分子伴侣的作用

关键词： 宫颈癌 细胞 肿瘤 病毒

分子伴侣的作用（精选六篇）

分子伴侣的作用 篇1

1资料与方法

1.1 研究对象

选择2010年3月至2012年3月在我院剖宫产的24例子痫前期患者为研究对象(子痫前期组),子痫前期的诊断标准参照丰有吉主编的第7版8年制《妇产科学》[1]。其中轻度子痫前期组12例,平均年龄27.21±4.36岁,平均孕龄36.27±2.01周,新生儿平均体重2.788±0.607 kg;重度子痫前期组12例,平均年龄26.17±3.42岁,平均孕龄35.02±1.79周,新生儿平均体重2.506±0.367 kg。同时选取相应孕龄孕妇12例(无内外科合并症,因臀位破水、胎位不正和社会因素行剖宫产者)为正常对照组,平均年龄27.78±4.15岁,平均孕龄37.02±3.34周,新生儿平均体重2.980±0.579 kg。子痫前期各组孕妇年龄、分娩孕周与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组孕妇均为单胎、初产、剖宫产分娩,非辅助生殖受孕,无高血压、糖尿病、肝肾疾病、胎儿生长受限、妊娠期肝内胆汁淤积症、甲状腺功能亢进或减退等病史。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集

受检者均在剖宫产术中胎盘娩出后,在无菌状态下取胎盘母体面正中组织3份,每份约1 cm×1 cm×1 cm大小,注意避开出血、梗死及钙化区,用0.9%氯化钠液漂洗去掉血液,吸干0.9%氯化钠液后,第1份置于3%戊二醛固定液中,4℃保存,用于透射电镜扫描;第2份立即置于液氮中保存,用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测;第3份用于Western-Blotting检测。

1.2.2 透射电镜扫描观察子痫前期胎盘滋养细胞内质网超微结构

胎盘组织标本4℃条件下置于3%戊二醛中固定2小时,磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗,1%锇酸常温固定1小时,乙醇逐级脱水,用丙酮和包埋剂(1∶1)混合液室温下浸透1小时,然后再用Epon 812树脂包埋剂进行包埋、固化;先制备半薄切片(0.5～1.0 mm),定位后再制成超簿切片(50～100 nm),醋酸铀和柠檬酸铅双重染色,再经漂洗、分化后待干;采用H-600型透视电镜扫描观察内质网的形态变化。

1.2.3 胎盘组织ERdj1

mRNA表达检测 采用RT-PCR技术,Trizol一步法提取总RNA,设β-actin作为内参物,进行总RNA定量和纯度分析(Beckman DU-600紫外分光光度计)。逆转录反应(试剂为美国Promege,Inc与Allele Biotech & Pharmaceuticals,Inc.产品)按说明书操作。ERdj1上游引物:5′-GAACGAAGGCAGAGGTATGA-3′,下游引物:5′-GACCCACTGTGAGAATAATGAA-3′,扩增产物长度139 bp,β-actin 上游引物: 5′-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3′,下游引物:5′-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3′,扩增产物长度250 bp。PCR反应条件为:95℃ 5分钟,94℃ 30秒,55℃ 30秒,72℃ 30秒,28个循环。取5 μl PCR产物,2.0%琼脂糖/溴化乙锭凝胶电泳。UVP凝胶密度扫描仪及其分析软件(UVP,Inc.)进行半定量分析。

1.2.4 胎盘组织ERdj1

蛋白表达检测 采用蛋白印迹技术,将胎盘组织根据质量/体积比1∶6加入尿素裂解液,冰上匀浆处理15秒,重复5次,每次间隔10秒,冰上裂解1小时,4℃ 40000×g离心20分钟,上清即为胎盘组织总蛋白。Bradford法检测蛋白浓度。12% SDS-PAGE电泳分离蛋白,半干法转印至PVDF膜(40 mA 2小时),用含5 %脱脂奶粉的TBS室温封闭1小时,一抗ERdj1(兔抗1∶500,Abcam)和β-actin (兔抗1∶1000,Abcam),4℃过夜,二抗(羊抗兔1∶2000)37℃ 50分钟,ECL显影,凝胶成像系统扫描。通过软件测定其灰度值,同一样本ERdj1与β-actin灰度比值作为该样本ERdj1蛋白的相对量,用于统计学分析。

1.3 统计学处理

应用SPSS 11.5统计软件,计量数据以均数±标准差undefined表示,采用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 正常胎盘与子痫前期胎盘滋养细胞超微结构

正常胎盘滋养细胞中内质网呈条索状,无扩张及肿胀,线粒体椭圆或球状,有嵴;子痫前期组胎盘滋养细胞中内质网扩张、肿胀、质膜间隙增宽,电子密度减低,线粒体肿胀,嵴断裂甚至消失。见图1。

2.2 3组孕妇胎盘组织中ERdj1

mRNA的表达水平 轻、重度子痫前期组胎盘组织中ERdj1 mRNA的表达水平高于正常对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01),重度子痫前期组胎盘组织中ERdj1 mRNA的表达高于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(P<0.05) 。见图2和表1。

