关键词：
病毒血清（精选十篇）
病毒血清 篇1
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年1~12月期间本院消化内科与传染病科门诊部和住院部共同收治的HBs Ag低水平阳性的患者3632例, 其中男3168例, 女464例;年龄27~58岁, 平均年龄36岁。所有患者经乙肝病毒酶联免疫吸附试验检测符合HBs Ag低水平阳性。
1.2 方法
HBs Ag检测采用ELISA试验[4], 试剂盒由广州威佳科技有限公司提供。HBV-DNA采用FQ-PCR检测[5], 试剂盒由宝生物工程有限公司提供。
1.2.1 ELISA检测
标本在室温下离心 (1000×g离心10min) 将血清和红细胞迅速小心地分离。使用不含热原和内毒素的试管, 按照试剂盒操作步骤说明进行实验。如果标本不立即使用, 将其分装保存于-70℃条件下, 避免反复冷冻, 在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。避免使用溶血或脂血。
1.2.2 核酸检测
留取血标本中核酸检测成分, 将ELISA检测结果中HBs Ag低水平阳性标本依次编号进行核酸检测, 检测过程依据荧光定量聚合酶链反应说明书进行。
2 结果
HBs Ag低水平阳性者3632例, 占2013年全年在本院进行HBs Ag检测的患者的29.23%, 对HBs Ag低水平阳性者进行HBV-DNA定量检测, 病毒DNA检出率为80.55%, 病毒核酸载量的平均值为7.305。说明当检测出乙肝表面抗原低水平阳性时, 只能说明人体内有乙肝病毒外壳或者是假阳性, 而外壳里面有没有乙肝病毒DNA则还要通过乙肝病毒核酸检测来确定。
3 讨论
HBs Ag编码区位于HBV编码的5个阅读框架的第3个, HBs Ag的衣壳蛋白是由HBs Ag的编码产物Pre-S1、Pre-S2以及HBs Ag-PHSA-Re共同组成[6]。当感染HBV后, 病毒常以完整的病毒颗粒、丝状或管状颗粒、球形颗粒3种形式存在, 其中病毒颗粒含有病毒蛋白和核酸。由于感染HBV后存在一段时间的窗口期[7], 即人体感染乙肝病毒后, 免疫系统在消灭乙肝病毒的这段时期, 也称乙肝恢复期末端, 此时病毒将大量减少或者全部消失, 但是还没有产生乙型肝炎表面抗体 (HBs Ab) 。而HBs Ab一般要在急性乙肝病毒感染后期或HBs Ag消失后, 经过一段时间才出现, 在此间隔期HBs Ag与HBs Ab都不能被检出, 称为“空白期”或“窗口期”。目前虽然有先进的荧光定量PCR技术可以及时准确的诊断感染性疾病, 但窗口期仍然是全世界的难题, 且对于一些没有条件实现临床PCR实验室建立的医院来说, 很难实现对HBs Ag低水平阳性乙型病毒性肝炎患者的正确诊断。所以, 本文在此探讨血清标志物HBs Ag低水平阳性与HBV-DNA检测之间的相互关系, 希望能够对乙型肝炎的临床诊断及疗效观察和预后判断起到一定的作用。
HBs Ag的出现常伴随乙肝病毒的存在, 因此HBs Ag是已感染HBV的标志。HBs Ag可存在于HBV感染者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在感染乙肝病毒后2~6个月、谷丙转氨酶升高前2~8周时, 可在血清中测到HBs Ag阳性;当HBs Ag呈低水平阳性时, 可结合荧光定量聚合酶链反应来进一步检测体内是否含有HBV-DNA。
研究结果显示, HBs Ag低水平阳性且乙肝病毒DNA<1000, 则体内存在乙肝病毒的表面外壳而不存在乙肝病毒DNA, 不存在病毒复制和传染性;HBs Ag阳性或弱阳性且乙肝病毒DNA>1000, 则说明体内存在完整的乙肝病毒, 具传染性且复制。因此, 当出现HBs Ag阳性或低水平阳性时, 也不一定是HBV患者, 还有可能是乙肝潜伏期、无症状携带者、慢性乙肝或者假阳性者, 这都需要结合PCR检查结果做出综合判断。
摘要：目的 探讨分析血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (HBV-HBsAg) 低水平阳性与病毒核酸载量的关系。方法 HBsAg弱阳性的患者3632例, 通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测血清 (HBsAg) 、使用荧光定量聚合酶链反应 (FQ-PCR) 检测血清乙型肝炎病毒DNA (HBV-DNA) 。结果 3632例HBsAg弱阳性的患者病毒DNA检出率为80.55%, 病毒核酸载量的平均值为7.305。结论 乙型肝炎病毒表面抗原低水平阳性对乙型肝炎的诊断不具有代表性, 只能能说明体内含有乙肝病毒外壳, 还需要结合血清病毒核酸载量检测来判断患者体内是否具有乙肝病毒DNA。只有在HBsAg阳性且合并病毒核酸载量值异常时, 才有助于乙型病毒性肝炎的诊断和疗效的评估。
关键词：乙型肝炎病毒,表面抗原低水平阳性,病毒核酸载量
参考文献
[1]邱黎霞, 郭满盈, 杨海燕.血清PreS1, PreS2抗原在乙肝诊断中的价值.实验与检验医学, 2009, 27 (2) :177-178.
[2]王宇, 杨延敏.对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前S1抗原的区别和临床意义.检验医学与临床, 2010, 7 (22) :2446-2447.
[3]夏邦世, 陈友土, 沈忠海.HBsAg阴性或低值弱阳性的乙型肝炎病毒感染.中国预防医学杂志, 2006, 7 (1) :49-51.
[4]陈慧英, 肖艳群, 张健, 等.酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨.检验医学, 2010, 25 (6) :447-450.
[5]刘庆鸣, 曾黎峰, 万本愿, 等.乙肝病毒免疫标志物与其DNA荧光定量聚合酶链反应之间的关系探讨.实验与检验医学, 2010 (5) :270-271.
[6]崔美兰, 周海洋, 刘杰, 等.抗乙肝病毒化学药物研究进展.国际药学研究杂志, 2011, 39 (4) :280-293.
