S-腺苷蛋氨酸

关键词：

S-腺苷蛋氨酸（精选八篇）

S-腺苷蛋氨酸 篇1

妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP) , 是发生在妊娠中、晚期的疾病, 对于母体来说是一种良性疾病, 但对围生儿却危害极大, 可导致早产、胎儿窘迫、死胎、死产等。我们选择了2005年7月—2008年12月在我院因妊娠期肝内ICP住院治疗患者, 分析其治疗效果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2005年7月—2008年12月在我院因ICP住院治疗患者, 共97例, 随机分成2组, 联合组56例, 年龄22～39岁, 平均年龄 (25.4±5.7) 岁;孕周27～36周, 平均孕周 (29.9±7.3) 周。对照组41例, 年龄21～40岁, 平均年龄 (26.9±6.2) 岁;孕周28～35周, 平均孕周 (28.7±6.5) 周。2组孕妇的其他一般情况如体重、孕产次等, 经统计学检验, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 2组有可比性。2组孕妇均无皮肤病史, 无慢性肝病史, 肝炎血清学标记物为阴性。

1.2 诊断标准

根据《中华妇产科学》标准[1]进行诊断: (1) 妊娠中、晚期出现皮肤瘙痒和不同程度的黄疸; (2) 血清总胆汁酸水平或血清甘胆酸水平显著升高, 血清转氨酶由轻度到重度升高; (3) 妊娠是引起皮肤瘙痒和生化检查异常的惟一原因; (4) 妊娠终止后症状体征迅速消失, 原生化检查异常值恢复正常。

1.3 清胆养肾汤主要配方

茵陈30g, 丹参、桑寄生、旱莲草、女贞子各15g, 淡芩、柴胡、山栀、车前子、赤芍各10g, 金钱草5g。

1.4 治疗方法

联合组予静脉滴注S-腺苷蛋氨酸1000mg, 每日1次, 7d 1疗程, 同时煎服清胆养肾汤, 每日分2次服用, 7d1疗程。对照组单纯静脉滴注S-腺苷蛋氨酸1000mg, 每日1次, 7d 1疗程, 疗程结束后检查血清甘胆酸和血清丙氨酸氨基转移酶, 根据检查情况决定是否进行第2个疗程。

1.5 统计学处理

采用SPSS 12.0统计软件, 进行卡方、方差检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组治疗前生化指标检查结果

联合组孕妇治疗前血清甘胆酸含量为 (59.4l±19.25) nmol/ml, 血清丙氨酸氨基转移酶活力为 (102.23±41.72) U/L;对照组孕妇治疗前血清甘胆酸含量为 (54.78±21.03) nmol/ml, 血清丙氨酸氨基转移酶活力为 (99.65±39.43) U/L。2组相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

2.2 2组治疗1个疗程后生化指标检查结果

联合组孕妇血清甘胆酸含量为 (32.68±10.39) nmol/ml, 血清丙氨酸氨基转移酶活力为 (59.11±30.74) U/L;对照组孕妇治疗前血清甘胆酸含是为 (40.78±17.32) nmol/ml, 血清丙氨酸氨基转移酶活力为 (71.47±35.59) U/L。联合组血清甘胆酸明显下降, 与对照组相比, 差异有统计学意义 (t=2.66, P<0.01) , 而对照组需行第2个疗程治疗。

2.3 2组的一般情况

联合组终止妊娠时孕周为 (36.63±3.12) 周, 新生儿体重为 (2604.37±579.08) g, 新生儿1min评分为 (9.12±1.14) 分;对照组终止妊娠时孕周为 (37.01±2.89) 周, 新生儿体重为 (2588.75±601.31) g, 新生儿1min评分为 (9.05±1.46) 分, 2组相比, 差异无统计学意义 (P>0.05) 。

3 讨论

妊娠期肝内胆汁淤积症临床上主要以皮肤瘙痒、黄疸、血清胆汁酸升高为特征, 分娩后症状迅速消失, 生化指标也恢复正常, 再次妊娠时可复发, 对母儿特别是胎儿的危害极大, 可引起早产、胎儿宫内窘迫、死胎、胎儿宫内生长受限等, 使围生儿病率及死亡率增加[2]。在妊娠期, 随着雌、孕激素的增加, 雌激素可引起逆行的胆汁淤积, 胆酸盐沉积在胎盘绒毛膜上, 可造成绒毛间隙狭窄, 引起慢性胎盘功能不良, 高浓度胆汁酸有浓度依赖性血管收缩作用, 可使胎盘绒毛静脉痉挛, 影响胎儿营养及氧的交换, 甚至发生胎儿生长受限或导致胎儿慢性缺氧[3]。

妊娠期肝内胆汁淤积症属中医“黄疸”范畴, 根据辨证病属“阳黄”。妊娠期间经血不再外泄, 气血聚而养胎, 形成阴血偏虚, 虚火内生, 此时易肝气郁结, 脾胃升降失常, 湿热内生, 交蒸于肝胆, 肝失疏泄, 胆汁外溢, 浸淫肌肤而身目俱黄, 气血运行不畅, 气滞血瘀, 化燥生风, 肌肤失养而生瘙痒之症。胞宫为孕育胎儿之所, 胎儿的滋养需要肝肾两脏及冲任二脉的调节, 若先天肝肾两虚孕后势必加重母体负担, 导致肝虚失去疏泄之功, 气郁化热夹湿则使黄疸加重, 进而引起胎动不安[4]。

妊娠期肝内胆汁淤积症对母儿的危害极大, 治疗上主要包括降胆酸、护肝、胎儿监护和适时终止妊娠。其中S-腺苷蛋氨酸疗效良好, 是近年研究的热点药物。腺苷蛋氨酸是存在于人体所有组织和体液中的一种生物活性物质, 在体内以甲基供体和生理性巯基化合物的前体参与重要的生化反应。在肝细胞内, 通过质膜磷酰甲基化作用灭活雌激素, 通过巯基反应促进解毒过程, 改善胆汁酸代谢系统的解毒功能, 起退黄、降酶作用, 防止肝内胆汁淤积。妊娠期肝内胆汁淤积症患者, 由于腺苷活性酶合成酶的活力下降, 使内源性腺苷蛋氨酸合成减少, 此时补充外源性腺苷蛋氨酸, 可使之恢复到正常水平而发挥作用[5], 从而达到胆酸明显下降, 改善胎儿与胎盘的代谢环境, 因此, 可预防胎儿宫内窘迫, 也能降低早产的发生率。本文2组资料均证实了这一点。

清胆养肾汤主要由茵陈、丹参、桑寄生、旱莲草、女贞子、淡芩、柴胡、山栀、车前子、赤芍、金钱草等药物组成。方中茵陈可清热利湿而退黄;桑寄生祛风湿, 益肝肾, 安胎;淡芩清热燥湿、除热安胎;柴胡疏肝, 肝胆得疏:车前子、金钱草利水祛湿泻热, 使湿热从小便泻出。综观全方, 具有清利肝胆湿热、养肾安胎之功效。本文中联合组应用S-腺苷蛋氨酸治疗的同时煎服清胆养肾汤, 治疗后的血清甘胆酸和血清丙氨酸氨基转移酶明显下降, 比仅用S-腺苷蛋氨酸治疗能更快达到临床治疗效果, 可见清胆养肾汤在治疗妊娠期肝内胆汁淤积症的独到功效, 值得应用于治疗妊娠期肝内胆汁淤积症。

参考文献

[1]曹泽毅.中华妇产科学.北京:人民卫生出版社, 1999:501-507.