①与正常对照组比较,P<0.01;②与轻度子痫前期组比较,P<0.05

2.3 3组孕妇胎盘组织中ERdj1蛋白的表达水平

轻、重度子痫前期组胎盘组织中ERdj1 蛋白的表达水平高于正常对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01),重度子痫前期组胎盘组织中ERdj1蛋白的表达高于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(P<0.05) 。见图3和表1。

3讨论

子痫前期是指妊娠20周以后出现的以高血压、蛋白尿、水肿为主要临床表现的一组临床症候群,尤其重度子痫前期可引起妊娠妇女及围生儿严重的并发症,是导致妊娠期母婴发病率及病死率上升的重要原因之一,严重危害母婴健康。子痫前期病因复杂,具体发病机制仍不完全清楚,对其病因和发病机制的研究一直是产科研究的热点。目前大量证据表明,子痫前期患者胎盘滋养细胞存在显著的凋亡现象,且凋亡指数显著增高,滋养细胞侵入受限,胎盘着床变浅。因此,认为子痫前期的发病机制与胎盘滋养细胞凋亡有着密切的关系。但这些研究大多集中在细胞内线粒体和细胞外死亡受体两条通路,很少有关于内质网应激介导的滋养细胞凋亡的相关报道[7,8,9]。

内质网是真核细胞中最重要的蛋白质合成折叠场所和钙离子的主要储存库。它主要参与细胞蛋白质量控制、糖基化修饰、细胞凋亡、蛋白质降解以及钙离子稳态等多种生物学功能。近年研究发现,葡萄糖或营养物质缺乏、脂质过度负荷、病毒感染、药物、毒素和分泌蛋白合成增加等均可打破内质网的稳态,其功能紊乱时出现错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集以及Ca2+平衡紊乱的状态,引起从内质网到胞质和胞核的信号传导,最终导致适应性存活或凋亡,称为内质网应激[6,10]。

既往研究显示,子痫前期胎盘组织存在氧化应激,继而引发内质网应激,最终导致滋养细胞凋亡,因此内质网应激介导的滋养细胞凋亡可能是子痫前期发病的又一重要机制[11]。CC Ni等[12]证实,GRP78被公认为是内质网应激的标志性蛋白之一,它能增强内质网对蛋白质的折叠能力,阻止未折叠蛋白质进一步积聚,其表达异常可明显加重内质网应激,引起细胞损伤。王耸等[3]及及孙丽洲等[4]研究发现,子痫前期孕妇的胎盘组织中GRP78的mRNA及蛋白表达水平显著高于正常胎盘。子痫前期胎盘组织中可能发生了滋养细胞内质网应激性反应,从而诱导GRP78高表达,进而滋养细胞可能启动了内质网应激相关性细胞凋亡。因此,GRP78可能参与内质网应激介导的滋养细胞凋亡,GRP78的高表达与子痫前期发病密切相关。然而GRP78在内质网应激中并不能单独行使功能,必须在ERdj1等一些重要的分子伴侣的共同参与下才能发挥作用。ERdj1的N末端具有一定高度保守的J结构域,该结构域与GRP78相互作用,激活GRP78的ATP酶活性,C未端能够结合待折叠蛋白,协助糖蛋白质正确的折叠和装配;参与蛋白质量控制系统与蛋白质降解[5,6]。

本研究采用RT-PCR技术与蛋白印迹法检测了正常孕妇、轻度及重度子痫前期孕妇胎盘组织中内质网应激标志性因子GRP78的分子伴侣ERdj1的表达。结果表明,子痫前期组胎盘组织中ERdj1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常对照组胎盘组织中的表达水平,差异有高度统计学意义(P<0.01),且随着子痫前期严重程度的增加,其表达量显著升高(P<0.05)。以上结果提示,内质网应激相关的凋亡可能是子痫前期发病的一个重要机制,分子伴侣ERdj1在子痫前期胎盘内质网应激导致的凋亡中可能发挥重要作用,这为揭示子痫前期的发病机制提供了重要的理论依据,有助于临床寻找子痫前期诊治的新靶点。

摘要：目的:探讨胎盘组织中内质网应激相关分子伴侣ERdj1的mRNA及蛋白的表达,及其与子痫前期发病的关系。方法:收集剖宫产分娩36例孕妇的胎盘,其中正常足月妊娠妇女12例(正常对照组),轻度子痫前期患者12例(轻度子痫前期组),重度子痫前期患者12例(重度子痫前期组)。应用透射电镜扫描观察子痫前期胎盘组织中滋养细胞内质网超微结构改变,通过RT-PCR技术检测胎盘组织中ERdj1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测胎盘组织中ERdj1蛋白的表达。结果:①正常对照组胎盘滋养细胞中内质网体积无明显增大,内质网无肿胀;子痫前期组胎盘滋养细胞中内质网体积增大、扩张及液泡化。②轻、重度子痫前期组ERdj1 mRNA的表达水平(2.1327±0.4855,2.3064±0.1004)显著高于正常对照组(0.2809±0.0064),差异有高度统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。③轻、重度子痫前期组ERdj1蛋白表达水平(3.8412±0.8423,4.9421±0.9810)显著高于正常对照组(1.5678±0.2315),差异有高度统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子痫前期胎盘滋养细胞内质网有明显扩张及肿胀性改变;内质网应激相关分子伴侣ERdj1参与了子痫前期的病理生理过程,可能是子痫前期发病的重要机制之一。

关键词：内质网应激相关分子伴侣ERdj1,胎盘滋养细胞,子痫前期

参考文献

[1]丰有吉,沈铿主编.妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2008:92-94.

