口服疫苗

关键词： 口服 福建省

口服疫苗（精选六篇）

口服疫苗 篇1

国家水生动物病原库和广东、上海、福建的海洋与水产病害专家, 近日对福建省农业科学院承担的“鱼类免疫刺激复合物的研制和应用”项目进行评审, 认为该项目已经突破鱼类口服疫苗产业化关键技术。

中国海、淡水鱼类口服疫苗研发应用目前尚处于起步阶段, 只有中科院海洋所研制出鳗弧菌感染的海水鱼疫苗、水产科学院珠江所研制草鱼出血病疫苗和台湾成功大学的石斑鱼疫苗, 但均未实现产业化。专家认为, 实用化的鱼类疫苗和广谱免疫增强剂潜在市场和经济效益均十分巨大。

福建省农业科学院生物研究所在国家863计划、农业部等项目资助下, 近年致力于鱼类临床医学领域的创新性探索, 创建了鱼类疫苗的制备工艺, 获得3项国家发明专利, 制备出性质结构稳定的鱼类口服型、浸浴型和注射型疫苗;开发出疫苗纳米颗粒, 鱼类口服后易在消化道降解, 提高了疫苗吸收效率, 形成实用、安全的鱼类口服疫苗接种技术。评审专家组认为, 该项目总体达到同类研究国际领先水平, 适合大规模免疫接种。

项目主持人龚晖研究员介绍说, 受嗜水气单胞菌、创伤弧菌感染病的海、淡水养殖鱼类, 接种这两类口服疫苗试制品, 田间试验1千万尾份, 保护率达80%。研发的疫苗制备工艺, 在兽药厂商GMP车间试验性生产, 批次产能达到1千万尾份, 年产能1亿尾份, -20℃条件下疫苗保质期13个月, 免疫保护周期大于3个月, 为产业化开发创造了条件。

鱼类新型口服疫苗的研究概况 篇2

关键词：鱼,口服,疫苗,来源,发展,免疫

我国水产养殖规模化、集约化的高密度养殖模式致使养殖水环境逐年恶化; 长期化学性渔药的不科学使用,也使得致病菌耐药性不断增强,以及药物残留量超标等问题日益突出,严重阻碍了我国水生动物集约化养殖的经济效益。水产动物病害的合理、有效防控成为我国水产养殖业持续健康发展的核心问题,而鱼用疫苗在提高动物体特异性免疫水平的同时亦能增强机体抗应激能力,且符合不污染环境、水产食品无药物残留等要求。因此,采用鱼用疫苗预防水产动物疾病,越来越被各国研究者所关注。

1 鱼类疫苗的发展

1942年,D. C. P. Duff首次应用灭活的杀鲑气单胞菌( Aeromonas salmonicida) 口服免疫硬头鳟获得成功,开辟了疫苗在鱼类应用史上的先河。此后几十年,许多科研人员开始对鱼用疫苗的制备与研究进行大量探索,对那些突发而又难以用药物防治的鱼病进行免疫预防[1,2]。1975年,美国疫苗有限公司生产商业性鱼用疫苗,随后英国、法国、加拿大、丹麦、日本及我国的台湾积极开展渔用疫苗的生产。1984年2月份,24个国家和地区的78名代表及联合国粮农组织和国际动物流行病办公室的官员在法国巴黎举行鱼用疫苗接种研讨会,以新技术、新方法用于病毒病疫苗、高效价菌苗的研制。目前,国外已批准上市的鱼类疫苗达30余种,且这些疫苗的使用已取得了非常显著的效果。随着分子生物学、生物化学等基础学科研究的不断深入,鱼用疫苗从传统的灭活疫苗和减毒疫苗逐渐向新型口服疫苗过渡。口服免疫给药方便,使用时不受时间、地点和鱼体大小的限制,且对鱼体无伤害,被视为一种最安全有效的新型疫苗。

2 新型口服疫苗的发展现状

口服免疫的效果受胃肠黏膜系统的吸收及抗原呈递细胞对抗原呈递效率的影响。一般认为,口服免疫效果不如肛门灌注,是因为抗原在胃和前肠道被消化掉,没有足够的抗原能够到达后肠。因此,研究者们纷纷采用新的技术与方法用于保护疫苗抵抗胃酸及各种消化酶的破坏,同时使抗原物质能够缓慢而持久地释放,以便达到更好的免疫效果。目前,口服疫苗的来源主要分为缓释微胶囊( 疫苗存在于可被生物降解的高分子聚合物中) 、工程微生物( 疫苗存在于发酵产物中) 、转基因植物( 疫苗存在于可食部分中) 及转基因动物( 疫苗存在于雌性动物的乳汁中) 。

2. 1 缓释微囊疫苗

目前,可生物降解的缓释微囊是国际上口服疫苗研究中最活跃的领域,通过对疫苗进行包裹、吸附或键合,不仅可以避免胃肠道消化液酸碱环境和酶类对抗原的破坏,而且有利于控制疫苗的释放速度。近年来,纳米技术与现代高分子化学及高分子材料学相交叉,产生了纳米球、纳米囊和纳米胶束等新一代纳米粒新型口服疫苗,为疫苗剂型和免疫途径的多样化提供了广阔前景[3]。1979年,I. Preis等人首先制备出微胶囊疫苗,通过免疫小鼠发现,该系统可以持续释放抗原,刺激抗体产生,而且不会诱发免疫耐受。此后,英国的Nottnigham大学和美国的Albamaa大学等相继成立了免疫微囊研究室,进行缓释微囊疫苗投递系统材料选取、制备工艺、疫苗释放、体内分布及免疫学特点等方面的研究,且取得了很大进展[4]。到目前为止,针对人的一次性注射微球疫苗就已有十多种处于研究阶段,如葡萄球菌肠毒素、类毒素、白喉类毒素、各种多肤抗原、卵清蛋白、牛血清白蛋白、人免疫缺陷病毒( HIV - 1) 蛋白亚单位预防疫苗等。