[2]戴钟英.妊娠肝内胆汁瘀积症对终止妊娠的时机选择.实用妇产科杂志, 2002, 18 (1) :11.

[3]唐萍, 王正平, 黄荷风.ICP对胎儿的影响和产科处理.国外医学妇产科分册, 2002, 29 (3) :148.

[4]吴献群, 骆黎静, 李莉.清胆滋肾汤对妊娠期肝内胆汁淤积症大鼠肝脏ICAM-1及胎盘ER的影响.中西医结合肝病杂志, 2007, 17 (1) :30-31.

S-腺苷蛋氨酸 篇2

重组毕赤酵母发酵生产S-腺苷甲硫氨酸培养条件优化

甲醇营养型毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是通过其表达的SAM合成酶催化L-甲硫氨酸(L-Met)和ATP反应而合成的..本文采用全合成培养基,在摇瓶上进行了培养条件的优化,确定了接种量、pH、PTM1、PO43-等初步条件.并根据SAM生物合成的特征,重点对其碳、氮源的影响作了进一步的分析优化.结果表明:当CaSO4 0.465g/L,K2SO4 9.10g/L,MgSO4・7H2O 7.45g/L,PO43-0.5mol/L情况下,生长阶段,甘油4%、硫酸铵4.00g/L为最佳;诱导表达阶段,L-Met1.0g/L,甘油与甲醇比例为0.5、硫酸铵8.00g/L为最佳.优化后,SAM产量诱导4d后达1.48g/L,诱导5d后可达1.70g/L(131mg/g干细胞),L-Met的转化率可达40.65%,既利于工艺放大又便于产品的分离纯化.

作 者：朱志钢 储炬 胡晓清 庄英萍 王永红 张嗣良 袁中一 ZHU Zhi-Gang CHU Ju HU Xiao-Qing ZHUANG Ying-Ping WANG Yong-Hong ZHANG Si-Liang YUAN Zhong-Yi  作者单位：朱志钢,储炬,胡晓清,庄英萍,王永红,张嗣良,ZHU Zhi-Gang,CHU Ju,HU Xiao-Qing,ZHUANG Ying-Ping,WANG Yong-Hong,ZHANG Si-Liang(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,国家生化工程技术研究中心,上海,200237)

袁中一,YUAN Zhong-Yi(中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所,上海,200031)

刊 名：工业微生物  ISTIC PKU英文刊名：INDUSTRIAL MICROBIOLOGY 年，卷(期)：2006 36(3) 分类号：Q939 关键词：毕赤酵母   高密度发酵   甲硫氨酸   S-腺苷甲硫氨酸  

S-腺苷蛋氨酸 篇3

1.1 一般资料

淤积性肝硬化患者92例, 随机分成两组, 治疗组46例, 对照组46例, 其中男60例, 女32例, 年龄20-75岁, 平均43岁。全部病例符合2000年美国肝病学会 (AASLD) 的诊断标准。病程最长12年, 最短3年, 平均7年。治疗组与对照组的性别、年龄、病理、肝功能差异及临床症状差异均无显著性 (P>0.05) .

1.2 治疗方法

两组在常规治疗基础上, 治疗组给予S-腺苷蛋氨酸1000mg (商品名:思美泰) 加入5%葡萄糖注射液250ml中静脉滴注, 每天一次, 疗程4周, 苦参碱注射液150mg (商品名:天晴复欣) 加入5%葡萄糖注射液250ml中静脉滴注, 每日1次, 疗程4周。对照组给予苦参碱150mg (商品名:天晴复欣) 加入5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注, 每日1次, 疗程4周。两组均给予辅加药物门冬氨酸钾镁针20ml加入5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注, 疗程4周。

1.3 观察指标

治疗后临床症状改善情况及并发症的发生情况, 治疗后2周, 1个月复查血生化指标的变化。

1.4 疗效评定标准

显效:疗程结束时临床症状消失或基本消失, 黄疸消退或基本消退、肝功能正常、肝脾肿大回缩、腹水消失。有效:疗程结束时症状改善, ALT、AST、TBIL下降到治疗前水平的50%以下, 腹水明显减少。无效:症状、体征无变化, 肝功能无好转。有效率 (%) = (显效病例+有效病例) /总病例数×100%

1.5 统计学方法

应用SPSS10.0统计软件, 数据用 (X±S) 表示。t检验及方差分析, 以p<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床症状改善情况, 两组患者治疗后临床症状均有改善, 见表1

注:组间比较P<0.05

2.2 肝功能指标, 两组治疗后ALT AST TBIL明显下降, 与治疗前比较有显著性差异 (P<0.01) , 见表2

注; (1) 与同组治疗前比较, P<0.01 (2) 与对照组治疗后比较P<0.01

2.3, 治疗效果比较:治疗组在改善症状, 降酶退黄、腹水下降等方面优于对照组, 见表3

3 讨论

胆汁淤积性肝硬化[1]是由多种病因导致长期肝内或肝外胆汁淤积所引起的肝硬化, 其病变特点是胆汁淤积, 肝实质损害和进行性肝纤维化[2]。严重危害人体的健康, 且目前尚无理想的治疗药物。腺苷蛋氨酸[3]是存在于人体所有组织和体液中的一种生理活性分子。它作为甲基供体 (转甲基作用) 和生理性巯基化合物 (如半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽和辅酶A等) 的前体{转硫基作用}参与体内重要的生化反应[4], 在肝内通过使质膜磷脂甲基化而调节肝脏细胞膜的流动性。而且通过转硫基反应可以促进解毒过程中硫化产物的合成。这些反应就有助于防止肝内胆汁淤积。

苦参碱是苦参素的衍生物[5], 可减少肝细胞损伤, 并促进其再生, 改善肝脏微循环, 以利于胆红素摄取, 结合与排泄而达到抗炎保肝以及退黄降酶的功效。临床研究发现苦参碱具有抗炎、调节免疫、消肿利尿和抑制细胞凋亡等作用[6]。苦参素不仅可抑制病毒复制, 还对感染后免疫系统具有双向调节作用, 从而减轻肝损伤[7]。有研究表明, 苦参碱具有抗炎、调节免疫、稳定细胞膜、激活细胞膜腺苷酸环化酶, 诱导肝细胞微粒体药物代谢酶, 清除自由基、升高白细胞, 抗肝纤维化等作用[8]。

