腹水细胞学检查

关键词：

腹水细胞学检查（精选七篇）

腹水细胞学检查 篇1

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集笔者所在医院2010年1-12月胸腹水标本127例,其中男73例,女54例,年龄19~88岁,平均55.5岁;其中胸水84例,腹水43例。每例同时做普通离心后涂片和TCT涂片,复查和疑难的病例加做沉渣包埋,必要时(仍难以确诊)加做免疫组化。

1.2 方法

1.2.1 普通涂片

送检标本静放1~2 h,倒去上部留下底部标本(约50 ml),置于锥底离心管中,以2000 r/min,离心5 min,弃上清液,取沉淀物涂片2~3张,稍晾片刻,95%乙醇固定10 min,HE染色,封固,镜检。

1.2.2 新柏氏TCT技术

将标本置于干净、干燥的容器中,加入抗凝剂(每100 ml加入10 ml 3.8%的枸橼酸钠),离心(2000 r/min)10 min,弃上清液,加入30 ml Cytolyt液振荡混匀后离心,倒出上清液,加入Thinprep保存液,振荡混匀,15 min后经新柏氏TCT微电脑处理系统制成超薄细胞涂片,95%乙醇固10 min,HE染色,封固,镜检。

1.2.3 沉渣包埋

将胸腹水离心后,弃去上清,将絮状物包入纱布或滤纸中,进行常规石蜡组织的固定、脱水、包埋、染色,最后制成常规组织片。

2 结果

127例恶性胸腹水中,腺癌103例,鳞癌12例,恶性间皮瘤9例,淋巴瘤3例。组织学来源依次为肺、卵巢、胃、肝、结肠、胆囊、胸腹膜等。其阳性率及免疫组化表达情况见表1、2。

3 讨论

尽管FCM DNA含量与倍体分析和端粒酶的检测等实验室检查方法,有益于良恶性胸腹水的鉴别,且具有较高诊断价值[1],但胸腹水的脱落细胞学检查仍是良恶性胸腹水的主要确诊方法[2]。离心沉淀后将沉渣制成常规HE涂片已应用多年,并且仍然发挥着主要的诊断作用。一般胸腹水的良恶性依靠制作良好的普通涂片即可鉴别。虽然有着背景脏,细胞易重叠、易变形、不集中等缺点,但能显示恶性背景且癌细胞体积大,异型明显,保持癌细胞排列的特点,所以易于诊断。2009年开始,本科引进了非妇科TCT技术,试图能制作出更优质的细胞涂片,然不尽如人意(细胞丰富、形态清晰、排列有序、背景干净)[3,4]。与传统普通制片方法相比,其缺点表现为:(1)细胞量少,研究发现胸腹水液基制片的细胞量较细胞采集器少;(2)细胞缩小,液基制片的细胞较传统制片的细胞小1~2倍;(3)成团的癌细胞分散,失去了原有的排列方式;(4)癌性背景消失。并未表现出文献中所称的优点(背景清晰、细胞集中、结构清晰,采集量大、退变较少)[5,6]。虽然有些时候肿瘤细胞脱落较多时也能制成较好的涂片。结果显示液基制片并不优于传统制片,反而由于细胞形态和排列方式的改变给诊断造成一定的困难。笔者认为,液基制片和传统制片结合使用可取长补短,更有利于诊断。对于一些难以确诊的病例,加做沉渣包埋和免疫组化。沉渣包埋的切片细胞形态接近于常规组织学切片中细胞形态,并且保持着肿瘤的组织排列形态,还可以进行免疫组化和特殊染色检查[7]。胸腹水的脱落细胞学检查中最难最常见的问题是间皮细胞和癌细胞的鉴别,尤其是退变的间皮细胞,因其不典型性(裸核、核大、深染)更易误诊为癌细胞。而在沉渣包埋切片中,病变细胞形态清晰,少退变,排列有规律,异型性确定。另外,在区分间皮细胞和腺癌细胞及恶性肿瘤细胞分类上,用沉渣包埋块中的细胞团做免疫组化检查可以提供帮助。腺癌细胞CK-low阳性,鳞癌细胞CK-high阳性,淋巴瘤细胞LCA阳性,恶性间皮瘤细胞MC阳性,Ki-67增殖指数较高,而良性间皮细胞MC阳性,Ki-67增殖指数较低。

从经济实用方面,常规细胞涂片依然是首选。它价格低廉,方法简单,出结果快,且瘤细胞异型明显,有着本质的肿瘤组织学趋势,大多易于诊断。其次,沉渣包埋对于复查和疑难病例尤其适用,因其实用性接近于小活检,细胞集中,有组织学排列趋势,并能加做特染和免疫组化。最后是新柏氏TCT,它价格较贵,收集细胞少,瘤细胞小,且失去原肿瘤排列趋势,不利于良恶性细胞鉴别,故其经济性和实用性均较差,也许机器质量差,有待改进方法。也有报道文献称,沉降式TCT效果好(细胞多而集中,又不致太厚,同时在离心中由于细胞体积大小不一,沉降系数,各自分布于切片的不同部位)[8],优于普通细胞涂片,将有待进一步验证。

摘要：目的:比较恶性胸腹水几种细胞学检查的优缺点,探讨恶性胸腹水病理细胞学诊断的最佳途径。方法:对每例胸腹水行普通离心沉淀涂片、TCT制片,部分疑难病例结合沉渣包埋及免疫组化检查。结果:127例恶性胸腹水中,普通离心沉淀涂片诊断127例,TCT诊断127例,沉渣包埋诊断38例,免疫组化诊断24例。结论:普通离心沉淀涂片、TCT、沉渣包埋和免疫组化是恶性胸腹水细胞学的重要检查方法,普通离心沉淀涂片适于一般良恶性胸腹水,沉渣包埋和免疫组化适于复查和疑难病例,而TCT制片技术尚待改进。

关键词：胸腹水,细胞学,涂片,TCT,沉渣包埋

参考文献

[1]王俊利.良恶性胸腹水鉴别诊断的研究进展[J].右江医学,2010,38(6):763-765.

[2]刘邦荣,吴丽颖,杨玉莲.658例胸腹水细胞病理学诊断分析[J].中国现代医学杂志,2006,16(16):2503-2507.

[3]张智慧,孙耘田.薄片技术在体腔积液诊断中的应用[J].中华病理学杂志,2002,31(4):360-361.

[4]杜芸,刘鹿宁,王珩.液基细胞学在非妇科领域的应用分析[J].临床与实验病理学杂志,2008,24(4):495-496.

[5]刘梅,季晓丽,吴海燕,等.胸腹水患者液基细胞学检查[J].实用临床医学,2006,7(2):6-7.

[6]张培谊,邹赛英,王玉兰,等.TCT技术在胸腹水恶性肿瘤诊断中应用[J].临床与实验病理学杂志,2005,20(3):357-358.

[7]奉孝荣,陈莉,梁辉,等.胸腹水沉渣切片在脱落细胞学中的作用[J].西部医学,2010,22(7):1230-1231.