[2]Cross JC.The genetics of preeclampsia:a feto-placental or maternal problem[J].Clin Genet,2003,64(2):96-103.

[3]王耸,瓮占平,纪向虹.葡萄糖调节蛋白78在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义[J].实用妇产科杂志,2012,28(1):45-48.

[4]孙丽洲,马孝甜,葛志平.滋养细胞应激特征性分子葡萄糖调节蛋白及内质网凋亡因子caspase-12与子痫前期发病的关系[J].中华妇产科杂志,2010,45(12):891-895.

[5]Li Q,Qi B,Oka K,et al.Link of a new type of apoptosis-inducing gene ASY/Nogo-N to human cancer[J].Oncogene,2001,20(30):3929-3936.

[6]陈鹏,杨成明.内质网应激反应与心血管系统疾病[J].心血管病学进展,2009,30(2):315-319.

[7]Huppertz B,Kadyrov M,Kingdom JC.Apoptosis and its role in the trophoblast[J].Am J Obstet Gynecol,2006,195(1):29-39.

[8]Levy R,Smith SD.Yusuf K,et al.Trophoblast apoptosis from pregnan-cy complicated by fetal growth restriction is associated with enhanced p53expression[J].Obstet Gynecol,2002,186(5):1056-1061.

[9]Desagher S,Martinou JC.Mitochondria as the central control point of apoptosis[J].Trends CellBiol,2000,10(9):369-377.

[10]Nakka VP,Gusain A,Raghubir R.Endoplasmic reticulum stress plays critical role in brain damage after cerebral ischemia reperfusion in rats[J].Neurotox Res,2010,17(2):189-202.

[11]Burton GJ,Yung HW,Cindrova-Davies T,et al.Placental endoplasmic reticulum stress and oxidative stress in the pathophysiology of unex-plained intrauterine growth restriction and early onset preeclampsia[J].Placenta,2009,30(Suppl A):S43-48.

分子伴侣的作用 篇2

近年对分子伴侣蛋白Hsp70作用机制的研究发现,其ATP功能区域X光晶体结构有一个新的钙离子结合区域,这个新的功能区域与Hsp70分子的ADP结合、ATP水解及合成有关.有报道认为,Hsp70蛋白的NDP激酶样作用,通过形成酸不稳定性自身磷酸化中间体催化γ-磷酸基团在ATP和ADP间传递,组氨酸H89与这个新的区域有密切关系,有可能与Hsp70蛋白形成自身磷酸化中间体有关.本研究运用基因定位诱导突变技术,将89位组氨酸以丝氨酸替代(H89S),通过比较Hsp70野生型及突变型蛋白的自身磷酸化过程的改变,及其对Hsp70蛋白体外荧光素酶活性影响的不同,初步探讨Hsp70作用机制.结果发现,突变的H89S蛋白自身磷酸化过程及体外变性荧光素酶重折叠受到抑制.野生型蛋白未受到影响,野生型Hsp70可以形成酸不稳定的自身磷酸化中间体,产生CDP依赖性解磷酸反应,而H89S突变型蛋白不能形成这种反应.89位组氨酸点突变能显著降低ATP酶交换反应及体外变性荧光素酶重折叠水平,但它的.自身磷酸化可能并非唯一必需的介导位点或只是一个选择性的功能侧链.

作 者：吕元明 陶蕾 张利能 L(U) Yuan-Ming TAO Lei ZHANG Li-Neng 作者单位：吕元明,陶蕾,L(U) Yuan-Ming,TAO Lei(上海交通大学第六人民医院中心实验室,上海,33)

张利能,ZHANG Li-Neng(复旦大学上海医学院生物化学研究室,上海,32)

科学家发现胰岛素作用的分子机制 篇3

胰岛素控制葡萄糖在体内的水平，在Ⅰ型糖尿病患者体内胰腺不能产生胰岛素，从而导致高血糖，需要每天注射补充胰岛素，而Ⅱ型糖尿病患者细胞不能对胰岛素作出适当反应。

澳大利亚墨尔本沃尔特·伊丽莎研究所的一个研究小组与来自美国、英国和捷克的研究人员合作进行了这项研究，他们揭示了胰岛素分子如何与人体细胞的蛋白质结合，这是医学研究者近20年来一直试图破解的问题。

研究小组发现，胰岛素受体是细胞表面的一种大蛋白质，胰岛素与这种蛋白质分子结合，对细胞从血液中摄取糖分作为能源非常必要。研究团队的主要负责人之一迈克·劳伦斯说，他们首次获得了胰岛素及其受体相结合的三维图像。