血清学解读猪繁殖与呼吸综合征病毒 篇2
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)现在流行于美国、加拿大、欧洲和亚洲。但科学家怀疑该病毒在世界各地均有分布。世界其它地区的诊断学家不断发展该病的诊断技术，检测病毒将变得更为容易，也将印证我们的怀疑。养猪从业者可以从确诊PRRS的过程中了解该病。该病的临床症状复杂，可感染呼吸系统和生殖系统，并且易感猪的猪龄范围广泛，因此在遇到临床症状多样的疾病时，PRRS是值得怀疑的对象。
20世纪80年代中晚期，易感猪感染PRRS能够引发较为一致的临床症状。许多感染PRRS的猪群同时发生繁殖障碍和呼吸道疾病，且繁殖障碍更为严重。母猪表现以下典型症状：中度发热(104到106华氏度)，短时间的食欲减退，早产(108-110天)导致死胎数明显增加，随后出现妊娠早期母猪流产，木乃伊胎增多。出生的活仔中很多较弱，几小时内死亡；存活下来的仔猪生长缓慢，易发细菌病，最终死亡，通常很难控制。这些细菌病中包括链球菌病、鼻炎和格氏病(副猪嗜血杆菌)等等。通常，断奶前和断奶后猪出现严重的呼吸道疾病，表现为急促的腹式呼吸，多称为“呼吸困难”。PRRSV在肺内增殖引起间质性肺炎，但其他病毒也可引起类似病变，因此发现间质性肺炎提示可能存在PRRSV感染，但不等同于确诊为PRRS。
PRRS在猪群中渐渐“成熟”，其临床症状也随之发生改变。前面描述同时存在繁殖障碍和呼吸道症状的经典PRRS仍有发生。但更为常见的是只出现繁殖障碍或呼吸道症状。并且现在发生时呼吸道症状比繁殖障碍明显。
保育猪和生长育肥猪出现呼吸道问题，尤其是抗生素治疗效果不明显时，PRRS可疑。即使已知这种呼吸道疾病的病原为胸膜肺炎放线杆菌或猪霍乱沙门氏菌，但PRRS感染也可能在其中发挥启动或加重病情的作用。
2血清学诊断
现有的检测PRRSV特异性抗体的方法包括间接荧光抗体检测(IFA)、血清病毒中和试验(SVN)、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。其中，IFA，SVN和ELISA检测是现阶段北美兽医诊断实验室采用的检测方法。
IFA具有高度的特异性(99.5%)，但不同动物个体的敏感性不确定。与ELISA相比，IFA的优势在于能够确定抗体滴度。根据试验中血清的初始稀释度，滴度为16或20视为阳性。然而由于结果为主观判定，不同实验室或检测员进行检测时IFA滴度终点会有差异。这也限制了IFA在小规模样品检测上的应用。此外，由于PRRSV抗原的多样性，检测所用的PRRSV毒株不同，检测结果也会不同(阴性vs阳性，或滴度)。
最近出现了检测PRRSV特异性IgM抗体的IFA方法。这种方法可用于检测急性/最近发生的PRRSV感染，滴度16或20为阳性。很有意思的是，研究表明IgM阳性样品中81%的样品可分离到病毒。然而，值得关注的是该方法存在由非特异性IgM引起的假阳性结果，因此该方法在广泛用于常规诊断之前必须对其所有的实验性能包括特异性和敏感性进行评估。
ELISA的不同形式包括：采用样品与阳性比值的间接ELISA，直接采用OD值的间接ELISA和阻断ELISA。IDEXXELISA试剂盒检测样品，S/P值等于或高于0.4时为阳性。据报道，该
方法灵敏而特异，敏感性为100%，特异性为99.5%。
尽管S/P值与IFA滴度间可能存在关联，但生产商不推荐以这种方式来解读S/P值。许多兽医诊断学家和从业者认为S/P值为2.5或以上即表示最近发生或正在发生感染。自动化操作是该方法的一大优势，因为自动操作差异小，且易于实现高水平的质量控制。此外，ELISA还有其他优点：a）欧洲株和美洲株PRRSV抗体均可检测；b)检测周期短；c)通过USDA和AgCanada认证。
SVN检测也是一种特异性检测，但以前的试验显示SVN的敏感性低于IFA和ELISA方法。目前，滴度4视为阳性。最近的研究显示被测血清中加入新鲜猪血清可提高SVN检测的敏感性。即便如此，SVN方法也最好作为一种研究工具而非常规诊断手段来使用。
3血清学结果
试验感染PRRSV的猪，IFA，ELISA，SVN首次检测到病毒特异性抗体IgG的时间分别为感染后7-11，9-13和9-28天，达到高峰的时间则为感染后30-50，30-50和60-90天。感染后5天内检测到PRRSV特异性IgM抗体，并可维持到感染后21-28天。实验和田间观察显示IFA，ELISA和SVN检测抗体滴度通常分别在4-5个月，4-10个月和12个月时降至不可检测水平。未接触过该病原的猪接种疫苗后抗体也呈现相同的时间模式。
基于RollingsLaboratory对30,000份血样的检测结果，我们得到以下关于PRRS的信息：
1）未免疫小母猪，后备公猪和成年种猪的S/P值<2.25（测定值与阳性对照测定值的比值），显示在采血时可能有病毒血症。血清S/P值在3.5到5.0之间或高于5.0时，很可能为最近感染的猪。未成年猪上也观察到相同情况。
2）对发生感染的免疫猪群进行评价时，可参照以下模式：
Ø对保育猪为阴性的稳定种猪群来说，母猪和公猪的S/P值为阴性到较低的2，但不高于2.5。阴性架子猪试验接种疫苗后S/P值高于3.5。但曾发生感染的稳定猪群即分娩率和每头母猪每年的断奶仔猪数均比较理想，接种疫苗后，免疫的母猪和公猪没有观察到这种抗体反应。
Ø免疫繁殖猪群的平均S/P值为1.00是比较理想的。免疫后30到60天以内20%免疫猪为阴性是比较典型的。典型的免疫较好的猪群S/P值在0.7到1.8之间，有些猪可达到2.0以上。如果种猪群每年两次接种疫苗，免疫后60天以内免疫种猪20%以上为阴性，则应对疫苗处理和接种操作进行检查。
Ø对每年四次或更多次接种疫苗的猪群来说，超过20%的免疫猪为血清阴性并非不常见。但缺乏可检测体液抗体的依据尚不清楚。但这些血清阴性的免疫猪在被田间PRRSV毒株感染后，多数会转阳。田间毒株侵入并传播引起免疫猪群再次发生繁殖障碍或生产成绩不佳，抗体水平则会发生变化。反复感染的母猪抗体水平高于3.0也不是不常见，如上所述，通常此类猪群所有的母猪和公猪ELISA检测都为阳性。
3）免疫母猪所产仔猪的母源抗体逐渐下降，而种猪群中存在病毒循环，3-4周龄仔猪的S/P值在0.7到阴性之间。抗体水平高于1.8的猪可能为断奶后转入保育舍有病毒血症的猪。在没有病毒循环的保育舍，多数仔猪在6周龄时为阴性。如果保育舍有很多猪发生病毒血症，则7周龄时S/P值会升高，多数猪呈阳性，S/P值高于1。9到10周龄时，若保育舍病毒循环非常活跃，则所有猪均为阳性。多数7到10周龄的阳性保育猪很可能排出PRRSV。
4）转入育肥舍时30到80%的保育猪为阳性，随后在育肥舍继续发生感染，血清转阳。这期间平均S/P值可能不升高。我们观察到许多猪舍中阳性猪比例很高，但S/P值很少高于
1.8。其原因可能与房舍的设计及猪的流动有关。
4血清学检测结果的应用
解读PRRS血清学结果时应考虑到以下几个问题或局限。美国猪群中PRRS流行率(80%)很高，单个样品的血清学信息不足以诊断临床PRRS。例如，一头猪采一次样测定为血清阴性，这一结果有好几种可能性：
1）这头猪未被PRRSV感染；
2）这头猪最近感染PRRSV但尚未发生血清转阳；
3）这头猪感染了PRRSV但血清呈阴性；
4）由于检测方法的敏感性低或操作失误造成阴性。
因此，PRRS血清学方法应主要用于确定猪群是否曾发生PRRSV感染。
PRRSV特异性抗体不能维持终生。IFA和/或ELISA可测抗体的持续时间相对较短，推荐用于青年猪的检测，以建立猪群的PRRSV感染状况。在单点式从分娩到育肥猪场，生长育肥猪的PRRSV感染的血清学流行率往往最高。通常10份育肥猪的血清样本足以确定猪群是否曾感染PRRSV。对多点式生产系统来说，各生产阶段均为一个单独的群体，因此每个场区都应采样。
检测到成对样品血清转阳即可诊断繁殖障碍或呼吸疾病的原因为PRRSV感染。为了进一步确认正在发生PRRS，建议将血清学检测和病毒分离结果(如病毒血症)结合起来。
采用IgMIFA，IgGIFA和SVN方法，获得的血清学结果可将猪群中感染PRRSV的猪分为3类：未感染猪、急性感染猪和抗体水平下降的猪。未感染猪3种方法的检测结果均为阴性。急性感染猪则是IgM和/或IgG的IFA滴度为64的，但没有可检测的SVN抗体。
部分研究数据显示PRRS特异性SVN抗体在清除血中循环病毒方面发挥作用。然而，在存在循环抗体的条件下发生长期病毒血症和PRRSV持续感染，低浓度病毒特异性抗体存在时PRRSV感染的抗体依赖增强效应，这两种现象对抗体的保护作用提出质疑。因此，确定中和抗体与保护性免疫的关系非常重要。
PRRS病毒分离株的广泛抗原变异会影响猪群的血清学信息的解读，因为诊断实验室所用的毒株可能会导致假阳性结果。这一潜在问题可通过使用商品化ELISA试剂盒来避免，因为IDEXX试剂盒含有多种不同PRRS病毒的抗原。实际上，该试剂盒可用于检测北美株和欧洲株PRRS病毒分离株的抗体。