综上所述, S-腺苷蛋氨酸联合苦参碱[9]治疗胆汁淤积性肝硬化与对照组对比。结果表明治疗组治疗后转氨酶、黄疸下降及临床症状改善情况均比对照组治疗后改善明显。并且安全、有效、值得临床推广使用。

摘要：目的 观察S-腺苷蛋氨酸 (商品名:思美泰) 联合苦参碱治疗胆汁淤积性肝硬化临床疗效。方法 治疗组S-腺苷蛋氨酸1000mg (商品名:思美泰, Hos pira SPA Via Fosse Ardeatine 220060Lis cate意大利生产, 进口药品注册标准, JX20000239) 加入5%葡萄糖注射液250ml中静脉滴注, 每天一次, 疗程4周。苦参碱注射液150mg (商品名:天晴复欣, 江苏正大天晴药业股份有限公司生产, 批准文号:国药准字H20030210) 加入5%葡萄糖注射液250ml中静脉滴注, 每日1次, 疗程4周。对照组苦参碱150mg (商品名:天晴复欣, 江苏正大天晴药业股份有限公司生产, 批准文号:国药准字H20030210) 加入5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注, 每日1次, 疗程4周。两组均给予辅加药物门冬氨酸钾镁针20ml加入5%葡萄糖注射液250ml静脉滴注, 每日1次, 疗程4周。结果 治疗组ALT AST TBIL下降与对照组对比有显著差异性 (P<0.01) 。治疗组主要症状改善情况与对照组对比有显著差异性 (P<0.05) , 治疗组总有效率93.4%, 对照组为67.5%。治疗组与对照组对比有显著性差异 (P<0.05) 。结论 思美泰联合苦参碱在改善肝功能、降低胆红素、临床症状等方面具有良好作用, 安全有效, 依从性好, 值得临床推广应用。

关键词：S-腺苷蛋氨酸 (思美泰) ,苦参碱,胆汁淤积性肝硬化

参考文献

[1]叶任高, 陆再英.内科学[M].北京:人民卫生出版社, 2004.1 (6)

[2]梁扩寰, 王家胧.消化疾病诊疗指南.北京:科学出版社, 2004, 1 (2)

[3]颜玉、郑强.腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积的临床观察.黑龙江医药科学, 2009, 12 (32) 6

[4]彭浩辉.思美泰治疗肝内胆管淤积临床观察.临床消化病杂志, 2009, 21 (3)

[5]朱梁, 宋健, 张兴荣.苦参素对成纤维细胞增殖形态学及转化因子β1的影响, 2006, 06.

[6]焦建中, 葛勤利, 陈官陪.苦参碱抗乙型肝炎病毒的临床研究[J].西北国防医学杂志, 2003, 24 (4) :272-273

[7]施光峰, 李谦等.苦参素对大鼠纤维化肝脏金属蛋白酶21和α2平滑肌动蛋白表达的影响.中华肝病杂志, 2004, 12:6-14.

[8]蔡雄, 王国俊, 王俊学等, 苦参素注射液治疗慢性乙型肝炎临床疗效分析.第二军医大学学报, 1997, 18 (3) :47-49.

S-腺苷蛋氨酸 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院重度ICP患者66例, 年龄23~34岁, 开始治疗时孕周28~34周, 均符合重度ICP诊断标准[1,2]和以下任一项指标:总胆红素 (TB) >21μmol/L, 直接胆红素 (DB) >6μmol/L, 谷氨酸氨基转移酶 (ALT) >250U/L, 天门冬氨酸氨转移酶 (AST) >250U/L。排除合并慢性肝炎、自身免疫、代谢、遗传、药物及其他肝脏疾病所致肝功能损害者。所有患者按入院顺序随机分为观察组和对照组各33例, 2组产妇年龄、孕周、瘙痒评分、生化指标等方面比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2 方法 2组患者均口服熊去氧胆酸片 (优思弗) 500mg, 每天2次, 同时辅以维生素C及能量合剂治疗。观察组在此基础上予以静脉滴注思美泰2000mg每天1次;对照组予静脉滴注思美泰1000mg每天1次。7d为1个疗程, 均治疗2个疗程。若症状消失, 生化指标正常则改思美泰或优思弗维持治疗;若治疗无效, 尤其是血胆酸浓度与转氨酶不断上升的患者, 根据胎儿成熟情况, 均积极终止妊娠。

1.3 观察指标 治疗前、后检测肝功能, 均采用空腹静脉血。检测指标:总胆酸 (TBA) 、TB、DB、ALT和AST。瘙痒评分采用Ribaha (1991年) [3]制定的标准:0分为无瘙痒;1分为偶发瘙痒;2分为间断性瘙痒, 无症状波动;3分为间断性瘙痒, 有症状波动;4分为持续性瘙痒, 日夜无变化。

1.4 统计学方法 采用SPSS统计软件进行数据处理, 计量资料以$\overline{x}\pm s$表示, 组间比较采用t检验;计数资料以率 (%) 表示, 组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 生化指标及瘙痒评分

2组患者治疗后TBA、TB、DB、ALT、AST水平及瘙痒评分均较治疗前降低, 差异有统计学意义 (P<0.01) ;观察组治疗后TBA、TB、DB、ALT、AST水平及瘙痒评分均较对照组明显下降, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

2.2 围生儿结局

观察组分娩孕周、阴道分娩率高于对照组, 早产儿、低体质量儿发生率少于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。胎儿窘迫、新生儿窒息、羊水浑浊发生率2组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。见表2。

2.3 不良反应

2组均未发生明显不良反应。

3 讨 论

ICP发病时有众多因素可能与胎儿出现早产宫内窘迫、死胎、死产有关, 其中与胆汁酸与胆红素的关系尤为密切。高胆汁酸血症引起胎盘结构功能的病理变化, 造成母胎血氧交换、运输障碍, 引起胎儿慢性或者急性缺氧。胆汁酸和胆红素还可直接对胎儿造成影响, 通过其细胞毒性使胎儿细胞能量衰竭, 氧自由基损伤及细胞凋亡、死亡等, 从而使胎儿受到损害[4]。

注:与治疗前比较, *P<0.01;与对照组比较, #P<0.05

治疗ICP的目的是缓解因胆盐潴留于皮肤深层而刺激皮肤感觉神经末梢引起的全身瘙痒症状, 恢复正常的肝功能, 降低血

注:与对照组比较, *P<0.01

中胆酸的浓度, 从而降低因高胆酸血症所致的胎儿宫内窘迫及死胎发生率、改善产科的结局[5]。因此, 所选的药物应对母、婴均无不良影响。目前大多数文献表明联合用药较单用药效果好。思美泰与优思弗联合用药治疗ICP, 其疗效已被诸多学者肯定。大剂量思美泰与常规用量思美泰治疗重度妊娠期肝内胆汁淤积症均有好的临床疗效, 在治疗过程中未发生明显不良反应。本资料中观察组经治疗后瘙痒缓解时间早, 转化为轻度ICP例数多证明了其有合理性, 故大剂量思美泰治疗重度妊娠期肝内胆汁淤积症提高了疗效;因此对血胆汁酸、甘胆酸浓度较高的患者和常规治疗剂量 (每天1000mg) 不敏感者使用大剂量思美泰每天2000mg静脉滴注治疗, 值得临床推广应用。