腹水细胞学检查 篇2

全能干细胞——多能干细胞——

造血干细胞

髓性干细胞淋巴干细胞

（原粒原单原红原巨核原浆）原淋巴(B/T)

早幼早幼幼巨核↓

中性 嗜酸 嗜碱↓↓↓↓

中幼 中幼 中幼中幼颗粒巨幼浆

中性 嗜酸 嗜碱幼单↓↓↓幼淋巴(B/T)

晚幼 晚幼 晚幼晚幼产板巨成浆

中性 嗜酸 嗜碱

杆核 杆核 杆核网织

中性 嗜酸 嗜碱↓↓↓↓

分叶 分叶 分叶单核成红血小板淋巴(大/小)

血细胞发育形态演变规律要点：

胞体：由大变小，巨核细胞系则逐渐变大。

胞质: 量—— 由少到多（因细胞主要功能由分裂转向生理作用）色—— 由深蓝到浅蓝或灰红（带正电荷的Hb与伊红结合，带负电

荷的早期细胞与美蓝结合）

颗粒— 由无到有（特异或非特异），但红细胞、小淋巴细胞无颗粒胞核: 体积——由大到小（红细胞无核，易于变形穿梭）

形态——由圆到不规则（或消失），淋巴细胞的核型改变不明显染色质—由疏松细致到紧密粗糙

颜色——由染淡紫色到深紫色（均是由于进一步浓缩，以减小核体积）核仁——从有到无（由RNA聚集形成，分裂时分散，结束后聚集）

血细胞形态分析要点

涂片质量： a．厚薄b．染色c．部位选取

细胞发育连贯性： 注意细胞发育过程中各阶段的主要特征

结合细胞功能：细胞发育与细胞功能具密切关系

临床应用

1.适应症

a.外周血数量、成分、形态等异常者

b.经一定检查原因不明的发热、肝脾及淋巴结肿大c.出现原因不明的骨痛、骨质破坏、黄疸、紫癜等

d.需作治疗观察和其他检查者

e其他（活检、标记检测、染色体检查等）

2.禁忌症

a.血友病或凝血因子重度缺陷者

b.穿刺部位有炎症或畸形

c.晚期妊娠的孕妇

骨髓穿刺方法：

（一）部位的选择和条件

穿刺部位通常选择—髓液丰富、浅表易定位、避开重要器官。如髂后上棘、髂前上棘、胸骨、胫骨等。被穿刺部位的体表皮肤应无破损和炎症及畸型。

（二）穿刺要求：1．耐心解释。2．严格无菌操作。3．髓液应控制0.2ml以

内。4．骨质疏松或多发性骨髓瘤患者需小心。5．血小板减少等患者，穿刺后应

予压迫。6.了解病史注意禁忌症。

结果的计算：首先计算各系统各阶段细胞所占百分比。（红细胞系统20～25%，粒细胞系统50～55%，淋巴细胞系统20～25%）然后将各阶段粒细胞

百分率的总和除以各阶段有核红细胞百分率，得出粒红比值（G/E）。

检测结果分析与报告方式：

（一）结合临床分析1．一般资料2．症状3．体征

（二）结合血象分析三系数量和质量

（三）骨髓象分析1．小粒、油滴、色泽2．有核细胞增生程度3．细胞数量分

析4．细胞形态分析（粒、红、巨、淋、单、浆、其他异常细胞）

（四）骨髓象与血象结合分析

1．骨髓象相似，而血象有区别（溶贫与急性失血等）

2．骨髓象有区别,而血象相似（传淋与慢淋、白血病与类白）

3．骨髓象无变化,而血象有变化（传染性单核细胞增多症、部分淋巴瘤）

4．骨髓象有变化,而血象无变化（多发性骨髓瘤、戈谢病）

5．骨髓象细胞难以辨认,而血象细胞易辨认（白血病、血液寄生虫、淋巴瘤）

（五）报告方式：须具有独立性、肯定性，依赖细胞化学染色。简明报告特征所见，而不下结论。分为肯定性诊断、支持临床诊断、排除性诊断、描述形态学所

见。

临床意义：

一、粒细胞系

增多：原始粒细胞——急性白血病

早幼粒细胞——急性早幼粒细胞白血病

中幼粒细胞以下阶段粒细胞——慢性粒细胞白血病

晚幼粒细胞、杆状核细胞——慢性粒细胞型（类）白血病、中毒

减少：再生障碍性贫血、粒细胞减少症、粒细胞缺乏症。

二、红细胞系

增多：原始红细胞、早幼红细胞——急性红血病、急性红白血病

中幼、晚幼红细胞——增生性贫血、红白血病、铅中毒

减少：纯红细胞再生障碍性贫血、急性白血病未分化型、化疗后

三、巨核细胞系

增多：慢性特发性血小板减少性紫癜、急性巨核细胞白血病

减少：再生障碍性贫血、急性白血病、慢性粒细胞白血病、化疗后

四、单核系细胞

增多：原单核细胞、幼单核细胞——急性单核、粒-单核白血病成熟单核细胞——急性单核、慢性粒-单核细胞白血病

五、淋巴系细胞

增多：原淋巴细胞、幼淋巴细胞——急慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤成熟淋巴细胞——慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫

血、病毒感染

在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下，应用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位进行显示，从而分析细胞化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变。

应用：a．对各类白血病的确诊b．对许多血液疾病鉴别诊断c．对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息

原理：粒细胞和单核细胞内有过氧化物酶POX

参考结果：中性粒细胞、嗜酸粒细胞——强阳性

单核细胞——弱阳性或阳性（弥散状）

淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞——阴性

临床意义:1．增高--再生障碍性贫血、感染、急慢性淋巴细胞白血病、2.减低--急慢性粒细胞白血病、MDS、风湿热、放射病等

3.缺乏—先天性髓过氧化物酶缺乏症。

在急性白血病分型中的意义：临床上通常将POX染色阳性率3%作为淋巴与非淋

巴的分界标准。

原理：糖原在不同种类细胞中的含量和分布有所不同。

参考结果：巨核细胞、血小板——强阳性（胞质中出现红色颗粒状等反应物）粒细胞、单核细胞——随细胞的成熟程度，阳性逐渐增强

淋巴细胞、浆细胞——少部分阳性

红细胞——阴性

临床意义：幼红细胞强阳性反应——红血病、红白血病

阳性反应物呈粗颗粒状或块状强阳性——急性巨核细胞白血病

呈粗颗粒状或块状——急性淋巴细胞白血病

呈细颗粒状或弥漫状——急性单核细胞白血病

呈细颗粒状或均匀淡红色——急性粒细胞白血病

原理：是成熟中性粒细胞的特异性酶

病理变化：增高：感染、AA、类白血病、急淋、其它

减低：粒缺、脾亢、感染（G－）、病毒、白血病

原理：此酶主要分布在粒细胞和肥大细胞中。通常从原粒细胞后期即可见有弱阳性

反应，而到早幼粒细胞就可见强阳性反应。且酶的活性不随细胞分化成熟而增强。此酶的阳性产物比POX更为特异。单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞等均为阴性，临床评价：此组合酶类染色，主要运用于各种急性白血病的鉴别诊断，特别在急性

非淋巴细胞白血病（ANLL）中的分型和亚型分型提供重要依据。

原理：骨髓铁包括细胞内铁和细胞外铁。细胞内铁为幼红细胞合成血红蛋白时的利

用形式，而细胞外铁是骨髓以含铁血黄素形式存在的储存铁。

骨髓铁染色可了解骨髓中幼红细胞对铁利用的功能和铁原料在机体内的吸受与储存情况，是诊断缺铁性贫血最重要且较早期的指标之一。

临床意义：

1、明显降低甚至阴性——缺铁性贫血。

2、明显增多——铁粒幼细胞贫血（铁含量并不缺乏，但利用率低）

3、骨髓增生异常综合症：可见环形铁粒幼细胞增多

本病是一组骨髓造血干细胞克隆性疾病。

外周血象-主要表现在三系呈不同程度的改变，可见到各类细胞在数量、质量上的异常。

骨髓象-主要以各系病态造血为突出表现。

分型：难治性贫血:伴有环行铁粒幼细胞(RARS)

不伴有环行铁粒幼细胞(RA)

难治性血细胞减少伴有多系增生异常(RCMD)