这项研究完善了对胰岛素作用机制的认识，也有助于未来设计新药物。理解胰岛素与其受体蛋白如何互相作用对开发新药物具有奠基性意义。

澳大利亚大约有100万糖尿病患者，每年的新增患者则有10万人。這一研究发现对于那些每日注射胰岛素的患者是个福音。

（责任编辑：李浩）

分子伴侣的作用 篇4

1 材料与方法

1.1 材料选择

1.1.1 临床标本

选择新疆医科大学第一附属医院2007~2009年维吾尔族慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌患者活检组织标本共152例,全部标本甲醛固定,石蜡包埋。组织病理学诊断由病理医师确诊,其中慢性宫颈炎25例,CIN 64例(CINⅠ31例,CINⅡ~Ⅲ33例),宫颈癌63例(高分化鳞癌32例,中低分化鳞癌31例)。1.1.2试剂和仪器DNA提取试剂盒购自德国Qiagen公司,SP试剂盒及DAB显色剂购自北京中杉金桥公司。分子伴侣抗体分别为:鼠抗人HLA-Ⅰ抗体(1∶100稀释,SantaCruz公司);兔抗人CNX单抗(1∶50稀释,SantaCruz公司);兔抗人CRT单抗(1∶50稀释,SantaCruz公司);鼠抗人ERp57抗体(1∶50稀释,Abcam公司);鼠抗人tapasin抗体(1∶100稀释,Abcam公司)。高速低温离心机(Bechmann公司)、核酸/蛋白快速测定仪(GeneQuantⅡ,GE公司)、PCR仪(iCycler,Biorad公司)和核酸凝胶成像系统(GelDocXR,Biorad公司)。

1.2 方法

1.2.1 聚合酶链反应(PCR)

应用DNA提取试剂盒提取不同宫颈石蜡组织标本中的DNA,并用核酸蛋白分析仪检测DNA的含量和纯度。以提取的每份DNA为模板,应用HPV 16特异性通用引物进行PCR扩增(上游引物5′-TCAAAAGCCACTGTGTC-CTG-3′和下游引物5′-CGTGTTCTTGATGATCTG-CA-3′)。反应体系为:10×PCR缓冲液2.5μl,0.5μmol/L的引物,1.2μl的各种dNTP和0.5UTaqDNA聚合酶,加双蒸水至25μl。反应条件:95℃预变性4分钟,94℃变性45秒,52.4℃复性45秒,72℃延伸45秒,共35个循环,然后72℃再延伸7分钟取5μlPCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳(电压120V),30分钟后在紫外线凝胶成像仪下观察结果并

1.2.2 HLA-Ⅰ类分子和分子伴侣蛋白的检测

应用免疫组化SP法检测,切片常规二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化后微波炉抗原修复,滴加适量H2O2阻断内源性过氧化物酶,然后滴加一抗,4℃冰箱过夜(以PBS作为阴性对照)。第2天加二抗(各步间隔PBS缓冲液冲洗10分钟)。DAB显色,苏木素复染,常规脱水、透明封片。

1.3 结果判断

采用双盲法由两位病理医师分别观察免疫组化结果,以阳性细胞数和染色程度为判断标准。光学显微镜下全视野观察,按阳性细胞数在上皮细胞内所占比例分为4个分值,染色细胞数少于5%视为0分,5%~25%为1分,26%~75%为2分;大于75%者为3分。染色强度判定:不显色或显色不清为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分。综合积分按公式计算:综合积分=(染色细胞分数+染色强度分数)/2。综合判定:积分小于0.5分为表达缺失,0.5~1.5分为表达下调,大于1.6分为正常表达。在分析内质网分子伴侣与HLA-Ⅰ类分子表达和HPV 16感染的关系时,综合判定积分<1分为阴性,≥1分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 15.0软件对各种数据进行统计处理,资料分析采用卡方检验;相关分析采用Pearson相关。

2 结果

2.1 宫颈病变中HPV 16感染情况

PCR结果发现,HPV 16的检出率随着宫颈病变的进展而增加,在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌组织中阳性表达率分别为8.0%(2/25)、67.2%(43/64)和77.8%(49/63),各组间阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

2.2 HLA-Ⅰ分子和内质网分子伴侣在宫颈病变组织中的表达以及与临床病理特征之间的关系

HLA-Ⅰ类分子阳性表达部位主要定位于细胞膜,少数为细胞质,上皮细胞和间质淋巴细胞染色呈黄色或棕黄色。分子伴侣Tapasin、CNX、CRT和Erp57主要表达于细胞质。与慢性宫颈炎相比,CIN和宫颈癌组织中所有分子伴侣成员和HLA-Ⅰ类分子表达明显减少,CIN中分子伴侣CNX、CRT、Tapasin、Erp57和HLA-Ⅰ抗原的表达下调和缺失率分别为15.6%/21.9%、21.9%/15.6%、28.1%/15.6%、20.3%/21.9%和31.2%/29.7%。在宫颈癌组织中表达下调和缺失率分别为22.2%/30.0%、20.6%/34.9%、23.8%/28.6%、30.0%/28.6%和31.7%/47.6%,表达水平随着宫颈病变的加重而减少,呈现递减趋势。尤其是在恶性度较高的中低分化癌和进展期肿瘤中表达下调和缺失更加显著,除了CNX以外,其他蛋白在各组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。临床病理特征之间进行比较,发现HLA-Ⅰ类分子表达量与肿瘤的分化程度、临床分期以及是否有淋巴结转移密切相关;分子伴侣成员中CRT、ERp57与宫颈癌分化程度密切相关;Tapasin、CNX、ERp57与淋巴结转移密切相关;Tapasin的表达下调与FIGO临床分期密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

