血清碱性磷酸酶

关键词： 钙化

血清碱性磷酸酶（精选九篇）

血清碱性磷酸酶 篇1

1 资料与方法

我院2012—2014年收治的冠心病患者470例, 无慢性肝病、急慢性胆道系统疾病、活动性感染、慢性炎症性疾病等可能影响血清ALP水平的因素。按Gensini评分系统判断冠状动脉非严重狭窄的结果, 将Gensini评分≥40分的329例, 设为严重狭窄组;<40分的141例, 设为非严重狭窄组。ALP正常范围:男性为40~129U/L, 女性3 5~1 04 U/L。

2 结果

严重狭窄组男253例, 女76例;合并高血压病218例 (66.3%) ;ALP升高72例 (21.9%) 。非严重狭窄组男88例, 女53例;合并高血压病34例 (24.1%) ;ALP升高7例 (5.0%) 。由表1可见, 冠状动脉严重狭窄组较非严重狭窄组, 血肌酐、ALP水平更高, 左室射血分数更低, 血清高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 水平降低, 红细胞分布宽度 (RDW) 、平均红细胞体积 (MPV) 及血清磷水平升高。两组年龄、体质指数 (BMI) 、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 、糖化血红蛋白 (Hb A1c) 、白蛋白、血清钙水平无显著差异。

3 讨论

Martins等[2]发现, ALP分布与心肌细胞肌浆网具有一致性, 从而增强ALP在心脏的病理作用, 故推测血清ALP可局部调节心脏功能。Shantouf等[3]通过多层螺旋CT评价冠状动脉钙化发现ALP升高水平与冠状动脉钙化相关。本文通过测量主要存在骨、肝、肾中的非组织特异性血清ALP水平发现, 冠状动脉严重狭窄组的血清ALP水平显著高于非严重狭窄组, 表明血清ALP水平升高可能是冠状动脉粥样硬化患者冠状动脉狭窄的重要因素。

参考文献

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血清碱性磷酸酶 篇2

关键词：翘嘴鳜；胚胎发育；酸性磷酸酶；碱性磷酸酶

中图分类号： S917 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）10-0287-03

酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）广泛存在于动物各种组织，是非特异性的磷酸单酯水解酶。它们分别在酸性和碱性条件下起催化作用，直接参与磷酸基团的转移与代谢，有众多的催化底物和复杂的生理学功能[1]。其活性与生命活动密切相关，在蛋白（酶）的去磷酸化、调节跨膜运输及生物体内DNA、蛋白质和脂类等物质代谢中起着重要作用[2，3]。

胚胎期是鱼类整个生活史中的一个重要时期，这个时期内鱼类依赖其母体提供的营养物质存活，出膜以后则实现了其形态、代谢和生理上的巨大变化，而作为物质代谢过程中的重要调控酶，ACP和AKP在鱼类的生长和发育过程中发挥了重要作用。迄今为止，关于水生生物发育过程中磷酸酶的活性变化及表达模式等已开展了相关研究[4-7]，而有关翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）胚胎发育过程中磷酸酶活性变化的研究还未见报道。本研究采用磷酸苯二钠比色法对翘嘴鳜胚胎发育期间ACP和AKP活性变化进行了定量研究，以期阐明这2种酶在翘嘴鳜发育早期的活性变化规律，进一步掌握翘嘴鳜胚胎发育过程中生理生化的动态变化，为翘嘴鳜的生物学研究积累原始数据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

考马斯亮蓝G-250、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、柠檬酸缓冲液、磷酸苯二钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、4-氨基安替吡林、铁氰化钾、硼酸等试剂购于湖南汇虹生物公司。

1.2 主要设备

Nikon Eclipse E200生物显微镜，购于日本尼康公司；Biophotometer 核酸蛋白测定仪和Centrifuge 5904离心机，购于德国Eppendorf公司；台式pH计，购于上海精科公司；岛津UV2401型紫外可见光分光光度计，购于日本岛津公司。

1.3 试验材料

用于繁殖的性成熟亲鱼健康无伤，来自湖南省益阳市水产养殖场。人工授精后，获取翘嘴鳜受精卵，随机分组，每组大约500粒，置于含曝气水的培养皿中。每组设3个平行，试验期间水温控制在（20±2） ℃，静水孵化，换水1次/h以保证溶氧充足。胚胎各发育阶段划分参照刘筠的胚胎发育观察方法[8]，即所有鱼卵必须半数以上达到某个时期才能确定为到达该时期。胚胎发育过程中，及时清除未受精卵和异常胚胎。对受精卵、桑椹胚期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、视泡出现期、肌肉效应期、心跳期、耳石出现期、出膜前期、出膜期共11个发育时期分别取样。

1.4 样品制备

每组分别取受精卵120粒，用濾纸吸干水分，在电子天平上称质量后置于干燥的离心管中，贮存于-80 ℃冰箱备用。制样时，按质量体积比1 ∶ 4（g/mL）加入生理盐水，冰浴匀浆；4 ℃ 12 000 r/min 离心10 min，取上清液，分装储存于冰箱-20 ℃保存待测，用于测定酶活性的样本在4 ℃下存放不超过1 h。

1.5 匀浆粗提液蛋白定量

酶液中可溶性蛋白含量测定采用Bradford（考马斯亮蓝）方法[9]，样本于595 nm下测定吸光度，以牛血清白蛋白（BSA）作为标准蛋白。

1.6 ACP和AKP活性测定

ACP和AKP活性测定采用磷酸苯二钠比色法[10]，510 nm 下测定吸光度。ACP和AKP活性测定缓冲液pH值分别为4.9和10。酶比活力单位的定义为：37 ℃下，反应体系中1 mg/min蛋白酶产生1 μg酚所需的酶量作为1个酶活力单位（U）。

1.7 数据处理

采用Excel 2003和SPSS 13.0统计软件对数据进行统计分析，采用单因素方差分析（One-way ANOVA）检验组间差异显著性，以P

2 结果与分析

2.1 ACP活性变化

翘嘴鳜胚胎从受精卵发育至囊胚期，酶活性变化不显著（P>0.05），其中受精卵时期的酶活性为（0.436±0.051） U/g（图1）；原肠胚期ACP活性开始增强，发育至出膜前期的时候，酶活性明显增强，数值为（0.931±0.030） U/g，与前面各发育时期相比差异显著（P0.05）；继续发育至出膜前期后ACP活性显著性升高（P<0.05）；到出膜期，ACP活性已是受精卵时期酶活性的2.5倍。可见，翘嘴鳜胚胎从原肠胚发育开始ACP活性随着发育的进行而升高。

2.2 AKP活性变化

在受精卵阶段AKP活性较低，仅为（0.061±0.009） U/g（图2）；胚胎继续发育至囊胚期，ACP维持一定活性且有微弱降低的趋势，但酶活性变化不显著（P>0.05），随着胚胎的进一步发育，AKP活性逐渐增高，原肠胚期AKP活性为（0.096±0.014） U/g，显著高于前面各发育时期（P<0.05）；心跳期后AKP活性增加幅度更大。耳石出现期、出膜前期、出膜期的酶活性，与前面各发育时期相比，显著提高（P