难治性血细胞减少伴有多系增生异常和环行铁粒幼细胞(RCMD-RS)难治性贫血伴有原始细胞过多(RAEB)

5q-综合征(原始细胞大于20%的AML且有细胞遗传学异常)

骨髓增生异常综合征,不能分类

白血病是一种造血系统的恶性疾病，其特点是大量原始和幼稚或异常细胞出现在骨髓、外周血和其他器官或组织。

分型：1.急性白血病

急性淋巴细胞白血病 以原始或幼稚淋巴细胞为主，依据形态可分为三型（FAB分型）： L1-小细胞

型； L2-大小细胞混合型； L3-空泡型；

按照免疫学特点可分成T-细胞和B-细胞二大

类，再分成多种亚型。

急性非淋巴细胞白血病 根据发病细胞种类以进行分类

急性白血病的MICM分型：即对急性白血病进行形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学的分型。

2.慢性白血病

慢性淋巴细胞性白血病 以小淋巴细胞增多为突出表现，病程温和，可延至晚期，可急变

慢性粒细胞性白血病中、晚幼粒细胞明显增多，病程快，死亡率高

淋巴瘤起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤，可分为何杰金病与非何杰

金淋巴瘤两大类。在后期可累及全身各个器官或组织包括血液与骨髓。

多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增生所至的恶性肿瘤。骨髓内可见大量异常浆

细胞（骨髓瘤细胞）。若外周血中见有较多这类细胞即为浆细胞

白血病。

恶性组织细胞病是一种单核-巨噬细胞系统的恶性疾病，在骨髓中可见体积较

腹水细胞学检查 篇3

1资料与方法

1. 1临床资料收集2000年1月1日至2010年12月31日广东省妇幼安康工程子宫内膜癌防治项目医院有随访、临床病历资料完整、经术后病理检查确诊的5816例子宫内膜癌病例,其中FIGO 2009 Ⅰ ~ Ⅱ 期、术中行腹水细胞学检查病例共3476例,剔除行术前辅助治疗、行子宫次全切除术、保留附件手术61例,共纳入3415例。

1. 2方法分析其腹水细胞学检查阳性与临床病理情况的关系及腹水细胞学检查阳性与患者预后的关系。

1. 3随访采用电话随访 、 信件随访及门诊随访 。 随访截止日期2012年12月31日 。 失访372例,失访率10. 9% ,随访时间3 ~ 155月,中位随访时间57月 。

1. 4统计学方法采用SPSS 16. 0软件进行统计分析 。 计量资料采用t检验; 计数资料采用卡方检验; 生存曲线采用Kaplan-Meier法进行分析,单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox比例风险比例模型分析 。P<0. 05为差异有统计学意义 。

2结果

2. 1一般情况3415例子宫内膜癌病例发病年龄22 ~ 93岁,中位发病年龄53岁。腹水细胞学检查阳性127例 ( 3. 7% ) ,腹水细胞 学检查阴 性3288例 ( 96. 3% ) 。Ⅰ 期3088例 ( 90. 4% ) ,Ⅱ 期327例 ( 9. 6% ) 。子宫内膜样腺癌3323例( 97. 3% ) ,非子宫内膜样腺癌92例( 2. 7% ) 。子宫内膜样腺癌中组织学分级G1 1034例( 31. 1% ) 、G2 1561例( 47. 0% ) 、 G3 368例 ( 11. 1% ) ,不详者360例 ( 10. 8% ) 。肌层浸润深度<1 /2者2258例( 66. 1% ) ,肌层浸润深度≥ 1 /2 518例( 15. 2% ) ,不详者639例 ( 18. 7% ) 。行全子宫切除术1456例( 42. 6% ) 、次广泛子宫切除术598例( 17. 5% ) ,广泛子宫切除术1361例( 39. 9% ) 。行淋巴结切除术1696例( 49. 7% ) ,未行淋巴结切除术1719例 ( 50. 3% ) 。 无术后辅 助治疗2629例 ( 77. 0% ) ,术后辅助放疗161例( 4. 7% ) ,术后辅助化疗538例( 15. 8% ) ,术后联合放化疗87例( 2. 5% ) 。

2. 2腹水细胞学检查阳性与各临床病理因素的关系腹水细胞学检查阳性和阴性的Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌临床病理资料,见表1。单因素分析显示,发病年龄>60岁( P = 0. 008) 、深肌层浸润( P = 0. 001) 、宫颈间质侵犯( P = 0. 007) 是Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌腹水细胞学检查阳性的影响因素。多因素分析显示,发病年龄( OR =1. 797,95% CI 1. 064 ~ 3. 036,P = 0. 028) ,深肌层浸润 ( OR = 1. 724,95% CI 1. 025 ~ 2. 900,P = 0. 040) 、宫颈间质侵犯 ( OR = 2. 051,95% CI 1. 083 ~ 3. 886,P = 0. 027) 是Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌腹水细胞学检查阳性的独立危险因素。

2. 3复发情况腹水细胞学检查阳性患者复发率为14. 2% ,腹水细胞学检查阴性患者复发率为7. 4% ,差异有统计学意义( χ2= 7. 970,P = 0. 005) 。局部复发率在腹水细胞 学阳性和 阴性患者 中分别为3. 1% 、 2. 9% ,差异无统计学意义 ( χ2= 1. 000,P > 0. 05 ) 。远处复发率分别为11. 0% 、4. 5% ,差异有统计学意义 ( χ2= 11. 688,P = 0. 001) 。见表2。

2. 4预后及预后影响因素分析腹水细胞学阳性和阴性患者的5年总体生存率分别为90. 5% 、95. 5% ,5年无进展生存率分别为82. 8% 、92. 3% 。经Log-rank分析,两组患者的生存时间( χ2= 14. 183,P <0. 001 ) 和无进展生存时间( χ2= 10. 347,P = 0. 001 ) 差异有统计学意义。见图1、图2。

经单因素分析发现,发病年龄( χ2= 40. 307,P < 0. 001; χ2= 47. 997,P < 0. 001 ) 、组织学类 型 ( χ2= 9. 755,P = 0. 002; χ2= 9. 893,P = 0. 002 ) 、组织学分级 ( χ2= 87. 401,P<0. 001; χ2= 89. 290,P<0. 001) 、肌层浸润深度 ( χ2= 98. 050,P < 0. 001; χ2= 100. 154,P < 0. 001) 、宫颈间质侵犯 ( χ2= 14. 951,P < 0. 001; χ2=18. 392,P<0. 001 ) 、淋巴血管间隙受累 ( χ2= 27. 641, P<0. 001; χ2= 29. 780,P<0. 001) 是子宫内膜癌生存时间及无进展生存时间的影响因素。将腹水细胞学检查是否阳性、发病年龄、组织学类型、组织学分级、肌层浸润深度、宫颈间质侵犯、淋巴血管间隙受累纳入Cox多因素分析,结果表明,腹水细胞学检查阳性对生存时间( OR =0. 620,95% CI 0. 194 ~ 1. 986,P =0. 421) 和无进展生 存时间 ( OR = 0. 496,95% CI 0. 182 ~ 1. 348,P = 0. 169 ) 无明显影 响。 发病年龄 ( OR = 2. 438,95% CI 1. 544 ~ 3. 850,P < 0. 001; OR = 1. 934, 95% CI 1. 361 ~ 2. 774,P < 0. 001 ) 、组织学分级 ( OR = 1. 645,95% CI 1. 162 ~ 2. 330,P = 0. 005; OR = 1. 505, 95% CI 1. 164 ~ 1. 947,P = 0. 002 ) 、肌层浸润 深度 ( OR = 3. 349,95% CI 2. 089 ~ 5. 370,P < 0. 001; OR = 2. 553 ,95 % CI 1. 801 ~ 3. 619 ,P < 0. 001 ) 是 Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌患者生存时间及无进展生存时间的独立预后影响因素。组织学类型、宫颈间质侵犯、淋巴血管间隙受累对Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌患者生存时间及无进展生存时间无明显影响( P均> 0. 05 ) 。

