21]研究发现, 黄芪多糖可明显增强病毒感染雏鸡中枢和外周淋巴器官、主要实质器官中SOD和GSH-Px的活性, 并能抑制LPO的产生。LPO是自由基攻击不饱和脂肪酸的结果, 丙二醛 (MDA) 就是LPO氧化形成的终产物, 体内MDA含量可直接反映LPO的水平, 即显示机体脂质受活性氧自由基攻击的损害程度。王翠菊等[22]报道, 饲粮中添加适量黄芪多糖可显著提高血清中SOD和GSH-Px活性, 降低血清中MDA含量, 说明黄芪多糖可提高蛋鸡的抗氧化能力。细胞内 (间) 膜上脂质过氧化增强会导致细胞、组织、器官的损伤, 而SOD和过氧化氢酶 (CAT) 是非常重要的抗氧化酶, 可以通过清除ROS对这些细胞、组织、器官进行保护。清除过程为:SOD催化O2-歧化为H2O2, CAT将H2O2降解为1个氧分子和1个水分子。
4 结语
黄芪多糖治疗种猪应激反应的体会 篇7
1 发病情况
2010年9月辖区某猪场在3个原种猪场分期分批引进种公猪55头, 体重80~150 kg不等。引回后从次日到15 d内先后出现不食, 重症者7 d不吃不喝、有43头种公猪无明显症状。30%的种猪体温升高39.5~41.5℃, 9%的种猪有耳页、殿部及睾丸皮肤发紫, 个别猪只出现呼吸困难。
2 防治措施
2.1 针对全群饮用电解多维+葡萄糖于饮水中。
2.2 针对发热猪只肌注头孢噻呋钠, 每千克体重5 mg+20~60 mL复方氨基比林 (或柴胡注射液) , 每天2次, 或肌注30%磺胺间甲氧嘧啶注射液0.1 mL (kg体重) 。防止发生败血症而增强发病率和死亡率。
2.3 当出现多重耐药性时, 使用清开灵注射液或穿心莲注射液, 或大青叶注射液, 加干扰素:1 mL/ (40 kg体重) , 重症加倍, 肌注, 每天1次;排疫肽:1 mL/ (50 kg体重) , 重症加倍, 每天1次;干扰素和排疫肽用前述中草药注射液稀释后混合肌注;同时还要更换优质广谱、安全无耐药性的抗生素进行治疗。
2.4 当发病时间较长、体温正常病猪免疫力低下时, 改用黄芪多糖注射液0.2 m L/ (kg体重) , 同时注射VC, 间隔肌注头孢噻呋钠 (或头孢拉定) 5 mg/ (kg体重) , 直到病猪开食痊愈。
3 小结
3.1“应激反应”是指机体在受到体内外各种强烈因素 (即应激原) 刺激时, 所出现的交感神经兴奋和垂体———肾上腺皮质分泌增多为主的一系列神经内分泌反应, 以及由此而引起的各种机能和代谢的改变。本病例中环境的应激因素、饲养管理因素、营养因素、群饲应激密度等的改变、在装卸和运输过程中运输应激因子, 许多超阈值的刺激同时作用于猪, 则降低生猪的防御机制以及生理机能失衡而导致猪发生种猪应激反应。
3.2 对应激反应并发其它发热性疫病时大剂量或滥用抗生素时可能引起某些细菌耐药现象的发生, 影响血细胞的生成, 致血细胞减少, 包括白细胞及粒细胞减少、血小板减少及全血细胞减少即再生障碍性贫血, 对感染的治疗会变得十分困难。
3.3 黄芪多糖具有免疫增强作用, 对非特异性免疫或特异性免疫均有促进作用。能明显增加肾上腺重量, 具有抗应激作用, 对干扰素系统有明显的刺激作用, 能促进机体对抗病毒诱生干扰素的能力, 能诱导机体产生干扰素, 调节机体免疫功能, 促进抗体形成从而一定程度地抑制病毒的繁殖而发挥抗病毒作用。
黄芪多糖对猪免疫功能的影响 篇8
黄芪多糖 (Astragalus polysaccharme, APS) 是黄芪中最重要的天然有效成分, 是黄芪药理作用中起决定性因素的一类化合物。黄芪多糖能提高机体免疫功能, 增强细胞生理代谢, 提高巨噬细胞活性, 是理想的免疫增强剂, 它能促进T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的功能, 对多种免疫缺陷症均有良好的防治作用, 同时具有抗病毒、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用。笔者通过检测黄芪多糖对猪瘟免疫抗体的影响, 为黄芪多糖的合理临床应用提供了可靠的试验数据。
1 试验材料
1.1 主要试剂