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3 討论

3.1 翘嘴鳜胚胎发育期间ACP特性及活性变化

ACP定位于溶酶体和内膜系统，在酸性条件下催化磷酸单脂水解，在代谢调节、能量转化及信号转导上起重要作用，同时作为溶酶体标志酶，参与生物大分子消化、凋亡或坏死细胞的清除，在免疫功能和维持细胞的正常代谢活动方面发挥着重要作用[11-13]。本研究发现，翘嘴鳜受精卵分裂开始时ACP活性为（0.436±0.051） U/g，发育至囊胚期时为（0.425±0.021） U/g，呈现微量下降的现象，但活性变化不显著（P>0.05），表明了受精卵在发育早期具有一定的ACP活性，但为受精卵中的母源性酶类，并非合子基因表达的产物；且胚胎早期细胞分裂对磷酸酶的需求无显著变化。贾玉东等研究发现，大菱鲆（Scophthalmus maximus）繁殖期卵子中含有一定活性的ACP和AKP[14]，说明这2种酶来自母体，在胚胎发育过程中起重要作用。因此，受精卵中储存的相关酶或mRNA对胚胎发育的启动具有重要作用，进而为胚胎早期发育中细胞的快速增长及迁移提供保障[15]。而翘嘴鳜胚胎发育到原肠期开始ACP活性为（0.502±0.031） U/g，与之前相比活性有了较大的提高，说明在原肠期合成了ACP，胚胎内酶基因表达开始逐渐增强，合成水解酶，为胚胎的继续发育提供了保证。朱俊华等研究瓯江彩鲤（Diplodus sargus）早期发育过程中的ACP活性时，也发现出膜期的酶活性显著增加[16]。王书平等研究金鱼胚胎发育中ACP的变化也有类似发现[7]。在本研究过程中翘嘴鳜胚胎在出膜前期已有少量的胚胎孵出，而在出膜期几乎所有胚胎均已孵出，这2个时期ACP活性分别为（0.931±0.030）U/g和（1.076±0.063）U/g，且酶活性显著增强（P<0.05）。推测出膜以后的仔鱼可能由于失去了卵膜的保护而直接与外界环境接触，需要较高的ACP活性参与生理代谢调控和免疫防护有关，因此诱导了酸性酶活性大幅增加。

3.2 翘嘴鳜胚胎发育期间AKP特性及活性变化

AKP是一类膜结合蛋白，在碱性条件下催化磷酸基团的移除，通过跨膜运输参与核酸、蛋白质与脂类物质代谢，从而调控细胞的增殖、凋亡和分化，在动物的早期发育时期发挥重要作用[17-18]。本研究中，翘嘴鳜受精卵时期的AKP活性为（0.061±0.009） U/g，且活力处于一个较低的水平，随着胚胎的发育，母源性mRNA的消耗，AKP在桑椹胚期与囊胚期酶的活性呈下降趋势，但活性变化不显著（P>0.05）。而发育至原肠胚期的酶活性为（0.096±0.014）U/g，较前面的发育时期有了显著增强（P<0.05）；达到出膜期时，AKP活性达到最高，且酶活性显著增加（P

鱼类胚胎发育过程中ACP和AKP的作用较为复杂，其活性变化也受外源性激素、重金属元素和温度等多种因素影响，不同种间也存在一定的差异。本试验发现，翘嘴鳜胚胎从受精卵开始发育至囊胚期磷酸酶降至较低水平后，于原肠胚期有了较大的提高，说明在原肠胚期合成了磷酸酶，胚胎内酶基因开始表达并合成水解酶，随着胚胎的进一步发育，磷酸酶活性显著增强，这标志着翘嘴鳜由胚胎期向仔鱼期的转变及生理机能的完善。同时，研究发现受精卵时期的母源性ACP的活性要显著高于AKP，因此推测ACP很可能参与了调控卵母细胞的成熟。这些工作为进一步确定磷酸酶在鱼类受精过程和胚胎发育中的功能提供了新的理论依据。

参考文献：

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血清碱性磷酸酶 篇3

1 资料与方法

1.1 一般资料

2010年1月-2012年1月在笔者所在医院体检科随机抽取非孕健康育龄妇女40例作为对照组, 年龄19～41岁。选择在本院建卡并定期产科检查的孕28～40周单胎妊娠妇女156例作为晚期妊娠组, 年龄为21～40岁, 并根据TBA含量分成四组:A组50例, TBA正常组, 0～15μmol/L;B组48例, TBA 16～30μmol/L;C组36例, TBA 31～45μmol/L;D组22例, TBA>45μmol/L。清晨空腹抽静脉血3 ml送检。

1.2 方法

血清TBA及ALP定量检测用日立7180全自动生化分析仪, 试剂由上海执诚生物公司生产, 校准品可溯源, 每天用RNADOX质控品进行两水平质量控制。ALP正常参考范围为40～150 U/L, TBA正常参考范围为0～15μmol/L。

1.3 统计学处理

使用统计软件SPSS 12.0进行统计学分析, 计量资以 (x-±s) 表示, 两组比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

对照组血清ALP浓度为 (75±25) U/L, A组为 (168±34) U/L, B组为 (196±41) U/L, C组为 (235±52) U/L, D组为 (305±56) U/L。晚期妊娠妇女各组与对照组比较, ALP显著升高, 差异有统计学意义 (P<0.01) ;在不同TBA含量组中, TBA含量高组与TBA含量低组逐级比较, ALP亦显著升高, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。

3 讨论

碱性磷酸酶 (ALP) 是一种膜结合酶, 在碱性环境中可水解各种磷酸单酯化合物底物, 广泛存在于身体各种组织中, 但主要存在于肝脏和骨骼肌中, 常作为肝脏疾病的诊断, 也是评价骨代谢的一项重要指标。

本研究结果显示, 晚期妊娠妇女血清ALP与非孕健康育龄妇女比较, 明显增高, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。ALP的来源比较广泛, 存在于各器官组织中, 其含量以肝脏最多, 其次为肾脏、胎盘、小肠、骨等, 因此不能区分妊娠晚期妇女血清ALP升高的原因。一般认为, 正常妊娠晚期妇女ALP升高原因主要两方面: (1) 与胎盘合成和分泌同工酶重叠相关, 胎盘组织分泌ALP入血后致血清ALP升高, 其特点是产后1～2个月血中ALP浓度自然回落到正常水平[1]。 (2) 妊娠晚期, 由于胎儿发育耗用大量的钙导致孕妇血钙降低, 为维持血钙稳定, 机体动员骨钙入血引起骨代谢变化, 成骨细胞代偿性增生, 使ALP活性增高[2], 且随着孕周的增加ALP值不断升高, 到晚期达高峰。因此, 正常妊娠妇女, 特别是妊娠晚期单纯性ALP升高, 大多是正常的生理现象, 且一般不会超过正常上限的2倍[3], 产后1～2个月血中ALP浓度自然回落到正常水平。在临床诊断中, 应与病理性增高加以区别。