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3讨论

3. 1早期子宫内膜癌腹水细胞学阳性影响因素文献报道,早期子宫内膜癌腹水细胞学检查阳性率为3. 3% ~ 10. 6%[2~4]。本资料结果显示,早期子宫内膜癌患者中腹水细胞学检查阳性率为3. 7% ,与文献报道一致。目前子宫内膜癌患者腹水细胞学检查阳性的具体机制仍不清楚。一般认为,无宫外转移的子宫内膜癌腹水细胞学检查阳性可能是由于: 1通过双侧输卵管进入腹腔; 2深肌层浸润通过肌层、浆膜; 3淋巴引流; 4腹腔间皮原发灶。本文结果显示,早期子宫内膜癌中腹水细胞学检查阳性深肌层浸润率为25. 2% ,明显高于阴性患者,多因素分析也表明深肌层浸润是腹水细胞学检查阳性的独立危险因素。在妇女盆腔结构中,道格拉斯陷凹是最低点,脱落的细胞易在此聚集,发生深肌层浸润的癌细胞容易通过腹膜脏器浆膜面转移,在道格拉斯陷凹中找到肿瘤细胞的可能性大。有学者认为,盆腹腔有丰富的淋巴管网,游动的癌细胞可随淋巴管网进入腹腔,如淋巴堵塞,进入腹腔的癌细胞会增多[5]。但本文结果未提示淋巴血管间隙受累与腹水细胞学检查阳性有相关性, 腹水细胞学检查阳性是否与淋巴引流有关仍需进一步研究证实。本资料结果显示,发病年龄>60岁是腹水细胞学检查阳性的危险因素,可能与高龄患者中深肌层浸润、特殊病理类型、组织学G3等不良预后因素发生风险更大有关。

3. 2腹水细胞学阳性对早期子宫内膜癌预后的影响FIGO 2009分期中腹水细胞学检查阳性已经被剔除出ⅢA期,但近年来腹水细胞学检查阳性对子宫内膜癌的预后影响仍存在较大争议。部分学者认为,早期子宫内膜癌患者中腹水细胞学检查阳性患者的预后明显差于腹水细胞学检查阴性患者,腹水细胞学检查阳性是早期子宫内膜癌患者的独立预后因素。有资料显示[6],早期子宫内膜样腺癌腹水细胞学检查阳性和阴性患者5年总体生存率分别为80. 8% 、95. 1% , 浆液性腺癌患者分别为50. 4% 、70. 8% 。还有文献报道[2],病灶局限在子宫的子宫内膜样腺癌患者,腹水细胞学检查阳性患者的5年生存率明显低于阴性患者( 83% vs 97% ,P =0. 011) 。但也有人认为,细胞学检查有一定的假阳性,阳性结果不排除为手术时挤压子宫或术前宫腔镜检查所致,无宫外转移等高危因素的腹腔细胞学检查阳性并不影响子宫内膜癌患者的预后[4,7]。Kasamatsu等[8]回顾性分析280例无宫外转移的子宫内膜癌病例发现,腹水细胞学检查阳性对患者的预后影响无显著性差异,腹水细胞学检查阳性不是早期子宫内膜癌的独立预后因素,阳性患者行术后辅助治疗意义不大。本文结果显示,早期子宫内膜癌中腹水细胞学检查阳性患者的复发率为阴性患者的2倍,阳性患者远处复发率比阴性患者高( 11. 0% vs 4. 5% ) ; 生存分析提示腹水细胞学检查阳性患者的5年总体生存率和5年无进展生存率也比阴性患者低,表明Ⅰ ~ Ⅱ期子宫内膜癌患者中腹水细胞学检查阳性患者的预后比阴性患者差,提示在早期子宫内膜癌患者中腹水细胞学检查阳性是子宫内膜癌的不良预后因素。但多因素校正混杂因素后显示,腹水细胞学检查是否为阳性对生存时间( OR = 0. 620,95% C 0. 194 ~ 1. 986,P = 0. 421 ) 和无进展生存时间 ( OR = 0. 496,95% CI 0. 182 ~ 1. 348,P = 0. 169 ) 无显著性影响,腹水细胞学检查阳性并不是子宫内膜癌的独立预后影响因素。表明腹水细胞学检查阳性本身并不会增加患者死亡率,需要合并其他高危因素,如发病年龄、组织学分级、肌层浸润深度等因素才能影响患者的预后,与文献报道一致[9~11]。

综上所述,腹水细胞学检查阳性并不是早期子宫内膜癌的独立预后影响因素,但腹水细胞学检查阳性患者的预后比阴性患者差,可能与腹水细胞学检查阳性常合并深肌层浸润、宫颈侵犯等危险因素有关。因此,虽然腹水细胞学检查阳性已从FIGO 2009分期Ⅲ A期诊断标准中剔除,但是临床专家建议手术时仍有必要进行腹水细胞学检查,腹水细胞学检查阳性时临床仍应给予重视,特别合并深肌层浸润、宫颈侵犯时需积极处理。此外,本资料显示腹水细胞学检查阳性患者较阴性患者复发率更高,远处复发风险更大,随访时更应注意检查有无复发尤其远处复发。

腹水细胞学检查 篇4

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2012年1月~2015年1月行胸腹水TCT检测的200份 (200例患者) 剩余标本, 其中胸水138例, 腹水62例, 男85例, 女115例, 年龄45~81岁, 平均年龄 (60.3±8.7) 岁。根据细胞学诊断结果将200例患者分为A组与B组, 每组100例。

1.2 仪器与试剂

仪器:沉降式制片染色机 (安必平医药科技公司) 、自动样本转移机、低速离心机、振荡器、快速混匀器。试剂:缓冲液、苏木素、EA/OG染色剂、无水乙醇等。

1.3 方法

1.3.1 A组采用细胞块试剂盒法

将常规细胞学检查剩余的细胞学标本移入20~50 ml离心管, 1000 r/min离心5 min, 离心沉渣较少者移出上清液, 重复加入细胞学标本并离心, 直到离心沉渣满足要求。离心管内保留上清液1.5~2.5 ml, 轻轻混匀, 移入专用离心管, 色泽较浅的标本可适当滴加伊红试剂染色, 静置10 min后, 放入水平式离心机1500 r/min离心5 min;取出细胞块收集环, 细胞混悬液中的细胞成分被收集至细胞块收集环中, 形成固定大小形状的固体细胞块, 从上部滴加1~2滴琼脂液 (已加热至50~60℃) , 室温冷却, 连同收集环用脱水纸包裹后放入脱水盒, 4%中性甲醛固定液固定6~8 h, 即可进入脱水机常规脱水处理。细胞包块制作切片后, HE染色、镜检, 做出单独细胞包块诊断;结合细胞学涂片和细胞包块切片做出细胞病理学诊断。