摘要：目的 评估不同剂量S-腺苷蛋氨酸 (思美泰) 治疗重度妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP) 的临床疗效。方法 将66例重度ICP患者分为观察组和对照组各33例。2组均采用思美泰联合熊去氧胆酸片 (优思弗) 治疗, 其中观察组使用思美泰剂量为2000mg, 对照组使用思美泰剂量为1000mg, 观察2组治疗前、后血清总胆酸 (TBA) 、总胆红素 (TB) 、直接胆红素 (DB) 、谷丙转氨酶 (ALT) 、谷草转氨酶 (AST) 的变化及皮肤瘙痒症状和胎儿预后。结果 TBA、TB、DB、ALT、AST水平及瘙痒评分2组治疗后均较治疗前降低, 且观察组低于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.01和P<0.05) 。观察组分娩孕周、阴道分娩率高于对照组, 早产儿、低体质量儿发生率少于对照组, 差异均有统计学意义 (P<0.01) 。胎儿窘迫、新生儿窒息、羊水浑浊发生率2组比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。2组均未发生明显不良反应。结论 大剂量思美泰治疗重度妊娠期肝内胆汁淤积症安全有效, 值得临床推广。

关键词：S-腺苷蛋氨酸,肝内胆汁淤积症, 重度, 妊娠期,疗效

参考文献

[1]戴钟英.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社, 1999:500.

[2]漆洪波, 邵勇, 吴味辛, 等.妊娠肝内胆汁淤积症分度诊断和处理的临床意义[J].中华妇产科杂志, 2004, 39 (1) :14.

[3]Ribaltal, Reyes H, Gonzales MC.S-adenosyl-L-Methionine in the treatment of patient with intrahepatic cholestasis of pregnany:a randomized double-blind, placebocontrolled study with negative results[J].Hepotology, 1991, 13 (6) :1084.

[4]谭大勇, 简丽, 吴味辛.妊娠肝内胆汁淤积症胎儿猝死发病机制的研究进展[J].现代生物医学进展, 2006, 6 (2) :91-93.

S-腺苷蛋氨酸 篇5

中国市场进口的SAMe主要应用在肝病的治疗, 而在神经系统方面的研究刚刚起步。由于脑内依赖SAMe的甲基化决定了控制情绪反应的单胺类神经递质 (如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、血清素和组胺等) 的合成及活化, 而起关键作用的甲基转移酶在脑内如黑质和室旁核团等浓度最高, 集中分布在轴突, 因此SAMe在神经系统内的作用和相关的研究十分重要。

1 S AMe与Alzhe ime r's病 (AD)

AD病人中有叶酸、VB12和SAMe缺乏、血液中高半胱氨酸浓度升高和细胞膜的流动性降低的问题。AD脑SAMe的降低是由于SAMe的合成降低或是利用增加, 例如由于过度的甲基化和多胺的合成, 或是由于食物中蛋胺酸缺乏造成。比较人体死亡15小时内后不同个体脑内SAMe、S-腺氨半胱氨酸 (SAH) 浓度和甲基化指标 (SAMe与SAH的比值) 的异同发现[3], AD患者脑组织中SAMe和SAH的浓度平均分别低于对照的56%和85%, 单位体重内下降43%和79%, 因此这种降低和AD患者脑内总蛋白的降低无关, 与死亡时间、性别及痴呆的程度也无关。口服SAMe可以通过血脑屏障, 两个星期内可以增加脑脊液和血液中SAMe的浓度并可提高部分AD患者情绪和认知情况[4], 究其原因可能和降低淀粉样蛋白 (A) 浓度有关。AD患者脑中有大量老年斑, 由A组成, 来源于A前体蛋白APP的和水解过程, 这本是老化过程中一个正常的生理过程, 而AD病人中却过量沉积, 促使人们意识到痴呆与A浓度有关, 下调淀粉样蛋白有可能预防AD。水解酶和老年素presenilin1 (PS1) 关系密切[5]。PS1缺陷的小鼠不能存活, 而PS1基因过度表达时A蛋白过多异常沉积, 数年后就会导致脑细胞变性。人们正在尝试下调 (而不是完全阻断) PS1基因的表达来下调A蛋白的产生。其理论根据有二, 一是老年人中DNA甲基化逐渐降低, 二是AD病人中HCY生高。二者是相互关联的因为如果HCY不能有效地转化为蛋氨酸将导致SAH的增高, SAH是很强的DNA甲基转移酶抑制剂。用100μM的SAMe处理人神经瘤细胞SK-N-SH不影响APP和PS2的表达却显著降低PS1的表达水平[6]。PS1启动子中三个Cp G岛在生长培养基中总是被甲基化, PS1基因因此被抑制;而在分化培养基中启动子去甲基化, PS1基因因此被表达。如果分化培养基加入SAMe后去甲基化过程被显著抑制, 至少有一个Cp G岛的甲基化发生, PS1基因表达因而被下调, 只保持一个基本水平。在这种情况下A的产生下降6倍。结论是SAMe作为天然的和基本的机体代谢产物可以使PS1基因部分沉默从而降低A的产生。最近又有证据表明不仅是PS1调节的水解酶受甲基化调空, 而且水解酶也是如此[7]。当培养基中缺少叶酸和VB12时导致SAMe降低的同时PS1和水解酶表达增高, A产生增多。基质中加入SAMe可以使PS1和水解酶表达恢复到原来的水平同时降低A产生。因此用SAMe治疗AD可能很有前景。

2 S AMe与帕金森氏症 (P D)

PD是一种进行性神经变性疾病, 其基本特征是黑质纹壮体多巴胺能神经元丢失, 丢失的机理可能是自由基损伤或是与谷氨酸通过NMDA受体造成的兴奋性神经毒性有关。研究证明改善一碳循环可以调节神经变性的进程, 如SAMe可以保护原代培养的神经细胞免受谷氨酸的细胞毒作用, 多胺中的精胺和亚精胺可以清除自由基, 保护细胞膜的脂类不受过氧化作用。临床显示用SAMe前体蛋氨酸治疗PD病人可以部分改善震颤和僵硬的症状, 而SAMe本身可以改善PD病人抑郁症状。