乙肝病毒血清学检测方法进展与比较 篇3
【中图分类号】R93.1 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）03-0658-01
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所导致的一种在全球广泛流行的传染病，全世界HBsAg携带者有3.5亿人。据世界卫生组织报道，全球每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国属HBV感染高流行区，流行病学调查，一般人群的HBsAg阳性率为7.18%[1]，因此乙型肝炎病毒的检出对于乙肝的各项防治工作至关重要。
目前临床用于乙型肝炎病毒血清免疫学标志物检测的方法、试剂很多，各具特点，如用于定性的胶体金方法（GICA）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）；用于定量的则有化学发光法（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）等。本文就乙肝病毒血清学检测方法介绍及对比综述如下：
一乙肝病毒血清血检测方法研究进展
1、GICA
GICA，全称是胶体金免疫层析法（gold immuno chromatographic Assay），其优点是快速、不需仪器设备、单份测试成本低，但由于其只能进行定性检测且灵敏度较低，比较适合急诊和基层医疗机构作检测诊断。
2、ELISA
ELISA，全称是酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosor-bent assay），主要优点是经济，成批检测时间短，检测率高、不需要特殊仪器而且操作简单试剂容易保存，在我国被广大基层医院普遍应用。但由于它只能进行定性测定或半定量测定，且特异性不强、线性范围小、易产生钩状现象，故ELISA在对敏感性要求极高的血站及手术室等不适用。
3、TRFIA
TRFIA，全称是时间分辨荧光免疫分析法（time resolved fluoroim-munoassay），它是近年来发展起来的一种无污染、高灵敏度的免疫标记技术，以三价稀土离子作为示踪物，应用时间延迟技术消除标本中的非特异性荧光以提高灵敏度，再加上其特有的荧光解离增强技术使有效荧光增强，使其适用于生物学及医学的超微量分析度。但由于其检测时间较长，标本消耗量大，只适用于成批检测，不适于单份样本操作[3]。
4、CLIA
CLIA，全称是化学发光法（chemiluminescence immunoassay），它主要是使用固相性载体为顺磁性微粒，该种微粒直径为2.8μm，因微粒体积小，和相同体积的塑料珠相比其表面积增大，所以扩大了反应面积。同时因标志物循环利用，增强了发光的强度和时间，提高了检测的灵敏度。其优点是检测时间短，灵敏度与特异性高，逐渐在我国大、中型综合性医院中开展。CLIA因需配套的仪器设备与试剂，其检测成本高，难以在基层医院开展。
二乙肝病毒血清学检测方法比较
1、精密度和灵敏度
GICA 检测线的显色速度及强度与HBsAg的含量成正比。强阳性样品5分钟内即可显色。弱阳性样品10分钟内也可显色，静置30分钟可保证达到最高灵敏度。在国外较好的金标试纸在检测HBsAg灵敏度可接近ELISA。
ELISA半定量的精密度为批内变异≤8.23%，最大日间变异≤16.69%；其灵敏度在检测HBsAg时为：0.5ng/ml。
TRFIA在检测乙肝两对半时灵敏度如下：HBsAg ：0.2ng/ml；HBsAb：40mIU/ml；HBeAg ：0.5 NCU /ml；HBeAb：4 NCU /ml ；HBcAb：0.2 NCU /ml。TRFIA批内变异系数均小于10%。
CLIA最后测定的是光子的量，其敏感度在检测乙肝两对半时如下： HBsAg ：0.05ng/ml；HBsAb：0.5 mIU/ml；HBeAg ：0.3 NCU /ml；HBeAb：1.3NCU/ml ；HBcAb：0.06 NCU /ml。国内有文献报道采用化学发光法检测乙肝病毒学5种血清血标志物最小批内精密度为2.90%，最小批间精密度为6.04%[8]。
2、线性范围
CGIV 只能进行定性检测，不能测出线性范围；ELISA半定量检测方法线性范围比较窄，其检测HBsAg的线性范围是0.5～4.0ng/ml； TRFIA的线性范围在检测HBsAg时为0.2-300ng/ml。CLIA的线性范围为最宽，在检测HBsAg时为0.05-1000ng/ml，可以较为准确地反映HBsAg在血清中的含量。
三各种检测单位的解读
乙肝病毒血清学检测方法中TRFIA 、CLIA可用于定量检测，但因检测采用的单位不同，给临床医生和患者正确解读检验报告并将检验報告结果用于诊疗带来困难。常用的单位包括ng/ml、mIU/ml、NCU/ml、PEIU/ml、S/CO值等。
ng/ml表示每毫升中含有的纳克数，常在检测HBsAg的浓度时使用。因HBsAg为抗原，在HBsAg定量检测时只有国际单位IU/ml和ng/ml等单位可以与其转换，其转换关系是1IU=0.5ng。
mIU/ml表示每毫升中含有的毫单位数，常在检测HBsAb的浓度时使用。
NCU/ml 英文全称是national clinical unit，是国家卫生部临检中心单位（Nation health laboratory center units），定义是使用国际上公认的一流公司的试剂盒检出原血清中某物质的最低含量称为1NCU/ml。常在检测HBeAg和HBeAb等浓度时使用。它与质量浓度单位ng/ml并没有直接的换算关系，也不能与国际单位IU/ml换算。
PEIU/ml是基于Paul-Ehrlich-Institute标准（联邦血清与疫苗管理局标准），是德国制定的一个国家标准，常在检测HBeAg和HBeAb等浓度时使用。
S/CO值中的S表示样本（sample），CO表示临界值（cut off）。临界值CO一般定在阴性对照物的2.1倍，即CO = N×2.1，如果阴性光密度值为0.05，CO = 0.05×2.1=0.105。S/CO≥1判为阳性，S/CO<1判为阴性。在定量检测中S/CO值的大小表示超出临界值的倍数，例如S/CO值为356，即阳性值大于临界值356倍。
NCU/ml、PEIU/ml、mIU/ml均为相对定量单位，且它们之间因受检测试剂的影响，所以它们之间不存在换算关系。
综上所述，我们发现不同的乙肝病毒检测方法各有其优缺点，如传统的ELISA在检测乙肝血清病毒时存在灵敏度欠佳，线性范围窄、对低浓度乙肝血清病毒检测存在漏诊情况，所以如何针对病人情况选择最好的乙肝血清病毒检测方法至关重要；其次不同乙肝病毒检测方法间的单位无明确换算关系，有时对于低浓度乙肝血清病毒病人仍需多种检测方法同时进行以综合判断病人病情 。
参考文献
[1]等.实用内科学
[2]李君、陈娟等.慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA与HBeAg、HBeAb含量的关系. [J]东南大学学报.2004.23（4）：250-252
[1]张秀明、熊继红、杨有叶等. 2011年. 临床免疫学检验质量管理与标准操作程序. 人民军医出版社
[2]刘锡光、祁自柏、熊诗松等. 1998年第二版.病毒性肝炎实验诊断学. 人民卫生出版社
[3]乔艳红.乙肝病毒表面抗体TRFIA方法的建立及其应用[J].标记免疫分析与临床 .2007，14（1）：24-26
[4]杜锦池. 时间分辨荧光技术在乙型肝炎两对半检测中的应用研究[J].中国医药指南 .2013，11（7）：202-204
[5]龙绍芬. 乙肝两对半定量检测结果分析[J].实验与检验医学.2012，30（2）：187-188
[6]王晓玲. 乙型肝炎血清学标志物不同检测方法的结果分析[J].中国中医药现代远程教育.2011，3（9）：192-193
[7]毛丽萍.微粒子酶免疫测定乙肝病毒表面抗原的平价[J].南通医学院学报.2003，23（2）225-226
[8]胡国茂.化学发光免疫分析定量检测乙肝病毒标志物方法学研究. [J].标记免疫分析与临床.2004，11（3）157-159
[9]刘涛.不同方法学检测乙型肝炎肝炎血清标志物结果平价[J].中国医药指南.2013，（8）121-122
[10]刘运周.三种检测乙型肝炎两对半常用方法的比较[J].中国医师进修杂志.2012，35（7）22-26