2.3 内质网分子伴侣在宫颈病变中表达与HLA-Ⅰ类分子和HPV 16感染的关系

比较内质网分子伴侣Tapasin、CNX、CRT、ERp57与在HLA-Ⅰ类分子和HPV 16在宫颈病变中表达的相关性。在CIN中HLA-Ⅰ与CNX、CRT、ERp57表达下调呈正相关(相关系数分别为r=0.289,P=0.020;r=0.271,P=0.030;r=0.295,P=0.018),HPV 16感染与CRT、ERp57表达呈负相关(相关系数分别为r=-0.375,P=0.002;r=-0.327,P=0.008)。宫颈癌中HLA-Ⅰ与CRT、ERp57和Tapasin表达下调呈正相关(相关系数分别为r=0.491,P<0.001;r=0.299,P=0.017;r=0.412,P=0.001),HPV 16感染与Tapasin、CNX、CRT、ERp57表达呈负相关(相关系数分别为r=-0.450,P<0.001;r=-0.367,P=0.003;r=-0.408,P=0.001;r=-0.290,P=0.021)。

3 讨论

HLA-Ⅰ类分子广泛分布于体内绝大多数有核细胞表面,它作为抗原肽受体与结合和递呈抗原肽诱导产生免疫应答以及维持内环境稳定有密切关系。而内质网分子伴侣与不同的蛋白质折叠中间体相互作用,帮助HLA-Ⅰ多肽链的正确折叠和组装,对抗原的呈递过程发挥重要作用[5]。研究发现HLA-Ⅰ类分子在多种肿瘤中表达下调[6~10]。提示,肿瘤细胞利用HLA-Ⅰ类分子在细胞表面的表达缺陷,避免CD 8+CTL介导的抗原识别与杀伤作用。本研究就宫颈病变中内质网分子伴侣、HLA-Ⅰ类分子的表达情况以及与HPV 16感染的关系进行了分析。

结果显示,HPV 16的检出率随着宫颈病变的进展而增加,在慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌组织中阳性表达率分别为8.0%、67.2%和77.8%,各组间阳性表达差异有统计学意义;HLA-Ⅰ类分子表达随着CIN分级的增加、宫颈癌分化程度的降低和宫颈FIGO分期的进展而表达减少,表达差异有统计学意义。这与我们先前应用RT-PCR法检测HLA-Ⅰ的转录表达水平一致[11],另外淋巴结转移的宫颈癌患者中HLA-Ⅰ类分子表达低于未转移的患者。证明HLA-Ⅰ类分子表达下调在宫颈癌的整个演进过程以及预后中起到重要作用。与抗原呈递相关的内质网分子伴侣Tapasin、CNX、CRT和ERp57随着CIN分级和宫颈癌恶性程度的增加表达减少,表达差异有统计学意义。其中,CRT和ERp57表达下调与宫颈癌的分化程度相关,Tapasin的表达下调与FIGO临床分期密切相关,CNX、Tapasin和ERp57表达下调与淋巴结转移密切相关。提示,内质网分子伴侣表达下调,影响了HLA-Ⅰ类分子的正确折叠和组装,以及对抗原的呈递作用,导致肿瘤细胞不能有效的被T细胞识别与降解。值得注意的是,在CIN阶段内质网分子伴侣和HLA-Ⅰ类分子主要以表达下调为主,而在宫颈癌组织以表达缺失为主,从而推测宫颈癌细胞中内质网分子伴侣通过抑制HLA-Ⅰ类抗原的表达促进肿瘤细胞逃避免疫监视,使得肿瘤细胞继续生长和发展。因此,内质网分子伴侣和HLA-Ⅰ类抗原的表达降低可以作为宫颈癌早期浸润的标志。

本研究比较了内质网分子伴侣Tapasin、CNX、CRT、ERp57在CIN和宫颈癌组织的表达与HLA-Ⅰ类分子和HPV 16感染的关系。在CIN组织中HLA-Ⅰ与CNX、CRT、ERp57表达下调呈正相关,HPV 16感染与CRT、ERp57表达呈负相关;宫颈癌组织中HLA-Ⅰ与CRT、ERp57和Tapasin表达下调呈正相关,HPV 16感染与Tapasin、CNX、CRT、ERp57表达呈负相关。提示在CIN和宫颈癌组织中内质网分子伴侣表达下调,是影响HLA-Ⅰ类分子在细胞表面正常表达的重要原因之一。而HPV 16也可能利用此途径逃避免疫监视,促进宫颈癌的发生和发展。