但在妊娠晚期, 由于多种原因, 亦易产生ALP病理性增高。本研究结果显示, TBA含量高组与TBA含量低组逐级比较, ALP明显升高, 差异有统计学意义 (P<0.01) 。可见在妊娠晚期妇女TBA含量与ALP升高呈正相关。而TBA是肝内胆汁淤积的敏感指标, 因此, 伴随TBA异常而增高的ALP是一种病理性增高。分析原因是妊娠晚期发生妊娠性肝内胆汁淤积, 使毛细胆管内压升高及肝细胞膜通透性增高, 导致主要分布在肝细胞血窦侧和毛细血管侧的ALP漏入血液或阻碍胆汁排泄的因素诱导肝细胞合成碱性磷酸酶或蓄积的胆汁酸溶解细胞膜释放出碱性磷酸酶。妊娠性肝内胆汁淤积可引发胎儿宫内窘迫、早产, 严重者导致死亡[4]。因此, 对妊娠性肝内胆汁淤积的早诊断、早治疗显得非常重要。综上所述, 要区分妊娠期妇女血清ALP升高是生理性还是病理性原因, 首先得建立正常妊娠不同孕期妇女血清ALP的参考区间, 且由于ALP的来源比较广泛, 存在于各器官组织中, 应找到能反映不同ALP来源的相应生化指标, 避免不必要的治疗。

参考文献

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[2]徐礼杭.536例临产妇血清部分生化指标检测结果分析[J].检验医学与临床杂志, 2010, 7 (13) :1359.

[3]周新, 涂植光.临床生物化学和生物化学检验[M].北京:人民卫生出版社, 2003.170.

碱性磷酸酶偏高的缘由 篇4

碱性磷酸酶是在碱性PH中催化有机磷酸酯释放无机磷酸的一组同工酶，包括肝、胆管、肠壁、骨骼、胎盘和白细胞等许多组织中存在此类相同功能、而结构有一场的血清酶。碱性磷酸酶临床上主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。

那么，碱性磷酸酶偏高的原因有哪些呢?

1、淤胆性疾病

碱性磷酸酶存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALPmRNA转译增高，肝细胞合成碱性磷酸酶亦增高。碱性磷酸酶经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，碱性磷酸酶有非常明显的升高。碱性磷酸酶升高先于黄疸的出现，在黄疸消退后还可持续异常。

2、生理性增高

儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以出现碱性磷酸酶偏高。

3、骨组织中碱性磷酸酶很活跃

骨组织中碱性磷酸酶很活跃，因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症、佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等也是引起碱性磷酸酶高的病因

4、肝胆疾病

阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等都是引起引起碱性磷酸酶高的原因。推荐阅读碱性磷酸酶偏高的危害有哪些

5、病理性原因

当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。另外，如果人患有佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清中的碱性磷酸酶也会偏高。

6、肝内占位性病变

血清碱性磷酸酶 篇5

关键词：郭氏接骨灵,碱性磷酸酶,钙,磷

骨折是骨遭到外力破坏后其连续性和完整性中断, 是最常见的骨科疾病之一。郭氏家族是较著名的中医世家, 尤其在外伤有独特的建树。郭氏接骨灵是由郭氏祖传, 对粉碎性骨折, 骨折不愈合等有促进作用。由于该方秘传, 故缺乏系统的药理学实验, 毒理学实验, 物性及临床研究资料, 使该药目前尚停留于经验用药阶段。本研究旨在通过系统的临床前研究和临床试验, 为该药的开发推广提供理论及实验依据, 为争取申请新药奠定基础。

1 材料与方法

1.1 动物来源与分组

采用贵阳医学院实验动物中心提供一级新西兰家兔40只, 体重1.2~2.05kg, 雌雄各半, 随机分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组 (伤科接骨片组) 、接骨灵胶囊低剂量组、接骨灵胶囊高剂量组, 每组8只。

1.2 药物与试剂

1.2.1 药物

庆大霉素:上海信宜制药总厂。郭氏接骨胶囊:自制。伤科接骨片:上海信宜制药总厂。

1.2.2 试剂

碱性磷酸酶试剂盒:美国贝克曼库尔特公司。10%三氯乙酸溶液:安徽联谊药业股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 骨折家兔制备

取32只家兔用3%戊巴比妥1mL/kg静脉麻醉, 无菌条件下手术分离家兔双前肢桡骨, 以双层钢锯造成双侧桡骨中下段不完全性骨折, 骨折处宽约3mm, 深度为桡骨直径的1/2。缝合皮下组织及皮肤, 肌注庆大霉素4万U抗感染。X线片证实造模成功, 造模后分为阴性对照组、阳性对照组、接骨胶囊低剂量组、接骨胶囊高剂量组每组8只。

1.3.2 治疗

术后一周后药物治疗。阴性对照组常规喂养;接骨灵胶囊低剂量、高剂量组分别按照0.45g/kg与0.90g/kg体重将药物拌入饲料给药;阳性对照组给伤科接骨片0.42g/kg体重拌入饲料喂养。于上午禁食4h后喂含药饲料, 家兔通常于2h内吃完含药饲料, 再给予普通饲料。术后每周称体重一次, 并根据体重调整给药量。

1.3.3 指标检测

于造模后第10天、20天及30天乙醚麻醉家兔后颈静脉取血2mL, 离心取血清置-70℃保存统一测定血清AKP。于第30天处死全部家兔, 离断腕关节取完整左侧桡骨, 剔除附着的软组织低温干燥至恒重, 用10%三氯乙酸水解骨痂, 每10mg干样加3mL三氯乙酸, 水解三次并合并水解液。用EDTA络合滴定法测定骨痂中Ca含量;用硫酸亚铁磷钼蓝比色法测定P含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件, 所有数据以均数±标准差 (±s) 表示, 组间比较采用单因素方差分析, 统计结果显著性以P<0.05表示。

2 结果

2.1 血清碱性磷酸酶结果分析

接骨胶囊低剂量组和高剂量组均能提高血清碱性磷酸酶水平, 且高剂量组作用优于低剂量组。说明郭氏接骨灵能够促进血清中碱性磷酸酶的合成与释放。见表1。

注:*与正常对照组相比P<0.05;*与阳性对照组、低剂量及高剂量组相比P<0.01;☆△与阳性对照组相比P>0.05;☆与高剂量组相比P<0.05。

2.2 骨痂中Ca及P的结果分析

阳性对照组、接骨灵低剂量组和高剂量组骨痂中的钙磷含量与阴性对照组相比均增高 (P<0.01) , 说明伤科接骨片和接骨灵胶囊均有增加骨痂中钙磷含量的作用。接骨灵低剂量组与高剂量组相比 (P<0.05) , 说明高剂量组的作用强于低剂量组。见表2。