1.3.2 B组采用蛋清液支架法制作前先用蛋白液涂片, 然后晒30 min左右, 干燥备用。标本瓶用振荡器震荡15 s, 取4 ml细胞分离提取液置离心管内, 用注射移液器穿抽吸样品8 次使细胞混合均匀, 抽取8 ml样品液置离心管, 把离心管平衡放进离心机, 以转速1000 r/min转速离心2 min, 吸去上清液8 ml, 余下约4 ml, 再以转速2000 r/min转速离心10 min, 倾倒出上清液体, 并用吸水纸吸去管口的液体。震荡25 s/管, 静置10 min, 加入缓冲水1000μl, 抽吸8 次后转移400μl置制片舱。转移细胞时移液加样器TIP头居中插入染色室上缘0.5 cm处, 细胞静置沉降10 min, 将制片舱内液体倾出, 然后加冲洗液静置1 min, 将冲洗液倾出静置60 min, 染色5 0 0 μl/次, 停留1 min。缓冲液2 次→苏木素1次→缓冲液2 次→冲洗液2 次→EA/OG 1次→冲洗液2 次→冲洗液浸泡2 min。

1.3.3 免疫组织化学检测

使用美国生产的Ventana Benchmark XT全自动免疫组织化学仪, 对术后病理组织学确诊为癌和良性病变的细胞包块行CK19和Galectin-3免疫组织化学检测;对术后病理组织学确诊为滤泡性肿瘤的细胞包块行DDIT3和Ki-67免疫组织化学检测。鼠单抗CK19、Galectin-3和Ki-67购自上海长嘉生物科技有限公司, 兔抗DDIT3购自罗氏公司。采用En Vision法染色, 二氨基联苯胺四盐酸 (DAB) 显色。

1.4 统计学方法

采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率 (%) 表示, 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

本研究两种方法所制备的细胞蜡块质量稳定, 形状规则, 细胞块切片具有较规范的切面形状, HE染色细胞核和细胞质着色良好, 连续切片中细胞成分分布均匀;免疫组织化学标志物定位准确, 背景干净。200例行胸腹水TCT检测患者恶性细胞检出率为16.0% (32/200) , 其剩余标本经细胞块法检测出的总恶性细胞检出率为45.5% (91/200) , 其中A组恶性细胞检出率53.0% (53/100) 高于B组38.0% (38/100) , 差异具有统计学意义 (P<0.05) 。见表1。

注:与B组比较, aP<0.05

3 讨论

细胞蜡块制备是细胞学检查重要的组成部分, 是对细胞学涂片诊断有力的补充, 可为提高细胞学诊断正确性提供更多诊断依据, 细胞蜡块的后期处理方法同常规组织学标本, 因此切片、染色及免疫组织化学操作步骤与一般组织学切片相同;所制细胞蜡块同组织学蜡块一样, 方便长期保存;与涂片相比, 细胞学蜡块可连续性切片, 每张切片具有相似的组织结构, 便于进行多项检查结果的评价及比较。细胞块技术不是一个独特的技术, 20多年以来有很多学者应用, 但很少有人对此项技术感到满意。目前国内也有单位开展了细胞块技术, 归纳起来有如下几种:离心法、琼脂法、血浆凝血酶凝集法、鸡蛋清法凝集法[4,5]。但上述方法均存在步骤多、耗时、不易操作、甚至有标本量丢失等问题。作者采用细胞块试剂盒法处理后制作石蜡细胞块, 在满足细胞涂片所需的标本量之后, 将剩余的标本移至玻片上, 经过简单的组织固定过程, 即可得到粘附较为紧密的细胞和组织碎片团块。细胞成分丢失少, 这种操作简单快捷, 无需额外的辅助试剂, 减少了细胞和组织变形的程度。

对细胞涂片直接行免疫组织化学染色具有一定的优点, 包括无需抗原修复, 省时, 背景着色较浅等, 但由于涂片中目标细胞的散在分布, 数量稀少, 并且在制片过程中造成的细胞破坏以及涂抹玻片数量的限制, 存在试剂浪费、对细胞涂片不能多种类抗体标记以及无法正确判读染色结果等问题, 造成检测结果不稳定[6]。而细胞块可以被连续或多次切片应用多种抗体进行免疫组织化学等染色, 并且细胞块和白胶片可以长期保存以备日后进行更多的常规检测, 甚至分子方面的检测, 这就弥补了对细胞涂片不能进行多次多种类染色的先天不足[7]。本文提供的病例中, 这些细胞块经过多种抗体染色的联合应用, 便提供了单纯细胞涂片所不具有的更为丰富的病理诊断和鉴别诊断信息。

总之, 本文介绍的细胞块制作技术把穿刺细胞学和组织学中标本的固定、处理、石蜡包埋技术有机结合, 既保存了穿刺组织良好的细胞形态学特征, 又能进一步发掘组织形态学特征, 同时便于进行免疫细胞化学染色等辅助检测的进一步研究之用, 实践证明这是细针细胞学领域的延伸和行之有效的常规技能之一。这种细胞块技术可以有效地运用于日常细胞学工作中, 也易于在各级医院常规开展。

参考文献

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[3]刘岩, 吴秉铨, 钟镐镐, 等.琼脂石蜡双包埋和免疫细胞化学染色的细胞学应用.诊断病理学杂志, 2013, 20 (3) :184-186.

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[5]邓志勇, 李海, 陈芳, 等.超薄液基细胞技术在胸腹水癌细胞检测中的应用价值探讨.现代肿瘤医学, 2010, 18 (9) :1829-1830.

[6]Sriram KB, Relan V, Clarke BE, et al.Diagnostic molecular biomarkers for malignant pleural effusions.Future Oncol, 2011, 7 (6) :737-752.

腹水细胞学检查 篇5

1 检查方法

对患者良恶性胸腹水的鉴别检查分常规检查方法与理论分析两方面。常规检查包括对患者胸腹腔内异常的液体进行扫描, 对液体的化学特性进行研究, 观察液体的颜色、透明度, 检测比重与凝固性[1], 对液体中蛋白含量、乳酸以及葡萄糖进行定量检测, 对液体的成分、细胞含量进行化学检测, 对液体中菌落进行培养分析, 观察扫描胸腹腔的液体是否出现外漏或转移。在理论分析上多根据现今的临床资料与研究成果对患者胸腹腔的脱落细胞进行鉴别检查, 虽然检测结果会因脱落细胞的数量以及肿瘤细胞被破坏的程度而受影响, 但是由于其检测的准确性较高, 临床上进行脱落细胞的鉴别诊断仍然是不可或缺的。

2 标志物检测

在对患者的胸腹水良恶性进行鉴别时, 不光仅仅对脱落细胞进行鉴别, 还可以对肿瘤细胞的标志物进行检查分析, 帮助对肿瘤特性的分析。常见的肿瘤标志物有胃肠相关抗原、癌胚抗原、CA125、MMPs、VEGF、钙黏附素、肿瘤坏死因子以及白细胞介素等。其中胃肠相关抗原、癌胚抗原以及CA125, 与人体所患的胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌以及肺癌等疾病都有关联, 通过标志物检测有助于肿瘤来源的准确定位, 提高临床鉴别诊断的准确率。恶性肿瘤患者的腹水中, 肿瘤坏死因子与白细胞介素的含量异常升高, 采取联合检测的方法可有效鉴别良恶性胸腹水, 敏感度提高25%至37%。MMPs是一种蛋白水解酶, 在肿瘤的形成中起帮助肿瘤转移入侵的作用, 对细胞外的基质进行降解, 在肿瘤中MMPs的活性增强, 对MMPs以及VEGF进行联合检测, 能够显著提高判断良恶性腹水的准确率, 高达74%, 并对肿瘤性质的判别起一定作用[1,2]。钙黏附素与肿瘤细胞的转变有着紧密的联系, 对肿瘤细胞的运动、扩散与预后显著相关, 对钙黏附素进行免疫染色检验可准确检测恶性腹水且准确率高达90%以上。由于肿瘤的来源多种多样, 采取多种肿瘤标志物联合检测的方法能够提高检测的准确率。