[11]Masubara，N. A novel hepatitis B virus surface antigen immunoassay as sensitive as hepatitis B virus nucleic acid testing in detecting early infection. [J]. Transfusion . 2009， 49（3） 585-595
[12]PFEIFER K . Performance Characteristics of an Improved Version of the ABBOTT IMx～（～R） HBsAg （V2） MEIA. [J]. Clinical Laboratory. 2002， 48（7/8） 359-364
[13]王潔.两种免疫分析系统对乙肝肝炎表面抗原定量测定的比较[J].中华肝脏病杂志.2013.21（3）192-195
病毒血清 篇4
1 对象与方法
1.1 对象
2007年10月至2007年12月,绵阳地区健康体检义务献血者6 063例,经金标法和ELISA证实HBsAg阳性312例(5.15%),其中男183例,女129例,年龄18～55岁。
1.2 材料
1.2.1 仪器
AT-2全自动加样器和FAME全自动酶免分析仪(瑞士,HAMILTONGS公司);OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪(日本,OLYMPUS公司)。
1.2.2 试剂
(1)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)胶体金检测试剂:北京万泰生物药业有限公司。(2)乙型肝炎病毒免疫血清标志物(HBVM):①HBsAg;②乙型肝炎表面抗体(抗-HBs);③乙型肝炎e抗原(HBeAg);④乙型肝炎e抗体(抗-HBe);⑤乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)检测试剂盒,北京万泰生物药业有限公司。(3)丁型肝炎病毒免疫血清标志物(HDVM):①HDAg;②抗-HD检测试剂盒,中国预防医学科学院病毒研究所肝炎研究室。(4)肝功能检测试剂:总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能检测试剂、校准品和质控品,由日本OLYMPUS公司提供。
1.3 方法
留取经金标法和ELISA法证实的HBsAg阳性患者血清,贮于-20℃冰箱中,待样品收集齐备,将冰冻血清回复至室温,3 000r/min离心10min,取上清液用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBVM和HDVM,用OLYMPUS AU 400全自动生化分析仪检测肝功能指标,操作按使用说明书进行。
1.4 统计学处理
所有数据均使用SPSS10.0统计软件进行统计分析,计量资料检测结果用均值±标准差
2 结 果
2.1 312例HBsAg阳性患者血清中检出HDAg 11例、抗-HD 20例,HDV感染率为9.94%(31/312),其中男性感染率为10.38%(19/183),女性HDV感染率为9.30%(12/129),男女比较差异无统计学意义(χ2=0.10,P>0.05)。以HBsAg和HBeAg均阳性判定为HBV复制活跃,以HBsAg阳性且HBeAg阴性判定为HBV复制缓慢,两组HDV感染率比较,差异有极显著性(χ2=19.61,P<0.001),见表1。
2.2 HBV重叠感染HDV患者,血清ALT和AST均明显比未重叠感染HDV患者高(P<0.01),而TBil和DBil两组比较差异却无显著性(P>0.05),见表2。
*P<0.001。
3 讨 论
HDV是一种直径为35～37nm,分子量为68 000的缺陷性肝炎病毒,外壳由乙型肝炎病毒的表面蛋白构成,其中94%为HBsAg(P24/P27),1%为前S1蛋白(P39/P42),5%为前S2蛋白(P33/P36),基因组为单股负链环状RNA。研究表明,前S2能结合人多聚清蛋白,对HDV吸附、侵入肝细胞有重要作用,HBV进入肝细胞后,依赖宿主细胞的酶和HBV的衣壳蛋白,采用双滚环机制复制装配成完整的HDV颗粒[2,4]。过去认为HDV感染和生活周期的完成需要HBV的帮助,只有当HBV复制产生的衣壳蛋白——HBsAg装配在HDAg和丁型肝炎病毒核糖核酸(HDVRNA)的外部,方能组成丁肝病毒颗粒[5]。现在发现,除HBV作为辅助病毒可为HDV提供外壳外,其全嗜肝病毒如土拨鼠肝炎病毒(WHV)和鸭肝病毒(DHBV)也可用其表面蛋白为HDV提供外壳[6]。
HDAg为HDV基因组编码的唯一蛋白,其与HDVRNA构成病毒的核心。HDAg除参与病毒颗粒的装配外,还对病毒的复制过程发挥调节作用——小分子量HDAg促进病毒复制,而大分子量HDAg则减缓HDVRNA的复制[7],这种调节作用对于HDV的生存非常重要,因为HDVRNA的复制如果只有正调节,必将导致HDVRNA过度聚集,从而破坏病毒所依赖的宿主细胞,使HDV丧失生存和复制环境。
根据HBsAg阳性携带者抗-HD的血清流行病学调查,HDV感染遍及全球,但HDV感染的分布并不规则。过去认为在慢性乙型肝炎患者中,HDV感染率以中东地区和非洲国家最高,欧美国家其次,亚洲国家较低[8]。但最近研究表明,在亚马逊河流域,HBsAg携带者HDVM血清阳性率高达52.81%[9];而在伊朗HBV患者HDV感染率仅为5.8%[10]。2007年,Sagnelli等[11]对意大利79家医院的1 336例HBsAg阳性患者(其中86.4%患者HBeAg阴性)检测表明,HDV感染率为9.7%。与我国临近的印度,2005年报道HBsAg携带者血清抗-HD阳性为10.6%,其中7.3%为过去感染(IgG阳性,IgM阴性),而另3.3%为新近感染(IgM阳性)[12];日本HBV与HDV重叠感染也不少见,达9%[13]。
我国是HBV感染流行的高发区,因此,就HDV感染状况广大医务工作者做了大量调查:1989年买凯等[14]报道我国11个省、市、自治区1 027例HBsAg阳性患者HDV感染率为1.66%(17/1 027),其中河南、四川、福建、辽宁、黑龙江、广西、上海、北京八省、市634例HBsAg阳性患者血清中均未检出抗-HD,而内蒙、新疆和西藏自治区393例HBsAg阳性患者血清中检出抗-HD阳性17例(4.33%),呈明显的地方性散发特征,HDV感染主要发生在边疆少数民族地区。此后,张凌等[15]检测了重庆地区242例HBsAg无症状携带者抗-HD,阳性率为9.91%,郊区阳性率明显高于市区。2006年刘成桂等[16]对四川地区216例HBsAg携带者进行血清HDAg和抗-HD检测,检出HDAg阳性8例,抗-HD阳性15例,HDV感染率为10.6%。本文HDV感染率9.94%高于国内先期报道而与近期报道接近,估计与新近HDVM试剂检测的灵敏度更高有关,也可能系纳入研究的对象乙型肝炎病毒复制状态不同所致。本组男性HDV感染率为10.38%,女性HDV感染率为9.30%,男女比较差异无显著性(P>0.05),说明HBV重叠感染HDV与性别无关。
HDV与HBV复制的关系目前认识尚不一致,多数学者认为HDV感染对HBV的复制有抑制作用[4],血清学研究表明,重叠HDV感染的慢性HBV患者,血清中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及HBV聚合酶等指标的滴度降低。但Michitaka等[17]认为,HBV与HDV重叠感染者与单独HBV感染者的血清中HBVDNA并无差异。本文结果显示:在HBV复制活跃组(HBsAg和HBeAg均阳性)HDV感染率为3.76%,较HBV复制缓慢组(HBsAg阳性且HBeAg阴性)HDV感染率19.05%明显低(P<0.001),说明乙型肝炎患者重叠感染HDV后,HDV复制会抑制HBV的复制和表达,促使HBeAg阴转,使HBVM血清学模式表现以HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)为主要模式。这种作用可能是由于HDV与HBV复制时竞争同一蛋白质或核酸系统,也可能因病毒彼此相互干扰所致。
在临床诊断和治疗HBV感染过程中,往往忽视了HBV与HDV的重叠感染。文献报道,慢性肝病患者常因HBV与HDV重叠感染引起双重损害而表现为进行性肝病,多形成慢性肝炎重度、重型肝炎、肝硬化或肝癌,临床表现为病情重,并发症多,预后差[18]。本组资料显示,HBV患者重叠感染HDV后,血清ALT和AST均明显比未重叠感染HDV患者高(P<0.001),表明HBV重叠感染HDV会加重肝脏的损害。因此,重视HBV与HDV的重叠感染,加强对HBVM和HDVM及肝功能指标的检测很有必要。