注:*与正常对照组相比P<0.05;*与阳性对照组、低剂量及高剂量组相比P<0.01;☆△与阳性对照组相比P>0.05;☆与高剂量组相比P<0.05。

3 讨论

骨折愈合及修复是一个极其复杂的生物学过程, 受到许多因素的影响。在骨折的修复、愈合过程中骨基质中的矿物质成分起到了重要的用。研究证实, 成骨细胞分泌的AKP可作为观察骨折愈合的指标, 可代表骨重建和成骨细胞活动性增强的指标[1]。本实验中, 阴性对照组家兔血清AKP的水平在第10天时结果明显低于正常对照组, 这是由于骨膜受损, 成骨细胞分泌AKP能力下降而使其低于正常水平[2]。但是, 由于机体有自我修复能力, 虽未经任何药物治疗, 其水平在第20天、30天时也有一定的升高, 说明成骨细胞分泌功能活跃, AKP水平升高。在低剂量组和高剂量组治疗期间, 第10天、20天及30天时两组AKP含量就明显升高, 但是低剂量组升高没有高剂量组明显, 说明高剂量组效果更好。这是由于接骨胶囊中的成分能活血化瘀、刺激成骨细胞分泌活动增强, 使血清中AKP的浓度明显升高, 促进骨折修复与愈合。同时观察第30天时骨痂中Ca、P的变化发现, 在接骨胶囊低剂量及高剂量组Ca、P明显高于阴性对照组, 说明药物治疗有效。Ca、P沉积形成的钙盐对骨痂的形成有益, 不断进行钙化沉积, 不断骨化, 可以不断编织骨的形式形成新骨, Ca、P升高能促进骨折愈合[3]。本药目前尚停留于经验用药阶段, 故缺乏系统的药理学实验, 还需进一步研究提供理论及实验依据。

参考文献

[1]Lian JB, Gunderg CM.Osterocalcin.Biochemical consideration and clinical applications[J].Clin Orthop Rel Res, 1987, 226 (2) :267-270

[2]Khandwala HM, Mumm S, Whyte MP.Low serum alkaline phosphatase activity and pathologic fracture:case report and brief review of hypophosphatasia diagnosed in adulthood[J].Endocr Pract, 2006, 12 (6) :676-681

血清碱性磷酸酶 篇6

相关研究[1]表明, 针灸治疗在促进骨折愈合方面有着自身优势, 但目前针灸分期治疗骨折愈合的临床研究尚未见报道。本课题组前期动物实验研究表明针灸分期治疗可通过增加骨组织TGF-β1、b FGF基因表达促进骨折愈合[2], 本文在此基础上进行了针灸分期治疗促进骨折愈合的临床实验, 并探讨其促进骨折愈合的作用机理。

1 临床资料

1.1 一般资料

病例来源于2010-05~2011-10长沙市中医院本部、南院骨伤科住院病人, 符合纳入标准的胫骨中下段骨折患者共90例, SPSS编程随机分为针灸分期组、常规针刺组、药物组, 每组30例。3组患者在性别、年龄方面经统计学处理, 差异无统计学意义 (均P>0.05) , 具有可比性, 详见表1。

1.2 诊断标准[3]

①有外伤史;②X线摄片检查明确诊断为胫骨 (和腓骨) 中下段骨折;③小腿中下段肿胀、压痛明显, 骨折线在胫骨 (和腓骨) 中下1/3处。

1.3 纳入标准

①有明确外伤史, 新鲜的 (3天内) 、无并发症的单纯骨折, 全身症状不严重;②经X光片确诊行手术内固定的胫骨中下1/3处骨折的住院病人;③年龄在20~55岁。

1.4 排除标准

①年龄在20~55岁以外者;②多发性骨折或有严重合并伤者;病理性骨折, 孕产妇, 患有其它如肿瘤、糖尿病或合并心、脑、肝、肾、造血系统、内分泌系统等严重原发性疾病及精神病患者;③肝肾功能检查严重异常的患者。

1.5剔除、脱落和中止试验标准

①剔除标准:纳入后发现不符合纳入标准者, 或试验过程中未能按照本研究对受试者的要求参与试验者。②脱落标准:未完成试验而中途退出、资料不全影响疗效或安全性判断者, 或合并使用其他疗法或药物而无法判定疗效者。③中止标准:出现严重不良事件或不良反应者, 或试验过程中出现重大问题 (如因起泡而发生严重感染者) , 无法判定疗效者。

2 方法

2.1 分组治疗

三组均常规应用抗生素抗感染治疗。

针灸分期组:将骨折愈合过程分为三期, 早期即术后1~7天;中期即术后8~28天;后期即术后29~56天。早期宜调神止痛、活血行气, 中期宜接骨续筋、舒筋活络, 后期宜补益肝肾、强筋壮骨。取穴:早期取百会、内关 (双侧) 、血海 (患侧) 、太冲 (患侧) , 中期取患侧阳陵泉、丰隆、阿是穴, 后期取双侧大杼、膈俞、肾俞、足三里、阿是穴。操作:选取0.25mm×25mm、0.30mm×40mm一次性无菌针灸针, 早期、中期患者仰卧位, 后期侧卧位, 患肢在上, 针刺穴位皮肤常规消毒后进针, 中等强度刺激, 每次留针30分钟。早期百会、内关行捻转补法, 余穴行捻转泻法, 针刺得气后患侧接G6805-2B低频电子脉冲治疗仪 (上海华谊医用仪器有限公司) , 患侧血海接正极, 太冲接负极, 频率2Hz, 电流强度以患者能耐受为度。中期阳陵泉行捻转补法, 丰隆、阿是穴行平补平泻手法, 阳陵泉接电针仪正极, 选取一个阿是穴接负极, 刺激强度同前。后期大杼、膈俞、肾俞、足三里行补法, 阿是穴行捻转平补平泻手法, 双侧肾俞温针灸, 将华佗牌艾条切成2cm长艾炷, 每穴灸3炷。

常规针刺组:取患侧血海、阳陵泉、丰隆、双侧大杼、膈俞、肾俞、足三里、阿是穴, 血海、阳陵泉、丰隆、阿是穴行捻转平补平泻手法, 大杼、膈俞、肾俞、足三里行捻转补法。

药物组:早、中、晚期均服用愈伤灵胶囊 (湖南汉森制药股份有限公司, 批号:110106) , 温开水送服, 6粒/次, 3次/d。

2.2 观察指标及测定

2.2.1 血清钙、磷和碱性磷酸酶的测定

分别于入院1、28、56天抽取禁食12小时以上的外周晨血5ml, 用全自动生化分析仪测定血清钙、磷和碱性磷酸酶浓度。

2.2.2 患者骨痂生长情况

通过X片观察。X线片骨痂生长情况评分参照上海骨伤科研究所制定的X线片骨痂评定标准分为4级, 即:骨折断端清晰, 无明显骨痂生长者为0分;断端变模糊, 骨痂密度较淡如絮状者计1分;骨痂密度较深, 断端边缘接近消失, 但仍可见者为2分;骨痂密度进一步加深, 与骨端基本相同, 断端边缘消失者3分。