由于SAMe处理PD病人的安全性上仍然有很多争议, 如今左旋多巴辅以脱羧酶抑制剂仍然是治疗PD的首选方案。病人常需服用大量的左旋多巴, 这些左旋多巴经过两种代谢过程, 一是被氧化, 其中间产物quinone和semi-quinone具有很强的神经毒性, 因此长期服用左旋多巴确实可能加重PD症状;二是在儿茶酚-O-甲基转移酶 (COMT) 催化下迅速被SAMe甲基化, 接受左旋多巴的PD病人脑中SAMe浓度明显降低[8] (Wurtman RJ, 1970) , 而外周血中SAMe的浓度降低了50%, SAMe合成酶的活性反馈性地升高了30%[9]。有人还将SAMe处理大鼠作为PD模型, 发现大鼠脑室内注射的SAMe (1-2.5μmol) 多汇聚在纹状体区域, 黑质内多巴胺能神经元发生凋亡, 同时动物出现PD样症状。体外实验发现SAMe和SAH均可以导致未分化及分化PC12的细胞凋亡, 培养基中去除蛋氨酸或加入VB12抗体后胞内的SAMe和SAH浓度下降, PC12的细胞凋亡减少[10]。SAMe体外处理多巴胺能受体D1, D2可以显著降低它们的结合活性[11], 这可能是SAMe使多巴胺能受体甲基化形成甲酯, 继而水解形成了甲醇, 后者的毒性是显而易见的。有人还认为[12]PD病人因为服用了大量的左旋多巴而会增加患冠状动脉病的危险, 因为大量左旋多巴被SAMe甲基化而形成了大量的SAH, SAH不稳定会迅速降解, 使病人血液中同型半胱氨酸显著升高而叶酸浓度不变, 一般认为同型半胱氨酸可以导致多种血管疾病, 这也体现了大量左旋多巴的副作用。可是在最近的研究表明[13]正常人在一个月内每天服用1600 mg SAMe后血液中SAMe显著升高而有害甲基代谢产物 (如甲醛) 和同型半胱氨酸并不升高, 除一人出现躁狂外, 其余人无显著症状;说明口服SAMe很安全, 不会出现血管疾病。

在我国, SAMe用于各种肝病的治疗已经广为人知, 但是用于精神神经系统的治疗还没有开始研究和应用。我国已于1999年进入老年型人口人家。随着人口老龄化的日益加速, 各种神经精神系统的疾病如老年痴呆症, 帕金森症, 抑郁症等的防治也成为日益突出的问题, 可以预见, SAMe未来将在治疗神经系统的多种疾病中起到非常重要的作用, 开展相关的研究势在必行。

摘要：S-腺苷甲硫氨酸 (SAMe, SAM, 或AdoMet) 是参与体内多种细胞代谢活动的一种重要的化合物, 参与转甲基、转硫基和转氨基等人体中超过100种生物代谢反应。人体缺乏SAMe后会出现消化和神经系统疾病如肝病、抑郁症和老年痴呆等。SAMe用于各种肝病的治疗已经广为人知, 但是用于精神神经系统的治疗在我国还没有开始。就SAMe用于精神和神经系统的研究结果作了综述。及时补充SAMe对于改善Alzheimer's病 (AD) 、帕金森氏症 (PD) 的症状具有重要的意义。随着我国和世界人口老龄化的日益加速, SAMe未来将在治疗各种常见的老年神经系统的多种疾病中起到重要的作用。

S-腺苷蛋氨酸 篇6

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2007—01～2008—12的住院患者, 并经临床检查确诊为慢性肝病伴胆汁淤积的患者61例, 均有明显黄疸, 谷氨酸转肽酶 (GGT) 、碱性磷酸酶 (ALP) 胆汁酸 (TBA) 明显升高。随机分为治疗组和对照组, 治疗组31例, 男27例, 女4例, 平均年龄 (43.03±12.36) 岁;对照组30例, 男27例, 女3例, 平均年龄 (44.03±12.78) 岁。两组病例入院时血清总胆红素 (TbiL) , 丙氨酸转氨酶 (ALT) 等各项指标比较均无统计学差异。

1.2 治疗方法

对照组30例给予综合保肝治疗, 用甘草酸二胺150mg加入5%葡萄糖250mL, 静脉滴注, 每日一次, 连续2周;促肝细胞生长素120mg加入5%葡萄糖250mL, 静脉滴注, 每日一次, 连续2周。治疗组31例在上述治疗的基础上加用腺苷蛋氨酸1000mg加入5%葡萄糖250mL, 静脉滴注, 每日一次, 连续2周。

1.3 观察指标

治疗前及治疗2周后患者临床症状、体征变化及肝功能检测。

1.4 疗效评价

治疗2周后临床症状明显改善, 体征消失或减轻, 显效:总胆红素值下降≥50%;有效:总胆红素植下降≤50%;无效:总胆红素值与治疗前相比无明显变化。

1.5 统计学方法

采用SPSS11.5统计软件处理, 实验数据用均数±标准差undefined表示, 均数比较用t检验。等级资料比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积的疗效观察腺苷蛋氨酸治疗组临床疗效明显高于对照组 (P<0.05) , 见表1。

注:经χ2检验P<0.05。

2.2 腺苷蛋氨酸治疗2周后肝功能的变化治疗组与对照组肝功能均有改善, 但与对照组相比, 治疗组TbiL、TBA、ALP、GGT下降更显著, 见表2。

注:与同组治疗前比较*P<0.05, **P<0.01。

2.3 不良反应治疗过程中未发现与药物有关的不良反应。

3 讨论

腺苷蛋氨酸是蛋氨酸和三磷酸腺苷经腺苷蛋氨酸合成酶催化生成。在肝细胞转甲基和转巯基两个重要的生化代谢途径中起关键作用。通过转甲基恢复肝细胞浆膜的流动性, 通过转巯基增强肝细胞的解毒功能。本研究主要观察了腺苷蛋氨酸对于慢性肝病伴胆汁淤积的治疗作用。慢性肝病伴胆汁淤积时患者往往出现疲乏无力、食欲不振、高度黄疸等症状, 实验室检查血清ALT、AST反复或持续升高, 胆红素也明显升高, 往往大于正常的5倍。胆汁淤积时内源性胆汁酸升高, 加重了肝细胞和胆管上皮细胞的损伤, 胆汁酸还能干扰生物膜的脂质成分, 诱导肝细胞破坏, 使肝细胞的修复和再生更加困难。同时高浓度的胆红素造成肝细胞变性、坏死。本研究结果显示, 腺苷蛋氨酸治疗组较对照组有更高的症状改善率, 总胆红素、胆汁酸及谷氨酰转肽酶的下降幅度较对照组更大, 而且可防止胆红素的反弹。慢性肝病患者常有蛋氨酸代谢异常, 腺苷蛋氨酸合成酶活性降低, 因此补充外源性腺苷蛋氨酸提高了肝细胞膜上的Na/K-ATP酶的活性, 改善了胆汁分泌和流动, 清除肝内胆汁淤积, 减轻黄疸;应用腺苷蛋氨酸后血浆和肝脏中谷胱甘肽含量增高, 提高肝细胞的解毒能力, 减少肝细胞的损伤;腺苷蛋氨酸同时促进肝细胞的再生。本研究显示腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积能显著改善临床症状和肝功能指标, 加速黄疸消退, 安全性好, 值得进一步推广应用。