将疫苗微囊化应用到水产养殖方面的工作开始于1997年,P. H. M. Joosten等人研制了虹鳟鱼的微囊化口服疫苗,在胃内起缓释作用,到达肠部被吸收后产生抗体。随着微囊疫苗工艺的不断成熟,鱼用囊膜疫苗已经在实验室内取得了较好的免疫效果。G.Wong等人用葡聚糖将鳗弧菌冻干粉包裹后口服免疫鲑鱼,免疫组的血清和黏膜抗体水平也显著提高,与存活率呈正相关。J. L. Romalde等[5]初步评价了非胶囊和微囊化口服疫苗对虹鳟格氏乳球菌病的免疫保护作用,结果显示,口服藻酸盐微囊化疫苗组有较好的保护效果( RPS为50% ) ,3个月后用微胶囊疫苗口服加强免疫,4周后的RPS达87% ,说明这种微囊化的口服疫苗可作为加强免疫的一种选择。余俊红等[6]首次制备了鳗弧菌口服微囊疫苗,该微囊疫苗的免疫效果优于普通全细胞苗,其保护率最高可达73. 7 % 。另外,将微囊包被技术用于注射用疫苗的包被,也可避免在鱼用疫苗中添加存在食品卫生方面问题的弗氏佐剂。

2. 2 酵母载体疫苗

酵母本身是一种良好的饵料添加剂,以它作为口服疫苗的载体,不仅改善了一般口服疫苗适口性不强的缺点,而且也延长了疫苗在生物体内产生免疫力的持续时间。酵母作为单细胞的真核细胞,既有真核生物复杂的转录、翻译和修饰系统,能对蛋白原进行加工、切割、糖基化、乙酞化等,使分泌的肽链正常折叠成有天然活性的蛋白分子; 又有原核生物繁殖快、容易进行基因操作的特点。另外,酵母本身及其表达产物可直接应用于食品工业、医药工业和保健业等领域,为生产安全、廉价的生物制品开辟了新途径,具有巨大的应用前景和潜在的商业价值。自1984年利用巴斯德毕赤酵母系统表达外源蛋白以来,已经有400多种重组蛋白在该系统中得到表达。以国外利用该体系表达出的亚单位VP2鸡传染性腔上囊病疫苗对数亿只鸡进行免疫,结果均得到了良好的保护效果,以VP2制成的二价疫苗已经在以色列鸡场使用了6 ~ 7年。国内的酵母疫苗研究大多数还停留在实验室阶段,真正用于大规模生产的酵母表达产物还很少,主要投入生产的是重组酵母乙肝疫苗。

在水产领域,利用毕赤酵母表达系统的研究虽然起步较晚,但也取得了一些成果,主要集中用于病毒衣壳蛋白、包膜蛋白和一些特异性功能蛋白的表达研究。M. B. Labus等[7]在四种表达系统( 大肠杆菌、巴斯德毕赤酵母、Chinook salmon Embryo cells、Chinese Hamster ovary cells) 中都成功表达了VP2传染性胰腺坏死病毒 ( IPNV) 氨基酸抗原表位蛋白; Q. H. Liu等[8]以p GAPZα - A为载体,在毕赤酵母中成功表达了对虾白斑综合征病毒( WSSV) 起主要黏附作用的VP37蛋白; 付峰等人将鲤春病毒血症病毒 ( SVCV)的表面糖蛋白G基因克隆并导入毕赤酵母中,实现了病毒糖蛋白的分泌表达。在促生长方面,虹鳟鱼、鲤鱼、草鱼的生长激素已成功在毕赤酵母中得到了表达,并证实重组酵母具有明显的促生长作用[9]。R.K. Jha等[10]将WSSV的包膜蛋白VP19和VP28在毕赤酵母中表达,并以口服的形式免疫小龙虾,结果免疫组获得了大于60% 的免疫保护率。酵母口服疫苗具有良好的安全性和免疫保护效果,而且便于操作和推广,非常适合用于鱼类。

2. 3 转基因植物口服疫苗

植物细胞具有天然的屏障———细胞壁,可使部分抗原蛋白免受胃部的消化和酶类的降解,从而使抗原蛋白到达黏膜免疫部位。转基因植物口服疫苗是将某些致病微生物的抗原蛋白基因通过转基因技术导入某些植物受体细胞中,并使其在受体细胞中表达,从而使受体植 物直接成 为可抵抗 相关疾病 的疫苗[11]。20世纪80年代末,Cutiss首先提出“可食疫苗”的大胆设想。1992年,H. S. Mason等人报道了在转基因植物中表达乙肝表面抗原,提出了转基因植物生产可食疫苗的概念。S. Karaman等[12]将埃希大肠杆菌热不稳定性肠毒素基因转入玉米中,通过对基因的改造使其表达一种无毒性的LT - B蛋白。用这种转基因玉米直接饲喂幼年和成年小鼠后,其体内均产生了免疫反应。近年来,利用植物生物反应器生产转基因植物口服疫苗的研究已取得了很大进展,在植物中成功表达的疫苗有几十种[13,14]。用于转基因植物疫苗研究的病原基因主要有乙型肝炎表面抗原( HBs Ag) 基因、大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位 ( LT - B)基因、狂犬病病毒糖蛋白( G蛋白) 基因、口蹄疫病毒VP1基因、轮状病毒基因等。

随着人和动物转基因植物疫苗研究的快速发展,水生生物转基因疫苗的研究也逐渐展开。2006年,J. Rombout领导的科研小组构建了融合表达大肠杆菌黏附因子蛋白、流感病毒血凝素蛋白、犬细小病毒VP2蛋白及绿色荧光标记蛋白的植物表达载体,通过电穿孔法转化土豆茎节间组织细胞获得了阳性克隆,成功生成转基因植株[15]。然后收集茎块通过干燥粉碎等过程制成饲料投喂鲤鱼,通过荧光显微镜观察及ELISA法可以检测到表达的融合蛋白在鲤鱼肠道中被吸收,从而说明其可诱导机体产生免疫应答反应,此研究为研发鱼用转基因植物疫苗开辟了一条全新的途径。