摘要：目的:探讨宫颈病变中内质网分子伴侣与HLA-Ⅰ和HPV16表达的关系。方法:通过免疫组化SP法检测内质网分子伴侣和HLA-Ⅰ类分子在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌患者石蜡包埋组织中的表达水平;以PCR技术检测相应标本中HPV16感染的情况。结果:CIN中分子伴侣钙连接蛋白(CNX)、钙网蛋白(CRT)、TAP相关蛋白(Tapasin)、蛋白质二硫异构体Erp57和HLA-Ⅰ抗原的表达下调和缺失率分别为15.6%/21.9%、21.9%/15.6%、28.1%/15.6%、20.3%/21.9%和31.2%/29.7%。在宫颈癌组织中表达下调和缺失率分别为22.2%/30.0%、20.6%/34.9%、23.8%/28.6%、30.0%/28.6%和31.7%/47.6%,并且随着宫颈病变的加重,其表达下调和缺失率增加(P<0.05)。CRT和ERp57与宫颈癌分化程度密切相关,Tapasin、CNX、ERp57与淋巴结转移密切相关,Tapasin与FIGO临床分期密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。在CIN中HLA-Ⅰ与CNX、CRT、ERp57表达下调呈正相关,HPV16感染与CRT、ERp57表达呈负相关。宫颈癌中HLA-Ⅰ与CRT、ERp57和Tapasin表达下调呈正相关,HPV16感染与Tapasin、CNX、CRT、ERp57表达呈负相关。结论:在CIN和宫颈癌组织中内质网分子伴侣表达下调,可能是影响HLA-Ⅰ类分子在细胞表面正常表达的重要原因之一。而HPV16也可能利用此途径逃避免疫监视,促进宫颈癌的发生和发展。

关键词：宫颈癌,内质网分子伴侣,人类白细胞抗原Ⅰ,人乳头瘤病毒16

参考文献

[1]Wiley D,Masongsong E.Human papillomavirus:the burden of infec-tion[J].Obstet Gynecol Surv,2006,61(6):3-14.

[2]Munoz N,Bosch F,de SanjoséS,et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

[3]拉莱.苏祖克,AmyE.Noffsinger,买买提艾力,等.新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织中人类乳头状瘤病毒DNA的检测[J].中华妇产科杂志,2006,29(7):569-571.

[4]Garrido F,Ruiz-Cabello F,Cabrera T,et al.Implications for immu-nosurveillance of altered HLA class I phenotypes in human tumors[J].Immunol Today,1997,18(2):89-95.

[5]Paulsson K,Wang P.Chaperones andfoldingof MHC class I molecules in the endoplasmic reticulum[J].Biochim Biophys Acta,2003,1641(1):1-12.

[6]Qiao Liu,ChunYan Hao,Peng Su,et al.Down-regulation of HLA class I antigen-processing machinery components in esophageal squa-mous cell carcinomas:Association with disease progression[J].Scand J Gastroenterol,2009,44(8):960-969.

[7]Mizukami Y,Kono K,Maruyama T,et al.Down-regulation of HLA class I molecules in the tumour is associated with a poor prognosis in patients with oesophageal squamous cell carcinoma[J].Br J Cancer,2008,99(9):1462-1467.

[8]Mehta AM,Jordanova ES,Kenter GG,et al.Association of antigen processing machinery and HLAclass I defects with clinicopathological outcome in cervical carcinoma[J].Cancer Immunol Immunother,2008,57(2):197-206.

[9]Meissner M,Reichert TE,Kunkel M,et al.Defects in the human leu-kocyte antigen class I antigen processing machinery in head and neck squamous cell carcinoma:association with clinical outcome[J].Clin Cancer Res,2005,11(7):2552-2560.

[10]Ogino T,Shigyo H,Ishii H,et al.HLAclass I antigen down-reg-ulation in primary laryngeal squamous cell carcinoma lesionsas a poor prognostic marker[J].Cancer Res,2006,66(18):9281-9289.

分子引力和大气压强谁起主要作用 篇5

两物体接触时，由于表面是粗糙的，只有个别粗糙峰（即微凸体）的顶部会发生真正接触，大部分区域是有间隙的，接触点成离散型分布状态。各真实接触点的总和称为真实接触面积。真实接触面积只占表观接触面积的很小一部分，可能比表现的宏观接触面积的万分之一还要少。

将两个铅柱的底面削平、削干净（除掉氧化物、污物），表面仍然是粗糙的，然后将两个铅柱紧压着转捻一下，由于铅较软，接触点发生变形，松开手后，铅柱不受压力，两表面仍是粗糙表面接触，根据A=[SX（]W[]σS[SX）]，式中A表示真实接触面积、W表示载荷、σS表示接触面中软材料的抗屈服极限，可以认为两铅柱底面间的真实接触面积几乎不变。

[LL][HJ1。5mm]

现估算两铅柱结合在一起，下铅柱下挂总重12 N（质量1200 g）的钩码静止时（见图1），下铅柱所受的大气压力差。已知下铅柱外径D约2 cm，内径d约0。8 cm。大气对它向上的压力

F向上=p0S表，

S表=[SX（]π[]4[SX）]D2。

大气对它向下的压力F向下=p0（S表-S真），

下铅柱所受大气压力的合力F大是向上的，

F大[WB]=F向上-F向下=p0S真=p0×10-4×[SX（]π[]4[SX）]（D2-d2）

[DW]=105 Pa×10-4×[SX（]3。14[]4[SX）]×（22-0。82）×10-4 m2

[DW]≈0。003 N。

[TP5CW36。TIF，Y#]