摘要：目的:探讨腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积的临床疗效。方法:选择慢性肝病伴胆汁淤积的患者61例, 随机分为治疗组和对照组。对照组30例给予综合保肝治疗, 静脉滴注甘草酸二胺、促肝细胞生长素;治疗组31例在上述治疗的基础上加用腺苷蛋氨酸。结果:治疗2周后, 治疗组总有效率为90.3%, 显著高于对照组的70.0% (P<0.05) ;总胆红素 (TbiL) 、胆汁酸 (TBA) 、碱性磷酸酶 (ALP) 及谷氨酸转肽酶 (GGT) 分别下降为 (60.2±15.6) umol/L、 (112.1±23.3) umol/L、 (140.2±32.7) U/L、 (180.6±41.3.0) U/L, 与对照组比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。结论:腺苷蛋氨酸治疗慢性肝病伴胆汁淤积能显著改善临床症状和肝功能指标, 加速黄疸消退, 安全性好。

关键词：腺苷蛋氨酸,慢性肝病,胆汁淤积,黄疸

参考文献

[1]杨爱芳.腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸治疗淤胆型病毒性肝炎疗效观察[J].临床荟翠, 2008, 23 (15) :1122-1123

[2]侯世荣, 唐保元, 林厚基, 等.腺苷蛋氨酸治疗黄疸型病毒性肝炎111例[J].中华传染病杂志, 1999, 17 (2) :129-130

[3]Santini D, Vincenzi B, Massacesi C, et al.S-adenosylmethionine (AdoMet) supplementation for treatment of chemothera-pyinduced liver injury[J].Anticancer Research, 2003, 23 (6D) :5173-5179

[4]范荣山, 白贤女, 刘蕴刚, 等.腺苷蛋氨酸治疗慢性重型病毒性肝炎患者对MELD分值的影响[J].临床肝胆病杂志, 2008, 24 (4) :286-287

[5]McClain CJ, Sonq Z, Chawla R, et al.S-Adenosylmethionine, cy-tokines, and alcoholic liver disease[J].Alcohol, 2002, 27 (3) 185-192

S-腺苷蛋氨酸 篇7

关键词：病毒性肝炎,剂量,腺苷蛋氨酸

在临床中病毒性肝炎属于一种常见传染病, 由多种肝炎病毒造成, 症状表现以食欲减退、乏力、恶心、肝区痛以及上腹部不适等为主, 部分患者可伴黄疸发热或者肝功能损害, 少数患者可发展成为肝硬化, 严重时还会发展成为肝癌, 影响患者生活质量和生命安全[1,2]。在病毒性肝炎的临床治疗中, 多采取综合治疗, 包含有抗病毒、护肝退黄等, 腺苷蛋氨酸作为肝病胆汁瘀积的常用药物, 常规剂量为1000 mg/d, 为探讨分析不同剂量腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎的效果, 分别采用了1000 mg和2000 mg腺苷蛋氨酸治疗, 现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年10月~2015年2月到本院实施治疗的70例病毒性肝炎患者为研究对象, 全部患者均满足病毒性肝炎诊断标准, 签订知情同意书, 积极参与研究, 无药物过敏史、精神障碍、交流障碍, 可配合医师完成治疗。排除特征人群 (哺乳期妇女和妊娠妇女) , 合并血液系统疾病、心脑血管疾病、内分泌疾病以及神经系统疾病患者, 存在精神障碍以及言语障碍患者。症状表现以皮肤瘙痒、恶心、厌食以及乏力等为主。将患者随机分为A组和B组, 每组35例。A组男20例, 女15例, 年龄29~71岁, 平均年龄 (46.9±8.6) 岁, 病程2~14年, 平均病程 (9.8±1.6) 年;B组男21例, 女14例, 年龄30~70岁, 平均年龄 (47.1±8.4) 岁, 病程3~13年, 平均病程 (9.6±1.7) 年。两组患者性别、平均病程和年龄等一般资料比较差异无统计学意义 (P>0.05) , 具有可比性。

1.2方法两组患者均施予护肝治疗和支持对症治疗, 输注白蛋白和血浆等, 使用门冬氨酸钾镁、还原型谷胱甘肽、维生素K1以及甘草酸二铵等药物治疗。两组均加用不同剂量的腺苷蛋氨酸 (注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸, 浙江海正药业有限公司, 国药准字H20103110) , 将药物注入至浓度为5%葡萄糖注射液250 ml中实施静脉滴注, 1次/d, A组使用剂量为1000 mg, B组使用剂量为2000 mg。两组均治疗2个月后观察比较效果。

1.3观察指标和疗效评判标准[3]观察比较两组患者临床疗效及各肝功能指标。参照《临床疾病诊断依据治愈好转标准》制定本次研究疗效评判标准。显效:黄疸和其他主要症状基本消失, 谷丙转氨酶 (ALT) 恢复正常, 且血清总胆红素 (TBIL) 下降>95%;有效:主要症状有所改善, ALT降低>50%, TBIL下降>70%;无效:症状未发生显著改变, 或者加重, ALT、TBIL变化不明显。总有效率=显效率+有效率。

1.4统计学方法采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示, 采用t检验;计数资料以率 (%) 表示, 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

经治疗, A组显效15例, 有效13例, 无效7例, 总有效率为80.0%;B组显效17例, 有效16例, 无效2例, 总有效率为94.3%, 比较差异具有统计学意义 (P<0.05) 。A组TBIL为 (56.3±18.3) μmol/L、谷氨酰转肽酶 (GGT) 为 (81.7±32.2) U/L、ALT为 (64.2±32.6) U/L, 碱性磷酸酶 (ALP) 为 (74.7±14.6) U/L;B组TBIL为 (32.4±16.5) μmol/L、GGT为 (59.3±29.6) U/L、ALT为 (60.7±29.9) U/L, ALP为 (55.2±12.4) U/L, B组患者肝功能指标均比A组低, 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。

3小结

病毒性肝炎病理机制比较复杂, 目前尚未明确。大部分学者认为可能和微管功能紊乱、肝细胞功能和膜结构改变、胆汁酸转移到毛细血管降低以及肝细胞胞质变化等有关。腺苷蛋氨酸的活性成分为腺苷和蛋氨酸, 具有解毒和抗毒作用, 不仅能促进胆汁排泄, 同时还可缓解肝内胆瘀积以及肝细胞受损程度, 目前已被广泛应用于病毒性肝炎, 且所获疗效良好且显著[4]。本次研究结果显示, 大剂量B组总有效率明显高于小剂量A组, 且各肝功能指标均明显低于A组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。

综上所述, 在病毒性肝炎的临床治疗中, 与采用小剂量腺苷蛋氨酸比较, 采用大剂量腺苷蛋氨酸治疗可提高治疗效果, 同时在肝功能的改善上更为显著, 在临床中具有应用价值和推广价值。

参考文献

[1]綦怀纲, 牟建立, 冯兴华, 等.腺苷蛋氨酸联合苦参碱治疗病毒性肝炎高胆红素血症60例.中国药业, 2011, 20 (13) :50-51.