3 结语

口服疫苗 篇3

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

1日龄蛋公鸡, 购自吉林省某孵化场, 常规饲养, 适应环境1周后对经临床观察健康者进行分组。

1.1.2 中药

黄芪、白术、防风, 均购自河北省安国药材市场。中药复方的制备:将黄芪、白术、防风按一定比例混合, 水煎提取2次, 每次30 min, 8层纱布过滤, 合并滤液, 浓缩至1∶1 (即1 mL煎液相当于原生药1 g) 即得。

1.1.3 疫苗

新城疫Ⅳ系疫苗, 购自北京市兽医生物制品厂。

1.1.4 主要仪器、设备

MP-2000A型分析天平, 上海第二分析仪器厂;UV-9100型紫外可见分光光度计, 北京瑞利分析仪器厂;20 μL微量吸管, 山东省成武县华通医用制品厂;光学显微镜, 重庆光学仪器厂;血细胞计数板, 上海医用光学仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 试验分组与设计

选取7日龄健康雏鸡300只, 随机分成5组, 每组60只。对照Ⅰ组只免疫不给药;对照Ⅱ组不免疫也不给药;其余3组为试验组, 分别在饲料中添加3种不同剂量的中药组方, 组方剂量分别为1, 2, 4 mL/L, 试验组于7日龄时开始添加给药, 连续添加42 d。分别于雏鸡14, 21, 28, 35, 42, 49日龄采血, 检测新城疫抗体水平和免疫器官指数。各组的免疫程序:7日龄时用新城疫Ⅳ系3羽份点眼、滴鼻及经口免疫, 21日龄时各组再分别用新城疫Ⅳ系1羽份点眼, 并同时配合肌肉注射新城疫灭活苗0.5 mL/只。

1.2.2 雏鸡新城疫抗体效价的测定

采用微量HA-HI法测定新城疫抗体水平。各组随机抽取10只雏鸡, 常规采血, 分离血清, 按常规方法用96 孔“V”形血凝板进行血凝抑制试验, 血凝抑制效价用lb表示。

1.2.3 雏鸡免疫器官指数的测定

各组随机抽取10只雏鸡, 剖杀摘取法氏囊、脾脏, 用滤纸吸取表面的水分后再用分析天平称重, 并计算法氏囊指数和脾脏指数。计算公式:法氏囊指数=法氏囊湿重 (mg) /体重 (g) ;脾脏指数=脾脏湿重 (mg) /体重 (g) 。

1.3 统计分析

用SPSS11.0统计分析软件检验各组试验数据。

2 结果

2.1 玉屏风口服液对雏鸡新城疫抗体效价的影响 (见表1)

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表1可知:玉屏风口服液对雏鸡新城疫抗体效价均有一定的提高作用, 这种提高作用从35日龄开始变得明显。35日龄时各组抗体水平达到高峰, 其中2 mL/L剂量组最高, 其次是 4 mL/L 剂量组、1 mL/L剂量组, 且抗体水平分别达到了9.20 lb、8.60 lb、8.50 lb。对照Ⅰ组也达到了7.30 lb, 从整体来看, 1, 4 mL/L剂量组结果相近, 差异不显著 (P>0.05) , 均低于2 mL/L剂量组, 但高于对照Ⅱ组。

2.2 玉屏风口服液对免疫器官指数的影响 (见表2和表3)

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表2可知:脾脏指数在28日龄各给药组与对照组相比差异显著 (P<0.05) ;35日龄2 mL/L剂量组与对照组比差异显著 (P<0.05) ;42, 49日龄各给药组与对照组相比均差异不显著 (P>0.05) 。

注:同列数据肩标字母不同表示差异显著 (P<0.05) , 字母相同表示差异不显著 (P>0.05) 。

由表3可知:法氏囊指数在28, 35日龄各给药组与对照组相比均差异显著 (P<0.05) ;42, 49日龄各给药组与对照组相比差异不显著 (P>0.05) 。但从整体来看1, 4 mL/L剂量组结果相近, 均低于2 mL/L剂量组, 但高于对照组。

3 讨论

玉屏风口服液为中医扶正固本的经典方剂, 由黄芪、白术和防风组成, 具有益气、固表、止汗之功效, 主治气虚表弱、易感风寒, 并能提高免疫器官中cAMP含量及cAMP/cGMP的比值, 促进淋巴细胞的增殖、分化, 对细胞免疫和体液免疫均有增强作用。

表1结果表明, 玉屏风口服液对雏鸡新城疫抗体效价均有一定的提高作用, 35日龄时各组抗体水平达到高峰, 对照Ⅰ组也达到了7.30 lb, 对照Ⅱ组整体水平均较免疫组低, 说明鸡只免疫成功, 此次获得的试验数据有效。从整体来看, 1, 4 mL/L剂量组结果相近, 均低于2 mL/L剂量组, 但高于对照组, 据此说明玉屏风口服液可以提高雏鸡血清凝集素水平, 使B 淋巴细胞的功能有所增强, 加快新城疫的血凝抑制抗体产生速度, 提高抗体水平以及延长抗体有效的持续时间, 从而提高机体的体液免疫功能。

表2、表3结果表明, 14, 21, 28日龄时脾脏指数、法氏囊指数与对照组比较差异明显, 随着日龄的增加, 各剂量组雏鸡免疫器官重量以及体重均比对照组增加明显, 但各组在42, 49日龄时免疫器官指数与对照组相比却没有明显差异。究其原因一方面可能是由于玉屏风口服液对免疫器官发挥药效的阶段主要在21, 28, 35日龄这一时段, 另一方面可能是随着时间的延长, 药效在体内全面发挥作用, 而该复方的主要作用位点在于促进机体产生特异性抗体、激发机体的体液免疫反应, 从而出现了42日龄以后同期各组免疫器官指数与对照组相比差异不明显, 而抗体水平却明显高于对照组的结果。这与李群道等报道的中药复方对鸡增重和免疫功能的影响结果一致。

4 结论

玉屏风口服液对雏鸡免疫器官指数有一定的提高作用。

参考文献

[1]戴远威, 江青艳, 傅伟龙, 等.补益中药提取物对雏鸡免疫功能的影响[J].中国兽医学杂志, 1997 (2) :225.