2.3 统计学处理

采用SPSS16.0统计软件对数据进行统计学分析, 计量资料数据用均数±标准差 (±s) 表示, 采用方差分析进行处理。显著性标准为P<0.05。

3 治疗结果

3.1 3组患者治疗前后血清钙浓度比较

结果见表2。

与本组治疗前比较*P<0.05, **P<0.01;与同组28d时比较△P<0.05;与常规组、药物组同时间点比较#P<0.05, ##P<0.01

3.2 3组患者治疗前后血清磷含量的比较

结果见表3。

与本组治疗前比较*P<0.05, **P<0.01;与常规组、药物组同时间点比较#P<0.05

3.3 3组患者治疗前后血清ALP活性测定

结果见表4。

与本组治疗前比较*P<0.05;与常规组、药物组同时间点比较#P<0.05

3.4 3组患者治疗后X线骨痂评分的比较

结果见表5。

与同组14d时比较*P<0.05, **P<0.01;与同组28d时比较△P<0.05, △△P<0.01;与常刺组、药物组同时间点比较#P<0.05

4 讨论

骨折愈合是机体结缔组织的一种再生修复过程, 主要涉及两个方面:有关骨折修复的各种细胞的增殖活动;有机基质的形成和无机盐的沉积[4]。

钙是骨折愈合过程中最重要的元素之一, 钙通常以钙盐晶体的形式包含在基质小泡内。一旦被分泌到周围机质中, 就沉淀于胶原纤维的周围, 参与完成骨机质的钙化, 形成骨质。在骨折愈合过程中, 钙盐沉积是一个突出的关键步骤, 血液中钙、磷是以Ca2+和HPO42-的离子形式存在, 是相互作用的系统;成骨作用 (钙盐在骨中沉积) 和溶骨作用 (骨中钙盐溶解) 的正常进行是维持血液中钙磷含量稳定的重要环节;反之, 血液中钙磷含量的高低又直接影响骨的钙化与溶解, 当超过Ca3 (PO4) 2及Ca CO3的浓度乘积时, 钙磷就在骨的有机质中先形成胶体的磷酸钙, 再沉淀为Ca3 (PO4) 2和Ca CO3, 即作为骨的无机盐成分沉淀于骨内[5], 也就是说钙磷乘积的升高, 有利于钙盐的沉积。因此, 使血清钙、磷升高, 必然会使钙磷乘积升高, 从而促进钙盐沉积, 有利于骨折愈合。

ALP能分解有机磷酸化合物, 产生大量的无机磷酸盐离子, 促使其与钙离子结合成磷酸钙而沉积于骨组织中, 其含量变化可预示骨折愈合程度。成骨细胞分泌的ALP可以渗透入血液, 因此血清ALP可作为成骨细胞活跃性的指标, 即观察骨折愈合的指标[6]。本实验结果显示, 针灸分期治疗可增加血清钙磷含量, 显著提高血清ALP的活性;X线示分期针灸治疗组的骨痂评分明显高于常规针刺组和药物组。由此提示针灸分期治疗有促进骨折愈合作用, 其机理与增加钙磷含量、促进钙盐沉积及增强ALP活性、提高成骨活动有关。

参考文献

[1]周建宏, 耿霞, 黄伯灵.针灸促进骨折愈合研究概况.河南中医, 2003, 23 (8) :83.

[2]杜革术, 陈卓夫, 漆晓坚, 等.针灸分期治疗对骨折家免TGF-β1mRNA、bFGFmRNA表达的影响.中国中医药科技, 2012, 19 (5) :389.

[3]国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准.南京:南京大学出版社, 1994:167.

[4]陈镇秋, 廖威明.骨伤方冲剂对骨折愈合相关血生化指标的影响.中医药学刊, 2006, 24 (7) :1324.

[5]周新, 涂植光.临床生物化学与检验.北京:人民卫生出版社, 2006:331.

血清碱性磷酸酶 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

300例正常妊娠孕妇作为实验组, 均为2009年1月~12月我院妇产科门诊接诊孕妇, 年龄为24~41岁, 平均年龄为28岁。其中100例为早期妊娠 (6~8周) , 年龄为23~39岁, 平均年龄为29岁。100例为中期妊娠 (16~18周) , 年龄为24~40岁, 平均年龄为30岁。100例为晚期妊娠 (大于19周) , 年龄为24~39岁, 平均年龄为29岁。并以查体中心健康查体的85例健康育龄非孕妇女作为对照组, 年龄为21~41岁, 平均年龄为28岁。均抽取空腹静脉血做血清碱性磷酸酶测定。

1.2 试剂和仪器

仪器为康仪全自动生化分析仪, 试剂为磷酸对硝基酚、2-氨基-2-甲基-1-丙醇。

1.3 方法

速率法。以磷酸对硝基酚为底物, 2-氨基-2-甲基-1-丙醇为磷酸酰基的受体物质, 增进酶促反应速率。磷酸对硝基酚在碱性溶液中为无色, 在ALP催化下磷酸对硝基酚分裂出硝基集团, 生成游离的对硝基苯酚, 游离的对硝基苯酚在碱性溶液中转变为醌式结构, 呈现较深的黄色, 在波长405nm处监测吸光度的增高速率可计算出ALP的活性单位。

注意事项:血清置室温 (25°C) , ALP活性显示轻度升高。例如:室温置6h, 酶活性升高约1%, 置1~4d, 酶活性升高3%-6%, 血清置放于冰箱 (4°C) , 酶活性亦出现缓慢的升高, 冷冻血清ALP活性降低, 但当血清复温后酶活性会缓慢恢复。检测时需注意保存温度及时间。速率法应用血清或肝素抗凝血浆测定, 抗凝剂如草酸盐、枸橼酸钠和EDTANa2能抑制ALP活性, 不能使用这类抗凝血浆做ALP的测定。另外高脂餐后, 血清ALP活性升高, 尤以血型O型或B型的分泌型 (唾液中可分泌血型抗原者) 人群更为突出, 增高的ALP多为小肠ALP。

2 结果

对照组健康育龄非孕妇女血清中ALP平均值为64.5±12.87U/L, 早期妊娠组孕妇血清中ALP平均值为51.7±16.7U/L, 中期妊娠组孕妇血清中ALP平均值为69.59±18.21U/L, 晚期妊娠组孕妇血清中ALP平均值为147.2±47.8U/L。正常早期妊娠孕妇血清中ALP略低于健康育龄非孕妇女, 中期妊娠孕妇血清中ALP接近于健康育龄非孕妇女, 而晚期妊娠孕妇血清中ALP明显高于健康育龄非孕妇女。这可能与胎儿的生长发育、孕妇的肝脏代谢、骨代谢及胎盘的功能有关。

3 讨论

ALP是指一组底物特异性较低在碱性环境中能水解很多磷酸单酯化合物的酶, 这种酶能催化核酸分子脱掉5&apos;磷酸集团, 从而使DNA或RNA片段的5&apos;-P末端转换成5&apos;-OH末端。但它不是单一的酶, 而是一组同工酶.目前已发现ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5及ALP6六种同工酶, 其中ALP1、ALP2和ALP6均来自肝脏, ALP3来自骨细胞, ALP4产生于胎盘及癌细胞, 而ALP5则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。ALP广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出, 各器官ALP的理化性质都有区别, 其含量以肝为最多, 其次为肾、胎盘、小肠、骨骼等, 一般认为骨骼中的ALP和骨的钙化作用关系密切, 目前ALP主要用于骨骼和肝脏系统疾病的诊断和鉴别诊断, 尤其是黄疸的鉴别诊断。