摘要：目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)与丁型肝炎病毒(HDV)重叠感染后血清病毒性肝炎标志物和肝功能变化。方法对312例HBsAg携带者,用ELISA法检测HBV和HDV免疫血清标志物(HBVM:HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc;HDVM:HDAg和抗-HD),用OLYMPUSAU400全自动生化分析仪检测肝功能指标。结果312例HBsAg携带者血清HD-VM检出率为9.94%,其中男性HDV感染率为10.38%,女性HDV感染率为9.30%,男女比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV复制活跃组HDVM检出率为3.76%,较HBV复制缓慢组HDVM检出率19.05%明显低(P<0.001)。HBV重叠感染HDV患者,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)分别为(83.7±81.9)U和(64.6±66.5)U,均明显比未重叠感染HDV患者ALT(27.7±13.5)U和AST(25.3±14.2)U高(P<0.001)。结论HBV重叠感染HDV后,HDV复制会抑制HBV的复制和表达,促使HBeAg阴转,使肝脏功能明显受到损害。
病毒血清 篇5
资料与方法
2003年12月～2007年3月血清乙型肝炎病毒标志物（HBVM）阳性患者51例，其中男42例，女9例，年龄15～69岁，平均27.65±10.69岁；血清HBVDNA最高为9.2×108copy/L，最低为＜1000copy/L；血清HBVDNAD常用对数为平均为5.58±2.84；病程1个月~16年，平均42.82±51.11个月；有症状者24例，无症状者27例；有家族史者9例，无家族史者4例，家族史不详者38例；中医辨证无证可辨者27例，肝胆湿热者8例，肝气郁结者7例，肝肾阴虚者3例，肝郁脾虚者4例，脾虚者2例。
实验方法：填写情况调查表，清晨空腹采血，同时行肝胆脾B超等检查。
变量赋值及统计方法：将HBVM阳性患者分为3组，第1组是乙肝大三阳患者，第2组是乙肝小三阳患者，第3组为非乙肝大三阳和小三阳患者。男性赋值为1，女性赋值为2；症状、家族史、转氨酶异常及其他情况异常（包括血小板计数、肝功能中除转氨酶以外的其他指标、肝胆脾B超等）的有则赋值为1，无则赋值为0，不详则赋值为2；中医辨证无证可辨者赋值为0，肝胆湿热者赋值为1，肝气郁结者赋值为2，肝肾阴虚者赋值为3，肝郁脾虚者赋值为4，脾虚者赋值为5；血清HBVDNA、年龄、病程（以月为单位）均为实际数据，血清HBVDNAD＜1000copy/L者赋值为0，血清HBVDNA先转化为常用对数，然后再进行统计分析。利用SPSS10.0进行分析。
结 果
乙肝大三阳组30例，小三阳组16例，非乙肝大三阳和乙肝小三阳组5例，HBVDNA最低分别为1100copy/L、＜1000copy/L、5700copy/L；最高分别为9.2×108copy/L、2.6×108copy/L、9.7×107copy/L；HBVDNA常用对数分别为7.17±1.17、2.68±2.75、5.21±3.14。转氨酶正常组22例，异常组29例，HBVDNA最高分别为1.7×108copy/L、9.2×108copy/L；HBVDNA常用对数分别为4.28±3.34、6.56±1.93。其他情况正常组36例，异常组15例，HBVDNAD最高分别为9.2×108copy/L、1.3×108copy/L；HBVDNAD常用对数分别为5.62±2.92、5.46±2.76；有症状组24例，无症状组27例，HBVDNAD最高分别为9.2×108copy/L、1.9×108copy/L；HBVDNAD常用对数分别为6.04±2.97、5.16±2.77。
乙肝大三阳组血清HBVDNAD最高为9.2×108copy/L，乙肝小三阳患者血清HBVDNAD最高也有2.6×108copy/L,除乙肝大三阳组与非乙肝大三阳和小三阳组血清HBVDNAD最低为分别为1100copy/L、5700copy/L外，其他组血清HBVDNAD最低均为0，血清HBVDNAD最低分布范围基本相同。
乙肝大三阳组与乙肝小三阳组、转氨酶正常组与转氨酶异常组血清HBVDNA常用对数比较均P值均＜0.05，具有显著性意义，说明乙肝大三阳组血清HBV复制水平较乙肝小三阳组高；转氨酶异常组血清HBV复制水平较转氨酶正常组高；而其他4组患者血清HBVDNAD常用对数比较P值均＞0.05，无显著性意义，可认为此4组病例HBV复制水平相当。
HBVM阳性患者中医辨证无证可辨者血清HBVDNAD范围为（0～1.9）×108copy/L，肝胆湿热者血清HBVDNAD范围为（0～1.0）×108copy/L，肝气郁结者血清HBVDNA范围为（0～9.2）×108copy/L，肝肾阴虚者血清HBVDNAD范围为（0～1.3）×108copy/L，肝郁脾虚者血清HBVDNAD范围为7.49×105～2.6×108copy/L，脾虚者血清HBVDNAD范围为2.72×106～2.19×107copy/L，各中医证型之间血清HBVDNA常用对数比较除无证可辨者与肝郁脾虚者有显著性差异（P＜0.05），其余各中医证型之间均无显著性差异。
HBVM阳性患者中医辨证无证可辨者占52.9%，其次为肝胆湿热者占15.7%，肝气郁结者占13.7%，肝郁脾虚者占7.8%，肝肾阴虚者占5.9%，脾虚者占3.9%。
讨 论
本组病例临床资料结果提示血清HBVDNA与HBVM模式有关,乙肝大三阳组血清HBVDNA较乙肝小三阳组高，这与高氏等［1］报道的血清HBVM阳性患者中HBeAg阳性者HBVDNA阳性率及血清HBVDNA均明显高于抗-HBe阳性或HBeAg阴性者相似。但并不是绝对的，乙肝大三阳患者血清HBVDNAD最高为9.2×108copy/L，乙肝小三阳患者血清HBVDNAD最高也有2.6×108copy/L。e抗原抗体阴性患者病毒含量不一定低，其血清HBVDNAD最高、最低值均在乙肝大三阳患者范围内。进行血清HBVDNAD测定更有助于了解HBV复制情况，应加强对e抗原抗体阴性患者血清HBVDNA的监测。
刘氏等［2］研究提示：慢性乙型肝炎患者HBVDNA负荷与其肝组织炎症活动度有相关性，随着慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA水平升高,其血清ALT和肝组织炎症活动度明显升高。而与王氏等［3］HBVDNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显相关的结论有一定的出入，值得进一步探讨。
另外，本组资料提示症状的有无及其他情况正常与否其血清HBVDNA分别比较无明显差别，这与慢性HBV感染者常常无明显临床表现并呈慢性进展，进而导致肝纤维化、肝硬化甚至肝癌的过程有关，说明HBV的持续感染和复制是导致病情进展的重要因素，即使无临床症状也应该加强对一般情况的监测和随访，以便及时发现和掌握治疗时机。
此外，本组资料还显示乙肝家族史不详者占相当大比率（74.5%），说明患者和医生应重视和加强对乙型肝炎患者家族史的追忆、随访，这样将有助于了解乙型肝炎发展的自然史，为乙肝防治提供依据和经验。
總之，血清HBVM提供了HBV感染的间接证据,血清HBVDNA是HBV感染及复制的直接证据［4］,对于血清HBVM阳性患者,血清HBVDNA与肝功能、HBVM的同时检测,加上对其血小板、肝胆脾B超等的定期监测和对患者家族史的详细询问，将对乙型肝炎的预防、临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察都具有非常重要的指导意义。
本组研究表明各中医证型之间血清HBVDNA常用对数比较无显著性差异，由于观察病例的数目太少，期待以后进一步研究加以证实。
此外，HBVM阳性患者中医无证可辨者血清HBVDNAD范围为（0～1.9）×108copy/L，其中HBVDNA阳性率为85.2%（23/27），如何针对这些患者情况制定相应的中医临床观察和治疗标准，也是中医在乙肝及其并发症防治中应该解决的问题。
参考文献
1 高俊芬，张翠萍，孙庆国，等.应用荧光PCR技术检测6500例患者血清HBVDNA的实验研究.中国实验诊断学，2002，6(3):142-143.
2 刘伟，赵伟，罗婵.慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA负荷与其肝组织炎症活动度的相关性研究.临床肝胆病杂志，2002，18(1):26-27.
3 王敏，乐晓华，王辉，等.HBVDNA定量与HBVM及病理关系的探讨.临床医学，2004，24(4):5-6.