[2]朱沙, 陈圣先.中西药复合“新型免疫增强剂”对鸡新城疫疫苗免疫增强实验研究及机理探讨[J].中兽医医药杂志, 2001 (3) :426.

[3]赵勇, 张玲.中药免疫调节研究进展[J].中草药, 1994, 25 (11) :603-606.

[4]曾相朝, 陈树兴, 郭曹彰, 等.中药免疫增强剂对MD鸡外周血液鸡外周血ANAE T淋巴细胞动态的影响[J].河南农业科学, 1998 (1) :34-35.

口服疫苗 篇4

1 减毒沙门氏菌的相关基因

早期的减毒手段主要是利用化学物质诱变和紫外线照射,但这两种手段存在一些不足:减毒具有很大的盲目性,且在疫苗的制备过程中质量很难得到保证。近年来,随着分子生物学技术的发展和对沙门氏菌致病机制的进一步了解,应用分子遗传学方法在沙门氏菌染色体基因组上随机插入1个转座子*通讯作者

或删除1段或几段基因片段的减毒方法已引起了人们广泛的关注。

1.1 控制芳香族化合物生物合成的aro基因 野生型菌体中存在一系列aro酶,它们控制着分支酸的合成。分支酸是对氨基苯甲酸(pABA)、2,3-二羟基苯甲酸(DHB)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)和色氨酸(Trp)等芳香族化合物合成途径的分支点。一旦aro基因发生缺失,则阻断芳香族化合物合成途径,菌体在得不到外源芳香族化合物的条件下不能增殖,其毒力亦随之丧失[4,5,6,7,8]。近年来,研究者们还引入了双基因突变的营养缺陷型减毒株,如aroA、aroC株,aroA、aroD株,aroC、aroD株等,这类减毒株大大减少了毒力回复的可能性。

1.2 影响碳水化合物利用途径的galE基因 galE突变株缺失尿苷二磷酸半乳糖-4-差向异构酶(UDP-Gal-4-epimersae),此酶缺失导致 Leloir氏半乳糖代谢途径发生阻断,从而半乳糖-1-磷酸盐(galactose-1-phosphate)、UDP和Gal大量的聚集在细胞内,由此产生溶菌现象,细菌毒力亦随之丧失。半乳糖代谢发生的这一障碍,可由加入外源性半乳糖得到补偿,只产生部分溶菌并仍可生物合成完整的细胞壁脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),而LPS是保持菌体免疫原性的一个决定因素。

1.3 pur系列基因与asd 基因 pur系列基因是编码嘌呤生物合成途径中一系列酶的基因,如有缺失,嘌呤就不能合成,从而抑制细菌DNA的合成,使毒力减低[9],常用的有purA、purE。pur系列减毒力不如aro 系列。asd 基因编码天冬氨酸半醛脱氢酶,如缺失就不能合成革兰氏阴性细菌细胞壁中的二氨基庚二酸(diaminopimelic acid,DAP),从而影响细胞壁的完整性。带有asd基因的质粒和asd-的沙门氏菌构成平衡致死体系,仅转化有asd+质粒的沙门氏菌在体内才能生存,而未转化的沙门氏菌则死亡[10]。单纯asd突变株并不减毒,而使用△asd、△aro突变的沙门氏菌,既有减毒性,又可防止空载体沙门氏菌在机体内的存在。

1.4 其它减毒基因 除以上常见的减毒基因外,还包括有htrA基因编码热休克蛋白,cya、crp基因分别编码腺苷酸环化酶和环腺苷酸受体蛋白,突变调控基因转录的非特异性酸性磷酸酶phoP基因、调节膜孔蛋白(porin)表达的ompR基因等。

对于沙门氏菌的减毒,目前也已做了大量的研究。在使用沙门氏菌活疫苗时,首先必须考虑到安全问题,其次是没有反应原性和有免疫原性间的平衡关系问题[9,11],因此构建一种基因不连续的减毒双突变株,可以防止毒力返强的可能性,这一点非常重要。从芳香族(aro)氨基酸合成途径基因突变的减毒菌株在小鼠、牛、绵羊、鸡上使用来看确实有效果,在人志愿者试验中也显示了很大的应用前景[12,13]。