3 检测分析DNA含量与倍体

在临床检测中, 发现恶性肿瘤患者腹水的染色体多表现异常, 染色多倍体数量增多, 并且有癌细胞活动扩散的表现。相关资料表明, 恶性肿瘤患者腹水中染色体多高倍体, 恶性肿瘤细胞增殖异常, 染色体畸变的比例高达80.3%以上。也可以利用DNA染色体的异常表现鉴别良恶性腹水, 对染色体进行染色, 准确率可高达93.8%[3]。

4 免疫细胞化学法鉴别

在良恶性胸腹水的鉴别诊断中, 可以选择免疫细胞化学法对波形蛋白、钙结合素、CK以及CEA的检测, 以提高诊断的准确率。由于对脱落细胞鉴别的方法不好区分间皮瘤与腺癌细胞, 而波形蛋白则能较好的区分癌腺细胞与间皮瘤, 因为波形蛋白标记在癌腺细胞表现为阴性, 间皮瘤表现为阳性。CK与CEA主要标记上皮源性肿瘤, 钙结合素区别肺腺癌与间皮瘤, 联合检测将准确率提高到85%左右[4]。

5 端粒酶检测

端粒在细胞分裂的过程中起重要作用, 而端粒酶是保持端粒正常活性的逆转录酶[5], 是维持细胞永久活性的重要物质, 在肿瘤恶化的过程中表现异常。研究显示, 当出现恶性腹水的情况时, 首先在端粒酶中活性异常表达, 与肿瘤恶化的程度紧密联系, 因此对端粒酶进行检测敏感度较强, 一般维持在78%至89%, 特异性表现为88.7%至94.3%, 能有效提高鉴别良恶性腹水的能力, 准确率为90.1%。

6 结束语

随着现代医疗水平与生物科技的不断进步, 对良恶性腹水的鉴别诊断的研究也在不断发展, 临床上对脱落细胞进行单纯鉴别的手段被逐渐融合进多种标志物联合诊断, 通过对多种标志物的判别, 提高了诊断的准确率, 完善了临床诊断方法。笔者建议在鉴别诊断的过程中, 根据肿瘤细胞的多种标志物综合检测, 对目前还未定论的标志物开展深入研究。

摘要：临床鉴别诊断良恶性胸腹水一直是困扰临床医师的难题, 对患者脱落的细胞进行鉴别一直是进行恶性胸腹水准确诊断的最好方法, 但是当患者腹水出现肿瘤细胞被破坏或肿瘤细胞大量减少的情况后, 对患者进行细胞鉴别的难度增大, 本研究采取综合标志物检测方法对良恶性胸腹进行鉴别。

关键词：良恶性胸腹水,脱落细胞,综合标志物,鉴别

参考文献

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[4]肖同浩, 陈寿松, 熊丽萍.提高胸腹水肿瘤细胞检出率的方法探讨[J], 临床军医杂志.2009 (02) .

腹水细胞学检查 篇6

关键词：腹水,诊断,腹腔镜

腹水在临床上是一种常见病, 原因很多, 有些腹水的病因诊断相当困难, 经多次影像学及实验室检查后仍不能确诊, 给患者的精神及经济带来很大的负担。近年来, 随着腹腔镜技术水平的提高, 使诊断性腹腔镜技术变得更为方便快捷。我们分析了30例病因不明腹水患者的腹腔镜检查结果, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2004年7月-2008年2月我院消化内科收治的30例住院患者, 男17例, 女13例, 年龄16岁～68岁, 平均年龄42.5岁, 病程2个月～1年。腹水均为渗出性, 且经过腹腔穿刺液培养和细胞学检查以及各种影像学 (包括B超、CT和MRI等) 、胃肠镜检查难以确定诊断。部分患者经正规内科试验性治疗1个月以上无效。

1.2 手术方法

常规术前检查及采用持续硬膜外麻醉。患者取仰卧位, 碘酊、酒精消毒, 铺无菌手术巾。脐部Veress针盲穿造CO2气腹, 置10 mm穿刺器, 气腹压力0.16～2 kPa, 进行腹腔镜探查, 另置2孔作为手术操作入口。选择腹膜、肝圆韧带、肠系膜、大网膜上结节钳夹取活检。注意勿损伤血管、肠管, 最好不要选用膈肌表面及肠壁结节, 以免造成膈肌损伤出血及肠穿孔。术毕检查无出血后, 放出腹腔内CO2气体缝合各手术孔。

2 结果

30例患者中, 29例明确诊断, 1例未能确诊, 确诊率96.7%。其中腹腔恶性肿瘤15例, 腹腔结核8例, 皆为转移性;肝硬化腹水4例, 腹膜恶性间皮瘤2例。给予输白蛋白及其他对症处理, 3 d左右腹水引流量明显减少, 非肿瘤患者将引流管拔除, 肿瘤患者可继续留置, 以备化疗。均无感染、肿瘤戳孔种植转移等并发症的发生, 切口愈合良好, 术后3 d～5 d出院或转科化疗或抗结核治疗。

3 讨论

鉴别腹水病因传统用腹水细胞学检查, 文献报道[1]恶性肿瘤确诊率75%, 一组肝病腹膜炎[2]腹水涂片细菌阳性率22%, 细菌培养阳性率50%。CT、B超诊断一般只能发现1 cm～2 cm以上的病灶, 对微小病灶分辨率低。近年国内报道了腹腔镜检查对1 mm～2 mm粟粒样结节都能发现且准确性96%, 敏感性88%, 特异性100%[3]。本组30例患者均为原因不明的渗出性腹水, 且经过反复腹腔穿刺液细胞学、各种影像学及胃肠镜检查而难以确定诊断, 有一部分患者经正规内科试验性抗结核治疗1个月以上无效, 而最终选择腹腔镜检查确诊。本组30例诊断性腹腔镜检查100%成功, 96.7%有明确病理学检查诊断。其中恶性腹水比例最高 (50%) , 其余为结核性腹水 (26.7%) , 腹腔镜检查能准确进行鉴别。恶性腹水中以转移癌为多, 妇科肿瘤及腹膜恶性间皮瘤亦不少见。发病年龄以中青年患者占多。我们体会到以下腹水患者可考虑尽早进行腹腔镜检查: (1) 临床表现、生化检查、影像学结果相互矛盾; (2) 临床高度怀疑癌, 但无病理资料证实; (3) 考虑良性病变经内科正规治疗无效者。

腹腔镜检查在腹水诊断方面有着其他检查手段所不能比拟的优势:腹腔镜广角度和多角度的灵活性使其检查能直接窥视到大部分腹壁、脏层腹膜, 并能窥视肝、脾、胃肠、肠系膜以及盆腔, 它对腹腔内脏器有明确的、直观的了解, 可明确腹内病灶的性质, 有无腹内其他脏器肿瘤细胞浸润, 特别是对腹膜的种植性转移结节, 一般影像学检查难以发现, 而腹腔镜检查可明确诊断。直视下块状病变组织活检准确性高, 本组30例患者, 29例确诊, 确诊率达96.7%。

大宗病例报告显示[4], 腹腔镜检查其病死率0%～0.7%, 本组病例无1例死亡, 均无任何并发症。我们认为, 腹腔镜检查应注意以下几点: (1) 要开放建气腹, 因腹水患者腹腔内脏器常出现粘连, 组织水肿脆弱, 盲目穿刺易造成脏器的损伤; (2) 注意保护穿刺孔, 防止肿瘤穿刺孔种植, 取组织时一定要通过Trocar取出, 勿让病理标本与穿刺孔直接接触; (3) 做好充分的术前准备及术后护理; (4) 检查最好在全麻或硬膜外麻醉下进行。