病毒血清 篇6
1 材料与方法
1.1 标本采集
采自2004年8月17日至2006年 3 月21 日本院门诊病人158例 (最小年龄80天, 最大年龄61岁。) 取静脉血3mL, 分离血清, 用免疫酶染色法进行EBV—VCA —IgG、EBV—VCA —IgA、EBV—VCA —IgM的检测。
1.2 试剂组成
EB病毒抗原片、冻干酶标抗体底物 (二氨基联苯胺) 、底物缓冲液 (tris) 、0.01M磷酸缓冲液 (PBS) pH 7.4～7.6均购自中国预防医学科学院病毒学研究所肿瘤病毒研究室;30%H2O2自配。
1.3 测定方法
(1) 取细胞涂片移置室温风扇吹干。
(2) 用PBS将待检血清作1∶5～1∶40倍比稀释;
(3) 将稀释好的血清按5微升/每孔涂于EB病毒抗原片小孔内 (IgG作1∶20、1∶80;IgM作1∶5、1∶10;IgA作1∶10、1∶20两个滴度的涂片) 。
(4) 37℃湿盒内孵育60分钟, 用PBS洗三次, 每次5分钟, 然后用蒸馏水冲洗一次, 风扇吹干。
(5) 滴加相应的酶标抗体于细胞涂片上, 37℃湿盒内孵育35分钟, PBS洗片如3。
(6) 吸取底物缓冲液1mL加蒸馏水9mL后, 溶解二氨基联苯氨5mg, 加30%H2O210～15μL, 用于两片细胞涂片的显色反应。
(7) 将细胞涂片浸泡于显色液中常温5～8分钟, 取出细胞涂片放入蒸馏水内漂洗一次, 吹干。
(8) 普通光学显微镜观察结果。
1.4 结果判断
阴性血清:细胞不着色。
阳性血清:细胞呈棕色, 计阳性细胞数。
1+ 在细胞孔内仅少数细胞呈淡黄色。
2+ 低倍镜下每视野低于10个细胞, 呈棕黄色。
3+ 低倍镜下每视野大于10个细胞, 呈棕黄色
在EBV—VCA —IgG、EBV—VCA —IgA、EBV—VCA —IgM中有一项或一项以上阳性 (VCA一IgA 1∶10, VCA一IgM 1∶5, VCA一IgG 1∶80) 者, 即判断EB病毒抗体阳性。
2 结果
1) 在158例受检人中, 共检出EB病毒抗体阳性血清110例, 占受检人数的69.62%, 其中已确诊的为81例, 累及到的相关疾病27种, 81例EB病毒感染疾病谱及年龄分布见 (表1) 。未成年人 (<18岁) 组50例, 占总病例数的61.73%, 其中12岁以下的儿童42例, 占该组人数的84.00%, 占总病例数的51.85%, 累及到的相关疾病14种。
2) 81例EB病毒抗体阳性分型比较 (表2)
3 讨论
EB病毒所致的疾病非常广泛, 可涉及血液、心血管、呼吸、消化等多个系统多个脏器。在本文所显示的81例EB病毒感染中, 累及到的相关疾病27 种, 其中以血液系统疾病为多, 占35.80%, 如过敏性紫癜、传染性单核细胞增多症、特发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血、糖尿病紫癜肾。其他系统的疾病如病毒性心肌炎、哮喘、荨麻疹、肝炎、化脓性扁桃体炎、类风湿性关节炎、病毒性脑炎等疾病均发现与EB病毒有关, 提示临床在疾病诊断过程中, 不能局限于病名的诊断, 应尽可能进行病因诊断[1], 综合分析。
EB病毒感染症状多变, 因此实验室诊断尤为重要。目前临床最常用的方法—血清学抗体的检测, 此方法较为准确、方便、快速, 有助于疾病的诊断[2]。EB病毒抗衣壳抗原抗体 ( anti—VCAantibody ) IgM阳性, 说明EB病毒感染处于急性期, EBV—VCA —IgM升高, 表示近期感染或病毒持续活动状态, 故早期EBV—VCA—IgM检查是EB病毒感染的可靠的指标之一;EB病毒抗衣壳抗原抗体 ( anti—VCAantibody ) EBV—VCA—IgG阳性出现于EB病毒感染的恢复期, 可终生存在, 轻度升高一般作为既往感染的标记, 如异常高滴度的EBV—VCA —IgG则提示有慢性活动性EB病毒感染[3,4];EB病毒抗衣壳抗原抗体 ( anti—VCAantibody ) IgA, 即EBV—VCA—IgA, 其阳性说明曾感染过EB病毒, 多在半年以前, 低滴度见于病毒感染, 慢性鼻炎, 高滴度 ( 1∶40 ) 以上对鼻咽癌的诊断价值较大[5]。在持续性感染的患者体内, 能检出多种EB病毒抗衣壳抗原抗体, 如双项阳性或多项阳性者, 认为机体免疫功能低下时, 潜伏的EB病毒活化形成了复发感染, 应根据不同疾病进行具体的分析。
从表1中的疾病年龄分布来看, EB病毒感染多集中于12岁以下儿童, 占病例数的51.85%, 其中传染性单核细胞增多症是儿童EB病毒感染最常见的类型[6], 本文中传染性单核细胞增多症8例均出现于12岁以下年龄组, 故考虑EB病毒对儿童危害较大。在本文结果显示出EB病毒感染可累及不同年龄的多种疾病, 可能是EB病毒感染在不同地理地区的年龄分布与该地区的经济水平有关, 在发展中的国家或地区感染多发生在较小的年龄[7], 经济水平低的人群小年龄有着高度EB病毒感染。免疫防御功能低下是发病的重要原因[8], 尤其是免疫缺陷性疾病容易感染EB病毒。因EB病毒可通过唾液或血液播散, 在不良的卫生条件下, 将病毒传递到手、 玩具以及其他物品, 接触后受染, 对儿童需要提高保健意识, 做好个人卫生监护, 降低感染率。
参考文献
[1]李中跃, 楼金秆, 陈洁.儿童EB病毒感染首发症状及相关疾病谱分析[J].中华儿科杂志, 2004, 42 (1) :22-24.
[2]吕亚芳, 李中跃, 梁黎, 陈洁.儿童EB病毒感染及其相关疾病临床分析.浙江预防医学, 2005, 17 (4) :41-42.
[3]赵林清, 钱渊.EB病毒感染及其相关疾病[J].中华儿科杂志, 2003, 41 (10) :797-799.
[4]余勤, 伊藤韩生.EB病毒抗体检测对EB病毒感染患儿的诊断价值[J].浙江医学, 1997, 19 (1) :203-204.
[5]郑毓, 钟福华, 韦立国.鼻咽癌与EB病毒感染关系的研究.河南肿瘤学杂志, 1995, 8 (3) :236-239.
[6]金小红, 王昕昕, 罗菁.EB病毒感染30例临床分析.浙江临床医学, 2005 (3) :279.
[7]王滨有.病毒与健康 (第一版) .北京:化学工业出版社, 2004, 96.
病毒血清 篇7
1材料与方法
1.1标本来源
6620例血清标本均来自本院门诊及住院病人, 病人年龄21～62岁, 平均年龄44.3岁。
1.2方法及试剂
时间分辨荧光免疫分析法, 采用AT-2006时间分辨荧光分析仪及配套试剂, 由上海新波生物技术有限公司提供。
1.3统计学处理
所有资料均用例数或百分率表示。
2结果
在6620例血清标本中, HBsAg阳性者共597例。其中HBsAg浓度在5ng/mL以下者共129例, 占受检人数的1.95%, 占HBsAg阳性人群的21.61%, 对这129例HBsAg浓度在5ng/mL以下的病人的乙肝血清标志物模式进行分析, 共发现有6种模式, 见表1。
在HBsAg低水平的病人中, 以A模式最常见, 占76.674%;HBsAg和HBcAB同时阳性 (A/B+C) 占94.57%;HBsAg及HBeAg同时阳性 (B/F) 占11.63%;有1例HBsAg和HBsAb同时阳性的模式, 其HBsAg浓度为0.64ng/mL;单独HBsAg阳性者5例, 占低水平HBsAg病人总数的3.87%。
3讨论