2 减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答

疫苗免疫接种后要取得好的预防效果,刺激产生正确的免疫应答类型是十分重要的。其中除抗原的内在特性外,接种的途径和形式也会影响免疫效力和获得性免疫应答的质量。此外,大部分的病原进入机体的途径是消化道,为了阻止这些病原定居消化道和引发全身性疾病,需要通过黏膜途径接种疫苗抗原,激发局部的黏膜免疫,刺激全身性的细胞免疫和体液免疫,从而达到预防疾病的目的。减毒肠道微生物作为疫苗抗原的传递系统就可以解决以上问题。将细菌、病毒或寄生虫等具有抗原性蛋白的外源基因克隆到表达质粒中,然后将该重组质粒转入减毒沙门氏菌,用此重组减毒沙门氏菌对动物和人进行经黏膜免疫(口服或鼻腔免疫)。在鼻腔,减毒沙门氏菌侵入GALT淋巴组织;而在肠道,减毒沙门氏菌穿过GALT淋巴组织区域中的M细胞,侵入M细胞所覆盖下的集合淋巴结结构。减毒沙门氏菌在GALT和GALT淋巴组织的巨噬细胞中可诱导表达外源抗原并传递给APC,诱发免疫细胞应答,在局部黏膜处形成特异的针对外源抗原的SIgA。同时,减毒沙门氏菌亦可侵入脾、肝、肾等多处淋巴结,诱发全身性针对外源抗原的体液免疫和细胞免疫,但以黏膜处产生的免疫作用最有效,能阻止细菌、病毒和寄生虫入侵黏膜处而导致感染[14]。另外一种可能的机制是重组减毒沙门氏菌引起吞噬它的APC凋亡,凋亡产物(可含有目的抗原DNA疫苗)被邻近的APC吞噬。Yrlid等[15]在体外实验中发现鼠伤寒沙门氏菌4028可诱导髓源巨噬细胞凋亡,作为“旁观者”的巨噬细胞和DC都可吞噬凋亡产物。

3 减毒沙门氏菌进入机体免疫系统的机制

3.1 黏膜上皮

M细胞的粘附与免疫应答 减毒沙门氏菌是一种兼性胞内菌,可引起隐性感染、局部胃肠炎甚至整个肠道疾病。通常感染由侵袭性细菌穿过小肠上皮引起。肠黏膜上皮细胞间存在紧密连接,且在固有层细胞表面存在刷状缘,病原体不能直接接触上皮细胞,所以大部分病原体主要通过特殊的黏膜上皮M细胞进入机体[16]。M细胞主要集中在派伊尔结(Payer,s pathches,PPs)下的滤泡相关上皮中,其主要功能是穿过上皮屏障将抗原物质转运至细胞内,从而产生由上皮内或上皮下淋巴细胞介导的初级免疫应答。减毒沙门氏菌通过M细胞进入黏膜下淋巴组织后可激活Th2细胞产生大量的IL-5,它能活化B细胞,使其分化为浆细胞,在产生Ig的过程中发生向IgA的类型转换。肠黏膜上皮细胞还能产生分泌小体与双体IgA分子结合,形成分泌型IgA(SIgA)分泌到肠黏膜表面,SIgA能抵抗肠道蛋白酶的分解作用,形成黏膜上的局部抗体,在黏膜免疫中起重要作用。固有层CD4+T细胞受到细菌抗原物质的激活,能产生干扰素增强单核巨噬细胞的吞噬作用,从而杀灭细胞内的寄生物,起到细胞免疫作用。一般减毒的沙门菌仍有良好的侵袭力,因此它进入机体的方法与野毒株相似,都是穿过M细胞进入机体,但减毒后毒力明显下降,对M细胞的细胞毒作用可能没有或很小。具侵袭力的沙门氏菌可选择性地入侵PPs的M细胞并破坏M细胞,然后被位于上皮下穹隆区的抗原提呈细胞(antigen presentingcells,APC)捕获[17],之后,APC再与相关免疫细胞相互作用,从而产生局部黏膜免疫、体液免疫以及细胞免疫应答。

3.2 减毒沙门氏菌被树突细胞直接从肠腔摄取进入机体

减毒沙门氏菌除了通过M细胞进入机体外,还可以被树突状细胞(Dendritic cell,DC)直接摄取进入机体。DC是抗原递呈细胞,在启动获得性免疫中起重要的作用。DC一般定植于抗原暴露的位置,当在外围遇到抗原时就会移行到次级淋巴器官并在那里与T细胞相互作用。在外围组织的DC还处于不成熟状态,这种DC能够捕获抗原包括细菌,但不能高效刺激T细胞。未成熟的DC必须经过特殊的改造从而达到成熟,并在此过程中获得高效激活T细胞的能力[18]。DC和脾DC子集都能加工沙门氏菌和直接递呈源自沙门氏菌编码抗原的肽段到CD4+T和CD8+T细胞。Rescigno M等[19]也发现DC可以携带细菌穿过肠上皮单层细胞,在此过程中,DC将其树突伸出上皮外,进入肠腔,将微生物等抗原物质摄入机体。Hopkins S A等[20]还发现DC在体内也能摄取细菌,包括致病菌和非致病菌。被DC摄取后的抗原物质,能在DC中存活较长时间。DC能在体内有效加工抗原并将抗原递呈给T细胞,从而启动免疫应答。

4 减毒沙门氏菌的应用

以减毒沙门氏菌为载体的疫苗已经在很多领域内获得应用,尤其是载体-宿主平衡致死系统构建成功以来,减毒沙门氏菌载体疫苗的研究更加受到关注。有人用营养缺陷型沙门氏菌突变株SL7207运送gp100DNA载体疫苗来抵抗恶性黑素瘤病[21],有人用X4072(asd-、cya-和crp-)构建了表达幽门螺旋杆菌黏附素的减毒疫苗[22]。总之,目前国内外学者已相继研制了肺炎链球菌、宋内志贺菌、结核分支杆菌、霍乱孤菌、百日咳杆菌、鼠疫耶尔森菌、牛布鲁菌、破伤风梭菌、沙眼衣原体和猪肺炎支原体、甲乙丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、单纯疱疹病毒、伪狂犬病病毒、流感病毒、血吸虫、疟原虫以及肿瘤等疾病的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗[23,24,25]。但也许是因为活载体疫苗还没有真正做到完美无缺,其在现实生活中的应用并不普遍,虽然网络中和文献资料中时有其身影闪现,但在药店柜台上和医院药房里却很少见。