综上所述, 我们认为诊断性腹腔镜检查对腹水诊断确诊率高, 是一种快速、准确、简便且安全有效的诊断方法, 值得推广。对临床上腹水难以确诊病因时应及早进行腹腔镜检查, 以获得准确的诊断。

参考文献

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[3]吴志棉, 余俊峰, 陈流华, 等.腹腔镜探查在不明原因腹水中的应用[J].中国内镜杂志, 2001, 7 (5) :50～52

腹水细胞学检查 篇7

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2014年1月至2015年12月在我院住院胸腹水患者, 行结核感染T细胞斑点试验 (T-SPOT.TB) 的患者, 并同时行PPD、血清结核抗体、胸腹水ADA、胸腹水LDH等检测, 病例资料完整, 所有患者最终诊断明确。其中结核性胸腹水72例 (胸水33例, 腹水39例) , 男41例, 女31例, 年龄18~70岁, 平均年龄 (45.2±3.7) 岁;非结核性胸腹水97例 (包括肿瘤、肝病、感染、甲状腺功能减退、结缔组织病、低蛋白血症等) , 男49例, 女48例, 年龄18~70岁, 平均 (51.6±4.4) 岁。

1.2 T-SPOT.TB检测方法

T-SPOT.TB试剂盒 (厂家:英国Oxford Immunotec Ltd.) , 根据试剂盒说明操作。肝素钠抗凝管采集外周血5 m L, 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。在已包被抗体的微量板的4个孔中, 分别加入阳性对照物血凝素、阴性对照细胞培养液、A抗原早期分泌性靶抗原6以及B抗原滤液培养蛋白10。然后每孔加入外周血单个核细胞一起置于培养箱温育16~20 h。PBS洗脱, 再加入碱性磷酸酶标记的抗干扰素抗体孵育20 h, PBS洗脱, 显色, PBS终止。采用人工计数斑点数, 结果判断标准:阴性对照斑点数为0~5个, 抗原A或B斑点数>阴性对照斑点数6个即为阳性;阴性对照斑点数为≥6个, 原A或B斑点数≥2倍阴性对照斑点数, 判定为阳性。

1.3 PPD皮试、血清TB-Ab、胸腹水ADA、胸腹水LDH检测

所有PPD皮试、血清TB-Ab、胸腹水ADA、胸腹水LDH检测结果均来自病例资料。PPD皮试硬结平均直径大于或等于5 mm均统一定性为阳性, 血清TB-Ab Ig G (+) 、 (+/-) 均统一定性为阳性, 胸腹水ADA大于或等于45 U/L为诊断TBP临界值;胸腹水LDH大于200 U/L且小于500 U/L定义为阳性。血清TB-Ab检测由我院免疫室完成, 胸腹水ADA、胸腹水LDH由我院生化室完成。

1.4 统计学方法

所有数据均录入EXCEL表中, 采用SPSS17.0统计软件处理, T-SPOT.TB与PPD皮试、血清TB-Ab、胸腹水ADA、胸腹水LDH比较运用配对四格表资料χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血T-SPOT.TB与血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA检测的敏感性比较

外周血T-SPOT.TB、血清结核抗体、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA诊断结核性胸腹水的敏感性分别是88.89% (64/72) , 8.33% (6/72) , 65.28% (47/72) , 54.17% (39/72) , 59.72% (43/72) 。外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的敏感性与血清结核抗体、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA比较, 差异均有统计学意义 (P<0.05) , 表1。

2.2 外周血T-SPOT.TB与血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA检测的特异性比较

外周血T-SPOT.TB、血清结核抗体、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA诊断结核性胸腹水的特异性分别是75.25% (73/97) , 90.72% (88/97) , 86.60% (84/97) , 78.35% (76/97) , 54.64% (53/97) 。外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的特异性与血清TB-Ab、PPD、胸腹水ADA比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的特异性与胸腹水LDH比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 表2。

2.3 外周血T-SPOT.TB与血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA检测的阳性预测值比较

外周血T-SPOT.TB、血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA诊断结核性胸腹水阳性预测值分别是72.73% (64/88) , 40.00% (6/15) , 78.33% (47/60) , 65.00% (39/60) , 49.43% (43/87) 。外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的阳性预测值与血清TB-Ab、胸腹水ADA与比较, 差异有统计学意义 (P<0.05) ;外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的阳性预测值与胸腹水LDH、PPD比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) , 表3。

2.4 外周血T-SPOT.TB与血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA检测的阴性预测值比较

外周血T-SPOT.TB、血清TB-Ab、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA诊断结核性胸腹水阴性预测值分别是90.12% (73/81) , 57.14% (88/154) , 77.06% (84/109) , 69.72% (76/109) , 64.63% (53/82) 。外周血T-SPOT.TB诊断结核性胸腹水的阴性预测值与其他方法比较, 差异均有统计学意义 (P<0.05) 。见表4。

3 讨论

结核杆菌可侵犯全身各器官, 临床上, 可引起全身多器官多系统病变, 肺结核最为常见, 结合胸部影像学特征, 肺结核临床诊断相对容易。结核性胸膜炎、结核性腹膜炎是内科常见肺外结核病, 这些疾病缺乏影像学特异性, 临床诊断困难, 常与肿瘤等其他疾病进行鉴别, 早期诊断及鉴别诊断困难。临床常用辅助诊断方法包括:PPD皮试、血清结核抗体检测、胸腹水抗酸染色、胸腹水结核杆菌培养、胸腹水LDH、胸腹水ADA检测、PCR检测及近年应用较多的以T细胞免疫为基础的体外γ-干扰素释放试验 (interferon-γrelease assays, IGRA) 已成为世界卫生组织及欧美多国结核诊疗指南推荐的结核感染性疾病检测方法, 临床上用于活动性结核病和潜伏性结核感染者的辅助诊断[2,3]。结核杆菌培养法目前是诊断困难结核病诊断金标准, 灵敏度高, 由于结核杆菌培养条件要求较高, 但检验时间较长且阳性率不高, 许多单位不具备开展此类检验条件, 限制其在临床广泛应用[4]。

纯蛋白的衍生物 (PPD) 试验是临床常用结核病诊断方法, 操作简便, 经济。纯蛋白的衍生物是用苏通培养基培养结核菌, 经过灭菌超滤后提纯结核蛋白, 性质稳定, 阳性率较旧结素略高, 目前在临床上广泛应用。结核菌素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应, 抗原进入机体使机体的免疫淋巴细胞致敏, 并大量分化增殖, 当致敏的机体再次受到抗原入侵时, 致敏淋巴细胞就会与之结合, 引起变态反应性炎症, 在结素注射部位可以形成硬结、红肿, 部分甚至发生水泡和坏死[5]。高玉然等[6]研究发现PPD试验在肺结核组、肺外结核组、健康人群组强阳性率分别为10.00%、16.67%、0%。经统计学检验对肺结核组和肺外结核组检测结果差异有统计学意义 (P<0.05) 。结核分支杆菌由于具有特异性抗原, 构成了运用血清抗体检测诊断的基础, 结核分支杆菌表面物质由多种蛋白质、脂质以及糖类等物质相互组合构成, 具有多种抗原决定物质。在结核病发生发展的不同阶段, 机体的抗结核体液免疫产生不同的免疫球蛋白。林伟灵[7]对活动期结合患者与健康对照组结核抗体 (Ig G) 进行了检测, 结果显示:结核患者组结核抗体阳性率55.7%, 对照组则只有4.5%。夏强等[8]对结核抗体Ig G/Ig M检测在肺结核和肺外结核的敏感度分别为82.19%、55.17%, 肺内和肺外结核的敏感度差异有统计学意义 (P<0.05) 。林培歆等[9]研究显示肺结核组患者对血清结核抗体具有较好的敏感性, 其敏感度为83%, PPD试验的敏感度为85%。结核组双阳性率为82%, 非结核组双阴性率为84%。本文研究结果中PPD阳性率与以上研究结果一致, 但结核抗体检测结果与其他研究相差较大, 造成阳性率相差较大的原由与试剂如抗原及储存、人员技术水平等有关。