猪瘟兔化弱毒活疫苗 (细胞源, 由湖南省涟源市畜牧水产局提供) ;黄芪多糖可溶性粉可溶性粉 (10%, 湖南广大傲农畜牧兽医研发有限公司) ;猪瘟抗体检测试剂 (美国EDEXX:13-43220-Y241) 1.2主要仪器
高速离心机 (上海耐圣卡兰实业有限公司) ;微量移液枪 (上海荣泰生化工程有限公司) ;全自动酶标仪 (南京华东电子集团医疗装备有限责任公司) ;微量振荡器 (长沙永乐康医疗设备有限公司) ;生化培养箱 (上海精密仪器有限公司) ;优普纯水机 (广州市授科仪器科技有限公司) 。
1.3 试验动物
根据试验要求, 选择未经过猪瘟疫苗免疫的涟源市蓝田办事处某猪场 (200头母猪) , 自繁自养, 饲养管理水平适中, 挑选出50头65日龄左右, 体重相近、健康壮实的“杜长大”三元杂交猪。
2 试验方法
2.1 动物分组
共分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和空白对照组五组, 基础日粮为玉米-豆粕型, 对照组与试验组均每天饲喂2次, 饲喂时间为1个月。
(1) 空白对照组:饲喂基础日粮, 耳标编号为1~10号; (2) 试验Ⅰ组:基础日粮, 另添加饲料量0.05%黄芪多糖可溶性粉, 耳标编号为11~20号; (3) 试验Ⅱ组:基础日粮, 另添加饲料量0.1%黄芪多糖可溶性粉, 耳标编号为21~30号; (4) 试验Ⅲ组:基础日粮, 另添加饲料量0.2%黄芪多糖可溶性粉, 耳标编号为31~40号; (5) 试验Ⅳ组:基础日粮, 另添加饲料量0.3%黄芪多糖可溶性粉, 耳标编号为41~50号。
2.2 注射免疫疫苗
在免疫疫苗前后15天, 除空白对照组外, 试验组按试验要求在基础食粮中添加了不同量黄芪多糖可溶性粉。在猪群无异常状况下, 2013年4月25日, 按照疫苗使用说明, 用专用疫苗稀释液稀释猪瘟冻干疫苗, 严格按免疫要求进行消毒和一个针头免疫一头猪标准, 在猪颈部后侧肌注猪瘟疫苗1头份/头。观察免疫副反应及应激情况。
2.3 采血及检测判定方法
于5月25日和6月25日, 在猪耳静脉进行采血, 每头猪采血量为2.5m L, 按操作规程要求采集猪全血样品100个, 用保温箱冷藏, 在试验室用离心机处理得到检测用血清。采用猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测法。判定标准:阻断率≥40%, 抗体阳性 (+) ;阻断率≤30%, 抗体阴性 (-) ;40%>阻断率>30%, 为可疑 (±) , 可疑血清样品在下次采血时以下次抗体效价作为最终结果判定。
3 试验结果
3.1 免疫副反应及应激情况
4月25日免疫后, 空白组的3、7号猪, 试验I组的18号猪, 出现了免疫应激反应, 具体表现为精神萎靡不振、呼吸略为急促, 观察1h后, 免疫应激反应症状消失, 逐步恢复正常。
3.2 抗体检测对照
5月27日免疫抗体检测其阴性对照OD450=0.131, 阳性对照OD450=1.633;6月27日免疫抗体检测其阴性对照OD450=0.147, 阳性对照OD450=1.735。
3.3 各组抗体检测结果
3.3.1 空白对照组的抗体检测结果。具体结果见表1。
从表1中可看出, 5月27日检测4、6、7号猪抗体结果为阴性, 其它为阳性, 抗体阳性率为70%;7个抗体阳性OD450值平均为0.641。6月27日检测4、6、7号猪抗体结果为阴性, 其它为阳性, 抗体阳性率为70%;7个抗体阳性OD450值平均为0.658。
3.3.2 试验Ⅰ组抗体检测结果。
试验Ⅰ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.05%。从表2中显示5月27日检测18号猪免疫抗体结果为阴性, 其它9个猪瘟免疫抗体阳性, 抗体阳性率为90%, 抗体效价OD450值平均为0.761。6月27日检测18号猪免疫抗体阴性, 其它9个猪瘟免疫抗体阳性, 抗体阳性率为90%, 抗体效价OD450值平均为0.761。
3.3.3 试验Ⅱ组抗体检测结果。具体结果见表3。
试验Ⅱ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.1%。从表3可看出, 5月27日检测27号猪免疫抗体为可疑, 28号为免疫抗体阴性, 其它8个猪瘟免疫抗体阳性, 抗体阳性率为80%, OD450值平均为0.818。6月27日检测28号猪为免疫抗体阴性, 其它9个猪瘟免疫抗体阳性, 抗体阳性率为90%, OD450值平均为0.892。