5 减毒沙门氏菌载体疫苗的优越性及潜在危险性

首先,抗原呈递的有效性,减毒沙门氏菌载体疫苗的抗原递呈效率高于以往其他的DNA疫苗细菌载体,而且减毒沙门氏菌的脂质体类物质和来自细菌DNA的非未甲基化的基序(motif)还可以发挥免疫佐剂的作用,大大增强疫苗的免疫原性。免疫简单易行,一般一次口服免疫即可诱导较强的免疫保护反应[26]。其次,以减毒沙门氏菌为载体的疫苗免疫具有持续性和多联性,其在体内寄生和有限增殖时期,表达的外源蛋白对宿主持续刺激,能有效地长期激发机体产生免疫反应,可省去反复多次的加强免疫。并且可将若干种抗原克隆到同一质粒上进行联合免疫。第三,减毒沙门氏菌载体疫苗制备简单,不需提纯抗原,易储存运输,能激发比较全面的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应, 显著降低疫苗的制作成本。

虽然减毒沙门氏菌载体疫苗有诸多优点,但仍存在一些不足。其一,制备疫苗使用的菌株尽管是减毒株,可能仍存在微弱的致病性,且革兰氏阴性菌在体内表达产生的脂多糖毒素可能对宿主细胞有毒性,可能会干扰编码基因在宿主细胞中的正确表达和合成,但目前还没发现减毒沙门氏菌载体(革兰氏阴性菌)有毒副作用,革兰氏阳性菌也没这些毒副作用。其二,质粒DNA可能会整合到宿主细胞基因组,从而引起调控细胞生长的基因紊乱、原癌基因和抑癌基因的表达失控、体细胞癌变、细胞转型等一系列问题。如用弱毒L.manocytogene为载体的DNA疫苗中已发现低水平的整合现象,这主要是转染至单个细胞的质粒拷贝数太多引起的,另外也发现细胞毒性T细胞可缓解甚至消除整合作用[27]。

6 结语

口服疫苗 篇5

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院儿科2011年2月—2012年2月进行预防接种的520例婴幼儿, 将其随机分为对照组与干预组, 每组260例。对照组男140例, 女120例;年龄2个月~3岁, 平均 (16.8±9.3) 个月。干预组男138例, 女122例;年龄2个月~3岁, 平均 (16.2±8.9) 个月。两组婴幼儿在性别、年龄间有可比性。

1.2 接种方法

采用双盲试验, 干预组给予口服轮状病毒疫苗治疗:口服轮状病毒疫苗 (商业名:罗特威, 兰州生物制品研究所生产, 国药准字S20010002) , 家长均同意服用, 与其他疫苗间隔2周以上, 婴幼儿均现场服用1支。对照组婴幼儿给予口服安慰剂, 剂量、剂型等均与口服轮状病毒疫苗一致, 且服用方法、服用时间均与干预组一致。

1.3 随访调查

两组婴幼儿均于1年后进行调查, 采用电话随访或门诊随访, 520例婴幼儿均得到回访。调查两组婴幼儿腹泻发病率、平均腹泻发病次数、平均腹泻时间、重症腹泻比例等指标。重症腹泻的判断标准:患儿除胃肠道症状外, 还伴有明显的脱水、电解质紊乱、全身感染中毒症状, 如发热、精神烦躁或萎靡、嗜睡, 甚至昏迷休克。

1.4 统计学方法

采用SPSS14.0统计软件进行统计学分析, 计量资料以 (±s) 表示, 采用t检验;计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组婴幼儿腹泻发病率及重症腹泻比例比较

干预组1年随访期间内发生腹泻34例, 腹泻发病率13.1% (34/260) , 其中重症腹泻2例, 重症腹泻比例5.9% (2/34) 。对照组1年随访期间内发生腹泻95例, 腹泻发病率36.5% (95/260) , 其中重症腹泻10例, 重症腹泻比例10.5% (10/95) 。干预组腹泻发病率及重症腹泻比例均低于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 。

2.2 两组婴幼儿平均腹泻发病次数及腹泻时间比较

干预组腹泻发病次数及腹泻时间均低于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05, 见表1) 。

3 讨论

轮状病毒主要通过粪口途径传播, 包括人与人传播或污染物间接传播。轮状病毒严重危害婴幼儿健康, 调查表明, 每年轮状病毒感染可引起2500万门诊病例及200万住院病例, 其中约50万病例死亡, 因此临床应加强对于婴幼儿腹泻的预防和治疗[3]。而接种疫苗是防治病毒感染的重要手段, 良好的疫苗应符合WHO疫苗标准: (1) 符合WHO质量标准; (2) 符合安全标准, 并且能使目标人群对疾病产生明显的免疫力; (3) 如果接种对象为婴幼儿, 应符合国家儿童免疫程序; (4) 与其他同时接种的疫苗不产生显著的交叉反应; (5) 普通技术条件能够完成冷藏和储存; (6) 在不同的国家、地区有合适的价格[4]。

口服轮状病毒疫苗为口服减毒活疫苗, 口服轮状病毒疫苗进入人体肠道后, 能在肠道进行复制, 并能够通过介导免疫反应 (如黏膜免疫、体液免疫及细胞免疫) 使人体产生特异抗轮状病毒的作用。研究表明, 在口服减毒活疫苗接种者的胃肠道内可检出特异性的SIg A。轮状病毒主要通过感染肠道黏膜细胞发挥作用, 并不通过血液或其他途径进入远隔部位, 因此肠道黏膜表面的SIg A起到主要的免疫作用。但进一步的研究表明, 口服减毒活疫苗接种者的血液中轮状病毒抗体效价以及特异性T细胞也明显升高, 表明口服减毒活疫苗也可诱导产生体液免疫及细胞免疫。国内已有相关研究证实了口服轮状病毒的安全性及有效性。杨长玲等[5]观察636例婴幼儿接种口服轮状病毒疫苗的临床试验结果表明腹泻发病次数、平均患病时间、严重病例和住院比例均显著低于未接种疫苗婴幼儿。柏凌云试验结果与杨长玲等[5]基本一致, 接种疫苗婴幼儿的平均患病时间为 (4.4±1.4) d, 严重病例比率为8.5%, 而未接种疫苗婴幼儿的平均患病时间为 (5.4±1.2) d, 严重病例比率为24.4%。本组平均患病时间、严重病例比率基本与其一致。而干预组腹泻发病次数、腹泻发病率也显著低于对照组。本研究结果表明尽管服用了轮状病毒疫苗, 患儿仍有13.1%的腹泻发病率, 因此不能轻视其他防治措施, 主要包括: (1) 大力推荐母乳喂养; (2) 对患病婴幼儿进行早期隔离治疗; (3) 增强婴幼儿体质; (4) 注意婴幼儿卫生习惯的养成; (5) 水源、食品卫生管理。通过上述预防措施, 婴幼儿腹泻病的发病率、发病时间、发病严重程度均可得到显著改善。