ALP升高见于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时, 肝的细胞过度制造ALP, 经淋巴道和肝窦进入血液, 同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍, 反进入血而引起血清ALP明显增高。但由于骨组织和胎盘组织中此酶也很活跃, 因此孕妇、骨折愈合期、骨软化症、佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、白血病、甲状腺功能亢进时, 血清中ALP亦可升高, 应加以鉴别。无黄疸肝脏疾病患者血中发现有ALP升高应警惕、有无肝癌可能。

ALP减低比较少见, 主要见于呆小症、磷酸酶过少症、Vc缺乏症、甲状腺功能低下、恶性贫血等也可见ALP减低。

ALP变化与年龄密切相关, 新生儿ALP略低于成年人, 以后逐渐升高, 在1~5岁有一次高峰, 可达成人上限2.5~5倍, 以后下降。第二高峰在10~15岁之间, 可达成人上限的4~5倍。20岁以后降至成年人水平, 到老年期又逐渐升高, 可能与生理性的激素变化有关。

孕妇血清中ALP活性在妊娠3个月即开始升高, 随妊娠的进展呈逐渐升高趋势, 9个月可达峰值, 约为正常值的1~3倍, ALP升高可维持到分娩后1个月, 升高的ALP来自胎盘, 和胚泡壁的细胞滋养层的发育程度直接相关。所以不能用正常的参考值来衡量正常孕妇和正常发育期儿童。

参考文献

[1]丛玉隆.检验与临床诊断全科医师分册[M].北京:人民军医出版社.

碱性磷酸酶在骨矿化中的研究 篇8

1 碱性磷酸酶的分类及结构

1.1 碱性磷酸酶的分类

碱性磷酸酶 (ALP) 是一类非特异性磷酸单酯酶, 在碱性环境中可水解磷酸单酯化合物生成无机磷酸、糖类、醇和酚。它定位于生物膜上, 是基质小泡和质膜的标记酶, 广泛存在于细菌、真菌和动物生物体内。在人体的各组织中也广泛分布, 主要分布于肝脏、骨骼、肾脏、胎盘、小肠、血细胞、乳腺上皮细胞和胆汁中, 其中以胎盘和小肠黏膜含量最高, 骨骼和肾脏次之, 肝脏、脾脏和肺脏中含量最少。

人类的ALP不是一种单一的酶, 而是一种保守的同工酶。目前, 已发现的ALP同工酶共有6种, 分别为ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5、ALP6, 分布于不同组织中, 其中ALP1、ALP2、ALP6分布于肝脏, ALP3分布于骨细胞, ALP4分布于胎盘和癌细胞, ALP5分布于小肠绒毛上皮和成纤维细胞。因此, 根据ALP的来源不同可将其分为以下4种类型:胎盘型 (PALP) 、肠型 (IALP) 、生殖细胞型 (GALP) 、组织非特异型 (TNAP) 。前3种都为组织特异型碱性磷酸酶, 并且它们有90%~98%的同源性, 其基因定位在染色体的2q37.1.位点上。TANP在许多组织中表达, 包括肝脏、骨骼、肾脏, 因此可以分为肝/骨/肾型 (L/B/K ALP) 3种, 由于分布部位不同, 其分子质量的大小、编码序列、空间结构和催化功能等也存在着很大的差异。

1.2 碱性磷酸酶的结构

在各种生物体内, ALP以同型二聚体的形式存在。每个单体由449个氨基酸组成, 完整的ALP分子呈现典型的α/β拓扑结构, 并且每个单体均具有一个活性中心, 活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、3个金属离子及其配体氨基酸组成[1]。每个相同的亚单元控制1个活性位点, 并且含2个Zn2+和1个Mg2+使三级结构更稳定[2], 因此它还是一种金属酶。编码人类ALP的基因位于常染色体1p36.1-p34[3], 并由11个编码外显子 (exon 2~12) 和2个主导外显子 (exon 1B和exon 1L) 组成。3种组织特异性ALP基因在常染色体2q34~37上成串存在。

2 碱性磷酸酶与骨矿化的关系

2.1 骨矿化的发生

生物矿化是指由生物体通过生物大分子的调控生成无机矿物的过程。它是机体代谢产物在细胞干预下, 在胞外基质的指导下形成生物矿物, 如牙齿、骨骼中羟磷灰石 (HA) 的形成。生理性的矿化发生在硬组织中, 如骨骼、生长板软骨, 在机体内许多组织特异性细胞在矿化中起作用[4];在生长板软骨细胞中, 矿化发生在肥大细胞的间隙中, 肥大性软骨细胞对HA的形成起重要作用;在骨骼中, 成骨细胞里面的类骨质对HA的形成负责, 与牙齿中的成齿质细胞一样。与生理性矿化相对应的是病理性矿化, 其主要发生在软组织中, 如关节软骨、心血管组织和肾脏更易发生病理性矿化。而矿化缺陷的增加与年龄也有很大关系。骨量丢失导致的骨质疏松是由一种生理性矿化的缺失导致的。心血管矿化的增加使发病率和死亡率增加, 关节钙化是由于关节僵直导致的[5]。

骨矿化的发生有2个过程。首先是基质小泡内HA晶体的形成, 紧接着HA增殖通过细胞膜进入细胞外基质。钙结合磷脂、钙结合蛋白和骨结合蛋白促进基质小泡 (matrix vwsicles, MV) 中钙的积累[4,6]。MV中的膜结合蛋白形成钙通道并结合钙进入MV。位于细胞膜和基质小泡膜上的Na/Pi协同蛋白Ⅲ提供磷酸盐[6]。细胞溶质磷酸盐 (PHOSPHO1) 通过水解磷酸胆碱和磷酸乙醇胺产生磷酸盐[7]。然而MV中钙离子和磷酸盐的起源还没有完全阐明。当钙和磷酸盐的积累超过磷酸钙 (CaPO4) 的溶解点时, 在MV中HA形成CaPO4沉淀。矿化的第二步是HA穿透基质小泡膜并延伸进入细胞外间质。HA的延伸要求基质小泡外钙和磷酸盐的浓度达到适合的值。生长板基质中细胞外液含有充足的Ca2+和Pi, Ca2+和Pi能够维持连续的HA形成[6]。HA在MV周围成簇存在, 并填补骨骼基质中胶原纤维之间的空隙。MV与其附近的胶原在这个增殖过程是协作关系[4]。Pi∶PPi的比率在矿化的第二步中起到至关重要的作用。PPi限制HA的形成[8], 其由核苷酸焦磷酸磷酸二酯酶1 (NPP1) 和强直蛋白 (ANKH) 提供[9]。ALP水解PPi产生Pi。PPi与Pi之间浓度的平衡被认为是矿化过程中重要的因素。