胸腹水ADA和LDH是临床常用诊断胸腹水病因的生化指标。ADA是嘌呤核苷代谢中重要的酶。胸腹水ADA检测对结核性胸膜炎、腹膜炎鉴别诊断有重要意义, 胸腹水ADA浓度以45 U/L为界, 结核性大多超过此值, 报道特异度及敏感度超过80%。胸腹水腔积液ADA与血清ADA比值≥1, 更倾向结核性积液。而对于癌性及非特异性积液, 其比值一般<1[10]。RIQUELME等[11]进行的一项包括了264例腹膜炎病例研究 (其中50例结核性腹膜炎) 的Meta分析表明, 阈值浓度为39 U/L时, ADA对于活动性结核性腹膜炎的敏感度为100%, 特异度为97%。杨正兵等[12]进行结核性腹水及癌性腹水研究表明, 结核性腹水ADA水平明显高于恶性腹水, 以ADA>45 U/L作为阳性标准, 其对结核性腹水的敏感性为100%, 特异性为97.1%, 准确性为98.5%, 腹水结核抗体对结核性腹水的敏感性为93.5%, 特异性为94.3%, 准确性为95.38%。认为腹水ADA检测对鉴别恶性腹水和结核性腹水有重要的临床价值, 腹水ADA水平升高支持结核性腹水, 反之, 则支持恶性腹水诊断。另外一项评价ADA用于结核性与肿瘤性胸腹水诊断价值的Meta分析显示:腹水标本结核组ADA含量比肿瘤组高1.5594~6.2066倍标准差;胸水标本结核组ADA含量比肿瘤组高0.6273~3.2647倍标准差, 差异均有显著性 (P<0.001) [13]。LDH是一种糖酵解酶, 几乎存在于机体所有组织细胞的胞质内。对TB的诊断来说, LDH可用于区别渗出性积液与漏出性积液, 胸腹水LDH与血清LDH比值≥0.6, LDH浓度>200 U/L倾向渗出液。结核性胸 (腹) 腔积液的LDH浓度一般>200 U/L, 与癌性胸腹水LDH浓度变化无特征性差异[10]。邬晓薇等[14]研究提示滤出性胸腹水LDH和ADA水平依次为 (105.42±54.57) U/L和 (19.95±9.79) U/L;结核性胸腹水组LDH和ADA依次为 (81.24±18.50) U/L和 (66.57±20.46) U/L;肿瘤性胸腹水LDH和ADA依次为 (409.57±148.54) U/L和 (20.33±9.06) U/L。结核性胸腹水ADA水平明显较肿瘤性胸腹水组和滤性胸腹水组高 (P<0.01) , 肿瘤性胸腹水组LDH水平明显较结核性胸腹水组和滤出性胸腹水组高 (P<0.01) 。认为LDH和ADA是结核性胸腹水和肿瘤性胸腹水鉴别诊断的良好指标。可以作为癌性胸腹水与肿瘤性胸腹水鉴别参考指标。

T-SPOT.TB是由英国Oxford Immunotec公司开发, 它是使用外周血单核细胞来完成检测的。近年来, T-SPOT.TB在诊断潜伏性结核感染和结核病临床诊断中的应用越来越广。李红等[15]评估了T-SPOT.TB在涂阴肺结核患者快速诊断中的临床诊断价值, 结果显示, 涂阴肺结核组患者T-SPOT.TB阳性率为85.8%, 肺结核组患者T-SPOT.TB阳性率为89.3%, 其他肺部疾病组T-SPOT.TB阳性率为19.2%, 肺结核组及涂阴肺结核组的T-SPOT.TB阳性率均明显高于其他肺部疾病组 (P<0.01) 。在涂阴肺结核组, 血T-SPOT.TB的敏感度为85.8%明显高于血清结核抗体的64.6% (P<0.01) 。血T-SPOT.TB的特异性分别为80.8%。T-SPOT.TB对涂阴肺结核的阳性预测值为87.9%, 阴性预测值为77.8%。认为全血T-SPOT.TB在涂阴肺结核的诊断上具有快速敏感度及特异度较高的优点, 在临床上对疑似结核患者进行T-SPOT.TB试验对鉴别诊断具有重要价值。另外, 国内外多为学者研究认为T-SPOT.TB方法对肺结核诊断的有较高灵敏度, 特异性, 且灵敏度高于PPD和痰涂片检查[16,17,18]。周乐亮等[19]前瞻性纳入疑诊结核性腹膜炎患者50例, 进行外周血T-SPOT.TB、PPD、血清结核抗体、腹水ADA检测, 并比较4种方法对结核性腹膜炎的诊断价值, T-SPOT.TB灵敏度及阴性预测值与后3种方法比较, 差异均有统计学意义 (P<0.05) , 特异度及阳性预测值与后3种方法比较, 差异均无统计学意义 (P>0.05) , 与本文的研究结果基本一致。

T-SPOT.TB技术是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异性T细胞, 这些淋巴细胞在受到结核特异性抗原刺激后分泌INF-γ而设计的T细胞斑点试验, 用于结核感染的辅助诊断。作为一种新的结核感染诊断方法, 其敏感性和特异性均高于传统方法, 较结核杆菌培养更方便, 快捷, 但不如PPD试验方便、经济。对于临床胸腹水及肺外结核诊断及鉴别诊断有重要意义及临床价值, 值得进一步推广。

摘要：目的 评价结核感染T细胞斑点试验 (T-SPOT.TB) 在胸腹水诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法 回顾性分析2014年1月至2015年12月因胸腹水在我院住院, 行结核感染T细胞斑点试验 (T-SPOT.TB) 的患者, 并同时行结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD) 皮试、血清结核抗体 (TB-Ab) 、胸腹水ADA、胸腹水LDH等5种方法检测, 病例资料完整, 所有患者最终明确诊断。比较5种方法对结核性胸腹水的诊断价值。结果 最终收集结核性胸水33例, 结核性腹水39例, 其他原因胸腹水97例。外周血T-SPOT.TB、血清结核抗体、PPD皮试、胸腹水LDH、胸腹水ADA诊断结核性胸腹水的敏感性分别是88.89% (64/72) , 8.33% (6/72) , 65.28% (47/72) , 54.17% (39/72) , 59.72% (43/72) ;特异性分别是75.25% (73/97) , 90.72% (88/97) , 86.60% (84/97) , 78.35% (76/97) , 54.64% (53/97) ;阳性预测值分别是72.73% (64/88) , 40.00% (6/15) , 78.33% (47/60) , 65.00% (39/60) , 49.43% (43/87) ;阴性预测值分别是90.12% (73/81) , 57.14% (88/154) , 77.06% (84/109) , 69.72% (76/109) , 64.63% (53/82) 。TSPOT.TB敏感性及阴性预测值与其他方法比较, 差异均有统计学意义 (P<0.05) ;T-SPOT.TB特异性与胸腹水LDH比较差异无统计学意义 (P>0.05) ;T-SPOT.TB阳性预测值与PPD、胸腹水LDH比较差异无统计学意义 (P>0.05) 。结论 外周血TSPOT.TB对诊断结核性胸水、腹水具有较高的敏感性及阴性预测值, 对结核性胸膜炎、结核性腹膜炎的诊断及鉴别诊断具有重要的参考价值。