慢性乙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的疾病, 我国是病毒性肝炎的高发区, 近年来的研究表明, 在部分乙肝病毒感染的人群中, 血清表面抗原呈低水平存在, 容易造成漏检。对低水平存在的血清标志物进行有效检测, 具有重要的临床和流行病学意义。尤其是目前普遍采用的酶标检测方法, 对低水平人群更容易造成漏检。随着免疫学技术的不断发展, 时间分辨荧光免疫分析技术的应用, 使低水平乙肝病毒得以检出。本文发现, 血清HBsAg浓度在5ng/mL以下者共129例, 占受检总人数的1.95%, 占HBsAg阳性人数的21.61%, 这足以表明血清低水平HBs Ag人群占有相当的比例。
本文发现, 低水平HBsAg病人的乙肝病毒血清标志物模式中, 以HBs Ag、HBeAb和HBcAb阳性最多见 (76.64%) , 大部分情况下, HBsAg和HBc Ab同时存在 (94.57%) , HBs Ag单独存在的情况并不多见 (3.87%) 。因此, 建议在做HBs Ag检测的同时, 能够同时检测相关的乙肝病毒其他指标, 这对保证输血安全和控制院内感染有重大意义。本文检测到1例HBs Ag和HBsAb共存的模式, 其HBsAg浓度为0.64ng/mL, 推测二者同存的原因可能是HBV发生变异引起的。另有5例HBs Ag单独存在的模式, 这种低浓度的表面抗原携带者最容易漏诊, 值得进一步探讨。
摘要：目的了解血清低水平乙肝病毒表面抗原的分布状态及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征。方法采用时间分辨荧光免疫分析技术对6620例门诊及住院病人的血清进行乙肝两对半定量测定, 确定浓度在5ng/mL以下的HBsAg阳性倒数, 并分析相关乙肝病毒标志模式。结果6620例受检者中HBsAg阳性共597例, 其中HBsAg在5mg/mL以下者共129例, 占受检者总人数1.95%, 占HBsAg阳性人群的21.61%。在129例低水平HBsAg病人的乙肝病毒标志物模式中, 以HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性为主, 共99例占76.71%;单纯HBsAg阳性者5例, 占3.87%。结论在乙肝病毒感染的人群中, 有相关比例的患者HBsAg的含量呈低水平状态, 提高HBsAg检测的灵敏度有很重要的意义。
关键词：时间分辨荧光免疫分析,乙肝病毒,乙肝表面抗原
参考文献
病毒血清 篇8
关键词：乙肝病毒前S1抗原,乙肝血清标志物,阳性
乙型肝炎主要是由乙型肝炎病毒 (HBV) 引起的一种传染性疾病, 传播快, 感染率高, 危害性大。我国已成为乙肝感染大国, 据国家卫生部门统计, 乙型肝炎在我国一般人群中的感染率已超过60%, 而乙肝表面抗原慢性携带率维持在10%左右。临床上, HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg和HBeAb等五种乙肝病毒血清标志物是HBV检测的常规项目。近几年, 医学界对PreS1￣Ag研究发现, 乙肝病毒HBV表面大分子蛋白就是PreS1￣Ag, 前S1蛋白在HBV附着和入侵干细胞的机制中发挥着重要的作用, 被公认为是HBV感染和复制的早期主要参考指标, 也是对乙肝患者进行诊治和预后的一个重要对照指标。本文笔者通过对820例乙肝患者血清样本进行PreS1￣Ag和五项乙肝病毒血清标志物联合检测进行了研究, 分析了二者之间的关系, 报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2009～2011年我院乙肝门诊进行健康体检、确诊HBV患者和HBV住院患者共820例 (份) 血清样本。诊断标准依据2000年全国第十次传染病与寄生虫病学会和肝病联合会修订的病毒肝炎的诊治方法。
1.2 检测方法
患者清晨空腹抽取静脉血5ml, 分离机分离血清后进行检测。PreS1￣Ag试剂采用上海阿尔法生物技术有限公司产, 乙肝病毒五项试剂采用上海新生物技术有限公司产, CB371酶标仪和ELX50洗板机均采用上海复兴长征医学科学有限公司产, ANYTES2000时间分辨荧光测定仪采用上海新波生物技术有限公司产。检测均按照试剂盒说明书操作和判定结果。
1.3 判定标准
以HBsAg>0.5ng/ml、HBsAb>10mIU/ml、HBeAg>0.03NCU/ml、HBeAb>1.5NCU/ml和HBcAb>0.1NCU/ml判定为阳性反应。
1.4 统计学分析
采用用SPSS 11.0统计软件进行数据分析, 阳性率之间的对比采用检验χ2, 以P<0.05视为有统计学意义。
2 结果
2.1 PreS1￣Ag联合HBV￣M检测结果见表1。
2.2 乙肝五项不同模式与PreS1￣Ag检出率关系对比见表2。
2.3 HBsAg (+) 浓度与PreS1￣Ag阳性率间的关系见表3。
3 讨论
3.1 PreS1￣Ag与HBV之间的病理关系分析
研究发现, 乙型肝炎病毒主要附着于肝细胞膜表面, PreS1蛋白的氨基酸21～47片段是重要的细胞膜受体结合部位, PreS1￣Ag由于具有高度的免疫原型, 因此是机体感染HBV后最早显现, 也是最快消失的血清标志物。诊断上来看, PreS1￣Ag消失越早, 一般而言患者预后相对越好;反之, 若机体匮乏对PreS1￣Ag的免疫反应时, 由于未能很好地清楚HBV而成为长期慢性携带者[3]。
3.2 PreS1￣Ag与HBV￣M联合检测结果分析
从本文表1来看, 820例血清样本中, PreS1-Ag检出576例, 阳性率为70.2%, 提示PreS1蛋白与乙型肝炎病毒感染有关。本文表2中的HBV￣M模式中, HBsAg (+) +HBeAg (+) +HBcAb (+) 模式中PreS1￣Ag阳性检出率为90.1%, 在HBsAg (+) +HBeAb (+) +HBcAb (+) 模式中PreS1￣Ag阳性检出率为62.3%, 而在HB-sAg (+) +HBeAg (+) 模式中PreS1￣Ag阳性检出率为60.2%, 这与Barrera A等[4]报道的80.1%、47.3%和100%相差较为明显, 分析原因可能与样本数、检测方式等有关。而从表3可以看出, HBsAg (+) 浓度值与PreS1￣Ag阳性检出率成正比关系, HBsAg (+) 浓度值越高, PreS1￣Ag阳性检出率也越高, 也即是说, PreS1￣Ag阳性检出率与乙肝病毒表面抗原含量密切相关, 含量越高, 其接触率也就越高。
从临床应用角度上来说, PreS1￣Ag持续阳性可以推测患者病情在持续恶化, 预后也较差;而对急性乙肝患者来说, PreS1￣Ag转阴越早, 其预后也将越好, 这反映病毒在逐渐消除。总之, PreS1￣Ag可作为乙肝常规五项标志物的补充检测, 能更好地显示出乙肝病毒的复制状态和传染性, 对早期诊断和治疗有重要的临床价值。
参考文献
[1]乔菲.乙肝病毒前S1抗原检测的意义[J].实用医技杂志, 2009, 14 (5) :571-572.
[2]林裕龙, 兰萌, 龙国进, 等.PCR-RFLP检测HBeAg阴性preS1抗原阳性的HBV感染者前C区基因变异[J].临床检验杂志, 2009, 24 (5) :321-323.
[3]韩文明, 黄燕.乙肝病毒前S1抗原与乙肝病毒血清标志物联合检测的临床意义[J].中国现代医药杂志, 2011, 13 (7) :13-17.
[4]Barrera A, Guerra B, Notvall L, et al.Mapping of the Hepatitis B viruspre-S1 domain involved in receptor recognition[J].J Virol, 2010, 79 (15) :9786-9791.