3.3.4 试验Ⅲ组抗体检测结果。具体结果见表4。
试验Ⅲ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.2%, 表4中显示5月27日检测免疫抗体结果全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.857。6月27日检测免疫抗体结果全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.975。
3.3.5 试验Ⅳ组抗体检测结果。
试验Ⅳ组黄芪多糖可溶性粉的添加量为0.3%, 从表5看出, 5月27日检测Ⅳ组免疫抗体结果全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.813;6月27日检测免疫抗体全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.904。
6 小结
从试验结果来看, 空白对照组的免疫抗体合格率为70%, 抗体阳性OD450值平均为0.641;试验组整体抗体阳性率达92.5%, 抗体阳性OD450值平均为0.812, 表明日粮中添加适量的黄芪多糖可溶性粉能增强仔猪免疫功能, 并促进免疫抗体水平效价的提高;试验Ⅲ组 (基础日粮+0.2%黄芪多糖可溶性粉) 的5月27日检测免疫抗体全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.857。6月27日检测免疫抗体全部为阳性, 抗体阳性率为100%, OD450值平均为0.975, 免疫效果最好, 抗体效价最高;试验Ⅲ组 (基础日粮+0.2%黄芪多糖可溶性粉) 与试验Ⅳ组 (基础日粮+0.3%黄芪多糖可溶性粉) 检测抗体阳性率均为100%, 并无明显抗体效价水平差异, 从中可以得出在基础日粮中添加0.2%黄芪多糖可溶性粉为最适宜, 可达到理想的免疫增强效果;猪瘟疫苗在免疫60天后可达到较好的免疫效果, 在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的试验组免疫效价提升相对较高, 免疫增强效果显著;未在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的空白对照组发生免疫应激反应较大, 在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的试验组免疫应激反应最小, 机体抗病能力强。
通过此次试验, 可以得出以下初步结论:在免疫疫苗前后15天左右添加黄芪多糖可溶性粉, 有效添加量为基础日粮的0.2%黄芪多糖可溶性粉, 有利于加强机体的免疫系统功能, 解除免疫抑制, 提高抗体效价水平, 缓解由环境应激造成的免疫功能紊乱, 有利于预防和早期控制传染性及条件性疾病。
摘要：为了进一步考察黄芪多糖 (黄芪提取物) 对猪免疫功能的影响, 本试验于猪瘟疫苗免疫前后15日, 对50头65日龄的健康外三元杂交猪分组, 按不同剂量添加饲喂黄芪多糖可溶性粉, 饲喂时间为1个月;并于饲喂后分两次进行耳静脉采血, 采用猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测法检测猪体内抗体水平, 得出了在日粮中添加黄芪多糖的猪体内抗体水平明显高于空白对照组, 且添加量为日粮0.2%的黄芪多糖可溶性粉的试验组抗体水平最高, 该试验证实了黄芪多糖对猪的免疫功能具有明显的增强效果。
关键词：黄芪多糖,抗体检测,免疫增强剂,猪
参考文献
[1]高德富, 刘晓蕙, 樊剑鸣, 等.黄芪多糖可溶性粉对小鼠生长性能、抗氧化及免疫功能的影响[J].航空航天医学杂志, 2011, 2 (22) :144-147.
[2]王志祥, 吕美, 戚鑫, 等.黄芪多糖可溶性粉对肉仔鸡生长、免疫器官发育及抗氧化功能的影响[J].中国畜牧杂志, 2006, 17 (42) :30-31.