[2]王秀英, 赵晖.不同剂量腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎肝内胆汁淤积临床疗效观察.中国现代医生, 2012, 50 (22) :28-29.

[3]李伟健, 吴锐城, 李颖, 等.不同剂量注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎的效果观察.中国当代医药, 2015, 22 (4) :91-93.

S-腺苷蛋氨酸 篇8

摘要：目的:对重组腺苷蛋氨酸合成酶催化L-蛋氨酸(Met)和三磷酸腺苷(ATP)合成腺苷蛋氨酸的反应条件进行研究。方法:将重组腺苷蛋氨酸合成酶制成粗酶液,对其酶促反应条件进行研究和优化,摸索反应的最适pH值、最适反应时间及最适酶量,解决产物抑制问题和产物分解问题。根据试验摸索的条件进行450L生物反应罐的中试放大。结果:重组腺苷蛋氨酸合成酶催化Met和ATP合成的反应最适pH值为7.0,反应时间为8h,选择硼酸钠-硫酸缓冲液作为反应的缓冲系统,确定了反应液中酶液的最佳比例为1∶10,解决产物抑制问题的对甲苯磺酸钠的用量为9%,将镁离子和钾离子的盐酸盐形式改为硫酸盐形式,从而保证了最小限度的产物分解。中试放大结果:三批收率分别达到86.8%、87.1%和88.4%。结论:建立了重组腺苷蛋氨酸合成酶酶促反应的方法,为酶促法合成腺苷蛋氨酸大规模生产奠定了基础。