病毒血清 篇9
1 检测系统的标准和规范化, 有利于检测结果的互认
为方便资源共享, 有利于患者, 卫生部专门发文要求推广检测结果互认。乙肝病毒血清标志物定性测定由于检测系统局限, 测定结果可比性差, 结果互认欠科学。而定量检测系统仪器智能化程度高, 重复性好, 标准品可溯源至国际标准或行业标准, 报告结果单位采用WHO推荐或国际常用单位, 如HBsAg和HBsAb采用m IU/mL, HBeAg、HBeAb和HBcAb采用PEIU/ml (Paul-Ehrlich Institute Unite/ml) , 可比性好, 适合检测结果互认。
2 提高了灵敏度, 更适合临床应用
酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定灵敏度为0.25～0.5 ng/mL, 金免疫层析试验 (GICA) 测定HBs Ag灵敏度为1～5 ng/mL。而荧光免疫分析法 (TRFIA) 和化学发光免疫测定法 (CLIA) 测定HBsAg灵敏度为0.005～0.1 ng/mL, 对于其他乙肝病毒血清标志物测定也有很高的灵敏度, 因此更适合临床应用[4]。在HBV感染早期、或HBsAg-HBsAb血清学转换期、S基因变异、丙肝病毒和丁肝病毒重叠感染情况下, 都会影响HBsAg表达, 致HBsAg浓度低于ELISA和金免疫层析试验检测下限, 造成漏检。而定量测定所采用方法学的灵敏度高于传统方法, 可检出低浓度HBsAg, 及早判断HBV感染。
3 评价乙肝疫苗接种效果
全程 (3针) 免疫结束后1个月检测保护性HBsAb的浓度, 据此值将乙肝疫苗接种者分为四种情况: (1) 无应答者:抗体浓度小于1 m IU/m L, 无抗体产生或非特异性结合反应, 约占接种者的5%, 应继续加大剂量或更换疫苗厂家全程 (3针) 免疫注射。 (2) 低应答者:抗体浓度为1～10 m IU/m L, 保护作用比较弱, 约占接种者的10%, 须加强2针疫苗注射。 (3) 中应答者:抗体浓度为10～100 m IU/m L, 已有一定的保护力, 约占接种者65%, 须加强1针疫苗注射。 (4) 高应答者:抗体浓度大于100 m IU/mL, 免疫效果最好, 约占接种者20%, 不需要加强注射。
传统HBsAb测定多采用定性测定, 结果报告阴阳性, 无法溯源至国际或行业标准, 也就无法采用通行标准判断免疫力强弱。对于婴幼儿预防接种、防止高危人群职业暴露、免疫力评价以及预防策略的选择, 定量测定都具有重要意义。
4 有助于抗病毒治疗选择、疗效和预后效果评价
(1) HBV感染过程中, 因为S基因变异、不同亚型感染、干扰素诱导等因素影响, 可造成HBsAg和HBsAb共存。而HBsAg和HBsAb浓度的消长, 可反映病情转归和疗效。高浓度HBsAg经抗病毒治疗后或自然转变成阴性或持续低浓度;自然感染或抗病毒治疗后, HBsAb保持较高浓度, 说明治疗有效, 预后良好。在急性乙肝恢复期中约有3%的个例可同时检出低水平HBsAg和HBsAb, 然后HBsAg消失而HBsAb水平渐增高。 (2) HBeAg是核心抗原的可溶性成分, 与Dane颗粒、HBsAg、HBVDNA和前S1抗原呈正相关, HBeAg出现, 提示HBV感染和复制。HBeAb出现, 通常表示复制减少, 传染性变弱, 病情好转。HBeAg和HBeAb可在血清中共存, 其浓度消长, 可以反映病情变化和治疗效果。高浓度的HBeAb一方面提示病情的好转, 而在表达前C信号肽基因突变时, 虽不能表达HBeAg, 也可能出现肝硬化、肝坏死、肝癌, 应进一步结合肝功生化指标如丙氨酸转氨酶 (ALT) 、天冬氨酸转氨酶 (AST) 、血清胆红素 (BIL) 等进行综合判定。 (3) HBcAb是HBV感染“窗口期”惟一能检出的HBV血清标志物, 也是乙肝恢复期甚至好转期长期存在的标志物, 其浓度的高低可以反映病毒感染的状态及疾病的转归。 (4) 急性乙型肝炎一般会在6个内病情缓解, 甚至自愈。病情超过6个月仍未缓解者, 多转为慢性化, 但通过五项联合定量分析, 再结合肝功能指标和HBV-DNA的水平, 即若表现为HBeAg下降、HBeAb出现或渐升, HBsAg和HBV-DNA血清水平降低, 这是病变恢复的时相, 可望在1年～2年病毒被清除而疾病痊愈;若HBeAg和HBV-DNA血清水平持续很高的患者, 预期可能保留慢性无症状携带 (AsC) 或慢性乙型肝炎。
总之, 乙肝病毒血清标志物定量测定的广泛应用, 越发彰显其在乙型肝炎的预防、诊断、治疗和预后评估方面的重要性, 势必成为临床检测的方向。
参考文献
[1]吴殿磊, 徐光华, 郭贤利, 等.乙型肝炎病毒血清标志物免疫学检测方法发展现状[J].延安大学学报 (医学科学版) , 2006, 4 (1) :5-6.
[2]贾继东, 李海.HBsAg和HBVe抗原定量检测的临床意义[J].中华检验医学杂志, 2009, 32 (9) :965-966.
[3]魏来.HBV标志物定量和标准化是临床检测的方向[J].中华检验医学杂志, 2009, 32 (9) :967-970.
病毒血清 篇10
关键词 血清胆汁酸(TBA) 病毒性肝炎
血清胆汁酸(TBA)测定作为肝功能检查目前日益受到重视，但临床系统观察的报道甚少。为了探讨其临床意义，本文对各型病毒性肝炎365例进行了检测，了解其在不同肝病时变化并与肝功能进行比较。
资料与方法
1993年4月～ 1994年4月收治病毒性肝炎患者365例，其中急性黄疽型肝炎176例，急性无黄疽型43例，慢性迁延型21例，慢性活动型71例，重症肝炎12例，肝炎后肝硬化42例；男258例，女107例，男∶女=2.41∶1；平均年龄35.12岁。临床诊断符合第六次全国病毒性肝炎会议诊断标准。
对照组为健康献血员23例，男17例，女6例，平均年龄30.4岁。
方法：采用3-羟基胆汁酸脱氢酶测定，仪器为日立7150全自动生化分析仪。全部病例均于晨起采空腹血，做血清胆汁酸测定，并以同一血样本做常规肝功能检查。
结 果
胆汁酸测定结果：各型肝炎患者血清TBA水平均增高，与正常对照组比较有显著差异(P<0.05)，尤以急性黄疽型肝炎、慢性活动型肝炎、重症肝炎及肝硬化升高明显，见表1。
谷丙转氨酶测定结果：各型肝炎患者血清谷丙转氨酶(ALT)水平均增高，经统计学分析正常对照组与各组间差异均有显著性意义(P<0.05)，尤以急性黄疽型、慢活肝、重症肝炎升高明显，见表2。
TBA在ALT升高不同程度中的变化：结果TBA随ALT的升高而升高。但除了ALT3～6倍与6～10倍两组间TBA无差异外(P>0.05)，其他各组间有显著差异，见表3。
TBA与ALT、TBIL阳性率比较：测定结果超过正常值者为阳性。从阳性单来看，TBA阳性率主要高在急住黄疽型、慢性活动型、重症肝炎及肝硬化。而ALT阳性率高在急性黄疽型、慢性活动型、急性无黄殖型及重症肝炎。而TBA与TBIL的比较中，在急性黄疽型肝炎和重症肝炎中胆红素异常率均在100%，而且TBA阳性率也都很高，似乎与胆红素代谢有关。但在慢活肝和肝硬化中，胆红素代谢异常率分别为7.1%、35.71%，而TBA异常率分别为90.90%、96.77%，见表4。
讨 论
本文测定了23例正常人空腹血清胆汁酸正常值为 4.81±2.62，与文献报道相似[1]。本文对308例各型肝炎TBA测定结果来看各型肝炎均升高，同正常对照比较差异非常显著。说明TBA是反映肝细胞损害非常敏感的指标，对无黄疽型肝炎尤有诊断价值。
本文TBA测定结果显示：TBA升高与肝细胞损害的程度成正比，急性黄应型肝炎、慢性活动型肝炎、肝硬化及重症肝炎升高最明显，重症肝炎尤甚。它们分别平均超过正常15倍、7倍、6倍及25倍以上。TBA的升高主要是由于胆汁酸肝肠循环时，肝脏对胆汁酸的清除障碍所致。Poupou等证明，肝硬变患者分别测定外周血、门脉血及肝静脉血中胆汁酸的浓度，均高于正常值的3～5倍，提示肝实质性损害。
有人报道[2]在轻症肝病早期TBA即可见升高，说明TBA可灵敏的发现早期肝损害。Korman等又证明，在常规肝功能试验已恢复正常的肝炎恢复期而TBA高于正常者肝穿活体组织检查常常显示有病理性改变。在酒精性肝病的研究中[3]，也证明TBA升高能反映肝细胞存在病理改变及其损害的严重程度。
本文在TBA与TBIL的比较中发现，急性黄疸型肝炎和重症肝炎胆红素异常率均为100%，而且TBA阳性率也很高，但在慢性活动型肝炎、肝硬化中，胆红素代谢异常率分别为7.1%、35 71%。而TBA异常率分别为90.90%、96.77%。这是因为胆红素和胆汁酸是截然不同的两种物质。脸红素是红细胞破坏后血红蛋白的代谢产物。而胆汁酸是由胆固醇衍变而来，TBA与TBIL不呈平衡关系。
本文资料表明：血清胆汁酸测定在了解肝细胞损伤程度上是一敏感指标。它能准确反映肝功损伤程度，如TBA超过正常20～30倍以上，应高度警惕重症肝炎的可能。与ALT比较来看，它随ALT升高而增高，并在肝硬变、重症肝炎中阳性率较ALT高，故可以说TBA是肝功能检查的一项灵敏指标，值得临床推广使用。
参考文献
1 陈士漠.血清曾胆酸测定对慢性肝病的诊断价值.实用内科杂志，1990，10(1)：28.
2 王俊九.血清总胆汁酸测定在肝胆疾病中的意义.临床医学杂志，1987，33(4)：246.