这里真实接触面积按宏观（表观）接触面积的万分之一估算。即使真实接触面积按宏观（表观）接触面积的千分之一来估算，F大也只约等于0。03 N。

现在分析下铅柱受到的力，这里忽略铅柱分子之间的引力。下铅柱受重力G约1。6 N，钩码对它向下的拉力F拉等于12 N（g取10 N/kg），大气对它向上的压力F大（实际上是大气压力的合力），如图2。根据物体的平衡条件，有F大=G+F拉，而实际上F大远小于G+F拉，因此铅柱分子之间的引力不能忽略，且铅柱分子之间的引力约等于G+F拉，远大于大气压力差。根据以上分析，主要是分子之间的引力使两铅柱结合起来不被重物拉开，大气压力差起次要作用，教材上的结论是正确严谨的。实验中将两铅柱紧压着转捻一下，目的是使更多的分子接近到分子吸引力作用半径之内，增大铅柱分子之间的引力。

[KH-2][KG-2][CDH01155]

[FL（K2][HJ1。4mm]

[HT6F]★★（3）一根钢棒如何判断其有无磁性（至少两种方法）？

★★（4）一根条形磁铁的北极去吸起两枚大头针，这时两枚大头针远离磁铁的远端将会[JY]（）

A。互相吸引B。互相排斥

C。不发生作用D。无法判断

3。本节课学习过程中你还存在哪些疑问。

演示：铁棒和钢棒磁化后的效果不同

教师介绍：软、硬磁性材料。硬磁性材料常见的有高碳钢，铝镍钴合金，钛钴合金，钡铁氧体等。还应用于磁记录，如录音磁带，录象磁带，电脑磁盘粉等。软磁性材料指磁化后，不能保持原有的磁性。如软铁，硅钢，铁镍合金等。用来制造变压器，电磁铁等。

教师启发：磁化的反过程叫什么？怎么去磁？

拓展：磁体产生磁的原因大概如下：每个原子核周围旋转的电子看成是电流，而电流会产生磁场，当磁场方向都差不多朝同个方向时（与原子排列有关），整个物体表现出磁性。去磁的原理就是把原子核的排列打乱（震动，加热使其热运动加剧等），[HJ1。66mm]以致原子杂乱排列，磁场互相抵消，整个物体不显磁性。

主要的消磁方法有以下几种：

（1）加一与磁体原来磁化方向相反的、磁感应强度适当的外磁场。

（2）把磁体置于一个强度逐渐减小的交变磁场中。

（3）加热使分子热运动加剧，因分子电流方向不一致而失去磁性。

（4）把该磁体放在地上多摔几次。

巩固环节：比一比，看谁得的星级高？学生静静地“书写”在导学案上。之后“尽情”地表达自己地想法。

最后质疑，解答。

分子伴侣的作用 篇6

关键词：哈金；《池塘中》；邵兵；书画作品；话语权

作为当代美国华裔作家的代表人物，哈金通过自己坚苦卓绝的努力，以中国题材的英语小说和诗歌获得了美国主流文坛的肯定。1988年，哈金发行了自己的小说处女作《池塘中》。这一作品以虚构的小镇歇马亭为背景，描写了公社知识分子邵兵面对上级领导在住房分配问题上的贪污腐败，决心以笔为剑，以笔为杖，创作出一系列揭露腐败现象的书画作品。这些书画作品一经报纸期刊发表，激起了极大的反响，并帮助邵兵不断夺取话语权，一步步走向自己的目标。

“知识分子”一词的来源据考证是出现在19世纪俄国。当时俄国社会出现了一批出身上流社会的知识阶层。他们接受了西方教育，带着西方现代价值理念来观察俄国落后的专制制度，对自己所处社会秩序的黑暗与不合理产生了强烈的疏离感和背叛意识。“他们是具有强烈的批判精神，特别是道德批判意识的群体”。在哈金《池塘中》这部小说里，邵兵虽然是公社的一个小人物，但他热爱读书，具有一定的才华和学识。正是因为这些，才致使他不同于公社其余那些麻木不仁的成员。面对公社上层领导贪污腐败、以权谋私的现象，邵兵选择奋力争夺。他创作了一副又一副讽刺和揭露公社官僚腐败现象的书画作品。这些作品一经发表就引起了极大的反响。对于邵兵的这一斗争行为，公社领导们开始感到害怕。他们对邵兵进行了残酷的打压和抨击。面对官僚阶级的疯狂打压，知识分子邵兵没有退缩，他仍然继续自己的书画创作，并用自己笔下的作品进行了有力的还击。这些书画作品成为邵兵的武器，帮助其一步步争夺在公社，在社会中的话语权。