首先是在成骨细胞和软骨细胞衍生的MV中形成HA。HA的形成是通过膜结合蛋白钙通道与Ca2+相结合, Na/Pi协同转运蛋白Ⅲ提供的Pi, PHOSPHO1水解细胞膜上分离出磷酸胆碱 (Pcho) 和磷酸乙醇胺 (PEA) 。然后HA晶体穿透MV, 由于TNAP作用的延伸, 并在胶原纤维间沉积。抑制HA形成的PPi被TNAP水解。PPi由NPP1产生, 并通过ANKH转运到细胞外。TNAP、NPP1和ANKH活性之间的平衡对于矿化第二步至关重要。

2.2 TNAP在矿化中的代谢调控

在骨骼中, TNAP位于成骨细胞和软骨细胞表面, 同时在成骨细胞和软骨细胞细胞膜表面衍生的基质小泡的膜上也有[10]。在骨基质中, TNAP为HA结晶提供Pi, 然而TNAP也水解PPi促进矿物质的沉淀和生长。PPi是ALP的底物之一, 是与新产生的HA相结合的小分子之一, 并且它可以防止Pi与HA更进一步结合。TNAP基因的表达支持骨钙化, TNAP的作用是通过移除细胞外基质的PPi实现的。由TNAP缺乏而导致的骨钙化缺陷可以单独通过还原PPi的水平进行矫正。因此, TNAP基因敲除小鼠被广泛应用于TNAP缺乏模型的研究中。在小鼠ALP的同工酶中的Akp2与人类的ALPL基因相符合。Akp2-/-小鼠表现出磷酸吡哆醇 (PLP) 代谢缺陷和骨骼矿物质减少的特征;同时还发现Akp2-/-小鼠的骨骼和生长板中, 基质小泡周围的细胞基质中的HA增殖被抑制, 并且在患有低磷酸酯酶症的病人中也发现了相似症状[11]。因此, Akp2敲除小鼠可作为人类研究TNAP缺乏的模型。TNAP的表达受许多因子的控制。目前, 关于TNAP在骨骼中表达的机制还不清楚。有研究发现, 2个成骨性转录因子核心结合蛋白因子2 (Rnux2) 和远端缺失141源盒5 (Dlx5) 可以诱导TNAP的表达。在Runx2基因敲除的小鼠中, TNAP的表达呈减量调节, 骨形成蛋白2可诱导TNAP活性[12]。另外, 在C3H10T1/2间充质细胞中, Runx2的强制表达可以刺激TNAP mRNA的表达[13]。Dlx5可以直接与TNAP启动子上的反应元件相结合激活TNAP的转录。TNAP基因突变引起的低磷酸酯酶症是一种以骨骼及牙齿矿化障碍、血及总碱性磷酸酶 (TALP) 降低为特征的遗传性疾病[14]。由于TNAP降低导致PPi等多种底物蓄积增多, 而矿化抑制剂PPi在骨骼中蓄积将导致佝偻病或骨软化[15]。

3 血液中碱性磷酸酶、骨碱性磷酸酶与骨病的临床研究意义

在临床医学上, 血清中ALP的检测是骨骼、肝脏等多种疾病的重要诊断依据;TALP浓度水平也是骨病检测的重要指标, 因此其浓度水平偏高或偏低都会导致各种骨骼疾病或与骨骼有关的疾病。经研究发现, 幼儿患佝偻病时, 骨钙化不足, 成骨细胞不能及时钙化而堆积, 同时成骨细胞代偿性增生, 使成骨细胞功能增强, 骨碱性磷酸酶 (BALP) 生成增多, 释放入血液后使血液中BALP水平升高, 并随着病情加重, 升高程度愈加明显。临床研究证明, 健康成长的儿童在7~12岁时, 其ALP、BALP活性最高[16]。辛海岩等[17]对101例可疑佝偻病患儿进行BALP及钙、磷、ALP测定。结果显示:当BALP在200~250 μL时, 患儿处于维生素D缺乏状态;当BALP在252~300 μL时, 患儿处于佝偻病初期;当BALP>300 μL时, 患儿处于佝偻病激发期。同时还发现, BALP的改变先于血钙、磷、ALP的改变, 而且先于临床症状及体征的改变。由此可以得出, 合适浓度的ALP对低龄动物的生长发育有很大的意义。刘英华等[18]研究发现, BALP早期诊断佝偻病阳性率达90.8%, 其检测简便、快捷、特异性高、结果可靠、可减少漏诊率, 对佝偻病早期诊断有重要的指导价值。由此可以认为, BALP作为成骨细胞发育的标志物之一, 在佝偻病的诊断和预防方面有重要的价值。BALP与ALP的检测还用于骨质疏松、软骨病、骨性肿瘤、恶性肿瘤、骨转移等骨科疾病中, 在这些疾病中BALP与ALP都会有不同程度的升高。L.J.Melton等[19]认为, 高水平骨特异性血清TALP及Ⅰ型胶原羧基末端肽对女性发生骨质疏松型骨折的风险明显高于低水平者。临床研究发现, 血清中ALP、BALP对于诊断20~50岁骨肿瘤患者有重要意义。孙兰英等人研究体内组织工程骨时发现, ALP mRNA在犬体内组织工程骨中表达达到峰值的时间较自然再生骨晚, 并且表达量少, 但ALP mRNA在这2种骨中均呈先上升后下降的现象。综上所述, ALP、BALP在临床骨代谢疾病的诊断和治疗中发挥重要作用。

4 碱性磷酸酶在其他方面的研究进展

目前, ALP主要用于肝脏和骨骼等疾病的诊断, 由于ALP还有一种胎盘型, 因此现在也用于孕妇孕期的检查。妊娠期观察孕妇血清中ALP的规律变化是判断胎盘发育正常与否的良好指标。孙振华等[20]对300例不同孕周孕妇和85例健康孕育龄妇女的血清ALP进行比较发现, 孕妇血清中ALP浓度随着孕周增加而逐渐升高, 直至分娩达到最高值。付萌等[21]对36例妊娠先兆性流产患者的血清ALP进行分析, 结果发现, ALP值有较大的变化, 这些变化与胎儿胎盘的发育有一定关系。赵春生等[22]研究发现, 伴有肾衰、营养不良、甲状腺功能不全、镁缺乏、严重贫血的重症慢性肾炎病的病人血清ALP活性会降低。孙琦[23]的研究发现, 西宁地区107例糖尿病患者血清ALP, 明显高于健康人水平。在动物生产中, ALP也有广泛应用。彭立颖等人认为, 不同程度乳房炎牛乳中ALP、酸性磷酸酶 (ACP) 随着乳房炎严重程度的增加呈明显上升趋势, 因此ALP、ACP可作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标之一。杨伟平等研究不同品种鸭的血清ALP活力及其生长性能的关系。结果发现, 不同品种鸭血清ALP活力随着生长周龄的增加而降低。在患尿毒症的小鼠中, TNAP的活性升高将导致动脉血管钙化。TNAP水解的PPi增加会出现肾衰竭并促进血管的钙化。同时还发现, TNAP的表达对脑神经组织分化起作用。