综上所述, 口服轮状病毒疫苗能够显著降低婴幼儿轮状病毒腹泻的发病率, 缩短发病病程, 减轻腹泻症状, 且安全可靠、使用方便, 值得推广应用。

参考文献

[1] 陈小慈, 梁辉鹏.轮状病毒疫苗在防治婴幼儿腹泻的效果研究[J].按摩与康复医学, 2012, 3 (24) :19-20.

[2] 刘娜, 段招军.轮状病毒疫苗相关研究进展[J].中华实验和临床病毒学杂志, 2012, 26 (3) :236-238.

[3] 徐子乾, 方肇寅.轮状病毒疫苗[J].中国计划免疫, 2007, 13 (6) :611-613.

[4] 王爱梅, 李敏, 赵淑娟.口服轮状病毒疫苗及卫生宣教预防婴幼儿秋季腹泻的效果分析[J].黑龙江医药, 2011, 24 (3) :473-474.

口服疫苗 篇6

本试验对人工接种鸡新城疫疫苗和鸡法氏囊疫苗的雏鸡, 饮水服用玉屏风口服液 (黄芪、白术、防风等组成) , 检测其对鸡新城疫和鸡传染性法氏囊抗体效价的影响, 观察其对鸡生长发育的影响。通过试验研究该药的免疫增强作用, 为该药的大规模生产及应用提供合理、科学的临床试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验药品

玉屏风口服液, 由河北天象生物药业有限公司提供;黄芪多糖口服液, 石家庄路通动物保健品有限公司生产;鸡新城疫灭活油乳剂疫苗、鸡法氏囊中等毒力冻干疫苗, 黑龙江省生物制品一厂生产;鸡新城疫标准抗原、鸡法氏囊标准抗原购自中国兽医药品监察所。

1.1.2 试验动物:

1日龄伊莎褐蛋鸡500只, 购自石家庄金羽祖代鸡场。饲料为保定万千饲料公司生产的0~7周龄3A蛋雏鸡全价饲料。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组及处理:

1日龄伊莎褐蛋鸡健雏500只按随机区组试验设计方法分为5组, 每组100只。玉屏风口服液分别按低剂量[第Ⅰ组, 0.5 m L/ (kg体重) ]、中剂量 ([第Ⅱ组, 1.0 m L/ (kg体重) ]和高剂量[第Ⅲ组, 1.5 m L/ (kg体重) ]饮水, 第Ⅳ组加入黄芪多糖口服液[1.0 m L/ (kg体重) ]为阳性对照组;阴性对照组不添加任何药物 (Ⅴ组) 。试验组和对照组均采取笼养, 自由采食, 相同的常规饲养管理条件, Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组从第七天开始饮水给药, 给药3周;Ⅴ组饮用常水。试验期9周。

1.2.2 ND和IBD抗体水平测定:

各供试雏鸡于7、21日龄用La Sota疫苗常规免疫, 14、28 d用IBD疫苗滴鼻点眼免疫。并分别于21、35、49、63 d各取10只采血, 常规分离血清, 用微量血凝抑制 (HI) 试验法测定HI抗体滴度, 间接ELISA方法检测IBD抗体 (判定方法:当S/P>0.2时, 判为阳性;当S/P<0.2时, 判为阴性, 以抗体阳性时血清最高稀释倍数做为IBD抗体效价[1]) 。

1.2.3 免疫器官指数测定:

于21日龄、35日龄、49日龄、63日龄每组随机抽取10只鸡, 编号, 称重, 每只鸡心脏采血样后, 剖杀鸡只, 取胸腺、法氏囊、脾脏, 用电子天平称重, 计算免疫器官与体重的比值 (mg/g) 。

1.2.4 增重情况:

于21日龄、35日龄、49日龄和63日龄, 每组随机抽取20只鸡称重, 并计算平均日增重。

1.3 统计方法

试验数据用SPSS10.0分析软件以最小显著差数法进行处理。

2 结果及分析

2.1 玉屏风口服液对ND疫苗免疫后抗体的影响

结果见表1。21、35日龄Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组鸡新城疫抗体水平显著高于Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05或P<0.01) ;49日龄Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组抗体水平明显高于Ⅰ和Ⅴ组, 差异极显著 (P<0.01) ;63日龄Ⅴ组显著低于其它各组, Ⅱ、Ⅲ组抗体水平显著高于Ⅰ和Ⅳ组, 差异极显著 (P<0.01) 。表明玉屏风口服液低剂量饮水服用有一定增强新城疫疫苗免疫效果, 中剂量和高剂量饮用能显著增强免疫效果, 使抗体水平能够迅速提高, 抗体维持时间延长。