话语权是指一种信息传播主体的潜在的现实影响力。西方马克思主义及其法兰克福学派的批判理论（以意识形态批评为中心），索绪尔、罗兰·巴特的符号学（以语言、文本为中心）以及后现代各种文化理论形成汇流，使话语成为当代文化与传媒研究中的一个重要概念。后现代思想家福柯进一步指出，人类的一切知识都是通过“话语”而获得的，任何脱离“话语”的事物都不存在，人与世界的关系是一种话语关系，“话语意味着一个社会团体依据某些成规将其意义传播于社会之中，以此确立其社会地位，并为其他团体所认识的过程。”福柯认为话语的“立场”是意义，而对意义的阐释牵涉及到冲突和权力。知识分子话语权是指知识分子在启蒙和社会的人文关怀等方面产生的影响，在知识分子社会责任感中所蕴藏的一种力量。主要表现在知识分子凭借知识场域内的文化资本，如文章、书法、绘画等资源批判现实，引导舆论。

在本小说里，主人公邵兵正是利用自身文化资本创作出一系列书画作品来争夺其在公社中和社会中的话语权。小说开篇中，对新房期待已久的邵兵夫妇却得知此次分房仍然没有他们的名额。在分房问题上，面对以权谋私的公社领导，邵兵一家完全说不上话。因此擅长书画的邵兵创作了一副名为“有权家庭才幸福”的绘画作品，并在旅大日报得到发表。这一作品的发表立刻引起了领导们的注意。公社主管马刘二人召开了针对邵兵的批斗会，在公众面前歪曲事实并克扣了邵兵一家六个月的津贴补助。这一次斗争虽然以失败告终，但其揭开了邵兵为了自己应得的住房而争夺话语权的序幕。

这之后，邵兵得知杨晨将要参加人民代表大会的选举的消息，邵兵准备了一副写有“杨晨迫害我”标语的木板并带到了选举现场。在杨晨竞选期间，邵兵当众举起准备好的标语。他那手漂亮的字体立刻吸引了观众们的注意。这一次行动成功地毁掉了杨晨的竞选，其中邵兵的书法作品起到了非常关键的作用。这次事件后，公社上层领导开始感到惴惴不安。马刘二人开始后悔没有分给邵兵应得的住房。邵兵的书画作品成功地在其争夺话语权的过程中发挥了作用。

之后，邵兵继续书画创作。他创作了一副名为“过节真累”的作品。在这幅书画作品中，邵兵成功地勾勒出马刘二人腰包塞满礼物的丑陋嘴脸，极大地讽刺了公社领导过节收礼的腐败现象。两周后这幅作品在工人日报上发表，“及时地”毁掉了公社领导们的春节假期。邵兵在争夺话语权的道路上又前进了一步。邵兵出色的书法和创作才能甚者为他争取到在黄金乡文化中心工作的机会以及在大学里学习的机会，虽然这些机会被公社领导们卑鄙地阻止了，事实证明邵兵凭借自身的文化资本优势，一次又一次对敌人进行反击，公社领导对其畏惧日益加剧。

上大学一事被阻后，邵兵通过朋友严福结交了报纸环境的记者宋智。邵兵向宋智诉说了他在公社所遭受的不公的待遇和公社领导腐败现象。宋智将邵兵所遭受的一些在环境上报道出来。这篇报道一经发表就因触及高层领导利益和公社形象而激起千层大浪。上层领导将报道镇压，并严肃惩处了报纸编辑部的负责人员。邵兵争夺话语权的道路再次遭到重大阻碍。

在这次重大打击后，邵兵一行人仍未放弃对事实真相的揭露。邵兵独自赴京向原环境编辑部主任江平的叔叔柴先生寻求帮助。出发前，邵兵精心准备了一个刻有杜甫诗句的印章作为见面礼。这份礼物以及邵兵的才华博得了柴先生的青睐。在江平叔叔的引荐下，邵兵向法律与民主编辑部的工作人员吐露了他们一行人遭受的不公待遇和公社领导人的贪污腐败，沆瀣一气的现象。相关报道在法律与民主上发表后，邵兵一行人终于获得了胜利。江平重新复职，而邵兵得到了升迁。

纵观邵兵为住房奋斗的全过程，其自身出色的书法绘画才能可谓功不可没。正是这些优秀的书画作品成为邵兵打击敌人的重要武器，帮助其在公社乃至在社会中不断夺取话语权，不断扩张对舆论的影响力。邵兵凭借其杰出的文化资本，搞书法绘画创作，批判现实，引导舆论。通过这些作品，人们了解到公社内部贪污腐败的现象，看清高层领导滥用职权谋取私利的丑陋嘴脸。正是这些作品促使邵兵一步步接触到更权威的媒体，更有力的话语，一步步更加接近自己的目标。在这一过程中，邵兵的书画作品帮助其不断夺得更强更有力的话语权。

注释：

陶东风主编. 知识分子与社会转型[M].开封： 河南大学出版社，2010.

福柯.《知识考古学》[M].上海三联书店，1998.

参考文献：

[1]陶东风主编. 知识分子与社会转型[M].开封： 河南大学出版社，2010.

[2]Ha Jin. In The Pond [M]. NewYork： Vintage Books， 2001.

[3]福柯.知识考古学[M].上海三联书店，1998.

[4]钱穆.国史新论·中国知识分子[M].北京三联书店，2001.

[5]卡尔·博格斯.知识分子与现代性的危机[M].李俊，蔡海榕译.江苏人民出版社，2006.

[6]福柯.知识分子与权力[M].上海远东出版社，1998.