摘要：碱性磷酸酶 (ALP) 是一种非特异性磷酸单酯酶, 也是同工酶, 因来源不同可以将其分为组织特异性碱性磷酸酶 (tissue specific alkaline, TAP) 和组织非特异性碱性磷酸酶 (TNAP) 。碱性磷酸酶是早期成骨细胞分化的标志物, 在骨矿化过程中的主要作用是为骨矿化提供无机磷酸盐 (Pi) , 同时水解无机焦磷酸 (PPi) , 抑制PPi对羟磷灰石 (HA) 的抑制作用。文章对碱性磷酸酶在骨矿化中的研究进展作一综述。

小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果浅析 篇9

关键词：骨源性碱性磷酸酶,佝偻病,早期诊断

佝偻病(Rickets)是婴幼儿时期常见的慢性营养缺乏性疾病,是因维生素D缺乏,导致钙磷代谢失常,而使骨骼钙化不良所致。它不但影响患儿的骨骼发育,同时还影响患儿神经、肌肉、造血、免疫等多组织、器官的功能。佝偻病很少直接危及生命,但因发病缓慢,易被忽视,一旦发生明显症状时,机体的抵抗力低下,易并发肺炎、腹泻、贫血等其他疾病[1]。20世纪90年代后,中国严重佝偻病发病率已逐年降低,但轻、中度佝偻病发病率仍较高。因此早期发现、预防佝偻病比治疗佝偻病具有更重要的意义。小儿骨源性碱性磷酸酶(NBAP)在佝偻病发病初期即出现升高,而且升高程度与佝偻病活动程度密切相关[2]。因此,小儿NBAP检测对佝偻病的早期筛查、诊断、预防和治疗都有很大的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机抽取了儿童保健门诊3~36个月婴幼儿400例,其中男212例,女188例;年龄3~12个月174例,13~24个月121例,25~36个月105例,对其进行外周血NBAP检测[3]。采用小儿NBAP检测试剂盒。

1.2 方法

采用小儿NBAP检测试剂盒。NBAP试剂盒为北京中生金域诊断技术有限公司生产。试剂盒组成:NBAP反应装置、显色液、洗涤液、终止液、一次性定量取血管(含吸头)、使用说明书(含标准比色板)。步骤如下。

1.2.1 在反应装置血浆分离器的加样孔中滴加2滴洗涤液,待渗入后,放置3 min。

1.2.2 用微量移液器取17μl血清加到加样孔中,待渗入。

1.2.3 再往加样孔中滴加2滴洗涤液,待渗入。

1.2.4 从反应装置上取下血浆分离器,其下可见反应滑板上的圆形反应膜。

1.2.5 向反应膜上滴加2滴洗涤液,待渗入。

1.2.6 推动反应滑板,使反应膜定位在反应孔中央。

1.2.7 在反应膜上滴加1滴显色液,置37℃水浴箱内显色5 min。

1.2.8 将反应滑板推回原位,在反应膜上滴加1滴终止液,待渗入。

1.2.9 完成步骤1.2.8后,在20 min内与比色板比对,读取测定结果。

1.3 统计学处理

中、重度佝偻病患儿中NBAP的阳性例数与血清钙、手腕骨X线影像学改变检出例数间的统计学差异应用SPSS 15.0软件进行分析,采用字2检验。P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

NBAP参考值0~7岁≤200 U/L。400例婴幼儿NBAP活性检测结果>200 U/L 126例,阳性率为31.5%,其中>200 U/L、<300 U/L的为89例(占阳性婴幼儿的70.63%),≥300 U/L的为37例(占29.37%)。根据诊断标准[4],37例患儿诊断为中、重度活动期小儿佝偻病,将中、重度患儿NBAP检测阳性例数、血清钙异常例数、手腕骨X线检查异常例数进行分析,结果表明:37例中、重度活动期小儿佝偻病患儿中NBAP均≥300 U/L;血钙异常者3例,其血钙含量在1.92~2.17 mmol/L之间,低于正常参考值的2.23~2.80 mmol/L,并存在低钙血症引起的神经肌肉应激性增强,导致手足抽搐;骨骼有X线影像学变化者

2 例。

NBAP阳性数与血清钙降低例数比较,差异有统计学意义(字2=62.90,P<0.01);NBAP阳性数与X线摄片异常检出例数比较,差异亦有统计学意义(字2=66.41,P<0.01)。

3 讨论

小儿佝偻病是因体内血钙降低,刺激甲状旁腺分泌增加,加速旧骨溶解,释放骨钙入血,以维持血钙接近正常水平。但因甲状旁腺素抑制肾小管对磷的重吸收、尿磷排出增加,使血磷降低,导致Ca、P乘积降低,骨组织钙化不良,成骨细胞代偿性增生,骨钙化的主要活性物质NBAP生成增多,从而形成骨骼病变和一系列症状、体征及血液生化改变。在这一过程中,血液中NBAP水平的增高,先于骨骼影像学的变化,而且与佝偻病的病情成正相关,因此检测NBAP活性可反映佝偻病早期病变以及病情和疗效的动态变化[5]。

在张店区400例婴幼儿NBAP检测结果中大于200U/L者126例,占31.5%。37例佝偻病患儿中,NBAP催化活性均≥300 U/L,有3例血清钙减低引起手足抽搐,2例骨骼发生影像学变化。NBAP阳性数与血清钙、手腕骨X线影像学异常检出数比较,差异均具有统计学意义(P<0.01),是临床辅助诊断小儿佝偻病的早期诊断指标。而且,NBAP还可用于佝偻病患儿用药情况监测,若临床给予患儿维生素D治疗,NBAP催化活性≤200 U/L时,应及时停药或减量,以免造成维生素D过量对人体产生毒副作用[6]。

小儿NBAP检测可采用新鲜血清或末梢血,操作简单快速,无须特殊仪器,适合在基层实验室推广应用。小儿NBAP检测结合临床是早发现、早预防、早治疗维生素D缺乏的有效措施,是婴幼儿早期干预和钙营养状况监测及佝偻病早期诊断的首选指标,有利于保障儿童健康发育,提高我国人口整体素质。

参考文献

[1]陈红兵,张洪梅,李芬,等.南京地区学龄前儿童骨源性碱性磷酸酶和骨密度监测分析[J].中国儿童保健杂志,2008,16(1):158-160.

[2]罗燕.骨源性碱性磷酸酶与小儿佝偻病的早期诊断[J].中国当代医药,2010,5(13):34-35.

[3]王日平,胡晓燕,胡晓青.小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果分析[J].中华检验医学杂志,2005,2(2):1-3.

[4]章公鸣,诸福棠.诸福棠实用儿科学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,1995:548-557.

[5]俞淑敏,沈时霖,仇健樱.对佝偻病诊断标准中部分指标的几点看法[J].中华儿科杂志,2002,40(1):52-53.