2.2 玉屏风口服液对IBD疫苗免疫后抗体的影响

同列内字母相同者差异不显著 (P>0.05) ;小写字母间差异显著 (P<0.05) ;大写字母及大、小写字母间差异极显著 (P<0.01) 。下表同。

g

结果见表2。21日龄各组法氏囊抗体相近, 差异不显著 (P>0.05) ;35日龄Ⅱ、Ⅲ组抗体水平显著高于Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) ;49日龄、63日龄Ⅴ组显著低于其它各组, Ⅱ、Ⅲ组抗体水平显著高于Ⅰ和Ⅳ组, 差异极显著 (P<0.01) 。表明玉屏风口服液按中剂量和高剂量饮用能显著增强鸡法氏囊疫苗的免疫效果, 能促使法氏囊病毒的抗体效价迅速升高, 抗体维持时间延长。

2.3 对免疫器官绝对质量及生长指数的影响

结果见表3。21日龄Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组胸腺器官指数显著高于Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) ;21日龄Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组胸腺和法氏囊器官指数显著高于Ⅰ和Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) 。35日龄, Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组胸腺器官指数极显著高于Ⅴ组, 差异极显著 (P<0.01) ;35、49日龄, Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组法氏囊和脾脏器官指数显著高于Ⅰ和Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) 。63日龄, Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组胸腺和法氏囊的器官指数显著高于Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) 。63日龄, 各组脾脏的器官指数相近, 差异不显著 (P>0.05) 。表明玉屏风口服液按中剂量和高剂量饮用能显著促进胸腺、法氏囊和脾脏等免疫器官的发育, 提高免疫器官指数。

2.4 对鸡生长发育的影响

结果见表4。21日龄, 各组平均体重相近, 差异不显著 (P>0.05) ;35、49日龄, Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组平均体重显著高于Ⅰ和Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) ;63日龄, Ⅱ、Ⅲ组平均体重显著高于Ⅳ组 (P<0.05) , 极显著高于Ⅰ和Ⅴ组 (P<0.01) ;Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组平均日增重显著高于Ⅰ和Ⅴ组, 差异显著 (P<0.05) 。表明该玉屏风口服液按中剂量和高剂量饮用能显著促进鸡的生长发育。

3 讨论

在整个试验期间, 玉屏风散组鸡新城疫和鸡法氏囊抗体水平都明显高于对照组, 试验结果表明, 玉屏风口服液对鸡ND、IBD疫苗免疫有一定的增强作用, 尤其是中、高剂量组免疫增强效果明显优于对照组。现代药理研究证明, 玉屏风散具有提高机体免疫功能和一定的抗菌、抗病毒的作用[2~5]。杨鸿研究表明[2], 加味玉屏风散能明显增强雏鸡红细胞的免疫功能, 提高雏鸡体内抗氧化酶活性, 具有抗自由基损伤作用, 能使雏鸡生长加快。刘四君[3]通过研究加味玉屏风散对创伤应激小鼠免疫功能调节作用的影响, 发现口服加味玉屏风散能提高创伤应激小鼠的IFN-γ水平和CD4+CD25-T, CD4-CD25+T细胞比例, 降低TGF-β水平及CD4+CD25+Tr细胞比例。吕宏伟[4]临床用玉屏风散防治人复发性单纯疱疹病毒性角膜炎, 发现玉屏风散可以提高机体免疫功能, 增强机体抗病毒及清除病毒的能力, 在预防单纯疱疹病毒性角膜炎的复发方面效果较好。帅明华研究表明[5], 咳嗽变异性哮喘组患儿血清Ig E水平明显升高, 加味玉屏风散治疗能降低咳嗽变异性哮喘患儿血清Ig E水平。

中医通过辩证, 以不同的单味药组成复方治疗疾病是其临床的一大特点。玉屏风散由黄芪、防风和白术组成, 黄芪味甘微温, 归肺、脾经, 主要成分有香豆素, 黄芪多糖等。现代药理研究表明:黄芪多糖能激活免疫器官的免疫功能, 增强体液免疫, 增强单核吞噬细胞系统的吞噬功能, 刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞的功能[6]。防风药材中色原酮类成分[7]有解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集等多种功效[8]。炒白术除本身固有的健脾益气、燥湿利水、止汗安胎的功效外还具有保肝、显著增强白细胞吞噬功能, 延长淋巴细胞寿命、纠正T细胞亚群紊乱, 恢复白介素-2水平、抗应激、提高造血功能等功效[9]。

4 结论

试验表明饮水中添加玉屏风口服液能促进雏鸡生长发育, 能显著增强鸡新城疫和鸡传染性法氏囊病疫苗的免疫效果, 促使雏鸡迅速产生抗体, 抗体维持时间延长。中、高剂量组之间差异不明显, 但中剂量组的药费投入比高剂量组低, 所以综合分析, 以中剂量为最合理、最经济的添加剂量。

参考文献

[1]刘耀兴.鸡传染性法氏囊病抗体测三种方法的比较.中国家禽, 2005, 27 (11) :20

[2]杨鸿, 陈杖榴, 邓桦, 等.加味玉屏风散对鸡红细胞免疫和自由基的影响.中国兽医科学, 2006 (01) :70~73

[3]刘四君, 肖海, 帅萍.加味玉屏风散对创伤应激小鼠免疫功能抑制的影响.中药药理与临床, 2007 (6) :55~57

[4]吕宏伟, 韩兴国, 江萍.玉屏风散防治复发性单纯疱疹病毒性角膜炎36例临床观察.实用医学杂志, 2008 (2) :308~309

[5]帅明华, 郭春香.加味玉屏风散对咳嗽变异性哮喘患儿血清Ig E含量的影响.中医药导报, 2007 (12) :32~33

[6]赵银丽, 李国喜, 刘来亭, 张惠如.黄芪及当归对增强固始鸡免疫作用的适宜配伍研究.中国农学通报, 2006 (2) :8~10

[7]姜艳艳, 刘斌, 石任兵.高效液相色谱法测定防风色原酮部位中4种成分含量.北京中医药大学学报, 2006 (2) :128~131

[8]薛宝云, 李文, 李丽, 肖永庆.防风色原酮苷类成分的药理活性研究.中国中药杂志, 2000 (5) :397~399