关键词：重组腺苷蛋氨酸合成酶,腺苷蛋氨酸,酶促反应

腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是参与体内多种细胞代谢活动的一种重要的化合物,参与转甲基、转硫基和转氨基等生物代谢反应,它对慢性乙型肝炎[1]、胆汁淤积症[2]等疾病治疗具有可靠的疗效,在治疗各种常见的老年神经系统的多种疾病[3]和抗肝纤维化[4]中也将起到重要的作用,成为国内很多药厂和研发机构研究的对象。目前腺苷蛋氨酸的制备方法主要有化学合成法、发酵法和酶促合成法三种[5],酶促合成法是在生物体外通过模拟适当的条件利用腺苷蛋氨酸合成酶催化底物L-蛋氨酸和ATP制备腺苷蛋氨酸的方法,它与化学合成法、发酵法相比,具有终产物积累量高、分离提纯容易、反应周期短以及无污染等非常明显的优点,是腺苷蛋氨酸制备工艺研究的趋势。北京凯因生物技术有限公司构建了重组腺苷蛋氨酸合成酶工程菌株,并对发酵表达该合成酶的条件进行了研究与优化,而在酶促合成法制备腺苷蛋氨酸的工艺中,酶促反应的条件和底物转化效率直接影响产品的收率和纯度,是酶促合成工艺的瓶颈,本文通过对最适酶反应pH值、最适酶反应时间、最适缓冲系统、最适酶量的研究,摸索酶促反应的最佳条件;对反应过程中最适对甲苯磺酸钠的量和最适K+、Mg2+的成盐形式进行研究,解决产物抑制和产物分解的难题;通过3批中试放大生产,确定酶促反应的最佳条件。1材料与方法1.1材料腺苷蛋氨酸合成酶工程菌菌体(批号20080901);DL-蛋氨酸(北京嘉康源科技有限公司生产,批号200809151);因腺苷蛋氨酸合成酶只催化L-蛋氨酸与ATP结合,综合成本因素考虑,选择DL-蛋氨酸进行合成反应。三磷酸腺苷(上海太平洋制药有限公司生产,批号20080739)。其他试剂均为分析纯。1.2方法1.2.1腺苷蛋氨酸浓度的测定采用HPLC方法,选择C18柱,外标法测定。1.2.2ATP浓度的测定采用HPLC方法,选择C18柱,面积归一化法测定。1.2.3反应液初始配方设计参考文献资料[6-7]设计了反应液最初的配方:KCl100mmol/L;MgCl245mmol/L;L-蛋氨酸12.5mmol/L;ATP10mmol/L;对甲苯磺酸钠8%(质量体积百分比);Tris-Cl缓冲液0.375mol/L。设定反应温度35℃。1.2.4最适酶反应pH值的测定取1kg发酵菌体,分别重悬于1L0.375mol/L Tris-HCl(pH6.0、pH7.0、pH8.0、pH9.0)的缓冲液中,用高压均质机破碎菌体,15000r/min离心,收集上清,制得粗酶液。分别取酶液50ml,加反应液至1L,反应1h后加入HCl到终浓度为0.3mol/L中止反应,测定反应液中SAM的含量。1.2.5最适酶反应时间的测定选择在pH值为7.0的粗酶液10ml,将反应液体积定容到1L,反应过程中每小时取一次样,测定其中SAM的量。1.2.6最适缓冲系统的筛选原反应液中使用的缓冲系统是终浓度为0.375mol/L的Tris-HCl缓冲液,考虑到TrisH-HCl缓冲液的价格较贵,实际生产时会大大增加成本,因此我们用终浓度为0.1mol/L硼酸钠-硫酸缓冲液代替Tris-HCl缓冲液作为反应液的缓冲系统。分别用上述2种pH7.0缓冲液制得粗酶液,分别取酶液50ml,加入2种缓冲液配制的反应液中,定容到1L,反应8h,取样测定其最终pH值及其中的SAM含量。1.2.7最适酶量的测定在反应液中分别加入50,70,100,120,150ml等5种不同体积的酶液,并将最终体积定容到1L,反应8h,取样测定其中的底物ATP的剩余量和反应液中SAM的含量,并且将实际收到的SAM总量与根据反应计算出来的理论值相比。1.2.8产物抑制问题的解决——对甲苯磺酸钠对酶反应的影响测定在8%,9%,10%,11%,12%(质量体积百分比)这几个浓度下,对甲苯磺酸钠对产物收率的影响。反应体积为1L,加入酶液100ml,反应8h,反应结束后上柱层析,将实际得到的SAM总量与理论值相比,得到收率。1.2.9产物分解问题的解决——不同镁盐和钾盐对酶反应的影响将反应液配方中的MgCl2和KCl换成MgSO4和K2SO4,并且与原配方的反应结果进行比较。反应条件:体积1L,加入酶液100ml,对甲苯磺酸钠9%,时间8h。1.2.10中试放大生产反应液配方(%):四硼酸钠3.81;硫酸钾1.75;硫酸镁1.18;DL-蛋氨酸1.00;ATP1.50;对甲苯磺酸钠9.30,使用硫酸调节pH值至7.0。使用450L生物反应罐,加入酶液36L,反应液体积360L,反应温度35℃,搅拌速度100r/min,每隔1h监测1次ATP含量,反应时间8h,加入HCl到终浓度为0.3mol/L中止反应,用连续流离心机离心,收集上清液,检测SAM含量,计算收率。2结果2.1最适酶反应pH值当反应液的pH值在6.0时,SAM含量为289.42mg;pH值在7.0时,SAM含量为399.89mg;pH值在8.0时,SAM含量为318.24mg;pH值在9.0时,SAM含量为203.82mg。pH值7.0的条件下比高pH值和低pH值条件下酶的活性高,因此,选择pH7.0作为最适反应pH值。2.2最适酶反应时间的测定结果见图1。在合成反应的前6h,SAM的含量随时间的延长而直线上升,6h后SAM含量随时间的变化趋于缓和,在反应进行到9h后,SAM的含量基本不再变化。因此将酶反应的时间定为8h。图1反应时间对酶活性的影响Fig.1Influence of reaction time on enzyme activity2.3最适缓冲系统两种缓冲液的缓冲能力都足以维持反应过程中反应液的pH值;并且使用两种缓冲液反应时,结果比较相近,说明硼酸钠-硫酸缓冲液不会影响SAM的合成。因此选择使用0.1mol/L硼酸钠-硫酸、pH7.0缓冲液作为反应的缓冲系统。见表1。表1不同缓冲体系的反应结果Tab.1Reaction results of different buffer systems2.4最适酶量当溶液中加入的酶液体积超过100ml时,反应后底物的含量基本不变,因此确定加入酶液的最佳比例为1∶10。见图2。图2酶量对反应的影响Fig.2Influence of enzyme quantity on reaction反应结束后的pH值SAM的含量(mg)6.921424.847.151285.54缓冲液种类硼酸钠-硫酸,pH7.0Tris-Cl,pH7.02.5最适对甲苯磺酸钠浓度当对甲苯磺酸钠在反应液中的浓度超过9%时,SAM的收率不再有显著提高,因此确定反应液中对甲苯磺酸钠的浓度为9%。见表2。表2对甲苯磺酸钠浓度对酶促反应的影响Tab.2Influence of paratoluenesulfonic acid sodium salt'sconcentration on enzyme catalysis2.6最适镁盐和钾盐使用盐酸盐形式的镁盐和钾盐,SAM的平均收率为62.4%,而使用硫酸盐形式的镁盐和钾盐,SAM的平均收率为75.5%,反应结果证明,硫酸盐更有利于反应液中产物的稳定。2.7中试放大生产连续生产3批,结果收率分别为86.8%、87.1%和88.4%。3讨论在前期研究中,用羟基磷石灰柱对酶液进行粗纯,用NaCl洗脱,收集OD260值高的洗脱峰,结果显示,酶的纯度和比活都有一定的提高,但酶的总量损失较大,损失率达到30%,所以本研究使用未经提纯的重组腺苷蛋氨酸合成酶粗酶液进行实验。本研究所用的是大肠埃希菌表达的大肠埃希菌腺苷蛋氨酸合成酶,研究证明,其酶促反应最适的pH值接近中性,与重组毕赤酵母表达的S-腺苷蛋氨酸合成酶的酶促反应pH值相比略低[8]。腺苷蛋氨酸合成酶是由4个分子量为43kD的亚基形成的同源四聚体[9],分子结构复杂,作为两性蛋白质分子,最适的pH值能使蛋白质分子的四级结构较长时间保持稳定,从而能够最大效率地发挥其催化能力,与较高的pH值相比,中性的pH值也更利于保持合成产物的稳定。重组大肠埃希菌腺苷蛋氨酸合成酶的酶促反应时间控制在8h,在后续的研究中应同时监测ATP的含量变化,因为在两个反应的底物中ATP的量比蛋氨酸少,监测其浓度变化可以更容易确认反应的终点,确保反应完全,满足底物转化率的要求,同时尽量缩短反应时间可以减少S,S-异构体向S,R-异构体的转化。最适缓冲系统的选择更多的是考虑成本因素,所选择的硼酸钠-硫酸缓冲液可以保证反应的pH值稳定,也能保证SAM的收率。酶量的选择与表达产物的表达量同样密切相关,但因是使用未加提纯的粗酶,且考虑在反应时监测底物浓度,因此,选择1∶10的酶量能够保证反应完全。腺苷蛋氨酸作为酶促反应的产物,是SAM合成酶的抑制剂,可以通过添加对甲苯磺酸钠、乙腈、巯基乙醇或尿素来解8910111249.758.258.657.959.8对甲苯磺酸钠在反应液中的浓度(%)SAM的收率(%)决产物抑制问题,其中以对甲苯磺酸钠效果最好[10]。对甲苯磺酸钠在溶液中可以和SAM形成离子——π复合物[7],能够阻止SAM和腺苷蛋氨酸合成酶结合,起到抗反馈抑制的作用,而且还能使SAM合成酶选择性变性,使其不与SAM结合而不影响酶的活性,有效增加SAM离子的稳定性,对提高产品的收率有重要意义。当反应液中对甲苯磺酸钠浓度达到8%(质量体积百分比)时,就可以起到很好的抗反馈抑制作用,本实验研究中,在对甲苯磺酸钠达到9%时得到了最佳的反应结果。腺苷蛋氨酸合成酶在生物体内进行合成时,需要Mg2+和K+一起协同完成催化反应[11],因此,Mg2+和K+在SAM的合成反应中是必不可少的。在我们前期的实验中一直使用MgCl2和KCl进行反应,但用高效液相色谱对反应的程度进行监测,发现即使反应液中ATP的残余量已经很少,但SAM的收率仍不能令人满意,我们怀疑在反应过程中合成的SAM同时也在分解,以致于最后层析收获的SAM与理论值总是差距较大。因此我们对镁盐和钾盐的成盐形式进行了选择。SAM成盐形式中有与对甲苯二硫酸形成复盐的[12],所以考虑用硫酸盐代替盐酸盐,结果证明硫酸盐好于盐酸盐。中试放大生产使用生物反应罐进行,反应过程中可以匀速搅拌,可以保证酶与底物充分接触,从而使反应的效率更高。经过中试放大生产,证明了反应条件研究的结果,即最适pH值为7.0,反应时间为8h,选择硼酸钠-硫酸缓冲液作为反应的缓冲系统,反应液中酶液的最佳比例为1∶10,对甲苯磺酸钠的用量为9%,将镁离子和钾离子的盐酸盐形式改为硫酸盐形式能够保证腺苷蛋氨酸的收率。通过研究,解决了产物抑制和产物分解的难题,为后续的纯化提供了有力的保证。中试放大生产证明反应条件可靠,收率稳定。本实验研究为酶促法合成腺苷蛋氨酸的工业化生产奠定了基础。